CN108795777A - 出芽短梗霉rm 1603及其应用 - Google Patents

出芽短梗霉rm 1603及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108795777A
CN108795777A CN201810549167.1A CN201810549167A CN108795777A CN 108795777 A CN108795777 A CN 108795777A CN 201810549167 A CN201810549167 A CN 201810549167A CN 108795777 A CN108795777 A CN 108795777A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aureobasidium
aureobasidium pullulans
pulullan
pullulans
polysaccharide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810549167.1A
Other languages
English (en)
Inventor
赵洪新
郝雅荞
吴言
沈琦
潘镜宇
刘鑫
钱玙呈
杨佳瑶
李欧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University of Technology ZJUT
Original Assignee
Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University of Technology ZJUT filed Critical Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority to CN201810549167.1A priority Critical patent/CN108795777A/zh
Publication of CN108795777A publication Critical patent/CN108795777A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C12P19/10—Pullulan

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于微生物应用技术领域，具体公开了一种出芽短梗霉RM 1603，为短梗霉(Aureobasidium sp.)，其保藏号为：CGMCC NO:14657。本发明还同时公开了上述出芽短梗霉RM 1603的用途：制备普鲁兰多糖(Pulluan)。与目前报道的100多株出芽短梗霉相比，RM 1603具有明显的产糖优势，是一株极具开发潜力的产糖新菌株。

Description

出芽短梗霉RM 1603及其应用
技术领域
本发明涉及一种具有高产普鲁兰糖的出芽短梗霉RM 1603及其应用，属于微生物应用技术领域。
背景技术
微生物胞外多糖(Exopolysaccharides,EPS)具有多方面生物活性，是极具开发价值的天然产物(Flemming,et al.2016)。普鲁兰糖(Pullulan)是由出芽短梗霉(Aureobasidium spp.)产生的胞外、粘质水溶、非离子线性多糖，是一种特殊的微生物胞外多糖。普鲁兰糖基本结构由α-1,4糖苷键连接的麦芽三糖(Maltotriose)重复单位，经α-1,6糖苷键聚合而成的直链状多糖，具有独特的理化性质，及无毒、无诱变、无致癌、无免疫反应等生物学特性，在食品、石油、化工、医药行业，特别是药物载体、靶向治疗、医学成像、组织工程、血浆置换、疫苗、分子伴侣活性等新兴领域有特殊的应用，是性能优良的天然生物材料(Singh,et al.2017)。因此，普鲁兰糖是极具开发价值的一类天然多糖，开展出芽短梗霉(Aureobasidium spp.)产普鲁兰糖的基础理论研究与应用技术开发，具有重要理论意义与巨大商业价值(Trinetta,et al.2016；Singh,et al.2016)。
出芽短梗霉(Aureobasidium spp.)，又称黑酵母(Black Yeast)，是具有酵母细胞(Cell)和菌丝体(Hypha)两种形态的一类特殊真菌，FDA认证的GRAS(Generally regardedas safe)微生物，普鲁兰糖(Pullulan)的主要产生菌，广泛存在于水、土壤、深海底泥、植物表面等自然环境中(Singh,et al.2017)。50年代，Bernier首次报道了产糖芽霉菌(Pullularia pullulans)(即出芽短梗霉，Aureobasidium pullulans)代谢过程中可产特殊的胞外粘质多糖，关于普鲁兰糖的研究引起了广泛关注(Bernier,et al.1958)；60年代，发现普鲁兰糖具有良好的生物兼容性，可制作药物包衣(Capsule)；70年代，日本实现了普鲁兰糖的产业化；80年代，日本开发出了新的普鲁兰薄膜工艺。