CN108752441B - 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用 - Google Patents

一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用。本发明通过水稻谷蛋白分选突变体gpa5的表型分析和目标基因的初步定位,最终克隆得到谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5,该相关蛋白由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成,或将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且仍具有谷蛋白分选相关的由序列SEQ ID NO.1衍生的蛋白质。本发明的谷蛋白分选相关蛋白影响水稻胚乳中谷蛋白的分选过程,将所述蛋白的编码基因导入成熟谷蛋白含量降低的植物中,可以得到成熟谷蛋白含量正常的转基因植物,因此,本发明所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。

Description

一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用
技术领域
本发明属于基因工程领域,涉及一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用。
背景技术
水稻是世界上近一半人口的主粮。第一次绿色革命和杂交稻的大面积推广实现了水稻产量的两次飞跃。近期,我国科学家又提出了超级理想型籼-粳F1杂种的分子设计模型,以期实现水稻产量的第三次飞跃。然而,由于我国稻米品质欠佳,远不能满足大众对品质尤其是食味品质越来越高的要求,从而导致连年丰收后的“国产稻米粮满仓”与大米进口不断增长的矛盾日益突出。淀粉是稻米中最主要的营养物质,其含量、组成和结构对稻米的品质有着决定性的影响,因此目前稻米食味品质的改良往往以淀粉的改良为主,但蛋白质在稻米食味品质形成中的作用也不容忽视。谷蛋白是稻米中最重要的贮藏蛋白,是稻米蛋白品质改良的首选目标。因此,解析水稻谷蛋白合成、转运、加工和积累的分子机制对稻米的品质改良至关重要。
57H突变体是稻米蛋白品质改良研究的良好遗传材料。目前已经克隆了6个调控谷蛋白分选的关键基因,并初步描绘了谷蛋白分选的分子途径,但谷蛋白分选的确切机理我们仍知之甚少。PX结构域由100-120个氨基酸构成,首次在人类NADPH氧化酶复合体细胞质组分p47 phox 和p40 phox 中被鉴定。它是继PH (Pleckstrin homology)、FYVE和ENTH结构域之后,加入脂信号途径的又一新成员。目前尚无报道关于含有PX结构域蛋白参与水稻谷蛋白分选的研究。
发明内容
本发明通过水稻谷蛋白分选突变体gpa5的表型分析和目标基因的初步定位,最终克隆得到谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5,因而本发明提供一种谷蛋白分选相关蛋白及其编码基因与应用。
本发明提供的谷蛋白分选相关蛋白(OsGPA3),来源于稻属水稻(Oryza sativavar.Kitaaake),是如下(a)或(b)的蛋白质:
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且仍具有所述功能的衍生蛋白质。
序列表中的序列1由710个氨基酸残基组成,自氨基末端第67至179位为PX结构域,435-559为CC结构域。
为了使(a)中的OsGPA5便于纯化,可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。
表1 标签的序列
标签 残基 序列
Poly-Arg 5-6(通常为5个) RRRRR
Poly-His 2-10(通常为6个) HHHHHH
FLAG 8 DYKDDDDK
Strep-tag
Figure 257146DEST_PATH_IMAGE001
8 WSHPQFEK
c-myc 10 EQKLISEEDL
上述(b)中的OsGPA5可人工合成,也可先合成其编码基因,再进行生物表达得到。上述(b)中的OsGPA5的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子,和/或进行一个或几个碱基对的错义突变,和/或在其5´端和/或3´端连上表1所示的标签的编码序列得到。
编码上述贮藏蛋白分选相关蛋白的基因(OsGPA5)也属于本发明的保护范围。
所述基因OsGPA5可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子:
1)序列表中序列2所示的DNA分子;
2)序列表中SEQ ID NO.3所示的DNA分子;
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码所述蛋白的DNA分子;
4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90%以上同源性,且编码谷蛋白分选相关蛋白的DNA分子。
序列表中的序列2由2133个核苷酸组成。
所述严格条件可为在0.1×SSPE (或 0.1×SSC),0.1% SDS的溶液中,在65oC下杂交并洗膜。
含有以上任一所述基因的重组表达载体也属于本发明的保护范围。
可用现有的植物表达载体构建含有所述基因的重组表达载体。
