CN108802209A - 一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及鳕鱼肝油掺假鉴定方法，采用柱前衍生毛细管气相色谱法，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行峰面积测定，按面积归一化法计算所含典型脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，建立限度范围，植物油脂肪酸限度范围参考国标；通过比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸，掺假鱼油通过建立特征脂肪酸二维掺假模型，绘制掺假识别分析图，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定；掺假植物油采用植物油中亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，实现对鳕鱼肝油中掺假植物油的快速鉴定。本发明是一种基于鳕鱼肝油、鱼油和植物油脂肪酸特征指标的掺假鉴定方法，具有科学、准确、简便的特点。

Description

一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法
技术领域
本发明涉及鳕鱼肝油质量鉴定，尤其涉及一种有效规范鱼肝油市场存在的掺假乱象，可以快速准确鉴别的鳕鱼肝油掺假鉴定方法。
背景技术
鳕鱼肝油是从高纬度的挪威等国的深海鳕鱼肝脏中提取的油脂，鳕鱼不杂食、干净、无污染，提取的鱼肝油品质优良安全。鳕鱼肝油富含天然维生素A、维生素D3以及多种陆地上没有的ω-3不饱和脂肪酸(DHA、EPA、DPA)，其中DHA(二十二碳六烯酸)和EPA(二十碳五烯酸)含量很高，是人体自身不能合成但又不可缺少的重要营养素，尤其是DHA，是人体神经***生长及维持的主要元素，是大脑和视网膜的重要构成成分，对婴幼儿的智力和视力发育至关重要，具有保护视网膜、改善视力、促进婴幼儿智力发育、提高记忆力等作用。挪威政府每年的《健康营养指南》中提到：建议宝宝出生第4周开始食用以鳕鱼肝油形式存在的维生素A、维生素D3和DHA。鳕鱼肝油中所含的DHA、EPA和维生素A、D3符合世界卫生组织推荐标准，故鳕鱼肝油有“液体黄金”和“脑黄金”的美称。随着人们对婴幼儿智力和身体发育的日渐重视，鳕鱼肝油的市场需求也越来越大，目前全球药用级和保健级的鳕鱼肝油品牌多达百种，占整个鱼肝油市场的95％以上。纯鳕鱼肝油天然资源短缺，价格昂贵，不法厂商为牟利，在鳕鱼肝油中掺兑一定比例的廉价鱼油或植物油以降低成本，严重损害消费者的利益。监管上仅仅依赖测定标志性成分维生素A和D3含量，以及DHA与EPA含量(比例)是不够的，不法厂商可以通过添加合成维生素A和D3、乙酯型DHA使鳕鱼肝油中各项标志性成分符合指标要求，但实则为掺假的鳕鱼肝油，真假难以鉴定。
发明内容
本发明的目的在于为了建立一种快速准确鉴别纯鳕鱼肝油的方法，有效规范鱼肝油市场存在的掺假乱象。本发明基于天然动植物油中的脂肪酸，其种类、数量和含量均呈现较强的特征性，本发明采用柱前衍生毛细管气相色谱技术，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行峰面积测定，按面积归一化法计算所含典型脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，并建立限度范围，植物油脂肪酸限度范围参考国标。通过分析比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸，掺假鱼油通过建立特征脂肪酸二维掺假模型，绘制掺假识别分析图，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定；掺假植物油可采用植物油中高含量的亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，可快速地对鳕鱼肝油中掺假植物油进行鉴定，这种基于鳕鱼肝油、鱼油和植物油脂肪酸特征指标的掺假鉴定方法具有科学、准确、简便的特点。