如今日本是普鲁兰糖相关产品的生产大国，占据国际市场的主导地位，高产糖专利菌株也为国外公司垄断。经过几十年的努力，约近100株不同来源的出芽短梗霉(Aureobasidium spp.)从菌株筛选、产糖条件、发酵工艺、诱变育种、基因工程改造等方面做了大量的工作，取得了丰富的研究成果(Cheng,et al.2011；Sugumaran,et al.2017)。但相对于普鲁兰糖(Pullulan)下游的开发利用，对高产糖出芽短梗霉的寻找仍然是研究人员关注的热点。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种高产糖的出芽短梗霉RM 1603及其用途。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种出芽短梗霉RM 1603，为短梗霉(Aureobasidium sp.)，其保藏号为：CGMCC NO:14657。
本发明还同时提供了上述出芽短梗霉RM 1603的用途：制备普鲁兰多糖(Pulluan)。
本发明还同时提供了一种普鲁兰多糖(Pulluan)制剂：其有效成分为出芽短梗霉RM 1603的代谢产物。
本发明的可产普鲁兰糖的菌株出芽短梗霉，其活性成分为上述出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌制剂和/或其代谢产物。
该出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603是从无锡太湖边树根际土壤分离得到。
该出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的菌落特征：在发酵培养基平板上呈圆形或椭圆形生长、表面光滑粘稠、质地均匀容易挑起。单菌落整体颜色均一、乳白色(见图1)。菌株延长培养时间菌落边缘呈放射状并逐渐变黑，将菌落边缘部位置于倒置显微镜下观察呈菌丝状生长(见图3)。
该出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌体形态学特征：摇瓶培养状态的菌液制片在显微镜下观察，菌体呈现椭圆状的单个细胞(见图2)。
该出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的生长特征：在24～36℃时均能正常生长，最适生长温度为28℃(见图4A)；在pH3～9时均可生长，最适生长pH6.5(见图4B)。
所述出芽短梗霉RM 1603(Aureobasidium sp.)生理生化特征：菌体不能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、半乳糖等糖，可以同化葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉及棉子糖等碳源，对***糖同化作用较弱，蔗糖和酵母浸粉为发酵的最佳碳源和氮源。
所述出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的ITS基因序列如图7所示，Genbank No：MH041183。
本发明的目的还在于提供上述出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603和/或所述出芽短梗霉RM 1603的各种固型、液型制剂和/或所述出芽短梗霉RM 1603的代谢物和/或所述出芽短梗霉RM 1603的代谢物为原料之一的产品以及拓展或衍生的应用的产品，在工业及产业中的应用。
本发明菌株的代谢产物为普鲁兰多糖(Pulluan)，其活性有效成分能制备成出芽短梗霉和/或该出芽短梗霉的各种固型、液型制剂和/或该出芽短梗霉的代谢物和/或该出芽短梗霉的代谢物为原料之一产品。
所述出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603发酵液和代谢物具体可按照如下方法制备：以普鲁兰糖发酵培养基为基本培养基，在液体培养基中培养所述类出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603，除去液体培养物(发酵液)中的所述类出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603，即得到所述类出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的发酵液；将发酵液高速离心后，上清液用一次性细菌过滤器过滤成不含菌体的发酵液为代谢物。
本发明的菌株A.pullulans RM 1603是实验室从太湖近岸植物根际土壤中分离得到，在普鲁兰糖发酵培养基、转速180～200r/min、28℃条件下发酵培养至96h产糖最高可达63.41±2.0g/L的高产糖菌株。与目前报道的100多株出芽短梗霉相比，RM 1603具有明显的产糖优势，是一株极具开发潜力的产糖新菌株。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌株的菌落形态图。