所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等。所述植物表达载体还可包含外源基因的3’端非翻译区域,即包含聚腺苷酸信号和任何其它参与mRNA加工或基因表达的DNA片段。所述聚腺苷酸信号可引导聚腺苷酸加入到mRNA前体的3’端,如农杆菌冠瘿瘤诱导(Ti)质粒基因(如胭脂合成酶Nos基因)、植物基因(如大豆贮存蛋白基因)3’端转录的非翻译区均具有类似功能。
使用所述基因构建重组植物表达载体时,在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型启动子或组成型启动子,如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、玉米的泛素启动子(Ubiquitin),它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用;此外,使用本发明的基因构建植物表达载体时,还可使用增强子,包括翻译增强子或转录增强子,这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等,但必需与编码序列的阅读框相同,以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的,可以是天然的,也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。
为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选,可对所用植物表达载体进行加工,如加入可在植物中表达的编码可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。从转基因植物的安全性考虑,可不加任何选择性标记基因,直接以逆境筛选转化植株。
所述重组表达载体可为在pCAMBIA1305.1载体(http://www.cambia.org/daisy/cambia/585) 的多克隆位点SmaI之间重组***所述基因(OsGPA5)得到的重组质粒。所述重组质粒具体可为pCAMBIA1305.1-OsGPA5;所述pCAMBIA1305.1-OsGPA3是将由OsGPA3基因组编码序列连同上游2724bp的启动子区和下游3138bp的片段通过重组技术***到pCAMBIA1305.1多克隆位点SmaI之间得到的(Clontech公司,Infusion重组试剂盒)。
将含有OsGPA5的pCAMBIA1305.1命名为pCAMBIA1305.1-OsGPA5
含有以上任一所述基因(OsGPA5)的表达盒、转基因细胞系及重组菌均属于本发明的保护范围。
本发明的另一个目的是提供一种培育谷蛋白分选正常的转基因植物的方法。
本发明提供的培育谷蛋白分选正常的转基因植物的方法,是将所述基因导入谷蛋白分选异常的植物中,得到谷蛋白分选正常的转基因植物;所述谷蛋白分选异常植物为胚乳中谷蛋白前体剧增并伴随成熟谷蛋白含量降低的植物;所述谷蛋白分选正常的转基因植物为谷蛋白前体能被正常加工成为成熟谷蛋白的转基因植物。具体来说,所述基因通过所述重组表达载体导入谷蛋白分选异常植物中;所述谷蛋白分选异常植物可为gpa5
所述蛋白、所述基因、所述重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌或所述方法均可应用于水稻育种。
利用任何一种可以引导外源基因在植物中表达的载体,将编码所述蛋白的基因导入植物细胞,可获转基因细胞系及转基因植株。携带有所述基因的表达载体可通过使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化植物细胞或组织,并将转化的植物组织培育成植株。被转化的植物宿主既可以是单子叶植物,也可以是双子叶植物,如:烟草、百脉根、拟南芥、水稻、小麦、玉米、黄瓜、番茄、杨树、草坪草、苜宿等。
本发明的谷蛋白分选相关蛋白影响水稻胚乳中谷蛋白的分选过程。将所述蛋白的编码基因导入成熟谷蛋白含量降低的植物中,可以得到成熟谷蛋白含量正常的转基因植物。所述蛋白及其编码基因可以应用于植物遗传改良。
附图说明
图1野生型Kitaake和突变体gpa5的外观表型;
图2野生型Kitaake和突变体gpa5 SDS-PAGE和Western blot分析;
图3野生型Kitaake和突变体gpa5发育胚乳的考马斯亮蓝染色观察;
图4野生型Kitaake和突变体gpa5发育胚乳的免疫胶体金观察;
图5突变基因的图位克隆;
图6转基因互补株系的表型分析;
图7pCAMBIA1305.1载体图谱。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。
实施例1、水稻中谷蛋白分选相关蛋白及其编码基因的发现
一、水稻谷蛋白分选突变体gpa5的表型分析
在粳稻品种kitaake的60Co辐射突变体库中筛选出籽粒粉质的突变株系gpa5。与野生型相比,gpa5的主要特征是籽粒粉质,不透明(见图1A)。扫描电镜分析证实gpa5中淀粉颗粒松散,可能是导致胚乳粉质不透明的主要原因(见图1B)。gpa5种子蛋白的SDS-PAGE图谱显示谷蛋白57 kDa前体增加,相应成熟的谷蛋白酸性亚基和碱性亚基含量降低,同时球蛋白含量也有所降低(见图2A);Western blot分析进一步验证了上述变化(见图2B)。