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，所述鉴定方法为采用柱前衍生毛细管气相色谱法，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行峰面积测定；按面积归一化法计算所含各脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，建立各脂肪酸限度范围，植物油脂肪酸限度范围参考国标；通过分析比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸，掺假鱼油通过建立特征脂肪酸二维掺假模型，绘制掺假识别分析图，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定；掺假植物油可采用植物油中高含量的亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，实现对鳕鱼肝油中掺假植物油的快速鉴定；此外本发明通过测定鳕鱼肝油中5种代表性脂肪酸的回收率对柱前衍生方法进行准确性验证，通过测定各脂肪酸相对质量校正因子(f)对计算方法进行适用性验证。
在本技术方案中，鳕鱼肝油中所含脂肪酸是以甘油酯形式存在，沸点高，不能直接采用有机溶剂提取后进行气相色谱测定，需进行柱前衍生处理，即将鳕鱼肝油先皂化后甲酯化，转化为低沸点的脂肪酸甲酯。
鳕鱼肝油中的脂肪酸包括饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，种类多达二十多种，其中含量较高的有13种。本发明采用面积归一化法测定各脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，测定的关键因素是：(1)各脂肪酸色谱峰之间的有效分离，(2)柱前衍生方法的准确性。因素(1)通过对试验条件进行优选，以脂肪酸同分异构体色谱峰的分离度作为考察指标；因素(2)通过对鳕鱼肝油中具代表性的五种脂肪酸回收率进行分析考察。
对鳕鱼肝油中15种典型脂肪酸采用甲酯对照品进行定位确认，按出峰顺序的先后排列是肉豆蔻酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、异油酸、亚油酸、十八碳四烯酸(SDA)、顺9-二十碳烯酸、顺11-二十碳烯酸、EPA、鲸蜡烯酸、芥酸、二十二碳五烯酸(DPA)、DHA。鳕鱼肝油脂肪酸中包含3对同分异构体，分别是油酸(顺9-十八碳烯酸)/异油酸(顺11-十八碳烯酸)、顺9-二十碳烯酸/顺11-二十碳烯酸、鲸蜡烯酸(顺11-二十二碳烯酸)/芥酸(顺13-二十二碳烯酸)，这三对同分异构体的结构区别在于双键位置的不同。
对多样本的鳕鱼肝油样品经柱前衍生气相色谱法测得的各脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量进行分析，得到脂肪酸的百分含量限度范围，与采用同样方法测得的鱼油百分含量限度范围进行比较，找出两者特征性脂肪酸指标，一是鳕鱼肝油与鱼油中DHA/EPA值有明显区别，二是鳕鱼肝油中鲸蜡烯酸含量明显高于鱼油，鉴于这两个特征指标，建立了鳕鱼肝油中掺假鱼油的掺假模型，并以鲸蜡烯酸百分含量为横坐标，DHA/EPA值作为纵坐标，绘制掺假识别分析图，通过该分析图可快速识别鳕鱼肝油是否掺假鱼油及掺假程度。
常见6种植物油的脂肪酸限度参考国标，通过比较鳕鱼肝油和植物油的各脂肪酸限度指标，显示亚油酸在植物油中的含量远高于鳕鱼肝油，当鳕鱼肝油中掺入10％植物油时，亚油酸含量即可超过上限，据此特征即可对鳕鱼肝油掺假植物油进行快速鉴定。
作为优选，鉴定方法包括以下步骤：
a)混合对照品溶液制备：
称取棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、油酸甲酯、EPA甲酯、DHA甲酯置20mL棕色容量瓶中，加异辛烷溶解并稀释至刻度，制成含棕榈酸甲酯4.97mg/mL、棕榈油酸甲酯2.94mg/mL、油酸甲酯6.21mg/mL、EPA甲酯3.84mg/mL、DHA甲酯6.05mg/mL的混合对照品溶液；