图2为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603在100x(油镜)光学显微镜下，菌体的细胞形态图。
图3为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603在10x光学显微镜下的菌丝形态图。
图4为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的最适生长温度/pH对比图。
图5为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603在最适温度28℃/最适pH6.5的生长曲线。
图6为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的产糖曲线；
图7为出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌株ITS/18srDNA树状分类地位图；
A：ITS；B：18srDNA。
图8为本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌株产普兰糖红外光谱分析图。
图9为本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603菌株产普兰糖结构薄层层析分析图。
A～D分别代表：普鲁兰糖标准液，多糖样品液，普鲁兰糖标准品酶解液，多糖样品酶解液；
c～d分别代表普鲁兰糖标准品、多糖样品经普鲁兰酶水解后的麦芽三糖。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的分离与菌株鉴定
1、土壤样品采集
土壤样品：采集于江苏省无锡市太湖岸边树林地土壤。
2、菌株的分离筛选
取土壤样品一份，加入无菌水100mL，在30℃，180rpm摇床，震荡30min，按10-1、10-2、
10-3这样的比例依次稀释后分别接种于PDA固体培养基培养平板，培养基中加入100ug/mL
的氯霉素，直至菌落出现。用接种针挑取边缘生长良好的细落，接种于新的PDA固体培养基上，待新接种的菌长成菌落后，再挑取其边缘的划线培养，如此反复得到纯化，直到得到单菌落。
将所得的菌落进行摇瓶发酵培养，挑选产糖量最高的菌株，从而获得菌株RM1603。
将该菌株RM 1603进行了保藏，保藏信息如下：
保藏名称为：短梗霉Aureobasidium sp.，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC NO:14657，保藏时间2017年09月21日。
3、出芽短梗霉的鉴定及生长条件测定
对菌株RM 1603进行形态学、生理生化特性和部分保守序列(ITS、18srDNA)的分析。
结果表明，RM 1603菌株在发酵培养基平板上呈圆形或椭圆形生长、表面光滑粘稠、质地均匀容易挑起。单菌落整体颜色均一、乳白色(见图1)。延长培养时间菌落边缘呈放射状并逐渐变黑，将菌落边缘部位置于倒置显微镜下观察呈菌丝状生长(见图3)，取摇瓶培养状态的菌液制片在显微镜下观察，可观察到菌体呈现椭圆状的单个细胞(见图2)。在24～36℃时均能正常生长，最适生长温度为28℃(见图4A)；在pH3～9时均可生长，最适生长pH6.5(见图4B)。不能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、半乳糖等糖，可以同化葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉及棉子糖等碳源，对***糖同化作用较弱，蔗糖和酵母浸粉为发酵的最佳碳源和氮源。
实施例2、本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603的生长曲线绘制
活化：
取一接种环的出芽短梗霉菌株RM 1603接种至50ml的普鲁兰糖发酵培养基上，于28℃、180～200r/min的条件下进行活化，得出芽短梗霉菌株RM 1603活化种子液。
将出芽短梗霉菌株RM 1603活化种子液以2％(v/v，1OD)接种量接种至装有50mL普鲁兰糖发酵培养基的250mL三角瓶内，28℃，180～200r/min摇瓶培养，从24h起每隔12h取样一次。三次生物学重复，测定菌体生物量，以发酵时间为横坐标，以生物量(细胞干重，g/L)为纵坐标，绘制菌株生长曲线。
普鲁兰糖发酵培养基的配方为：蔗糖80g/L，酵母浸粉2g/L，(NH4)2SO4 0.6g/L，NaCl 2g/L，K2HPO4 6g，MgSO4·7H2O 0.2g/L；pH6～7(较佳为pH6.5)。
生物量测定方法：取一定体积不同发酵时间的发酵液5000r/min离心20min，沉淀用蒸馏水洗涤2～3次，离心，烘干，称重，按比例换算生物量。
换算公式：
生物量(g/L)＝细胞干重(g)/沉淀发酵液体积(L)。
所得的生长曲线如图5所述，根据图5，可得知0～96h为菌体和产糖的快速增长期，96～168h为平稳期，至132h菌体生物量达到最高点，其生物量稳定在17.62±2.83g/L左右，168h以后进入衰退期。