发育中期胚乳半薄切片经过考马斯亮蓝染色后观察发现,野生型存在两类蛋白体,球形的蛋白体I和不规则形状的蛋白体II,蛋白体II略大于蛋白体I(见图3A和3C,黑色三角标示蛋白体I,红色三角标示蛋白体II)。有趣的是,在gpa5中除上述两种蛋白体外,在细胞壁附件还发现一类填充有大量蛋白质的壁旁体类结构(见图3B和3D,红色星号标示)。此外,gpa5中蛋白体II相比野生型明显变小(见图3D,红色三角标示)。上述结果表明gpa5突变体中蛋白体II发育异常,大量蛋白质填充在细胞壁附近形成的壁旁体类结构中。
为了解析壁旁体类结构的形成过程,利用透射电镜结合免疫胶体金技术观察了发育中期的胚乳(见图4)。研究表明谷蛋白的后高尔基体运输由一类称之为致密囊泡的运输工具介导完成(图4A,4C和4K)。和野生型一样,突变体gpa5中致密囊泡可以从高尔基体正常出芽(图4B)。然而,有趣的是,gpa5中大量致密囊泡错误分选到胞外体空间(图4D),逐渐积累并形成大的壁旁体类结构(图4E-4J),因此,导致gpa5中的蛋白体II变小(图4L-4N)。
综上所述,上述结果证实gpa5中负责运输谷蛋白的致密囊泡发生错误分选,进而导致大量谷蛋白前体进入胞外体空间而不能被切割为成熟的酸性亚基和碱性亚基。
二、目标基因定位
1、目标基因的初步定位
利用突变体gpa5与广亲和品种Dular(购自中国农业科学院作物科学研究所种质资源库)杂交,在gpa5/Dular的F2分离群体中选取10粒gpa5表型(籽粒粉质不透明且谷蛋白前体增加)的隐性极端个体,抽提种子DNA,构建DNA混池。利用覆盖水稻全基因组的175对InDel标记进行连锁分析,将负责gpa5突变体表型的突变基因定位在第6号染色体InDel标记M124和M85之间,物理距离为358.6kb。
2、目标基因的精细定位
依据初定位结果,在InDel标记M124和M85之间寻找公共图谱上的分子标记,并依据NCBI公布的水稻基因组序列信息在此区间自行开发InDel标记。利用198个隐性极端个体对目标基因进行了精细定位(用于精细定位的分子标记见表2)。
表2 用于精细定位的分子标记
Figure 432781DEST_PATH_IMAGE002
最终将目标基因OsGPA5精细定位在InDel标记M161和LK48之间,物理距离为60.9kb(图5A)。经过对该区间内基因进行测序,发现第4个ORF的第4个外显子上存在一个单碱基的缺失,使得目标蛋白翻译提前终止(图5B和5C)。
三、目标基因OsGPA5的获得
提取粳稻品种kitaake叶片cDNA,以cDNA为模板,采用引物primer1和引物primer2进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,测序结果如SEQ ID NO.2所示,其编码的蛋白质如SEQID NO.1所示。
primer1:5'-ATGGCGACGCCGTCGTCGTTTTC-3';
primer2:5'-CTATCTGTCCAATAACCAATTAAG-3'。
将序列表的序列1所示的蛋白质命名为OsGPA5蛋白,由710个氨基酸残基组成。将编码OsGPA5蛋白的基因命名为OsGPA5基因,其开放阅读框如SEQ ID NO.2所示。
实施例2、OsGPA5蛋白及其编码基因的应用
一、基因组互补载体的构建
将pCAMBIA1305.1载体(参考文献:He Gao, Mingna Jin, et al., Days to heading 7, a major quantitative locus determining photoperiod sensitivity andregional adaptation in rice. Proc Natl Acad Sci USA,2014, 111(46): 16337-16342)的EcoRI和NcoI酶切位点之间的小片段替换为序列表中SEQ ID NO.3所示的双链DNA分子(包括OsGPA5基因上游2.6 kb的启动子序列和下游2.7 kb的终止子序列),得到pCAMBIA1305.1-OsGPA5基因组互补载体(已测序验证),pCAMBIA1305.1载体图谱见图7。
二、过表达转基因植物的获得
1、将步骤一得到的pCAMBIA1305.1-OsGPA5过表达载体导入农杆菌EHA105菌株(美国英俊公司),得到重组农杆菌。
2、采用步骤1得到的重组农杆菌转化粳稻品种kitaake(野生型),具体步骤如下:
(1)取步骤1得到的重组农杆菌菌体,采用N6液体培养基(Sigma公司,C1416)重悬并调整菌液OD600nm为0.5。
(2)将培养至一个月的粳稻品种kitaake(野生型)成熟胚胚性愈伤组织在步骤(1)得到的菌液中侵染30 min,滤纸吸干菌液后转入含有10 g/L 琼脂的固体N6培养基(Sigma公司,C1416)中,24℃共培养3天;
(3)将步骤(2)培养的愈伤组织接种在含有10 g/L 琼脂,100 mg/L潮霉素的固体筛选N6固体培养基(Sigma公司,C1416)上培养16天(第一次筛选);
(4)将步骤(3)培养后的健康愈伤组织接种在含有10 g/L 琼脂,100 mg/L潮霉素的固体筛选N6培养基(Sigma公司,C1416)上培养15天(第二次筛选);
(5)将步骤(4)培养后的健康愈伤组织接种在含有10 g/L 琼脂,100 mg/L潮霉素的固体筛选N6培养基(Sigma公司,C1416)上培养15天(第三次筛选);
(6)将步骤(4)培养后的健康愈伤组织接种在分化培养基(PhytoTechnologyLaboratories 公司,M524)上分化,得到T0代植株。
3、对步骤2得到的T0代植株进行鉴定,提取待测植株叶片的总DNA,采用引物primer3和引物primer4进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,缺失位点后为双峰的为转基因阳性植株(结果如图6A所示)。