b)样品脂肪酸本底含量测定：
称取鳕鱼肝油样品100mg置20mL带螺口反应瓶中，加入1.5mL的氢氧化钠-甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃恒温器中加热20min，冷却；加入2mL的硫酸甲醇(2g→100mL)溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃恒温器中加热10min，冷却；加入2mL异辛烷，旋紧瓶盖，漩涡混合1min，立即加入5mL饱和氯化钠溶液，轻摇，静置分层；吸取上清液转移至装有无水硫酸钠的具塞试管中，振摇脱水，即得供试品溶液，平行制备三份；c)加标回收率试验：
称取上述已测知含量的样品50mg，共9份，置20mL带螺口反应瓶中，精密加混合标准品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL各3份，加入1.5mL的氢氧化钠-甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃恒温器中加热20min，冷却；加入2mL的硫酸甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃恒温器中加热10min，冷却；加入2mL异辛烷，旋紧瓶盖，漩涡混合1min，立即加入5mL饱和氯化钠溶液，轻摇，静置分层；吸取上清液转移至装有无水硫酸钠的具塞试管中，振摇脱水，即得加标试验溶液；
d)按色谱条件，混合对照品溶液和供试品溶液依次进样，测定5种脂肪酸的峰面积，按外标法计算脂肪酸甲酯的含量，再换算成脂肪酸含量。
作为优选，步骤b)中加入的氢氧化钠-甲醇溶液的质量分数为2％；加入的硫酸甲醇溶液的质量分数为5％。
作为优选，相对质量校正因子f的计算公式为：
式中，Ai：组分峰面积；As：参比物峰面积；mi：组分浓度；ms：参比物浓度。
作为优选，色谱柱：DB-23毛细管柱，毛细管柱的规格为：60m×0.25mm×0.25μm；色谱柱升温程序：起始温度为170℃，以1℃/min的速率升温至225℃并保持5min；进样口温度：250℃；检测器：FID；检测器温度：280℃；载气：高纯N2，流速1.0mL/min；进样量：1μL；进样方式：分流进样，分流比：150∶1。
作为优选，鉴定鳕鱼肝油中掺假鱼油时，以鲸蜡烯酸百分含量为横坐标，DHA％/EPA％值为纵坐标，建立掺兑5％、15％、25％和50％鱼油的二维掺假模型，绘制掺假判别分析图。
作为优选，鉴定鳕鱼肝油中掺假植物油，以亚油酸含量作为特征指标，当鳕鱼肝油中掺兑任何一种植物油≥10％时，亚油酸的百分含量即超出上限，据此判别鳕鱼肝油中是否掺假了植物油。
本发明的有益效果是：本发明基于天然动植物油中的脂肪酸，其种类、数量和含量均呈现较强的特征性，本发明采用柱前衍生毛细管气相色谱技术，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行测定，按面积归一化法计算所含典型脂肪酸百分含量，并建立限度范围，植物油脂肪酸限度范围参考国标。通过分析比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸，掺假鱼油通过建立特征脂肪酸二维掺假模型，绘制掺假识别分析图，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定；掺假植物油可采用植物油中高含量的亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，可快速地对鳕鱼肝油中掺假植物油进行鉴定，这种基于鳕鱼肝油、鱼油和植物油脂肪酸特征指标的掺假鉴定方法具有科学、准确、简便的特点。
附图说明
图1是本发明鳕鱼肝油特征气相色谱图。图中，1、肉豆蔻酸 2、棕榈酸 3、棕榈油酸4、硬脂酸 5、油酸 6、异油酸 7、亚油酸 8、SDA 9、顺9-二十碳烯酸 10、顺11-二十碳烯酸11、EPA 12、鲸蜡烯酸 13、芥酸 14、DPA 15、DHA。