实施例3、本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603ITS序列/18srDNA的PCR扩增、测序及树状分类图绘制
内转录间隔区1和2引物序列：
ITS1 5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’
ITS4 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’
18S rDNA引物序列：
NS1 5’-GTAGTCATATGCTTGTCTC-3’
NS6 5’-GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC-3’
菌体总DNA提取，利用TIANGEN提取试剂盒。提取步骤按试剂盒说明书。Taq采用NEB的普通PCR用酶DNA聚合酶(货号：#M0480S)和高保真超保真2X Master Mix(货号：#M0491V)，混合使用，确保PCR产物的真实性；
PCR反应体系组成(100ul)：
加双或三蒸水至100ul
PCR反应条件：
94℃4min；
94℃30sec、55℃30sec、72℃1.5min，35cycles；
72℃10min；
4℃保存。
PCR产物用鼎国生物公司DNA凝胶回收试剂盒回收。将回收产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，，分类树分析表明该菌株属于出芽短梗霉属，见图7。
出芽短梗霉(A.pullulans sp.nov RM 1603)ITS(ITS1、ITS4)部分序列，如SEQ IDNo.1所示；
SEQ New:480bp；
Composition 133A；121C；111G；115T；0OTHER
Percentage:27.7％A；25.2％C；23.1％G；24.0％T；0.0％OTHER
Molecular Weight(kDa):ssDNA:148.08dsDNA:295.91
ORIGIN。
出芽短梗霉(A.pullulans sp.nov RM 1603)18srDNA部分序列，如SEQ ID No.2所示；SEQ New:567bp；
Composition 163A；118C；140G；146T；0OTHER
Percentage:28.7％A；20.8％C；24.7％G；25.7％T；0.0％OTHER
Molecular Weight(kDa):ssDNA:175.57dsDNA:349.53
ORIGIN。
实施例4、本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603产糖曲线的测定
供试菌株：出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)RM 1603。
具体操作如下：
将出芽短梗霉菌株RM1603活化种子液以2％(v/v，1OD)接种量接种至装有50mL普鲁兰糖发酵培养基的250mL三角瓶内，28℃，180～200r/min摇瓶培养，从24h起每隔12h取样一次。三次生物学重复，测定胞外多糖产量，以发酵时间为横坐标，以胞外多糖产量(g/L)为纵坐标绘制产糖曲线。
胞外多糖产量测定方法：取不同发酵时间的发酵液5000r/min离心20min，取一定体积的上清液加2倍体积的无水乙醇，置于4℃条件下过夜沉淀，次日再次离心(5000r/min离心20min)，沉淀用无水乙醇洗涤2～3次，离心(5000r/min离心20min)，烘干(80℃干燥6h)，称重，按比例换算多糖产量。
换算公式：
多糖产量(g/L)＝沉淀多糖干重(g)/沉淀发酵液体积(L)。
所得的产糖曲线如图6所述，根据图6，可得知：在24～96h菌体多糖产量快速增长，96小时达到最高产量63.41±2.0g/L和最高产率3.56±0.26g/g，96～168h为平稳期，其产糖量稳定在60.51±1.72g/L左右，168h以后进入产糖的衰退期。
实施例5、本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)1603产普兰糖红外光谱分析
取KBr分别以50:3和12:1与纯化所得多糖(作为样品)和普鲁兰多糖(作为标准品)充分研磨、混匀压片。在4000～400cm-1进行对照品采集。
采用savage法对粗多糖除蛋白处理，然后经DEAE纤维素柱层析及Sephadex-G100柱层析方法对多糖再次纯化最终获得纯化多糖，纯化方法及过程同文献《曹海石,孙宏,梁放，等.普鲁兰多糖的分离纯化及结构鉴定[J].高等学校化学学报，1999(11)：1729-1732.》一致。
红外光谱结果如图8所示，3000cm-1和1350～1400cm-1处为糖类物质特征吸收峰，普鲁兰糖的特征吸收峰为1200～1030cm-1处的vc＝0峰和930～900cm-1处的D-吡喃葡萄糖环振动峰。红外光谱结果显示多糖样品出现的特征峰与标准普鲁兰糖结构基本一致(图8)。因此，可得知该本发明纯化所得多糖为普鲁兰多糖。
实施例6、本发明的出芽短梗霉(Aureobasidium sp.)1603产普鲁兰糖结构薄层层析分析