primer3:5'- AATTGCTTGCTTCTCCAGTGAC -3';
primer4:5'- CACTCCTCCAAAGCGTTCCT-3'。
三、表型鉴定
分别将T0代转pCAMBIA1305.1-OsGPA5植株,gpa5和野生型Kitaake种植在中国农业科学院转基因试验田内。结果显示转基因株系T2种子中出现了透明的籽粒(图6B),SDS-PAGE检测透明种子(L1,L2和L3)与野生型表现一样。由此验证了转基因前的不透明粉质和谷蛋白前体增加性状是由OsGPA5基因控制的,即该OsGPA5基因为谷蛋白分选相关基因。将pCAMBIA1305.1-OsGPA5转化水稻gpa5突变体,可以使其成熟谷蛋白含量上升至正常水平(图6C)。
<110> 中国农业科学院作物科学研究所
<120> 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA5及其编码基因与应用
<160> 3
<210> 1
<211> 710
<212> 氨基酸
<400> 1
1 MATPSSFSSARKKAPSPPKHRHDGTSGLPFGMDWSPPPKRWEGRNTIWPHNPQTGWSYCV
61 MIPSWIAQTPEASATADNFLKSIVFYRIHVGIQSPEGISSSHGVLRRFSDFLKLSSDLKQ
121 EFPRKGIPPAPPKHAFSRINSSRVLLEERRNALEEWMQKLLSDIELSRSAPVAAFLELEA
181 AARSYYQDWNQRPSEVGSSAKSSADSSPRPDEHGSGVLSESSQMNSAFAHGNGPTGATGN
241 GMLGESILDQPNERASSMSNHRKKNHVFLEHGVRNGSIDTYKGVVSEEDHDSNPGHARKD
301 SAESIGSDLSSLRGSELSVPGVSSSLWDGPVDLPSGIDGHSQTEQFTGLDMQLLYDMDAQ
361 IILPADQRPKLTRLLISMDRRQVTAKTDMEDLIARLNQEVAVKEYLATKVKDLEVELEAT
421 KKKDKEILHQAVLTEREKITQLQWDKDELYRKYSEMESNLKIEQNEKTRVQSEKTTASGE
481 KEMLLEELETKRKEVESLQQHIGEFEAKSKADIKVLVKEVKSLRNSQKEMKKVLNQYHEE
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<210> 1
<211> 2133
<212> DNA
<400> 2
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<210> 1
<211> 12681
<212> DNA
<400> 3
1 cctgatatgt ctgattaggc gtttgaacgc ttgtttctca tattcttgtg agctgattga
61 ggatgtttat ttctgtgcag ggaactagct aaggatttcg ttgtatcggg gacagcatcg
121 gagtctctat atggtgcttg tgagtccatg tacaaaccaa acatggtatg catttgtttg
181 tttgtatgat cacatttagc ccgtgtaaca ttctttatgg gataacatca tgggctatag
241 caatttcgca tttctgtttg gatctgtata atatattata attctgttgc attgtactgt
301 ttagatttct accactattt tgaatgatag atgttacatg acaacatatt atttttcttg
361 acaaaggaac ctgaagaact ctttgagact atctcacaag ctctgcagtc atcagttgat
421 cgtgattgcc tcagtggttg gggaggcttt gttctgcttg tgtaagttca cttcactaat
481 tcaagattgg atgagtggct tcatttttct tctgttaaac agcttttgaa ttaaaatacg
541 ttatgcacca ttattttatc taccgttctg caataaattg gtagaagttc atcagtaatg
601 atttttttcc caatcaaata taattggagc tcaaagtcct accgcattcc gcattttagt
661 tgtttcagca cttcatttga gcatcaatac gtttctttta cataatcttc ttttgggttt
721 tcaggacacc aaccgaagta aaagagtgtg tgatcaaggg caggatggac taaatttatc
781 attgcgaaga gttcttggaa ccatttctga tgcctgctgt tcctggtctc tcagcattac
841 tatccgtgtt gtatgtggat tccgagggaa ccttgtaata tcaaagatgt tcattcaccc
901 gtagaagaaa ctgttgtttt cttacttttc tacgcttcct atgaatgaaa ggacttctat
