CN108896541B - 一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法及卡 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法及卡。判别方法包括将样液和酶混合，之后加入酶的显色底物，根据显色情况确定样液中是否存在导致假阳性的次生代谢物，其中，酶的活性可被次生代谢物抑制，而不被农药残留抑制。本发明的方法，可以有效检测出样品中是否存在导致常规胆碱酯酶农药速测卡出现假阳性结果的次生物质。同时具有使用方便、快速的优点，可以作用现有农药残留速测卡的有效补充，避免假阳性结果造成的损失。
Description
技术领域
本发明涉及农药残留检测领域，特别涉及用于鉴定蔬菜农残假阳性的判别方法及相应的速测卡。
背景技术
病虫害常对农业、林业牧业造成大量的经济损失。喷洒农药是防止病虫害的有效手段。但由此一些病虫害虫的产生抗药性，需要加大喷洒农药的剂量来对付虫害。这些不合理使用农药必然导致农产品如蔬菜、水果等农药残留超标，从而广大消费者的身体健康，甚至直接导致中毒死亡。因此农药残留检测是十分必要的。目前用于农药残留检测的方法主要有光谱法、酶抑制法、色谱法、化学速测法、免疫分析法、活体检测法等等。
酶抑制法检测农药残留因其前处理简单、操作方便，成本低廉等优点，被列为国家推荐测标准检测方法（GB/T 5009.199-2003）并在市面上广泛应用。但在韭菜、蒜苗、蒜黄、茭白等蔬菜产品中含有大量的次生物质，在进行剪碎样品处理时，蔬菜的细胞破裂使次生物质释放到待测样品液中，影响检测结果，甚至会产生大量的假阳性结果。
在蔬菜农药残留快速检测过程中，由于次生代谢物抑制胆碱酯酶活性或色素的存在干扰了酶反应过程的正确直观表现，使得假阳性结果时有发生。对于检测发现为阳性的样品，由于缺乏行之有效的快速手段进行确证，使得很多蔬菜被以农残超标处理，而有的在经过漫长的仪器检测之后，蔬菜已经在市场消耗，这不利于保障人民的食品安全和维护菜农利益，降低了质检效率和产品流通速度。
CN106093032A、CN104142305A及桑园园, 柴丽娜, 魏朝俊,等. 酶抑制法检测4种辛辣蔬菜农药残留假阳性消除的研究[J]. 中国农学通报, 2009, 25(11):60-64.等教导对样品溶液进行加热处理，以克服次生代谢物造成的假阳性。这种操作方法需要借助一定的仪器，检测时间偏长，难以用于现场判定。
如有快速有效地确定假阳性结果，是有待解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鉴别农药速测卡假阳性的判别方法及判别卡。
本发明所采取的技术方案是：
一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法，包括将样液和酶混合，之后加入酶的显色底物，根据显色情况确定样液中是否存在导致假阳性的次生代谢物，其中，酶的活性可被次生代谢物抑制，而不被农药残留抑制。
作为上述判别方法的进一步改进，酶选自水解酶中的β-半乳糖苷酶。
作为上述判别方法的进一步改进，酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
作为上述判别方法的进一步改进，酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
一种蔬菜农残速测假阳性的判别卡，包括酶片和显色底物片，酶片上固定有活性可被次生代谢物抑制、而不被农药残留抑制的酶，显色底物片吸附可被酶催化反应显色的底物。
作为上述判别卡的进一步改进，酶选自水解酶中的β-半乳糖苷酶。
作为上述判别卡的进一步改进，酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
作为上述判别卡的进一步改进，酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
作为上述判别卡的进一步改进，判别卡使用的吸水材料选自滤纸。
作为上述判别卡的进一步改进，判别卡设有盖膜。
本发明的有益效果是：
本发明的方法，可以有效检测出样品中是否存在导致常规胆碱酯酶农药速测卡出现假阳性结果的次生物质。同时具有使用方便、快速的优点，可以作用现有农药残留速测卡的有效补充，避免假阳性结果造成的损失。
本发明的判别卡，添加样液到生物酶片上后，通过折叠与药片接触，只需用手轻按反应3min即可得出结果，无需预反应，检测用时短，成本低，方便携带；在蔬菜农残速测中，用胆碱酯酶抑制法检测出现阳性结果的蔬菜样品，如果蔬菜样品液中含有造成假阳性结果的次生物质时，生物酶片的颜色就不会变色，如呈现无色；反之则会反应变色，如呈现蓝色。
附图说明
图1是一种蔬菜农残速测的假阳性判别卡的平面示意图；
图2是一种蔬菜农残速测的假阳性判别卡的截面示意图。
具体实施方式
一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法，包括将样液和酶混合，之后加入酶的显色底物，根据显色情况确定样液中是否存在导致假阳性的次生代谢物，其中，酶的活性可被次生代谢物抑制，而不被农药残留抑制。
酶的活性不被农药残留抑制，指存在农药残留合格上限的情况下，酶的活性依然可以保持在80%以上，或90%以上。
作为上述判别方法的进一步改进，酶选自水解酶中的β-半乳糖苷酶。
作为上述判别方法的进一步改进，酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