10g硅胶干粉中加入0.02mol/L的乙酸钠溶液25mL，充分搅拌，平铺在玻璃板上，震敲使其均匀后自然晾干后，制成硅胶板，置于干燥器中待用。将0.05g/mL普鲁兰糖标准液和粗提取所得多糖样品溶液(浓度为0.05g/mL，以蒸馏水作为溶剂)各分成两份，每份3mL。各取一份添加普鲁兰酶60uL(浓度为1.2g/mL)，室温酶解8h。利用毛细管将普鲁兰糖标准液、多糖样品液、普鲁兰糖标准酶解液、多糖样品酶解液点样于硅胶层析板上，在展开剂中层析，待液体层析至硅胶板顶部后取出吹干，喷硫酸显色剂，吹干后于110℃烘箱烘烤，观察显色反应。
由于普鲁兰糖是由麦芽三糖单体经α-1,6糖苷键连接，而该键可被普鲁兰酶特异性水解，因而在加入普鲁兰酶消化后，普鲁兰糖会被分解成麦芽三糖单体。在硅胶板上，由于普鲁兰糖分子量较大，故留在起点位置上，如A所示；酶解后产生的麦芽三糖分子量较小，如c所示。图9中A、B位置基本一致，c、d位置基本一致，说明普鲁兰糖标准品酶解液与多糖样品酶解液中都含麦芽三糖，由此推断该多糖为普鲁兰糖(图9)。
实验一、将出芽短梗霉菌株RM 1603活化种子液以2％(v/v，1OD)接种量接种至装有50mL普鲁兰糖发酵培养基的250mL三角瓶内，28℃，180～200r/min摇瓶培养，培养时间为96h，培养后，进行离心获取发酵液，然后按照醇沉干燥法进行检测，得知产糖量为63.41±2.0g/L，检测及计算方法如下：
胞外多糖产量测定方法：取发酵96h的发酵液5000r/min离心20min，取一定体积的上清液加2倍体积的无水乙醇，置于4℃条件下过夜沉淀，次日再次离心(5000r/min离心20min)，沉淀用无水乙醇洗涤2～3次，离心(5000r/min离心20min)，烘干(80℃干燥6h)，称重，按比例换算多糖产量。
换算公式：
多糖产量(g/L)＝沉淀多糖干重(g)/沉淀发酵液体积(L)。
对比实验一、将目前已知的短梗霉菌(如下表1所述)，按照实验一所述方法进行培养，最终所得结果如表1所述。
表1
参考文献
[1]陈国强,吴文涛,王纪明，等.出芽短梗霉A5产胞外多糖发酵条件的优化及产物结构鉴定[J].中国生物工程杂志，2017(02)：54-62.
[2]Ruly T H,Ayres O C,Ajaz A M,et al.Low-melanin containing pullulanproduction from sugarcane bagasse hydrolysate by Aureobasidium pullulans infermentations assisted by light-emitting diode[J].Bioresource Technology,2017,230:76-81
[3]戎蓉,欧杰.响应面法优化普鲁兰多糖发酵工艺条件[J].山东农业大学学报(自然科学版)，2016(05)：659-663.
[4]Sheng Long,Tang Gui Yue,Su Peng,et al.Understanding the influenceof Tween 80on pullulan fermentation by Aureobasidium pullulans CGMCC1234[J].Carbohydrate polymers,2016,136:1332-1337.
[6]马赛箭,安超,薛文娇，等.有机氮源对出芽短梗霉发酵普鲁兰多糖的影响[J].食品工业科技，2016(11)：169-173.
[7]王贤卓.高产无色素普鲁兰多糖菌株的选育及发酵条件优化[D].南昌：南昌大学，2015.[8]袁林,郭建军,王贤卓，等.茁芽短梗霉P1012产普鲁兰多糖的条件优化[J].食品工业，2016(06)：92-95.
[9]薛文娇,马赛箭,常帆，等.利用动力学模型探讨碳源浓度对普鲁兰分批发酵过程的影响[J].化学工程，2015(11)：5-10+40.
[10]Li H F,Zhang Y Y,Gao Y Y,et al.Characterization of UGPase fromAureobasidium pullulans NRRL Y-12974and Application in Enhanced PullulanProduction[J].Applied biochemistry and biotechnology,2016,178(6):1141-1153.
[11]Sheng L,Zhu G L,Tong Q Y.Effect of uracil on pullulan productionby Aureobasidium pullulans CGMCC1234[J].Carbohydrate polymers,2014,101:435-437.
[12]Seo C,Won L H,Suresh A,et al.Improvement of fermentativeproduction of exopolysaccharides from Aureobasidium pullulans under variousconditions[J].Korean journal of chemical engineering,2014,31(8):1433-1437.