961 ttgttgcatg agatgtgcac ttcttggcag tccttggcct tgatgatgac gattatactg
1021 atcagtaagc cggctactgg ttaattagct aagaatacgc gtatcgtggt gcaatgagct
1081 actcatactc acccttctca ggcatttgtt cgttcaccgt ttctatatct tggcaacact
1141 ttttctgaaa tggatgttag tgctttgtcg agtatggagc cgacgatgtg aagtctattc
1201 tgagtgcgag tcgttgcgac tcagatttta agttacagta ctaactacag ttcatagctt
1261 gtagtgctca gagttcaatg gtcttggctg ctttacaaaa attggtaaaa accgaggacg
1321 acttttggtc aattctatac aactaactaa aactgcttgt ttttcacaaa ttggtctcca
1381 atgatttcat ggaaatggag cgattttcgt tcagtactgt aaaccctagt attgcaaacc
1441 ctgttagtgc ttccttcgtt attttttact caaactacaa aaaataccca tgcgttgcat
1501 tgcaacgggt aagtgctatt ttaataataa taataataat attatatatg gtttgtggga
1561 actcgcttgg atccgtattt catctcaagt tagtatgcga gtttttttaa agagatttct
1621 tatacgactc cttttgtatt ttcaaaatca aacgagctta aaatccaact caaacacaac
1681 gaacttaaaa ccgactcaaa acgtaccaaa atttttgcaa aaacaactct aatttttata
1741 atagtagaga agagatagag atatacatgt tttttttgtt attgtttcga gcatcaatac
1801 aatctcaaat atgtgtttgg tcattgtttc ctccaactat agatgtattg aaccccataa
1861 ttttttctac ttagatattg tttagattct aacttttttc ttcaaacttc gtgtgtgttt
1921 agttcacgtt aaaattaaaa gtttggttga aattggaaca atgtgacgga aaagttggaa
1981 gtttatatgt gtagaaaaaa ttagaagttt atatgtgtag aaaaaattga tgtgatggaa
2041 aagttgaaag tttgaagaaa aaatttggaa ctaaactcgg ccttctaact tttccgtcac
2101 attgaacttt cgtacacaca taaacttcta actcttccgt cacatcgttt caatttcttt
2161 gaactttcaa ttttagtgtg gaactaaaca cagcctagta gtatgtactg aaccagttcg
2221 tcactaagaa gtgcatacca ttatctgtcg gcagccatgg ccacatccaa caattacact
2281 tgtgtgggct tgcgaaaaac ccacacaact ccccgccggc ccaccaccaa ctccaccacc
2341 ccacacggcg gtggaaaagc ctagacccgg accggaccgg accgacgccc tcgcttggct
2401 gccaccgccg cgcgttgacg gttagacgcc accgcgggag gagagcccct ccctccccgt
2461 ccgcgtccgc gtccgcctca tctccgccgc cctcttactc cccctcccct tcctccactc
2521 cgtccacctc ggaatcgtcg gcgcgacgcc tccaaacccc cgcatcgatt cctccctccc
2581 acctcacccc acccttccgc ccgctcgatc caccgccgaa gcgggcggcg atggcgacgc
2641 cgtcgtcgtt ttcgtcggcg aggaagaagg cgccgagccc gccgaagcac cgccacgacg
2701 gcacctccgg gctgccgttc ggcatggact ggagcccgcc cccgaagaga tgggtaagcg
2761 cgatcccccc cccccctccc ccccgctaat ttcgatccgg gctcgattga tcgggggttc
2821 ggttgggttg gctccctgct ttgatctgtg agggacgtgc ggttcgggag ttggagttgg
2881 gagcttgcga tcctgtggcg ttgctgctgc gtgcgtcaga ttcggcgtta gttgcgaggt
2941 gtcggggatt ttctttcttt ctttctttct tttaatgctt gtcctctcga tcgtaacgat