图2是本发明对照品气相色谱图。图中，1、棕榈酸甲酯 2、棕榈油酸甲酯 3、油酸甲酯 4、EPA甲酯 5、DHA甲酯。
图3是掺假鳕鱼肝油脂肪酸判别分析图。
图4是本发明的流程图。
具体实施方式
以下结合具体实施例及附图，对本发明作进一步的解释：
仪器与材料
Agilent 7890A气相色谱仪(美国Agilent公司)；脂肪酸甲酯对照品均购自美国NU-CHEK公司和美国SIGMA公司，纯度均＞99％；异辛烷、甲醇(色谱纯，J.T.Baker公司)，样品均来自市售和网购。
参照图4，一种鳕鱼肝油掺假鱼油鉴定方法，所述鉴定方法为采用柱前衍生毛细管气相色谱法，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行测定；按面积归一化法计算所含典型脂肪酸百分含量，并建立限度范围；通过分析比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸，掺假鱼油通过绘制特征脂肪酸二维掺假模型，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定。
鳕鱼肝油掺假植物油可采用植物油中高含量的亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，实现对鳕鱼肝油中掺假植物油的快速鉴定。
色谱条件的优化
同分异构体结构相近，在色谱中的分离难度很大，想要获得满意的分离度，必须对色谱条件进行优化。气相色谱中影响化合物分离的最重要因素是色谱柱和柱温，脂肪酸测定通常采用极性色谱柱，同类型的色谱柱不同固定相、不同牌号和规格对脂肪酸的分离有较大的影响。本发明中采用了规格为30m×0.25mm×0.25μm，不同牌号(DB-23、DB-WAX，Rtx-WAX)的毛细管柱，结果显示DB-23色谱柱对脂肪酸分离效果最佳，油酸/异油酸异构体能达到基线分离，但另两对异构体的分离效果不佳，分离度小于1.3。改变程序升温条件和流速也无法达到基线分离，故考虑增加色谱柱的长度，采用规格为60m×0.25mm×0.25μm的DB-23毛细管柱，顺9-二十碳烯酸/顺11-二十碳烯酸、鲸蜡烯酸/芥酸两对异构体的分离效果明显改善。通过对不同升温程序对分离度影响的分析考察，最终确定了最佳升温程序为：起始温度为170℃，以1℃/min的速率升温至225℃并保持5min。实验中对进样口温度、检测器温度、载气流速、分流比均进行了考察，结果显示上述几个因素对脂肪酸分离效果的影响不明显。
本发明确立的最佳色谱条件为：
色谱柱：DB-23毛细管柱(60m×0.25mm×0.25μm)；色谱柱升温程序：起始温度为170℃，以1℃/min的速率升温至225℃并保持5min；进样口温度：250℃；检测器：FID；检测器温度：280℃；载气：高纯N2，流速1.0mL/min；进样量：1μL；进样方式：分流进样，分流比：150∶1。
按上述色谱条件测得的三对异构体的分离度分别是2.0、1.4、1.6，满足面积归一化法测定要求，鳕鱼肝油典型气相色谱图见图1，该图谱可作为鳕鱼肝油的特征图谱，用于各脂肪酸快速定性确认。
脂肪酸柱前衍生化方法准确度考察
柱前衍生化方法
包括皂化反应、甲酯化反应、提取盐析与脱水，步骤为：
a.皂化反应：称取鱼肝油置带螺口反应瓶中，加入1.5mL2％氢氧化钠甲醇溶液，漩涡混合30秒，90℃加热20min，取出冷却，得皂化反应溶液；
b.甲酯化反应：在步骤a得到的皂化反应溶液中，加入2mL5％硫酸甲醇溶液，漩涡混合30秒，100℃加热10min，取出冷却，得甲酯化反应溶液；
c.提取盐析：于步骤b得到的甲酯化反应溶液中加入2mL异辛烷溶液，漩涡混合1min，立即加入5mL饱和氯化钠溶液，轻摇，静置分层；
d.脱水处理：吸取步骤c得到的上清液转移至装有少量无水硫酸钠的试管中，振摇，使脱水，脱水后溶液即为脂肪酸甲酯溶液。
脂肪酸加标回收率测定
本发明选取了5种在鳕鱼肝油中含量较高且具代表性的脂肪酸，分别是棕榈酸、棕榈油酸、油酸、EPA和DHA，其中棕榈酸代表饱和脂肪酸，棕榈油酸、油酸代表单不饱和脂肪酸，EPA、DHA代表多不饱和脂肪酸。
测定采取如下步骤：
a.混合对照品溶液制备