[13]高璇璇,汪建明,卢星达，等.高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉的诱变育种[J].中国食品添加剂，2013(S1)：45-49.
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
序列表
<110> 浙江理工大学
<120> 出芽短梗霉RM 1603及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 480
<212> DNA
<213> 短梗霉(Aureobasidium sp.)
<400> 1
tccctacctg atccgaggtc aacctagaaa aataaaaggt ttcagtcggc agaagtcctc 60
tcctttgaca gacgttcgaa taaattctac tacgcctaaa gccggtgagg cctcgccgag 120
gtctttaagg cgcgcccaac taaggacggc acccaatacc aagcatagct tgagtggtgt 180
aatgacgctc gaacaggcat gcccctcgga ataccaaggg gcgcaatgtg cgttcaaaga 240
ttcgatgatt cactgaattc tgcaattcac attacttatc gcatttcgct gcgttcttca 300
tcgatgcgag aaccaagaga tccgttgttg aaagttttga tttattcaaa attttaactc 360
agacgaccgg tttaataaca agagtttggt ttaactctgg cgggcgctcg cctgggacga 420
atccccagcg gctcgagacc gagcggtccc gccaaagcaa caaggtagtt ttaacaacaa 480
<210> 2
<211> 567
<212> DNA
<213> 短梗霉(Aureobasidium sp.)
<400> 2
cggtgaaact gcgaatggct cattaaatca gttatcgttt atttgatagt accttactac 60
ttggataacc gtggtaattc tagagctaat acatgctaaa aaccccaact tcggaagggg 120
tgtatttatt agataaaaaa ccaacgccct tcggggctcc ttggtgattc ataataacta 180
aacgaatcgc atggccttgc gccggcgatg gttcattcaa atttctgccc tatcaacttt 240
cgatggtagg atagtggcct accatggtat caacgggtaa cggggaatta gggttctatt 300
ccggagaggg agcctgagaa acggctacca catccaagga aggcagcagg cgcgcaaatt 360
acccaatccc gacacgggga ggtagtgaca ataaatactg atacagggct cttttgggtc 420
ttgtaattgg aatgagtaca atttaaatcc cttaacgagg aacaattgga gggcaagtct 480
ggtgccagca gccgcggtaa ttccagctcc aatagcgtat attaaagttg ttgcagttaa 540
aaagctcgta gttgaacctt gggcctg 567

Claims (3)

1.出芽短梗霉RM 1603，其特征在于：为短梗霉(Aureobasidium sp.)，其保藏号为：CGMCC NO:14657。
2.如权利要求1所述的出芽短梗霉RM 1603的用途，其特征在于：制备普鲁兰多糖(Pulluan)。
3.普鲁兰多糖(Pulluan)制剂，其特征在于：其有效成分为出芽短梗霉RM 1603的代谢产物。
CN201810549167.1A 2018-05-31 2018-05-31 出芽短梗霉rm 1603及其应用 Pending CN108795777A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810549167.1A CN108795777A (zh) 2018-05-31 2018-05-31 出芽短梗霉rm 1603及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810549167.1A CN108795777A (zh) 2018-05-31 2018-05-31 出芽短梗霉rm 1603及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108795777A true CN108795777A (zh) 2018-11-13

Family

ID=64089809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810549167.1A Pending CN108795777A (zh) 2018-05-31 2018-05-31 出芽短梗霉rm 1603及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108795777A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243135A (zh) * 2012-12-31 2013-08-14 天津北洋百川生物技术有限公司 生产普鲁兰多糖的新培养基及发酵生产普鲁兰多糖的方法
CN103695500A (zh) * 2013-12-27 2014-04-02 天津北洋百川生物技术有限公司 一种提高普鲁兰多糖产量的方法
CN103740785A (zh) * 2013-12-28 2014-04-23 天津北洋百川生物技术有限公司 高密度发酵生产普鲁兰多糖的方法