3001 atcgcgagct ggatttgccc gcggctatgt ggtgtgtaat agtagtggaa tgtaaggcta
3061 ggaattcatg tgtgggttgg gatctgcatt gggatttgtt ggtttggagt gcctgcgttg
3121 ctactgattc agagttgttt tagagctttc ccctggatag ggttttgaat tcctgtttct
3181 tttgcaagga gtcgagtatg ggtttcaggt aggactactt ctgcggggat gggtttagac
3241 aaaccgagtg cagttcagct tcatgatatg cggattgatt tggttgtata tgtgctgctt
3301 atttcaaaga ctctggtttt gtctgagtcc atcggacata agggctttgg atttctatat
3361 taggcaatta ggcatgttca tactgttacg cataaggcca taagtacaat aattgatttc
3421 gtatacatat ttgagcaggc tgatggtgat tttattattc atcattgttc ccattgtgaa
3481 gattagctct tttgtttgac ctgcctgcct tgtgctagcc tcattctttg cacttggtgt
3541 gtttcccaac atctttacca catttaacat gaaatgatcc tagaacgcaa atgaagatta
3601 acctactagt cctagtcaat tctttttcac cgtcaagtaa atcacatgcc tcgttaacaa
3661 aattcagtaa ttttcaaaca actgggaaag ttccttgaag atgtttcctt gtattaaaga
3721 aaatgtactt ccatgaagac cacataactt ctcaatctag gtttcgctgg aaagatgatg
3781 ccatatcaat aggataccat gaaaagttcc attgcttgat gcttcttacg gcttatgctt
3841 attgatctgc aggagggaag gaacaccata tggccacata accctcaaac cggatggagt
3901 tactgtgtga tgattccttc ttggatcgct cagacacctg aagctagtgc gactgctgac
3961 aacttcttga aatccatagt tgtgagtact gcttatatta tcatcacgtt atttttgtca
4021 gtcaatttgg attgacgtac agattggaaa tgttgtgtct ctggtattac cgctatgcta
4081 caacataaat gtgcttggag tggattacaa gtgagaaaac cttgttagac caataaaaag
4141 gacaaaagaa gttcagcact tatcaacgaa gaactgagct tctttcaaaa ctatctcata
4201 ttgggtagtg gatgccaact ttctaatgta ttaccttttt attgttcttt cattttgagt
4261 aaatcgtgtc actttccaat attccaccat acttatcaaa ctagtttatt aggctgctgg
4321 actcacaaaa ctgtactttt ctttagatca ctaaagggtc acttttggtt gttagcacac
4381 tgtcctgact cttaatgaca acatggcgtg ttgaggcata cccctgtatg gggtgcaaat
4441 tttgttgtga taaccaatcg ctgacgtgca gtacactaga ggtgattctc cctctccgca
4501 caactgcctc acttgtctca gtacacaggg ggtttgagtt gggggtgaga gagaactatg
4561 taaggccaaa actcatgggg gacaagtgca aatcacaata gccatggctg aagtcattaa
4621 ctcacgtgca gcccatgcca caatggtgta tgccaacatg acatgccata ggaagtattg
4681 tgctaatgat tcagggtgac ctactggcag aaatatactt tttggtgttt tggtaactgt
4741 ggtgcatctt acctctcttt tggctcacta gtttagtcgt gatcgacggg caagagacac
4801 ttatgtaatt ctgttgcata tatcatgcaa ttcctgtttg ttgtgaactt tgatactgtt
4861 ctgtttatga tctcatttta atgcccataa aggacagttt tacaggatac atgttggtat
4921 acaatctcca gaaggcatca gctctagcca cggagttctt cgaaggttta gtgactttct
4981 aaagttatct tctgatgtaa gttgagacac ctctttgcta ttttcttctt tcacatgcca