精密称取棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、油酸甲酯、EPA甲酯、DHA甲酯适量置20mL棕色容量瓶中，加异辛烷溶解并稀释至刻度，制成含棕榈酸甲酯4.97mg/mL、棕榈油酸甲酯2.94mg/mL、油酸甲酯6.21mg/mL、EPA甲酯3.84mg/mL、DHA甲酯6.05mg/mL的混合对照品溶液。
b.样品脂肪酸本底含量测定
精密称取鳕鱼肝油样品约100mg置20mL带螺口反应瓶中，加1.5mL2％氢氧化钠甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃恒温器中加热20min，冷却。加2mL5％硫酸甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃恒温器中加热10min，冷却。精密加入2mL异辛烷，旋紧瓶盖，漩涡混合1min，立即加5mL饱和氯化钠溶液，轻轻振摇，静置分层。吸取上清液转移至装有少量无水硫酸钠的具塞试管中，振摇脱水，即得供试品溶液，平行制备三份。按上述色谱条件，混合对照品溶液和供试品溶液依次进样，测定5种脂肪酸的峰面积，按外标法计算脂肪酸甲酯的含量，再换算成脂肪酸含量，脂肪酸甲酯转换成脂肪酸的转换系数为棕榈酸：0.948；棕榈油酸：0.948；油酸：0.953；EPA：0.956；DHA：0.959，测定结果见表1。混合对照品气相色谱图见图2。
表1 5种脂肪酸含量测定结果
c.脂肪酸加标回收率测定
取已测知含量的样品，共9份，分别精密称取约50mg至20mL带螺口反应瓶中，精密加上述标液0.5mL、1.0mL、1.5mL各3份，加入1.5mL2％氢氧化钠甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃干式恒温器中加热20min，取出冷却。加2mL5％硫酸甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃干式恒温器中加热10min，取出冷却。分别精密加入异辛烷1.5mL、1.0mL、0.5mL各3份，漩涡混合1min，立即加5mL饱和氯化钠溶液，轻轻振摇，静置分层。吸取上清液转移至装有少量无水硫酸钠的试管中，振摇，取上清液分别进样，5种脂肪酸的加样回收率测定结果见表2。由表可见，5种脂肪酸的加标回收率在98.30％～99.54％之间，RSD在1.09％～1.42％之间，表明在上述试验条件下，鳕鱼肝油中脂肪酸柱前衍生方法准确可靠。
表2回收率测定结果
脂肪酸相对质量校正因子(f)测定
采用面积归一化法对各组分进行定量的准确性取决于各组分的FID检测质量响应值(mi/Ai)，测定13种含量较高的脂肪酸mi/Ai值，结果显示DHA测得值最高，因此选择以DHA做为参比物，按下述公式计算各脂肪酸相对于DHA的f值，计算结果见表3，由表可见，鳕鱼肝油中典型脂肪酸甲酯的f值均大于0.95，故可直接用峰面积归一化进行定量分析。
公式：
式中，Ai：组分峰面积；As：参比物峰面积；mi：组分质量；ms：参比物质量
表3脂肪酸甲酯相对质量校正因子
组分 f值 组分 f值
肉豆蔻酸甲酯 0.96 十八碳四烯酸甲酯 0.97
棕榈酸甲酯 0.97 顺11-二十碳烯酸甲酯 1.00
棕榈油酸甲酯 0.96 EPA甲酯 0.98
硬脂酸甲酯 0.97 鲸蜡烯酸甲酯 0.98
油酸甲酯 0.98 DPA甲酯 0.96
顺11-十八碳烯酸甲酯 0.98 DHA甲酯 1.00
亚油酸甲酯 0.97 / /
鳕鱼肝油及鱼油脂肪酸特征分析
鳕鱼肝油是从鳕鱼肝脏提取的脂肪油，鱼油是从鱼类脂肪提取的脂肪油，两者所含的脂肪酸种类和数量基本相同，但含量区别明显，各具特征。本发明从两者特征性脂肪酸含量和含量比变化规律进行鉴定分析。发明人共收集国产和进口鳕鱼肝油原料、口服溶液剂和软胶囊样品共46批、鱼油原料及软胶囊样品共30批，将上述样品经柱前衍生处理后按面积归一化法计算脂肪酸百分含量。鳕鱼肝油中脂肪酸因鳕鱼产地和油脂提取工艺的不同会有所差异，测得的含量有一个相对较窄的波动区间(限度范围)。鱼油则受鱼种、季节、产地、加工部位以及提取工艺等因素的影响，含量波动区间大于鳕鱼肝油。