KR20160092744A (ko) * 2015-01-28 2016-08-05 건양대학교산학협력단 아우레오바시디움 플루란스의 멜라린 색소 억제방법 및 플루란 제조방법
CN106754410A (zh) * 2016-12-09 2017-05-31 石河子大学 一种产生普鲁兰多糖的菌株及利用其发酵生产普鲁兰多糖的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103243135A (zh) * 2012-12-31 2013-08-14 天津北洋百川生物技术有限公司 生产普鲁兰多糖的新培养基及发酵生产普鲁兰多糖的方法
CN103695500A (zh) * 2013-12-27 2014-04-02 天津北洋百川生物技术有限公司 一种提高普鲁兰多糖产量的方法
CN103740785A (zh) * 2013-12-28 2014-04-23 天津北洋百川生物技术有限公司 高密度发酵生产普鲁兰多糖的方法
KR20160092744A (ko) * 2015-01-28 2016-08-05 건양대학교산학협력단 아우레오바시디움 플루란스의 멜라린 색소 억제방법 및 플루란 제조방법
CN106754410A (zh) * 2016-12-09 2017-05-31 石河子大学 一种产生普鲁兰多糖的菌株及利用其发酵生产普鲁兰多糖的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AN C等: "Efficient production of pullulan by Aureobasidium pullulans grown on mixtures of potato starch hydrolysate and sucrose", 《BRAZ J MICROBIOL》 *
李冰等: "出芽短梗霉发酵生产茁霉多糖工艺优化研究 ", 《食品科技》 *
沈琦等: "出芽短梗霉新菌株RM1603产普鲁兰多糖条件优化及多糖分析", 《生物技术通讯》 *
龙锡等: "植物种子内生菌的研究进展", 《浙江农业科学》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102220270B (zh) 一种产硫酸软骨素菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产硫酸软骨素
US20190284521A1 (en) A bacillus subtilis strain, culture method and use thereof
CN106047780B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其在联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸中的运用
CN109294933B (zh) 一株酿酒酵母及其与产酯酵母共培养提高传统发酵食品品质的方法
CN102586151B (zh) 一株高产多糖的菌株及利用该菌株发酵生产多糖的方法
CN116426391B (zh) 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用
Xu et al. Production of exopolysaccharides by submerged culture of an enthomopathogenic fungus, Paecilomyces tenuipes C240 in stirred-tank and airlift reactors
CN106635920A (zh) 一种高产岩藻多糖酶的海洋交替假单胞菌及其应用
CN109321479A (zh) 耐酸酿酒酵母及其用途
RU2381270C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ Clostridium acetobutylicum - ПРОДУЦЕНТ БУТАНОЛА, АЦЕТОНА И ЭТАНОЛА
CN103937691A (zh) 一株产β-果糖苷酶的米曲霉菌株及其培养方法与应用
CN110616150B (zh) 一株高产多糖华泽兰内生真菌及其应用
CN107118980A (zh) 来自海洋的解角质素微杆菌mcda02及其产酶方法与产品
CN111518711B (zh) 一株肠杆菌株及其在联产微生物胞外多糖和2,3-丁二醇中的应用
CN113430126B (zh) 一株短梗霉及用它制备黑色素多糖的方法
CN108795777A (zh) 出芽短梗霉rm 1603及其应用
CN105505798A (zh) 一种产麦角甾醇内生真菌及其应用
CN110643552B (zh) 一种利用可溶性淀粉制备海藻糖浆的菌株及其应用
CN103468606A (zh) 一株产酸克雷伯氏菌及其在生产蒜糖醇中的应用
CN109735473B (zh) 发酵法制水溶性姜黄素
CN103173398B (zh) 一株短小杆菌以及由其发酵制备海藻糖的方法
CN109182185A (zh) 一株耐受低pH的乙醇生产运动发酵单胞菌菌株及其分离筛选方法和应用
CN105199966B (zh) 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用
NL2030498B1 (en) Method for producing p-coumaric acid esterases by degrading sorghum straw with the natural anaerobic fungus-methanogen co-culture
Chen et al. Characteristic analysis and fermentation optimization of a novel Aureobasidium pullulans RM1603 with high pullulan yield

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181113

RJ01 Rejection of invention patent application after publication