作为上述判别方法的进一步改进，酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
一种蔬菜农残速测假阳性的判别卡，包括酶片和显色底物片，酶片上固定有活性可被次生代谢物抑制、而不被农药残留抑制的酶，显色底物片吸附可被酶催化反应显色的底物。
作为上述判别卡的进一步改进，酶选自水解酶中的β-半乳糖苷酶。
作为上述判别卡的进一步改进，酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
作为上述判别卡的进一步改进，酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
作为上述判别卡的进一步改进，判别卡使用的吸水材料选自滤纸。
作为上述判别卡的进一步改进，判别卡设有盖膜。
参见图1、图2，一种蔬菜农残速测的假阳性判别卡，主要由底板(1)、生物酶片（2）、显色底物片（3）、盖膜（4）组成，底板固定有生物酶片和显色底物片，并被上盖膜覆盖。
底板由可以降解的合成纸材料制成，上盖膜为覆有热敏胶的OPP膜制成。
假阳性判别卡的一个具体制备实例如下：
将直径为11mm的圆形吸水滤纸固定在长方形底板的生物酶片（2）和直径为13mm的显色底物片（3）的位置上。将β-半乳糖苷酶1U加到酶片（2）所在滤纸上，烘干，再将X-Gal加到显色底物片（3）上，再烘干，在底板上覆上盖膜，使生物酶片（2）和显色底物片（3）防止其受潮和失去活性。
下面结合实施例，进一步说明本发明的技术方案。
实施例1
使用假阳性判别卡的过程如下：
1)取一片判别卡揭去上盖膜，取60μL的农残速测为阳性的蔬菜样品液，滴加到生物酶片上，然后将将判别卡对折，用手指轻按压3min。生物酶片显示为天蓝色即样品液中无次生物质，如果生物酶片显示为白色或浅蓝色，即蔬菜样品液中含有造成假阳性的次生物质；
2)按GB/T 5009.199-2003或CFDA发布的《KJ201710》标准，取3g表面干净的蔬菜，剪成约1cm可见方的碎片后放入样品瓶中，添加10mLpH=8的磷酸盐缓冲液，充分震荡后静置2min，上清液为待测液；
3)取60μL待测液滴加到生物酶片上，然后将判别卡对折，用手指轻按压3min；
4)取3mL待测液经过滤器过滤后用商品化农药残留速测试剂按其说明书操作，在农残速测仪上反应读出抑制率。
按上述检测操作，对经检测确定为无农药残留的蔬菜进行检测，试验结果如表1所示：
对假阳性判别卡显色为白色，即判定为有次生物质的蔬菜样品采取GB/T5009.199-2003或KJ201710标准里的整株提取法处理，取60μL处理液滴加到生物酶片上，然后将判别卡对折，用手指轻按压3min；取3mL处理液用商品化农药残留速测试剂按其说明书操作，在农残速测仪上反应读出抑制率。结果如表2所示：
由表1、表2可知，当蔬菜用商品化农残速测试剂检定为阳性样品时，使用假阳性判别卡可以快速确认提取液中是否含有抑制酶反应的植物次生代谢物，从而调整蔬菜样品的处理方式，并在确保样品处理液不含有次生代谢物的条件下用酶试剂进行检定。
按上述检测操作，对经检测确定为无农药残留的蔬菜按GB/T 5009.199-2003标准进行克百威加标后检测，其中对前面确定含有植物次生代谢物的蔬菜采用整株提取法处理，同时对处理液进行商品化酶试剂检验和假阳性判别卡检验，试验结果如表3所示：
由表3可知，本农残速测假阳性判别卡能有效对农残卡或酶试剂盒检测出的阳性结果进行假阳性判定，经多次重复试验和不同种类蔬菜试验，本假阳性判别卡均能有效判别出由次生物质抑制胆碱酯酶带来的假阳性检测结果。由表3可知本假阳性判别卡对检测农药项目不敏感，且在丙溴磷、灭多威、敌敌畏、敌百虫等其他农药加标试验中也符合该检测规律，实验重现性好。
Claims (8)
1.一种蔬菜农残速测假阳性的判别方法，包括将样液和β-半乳糖苷酶混合，之后加入β-半乳糖苷酶的显色底物，根据显色情况确定样液中是否存在导致假阳性的次生代谢物，其中，所述蔬菜为菠菜、上海青、韭菜或芹菜；所述蔬菜农残速测假阳性为常规胆碱酯酶农药速测卡由于次生代谢物抑制胆碱酯酶活性出现的假阳性。
2.根据权利要求1所述的判别方法，其特征在于：酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
3.根据权利要求2所述的判别方法，其特征在于：酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
4.判别卡在判别蔬菜农残速测假阳性中的应用，所述判别卡包括酶片和显色底物片，其特征在于：酶片上固定有β-半乳糖苷酶，显色底物片吸附有可被β-半乳糖苷酶催化反应显色的底物，所述蔬菜为菠菜、上海青、韭菜或芹菜；所述蔬菜农残速测假阳性为常规胆碱酯酶农药速测卡由于次生代谢物抑制胆碱酯酶活性出现的假阳性。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：酶对应的显色底物为吲哚类化合物中的一种。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：酶对应的显色底物为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷。
7.根据权利要求4～6任一项所述的应用，其特征在于：判别卡使用的吸水材料选自滤纸。
8.根据权利要求4～6任一项所述的应用，其特征在于：判别卡设有盖膜。
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