鳕鱼肝油和鱼油样品中测得的典型脂肪酸含量范围见表4，由表可见，鳕鱼肝油所含脂肪酸相比鱼油呈现两大特征：①DHA含量明显高于EPA含量，46批样品中除2批疑似掺假样品外，DHA、EPA百分含量比(DHA/EPA)均在1.40～1.68范围内，均值为1.55，而鱼油样品中的DHA含量明显低于EPA含量，DHA/EPA为0.64～0.75，均值为0.68。②顺11-二十碳烯酸和鲸蜡烯酸(顺11-二十二碳烯酸)含量明显高于鱼油。鳕鱼肝油中掺入一定量的鱼油将导致DHA/EPA、顺11-二十碳烯酸和鲸蜡烯酸的含量的下降，尤其是鲸蜡烯酸，在其他鱼肝油中(鲨鱼肝油、金枪鱼肝油)中几乎没有，在鱼油中含量很低，只在鳕鱼肝油中有较高含量，鳕鱼肝油中平均含量约为鱼油的5倍，具有很强的特征性，因此从DHA/EPA和鲸蜡烯酸含量的变化规律可以对鳕鱼肝油中掺假鱼油进行判别。
表4鳕鱼肝油和鱼油脂肪酸百分含量限度
掺假模型中脂肪酸变化规律
根据鳕鱼肝油脂肪酸的特征指标及其变化规律，本发明建立了一种比较直观的掺假模型，对建模用样品进行分析筛选，选定其中28批鱼肝油样品、17批鱼油样品(脂肪酸测定结果基本一致的不同批次样品，仅选其中一批次)的掺假数据用于模型输入，以鲸蜡烯酸百分含量为横坐标，DHA/EPA值为纵坐标，建立掺兑5％、15％、25％和50％鱼油的二维掺假模型，绘制掺假判别分析图，见图3。由图可见，当鳕鱼肝油中掺兑不同比例的鱼油时，不同掺假水平呈现一定的分布规律，脂肪酸分布具有较为明显的区域性。
掺假样品的判别
测定待鉴定样品中各脂肪酸峰面积，计算各脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，当鲸蜡烯酸含量和(或)DHA/EPA值超过限度范围时(DHA/EPA以1.40～1.68为限度范围)，可初步判定该样品疑似掺假，再从判别分析图中找到相应的坐标位置，即可对掺假程度作出直观的判别和鉴定。
掺假案例分析
对鳕鱼肝油样品进行分析时，发现有2批样品中DHA/EPA值和鲸蜡烯酸含量均偏离限度，一批DHA/EPA为1.16，鲸蜡烯酸百分含量为6.74，另一批DHA/EPA为1.13，鲸蜡烯酸百分含量为5.32，在掺假模型中画出该2批样品所在坐标点(图中圆点位置)，见图2，由图可见，圆点的位置落在25％的掺假区域内，由此可判定该2批鳕鱼肝油中掺兑了约25％的鱼油。
鳕鱼肝油中掺假植物油的鉴定方法
植物油中含有多种饱和和不饱和脂肪酸，其价格通常远低于鳕鱼肝油，市场上存在鱼肝油中掺和植物油以降低成本的现象。表5为常见植物油中13种脂肪酸的百分含量限度，将鳕鱼肝油和各植物油所含脂肪酸进行分析对比，结果显示两者的脂肪酸含量呈现很大的差异性，其中植物油中亚油酸含量远高于鳕鱼肝油，可将亚油酸含量作为特征指标，当鳕鱼肝油中掺兑任何一种植物油10％时，亚油酸的百分含量即超出上限，据此可判别鳕鱼肝油中掺假了植物油。本发明模拟制备鳕鱼肝油中掺假10％植物油的掺假样品，选用表4中亚油酸含量最低的菜籽油作为掺伪用油进行分析，模拟用鳕鱼肝油样品亚油酸含量为1.6％，掺假用菜籽油亚油酸含量为12.5％，当鳕鱼肝油中掺假10％菜籽油时，模拟掺假样品中的亚油酸含量由1.6％上升至2.7％，已超出上限，故通过分析待鉴定样品中亚油酸的含量是否超出限度上限即可快速对鳕鱼肝油中掺假植物油进行鉴定。
表5植物油脂肪酸百分含量限度
注：ND为未检出(含量小于0.05％)
应当理解的是，对于本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims (7)

1.一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法为采用柱前衍生毛细管气相色谱法，对鳕鱼肝油及掺假用鱼油中的脂肪酸进行峰面积测定；按面积归一化法计算所含各脂肪酸相对总脂肪酸的百分含量，建立各脂肪酸限度范围，植物油脂肪酸限度范围参考国标；通过分析比较鳕鱼肝油及掺假用油的脂肪酸限度范围，找出具有特征指标的脂肪酸；掺假鱼油通过建立特征脂肪酸二维掺假模型，绘制掺假识别分析图，实现鳕鱼肝油掺假鱼油的快速鉴定；掺假植物油可采用植物油中高含量的亚油酸作为特征指标，将样品中测得亚油酸含量与鳕鱼肝油限度进行分析比较，实现对鳕鱼肝油中掺假植物油的快速鉴定；通过测定鳕鱼肝油中5种代表性脂肪酸的回收率对柱前衍生方法进行准确性验证，通过测定各脂肪酸相对质量校正因子f对面积归一化计算方法进行适用性验证。
2.根据权利要求1所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，鉴定方法包括以下步骤：
a)混合对照品溶液制备：
称取棕榈酸甲酯、棕榈油酸甲酯、油酸甲酯、EPA甲酯、DHA甲酯置20mL棕色容量瓶中，加异辛烷溶解并稀释至刻度，制成含棕榈酸甲酯4.97mg/mL、棕榈油酸甲酯2.94mg/mL、油酸甲酯6.21mg/mL、EPA甲酯3.84mg/mL与DHA甲酯6.05mg/mL的混合对照品溶液；
b)样品脂肪酸本底含量测定：
称取鳕鱼肝油样品100mg置20mL带螺口反应瓶中，加入1.5mL的氢氧化钠-甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃恒温器中加热20min，冷却；加入2mL的硫酸甲醇(2g→100mL)溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃恒温器中加热10min，冷却；加入2mL异辛烷，旋紧瓶盖，漩涡混合1min，立即加入5mL饱和氯化钠溶液，轻摇，静置分层；吸取上清液转移至装有无水硫酸钠的具塞试管中，振摇脱水，即得供试品溶液，平行制备三份；
c)加标回收率试验
称取上述已测知含量的样品50mg，共9份，置20mL带螺口反应瓶中，精密加混合标准品溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL各3份，加入1.5mL的氢氧化钠-甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置90℃恒温器中加热20min，冷却；加入2mL的硫酸甲醇溶液，旋紧瓶盖，漩涡混合30s，置100℃恒温器中加热10min，冷却；加入2mL异辛烷，旋紧瓶盖，漩涡混合1min，立即加入5mL饱和氯化钠溶液，轻摇，静置分层；吸取上清液转移至装有无水硫酸钠的试管中，振摇脱水，即得加标试验溶液；
d)按色谱条件，混合对照品溶液和供试品溶液依次进样，测定5种脂肪酸的峰面积，按外标法计算脂肪酸甲酯的含量，再换算成脂肪酸含量。
3.根据权利要求2所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，步骤b)中加入的氢氧化钠-甲醇溶液的质量分数为2％；加入的硫酸甲醇溶液的质量分数为5％。
4.根据权利要求1或2所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，相对质量校正因子f的计算公式为：
式中，Ai：组分峰面积；As：参比物峰面积；mi：组分浓度；ms：参比物浓度。
5.根据权利要求2所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，色谱柱：DB-23毛细管柱，毛细管柱的规格为：60m×0.25mm×0.25μm；色谱柱升温程序：起始温度为170℃，以1℃/min的速率升温至225℃并保持5min；进样口温度：250℃；检测器：FID；检测器温度：280℃；载气：高纯N2，流速1.0mL/min；进样量：1μL；进样方式：分流进样，分流比：150∶1。
6.根据权利要求1或2所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，鉴定鳕鱼肝油中掺假鱼油时，以鲸蜡烯酸百分含量为横坐标，DHA％/EPA％值为纵坐标，建立掺兑5％、15％、25％和50％鱼油的二维掺假模型，绘制掺假判别分析图。
7.根据权利要求1或2所述的一种鳕鱼肝油掺假鉴定方法，其特征在于，鉴定鳕鱼肝油中掺假植物油，以亚油酸含量作为特征指标，当鳕鱼肝油中掺兑任何一种植物油≥10％时，亚油酸的百分含量即超出上限，据此判别鳕鱼肝油中是否掺假了植物油。
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