5041 agtgtcttta aattgtaccg accttctttc ctgagctaga agcccactaa cattttcagt
5101 tggaacatac ctttcaagaa caacctccag tgatttttaa ataagaataa tcccctatcg
5161 tatcctgagt ggtctgccag attaatttat ctggcattaa atttgaaaat gtaatcaaac
5221 ctttgaattg gacttacatt tgctagtgca ttgaatgcac aattgcttgc ttctccagtg
5281 acttccgttg caacttagga tttttggtgc attgcatcac acaggtagtc agacttcaga
5341 tactttaaaa catactgtta ttataaatct tgacttagtg tatacggtat gcttacctgg
5401 gccaaattag tttttacaga tttttgcatc ttccgctggt gacttcataa tgaggacttc
5461 accttttgca attttatggt ttctataatg aatgtggaca ttttggaagt ctcatcttgg
5521 atatgattct gagaaaaaaa gattattact ttccattcga cctctaatcc aatatcattt
5581 cttcattcta agattctccc gtactgcagc ttaagcagga atttcccaga aaaggaatcc
5641 cccctgctcc accgaagcat gccttttcaa gaataaattc aagcagggtg cttctagaag
5701 aggttagccg ttatgtatat tgattaattt ttgctttgtt cgatgtcaaa tactacattc
5761 agttgtgctt agcctttttg accggtggtt cttgaaatgt tttgtttgca gagaaggaac
5821 gctttggagg agtggatgca aaagctactt tctgacattg agttgtcgag aagtgcacct
5881 gttgctgctt ttcttgagct ggaagctgct gcacgctcat gtatgttccg cttgacatat
5941 tctattgaag acactttttc ctgattgtgc attgatccat ttattaacta aaatttctta
6001 acatttttag caaatgttta attacgctat ttttctgaat gaaagattac caagattgga
6061 atcagcgccc ttctgaagtg ggttcttcag caaaaagtag tgcagattct tctccgcgtc
6121 ctgatgaaca tggttcaggt gttctctctg agtccagtca aatgaattca gcctttgctc
6181 atggtaacgg tccgacagga gcaactggta atggtatgct gggagagtct atcttagatc
6241 agcccaatga gcgggctagt agcatgtcaa atcacaggaa aaagaaccat gtctttttgg
6301 aacatggtgt taggaatggt tccatagata cttataaggg agtggtttcc gaagaggatc
6361 acgattctaa ccctggccat gccaggaagg actctgctga aagtatagga agtgatttga
6421 gttctttgag gggcagtgaa ttatcggttc ctggagttag tagttccctt tgggatggtc
6481 ctgtggatct tccaagtgga attgatggac atagccaaac agaacaattt acaggtttag
6541 atatgcagct tttatatgat atggatgcac aaatcatcct tcctgctgat caaaggccga
6601 agttgactag acttttgatc agcatggaca gaagacaggt gacagcaaaa actgatatgg
6661 aggatctcat agcacgacta aatcaggaag tggctgtcaa agaatatctt gcgacaaagg
6721 ttacgttttc tacctgacat tcatttgtga tgcctatgga ttatgcttaa acacatgata
6781 tgctttgttt tatatgtcac gagtttaaaa taaattgatt tgtgtttttt tgttcatact
6841 ttattgatgt acgttgttct tgtgcttctc tgctattctg tgcaggtcaa agatttggag
6901 gttgagttgg aagctacgaa gaaaaaagac aaagagattc tacatcaggc tgttttgacc
6961 gaaagagaga aaattaccca acttcaatgg gataaggatg agctctacag gaagtactct
7021 gaaatggagt caaacctgaa gattgaacaa gttggttttc ctctttgtct cctctttgtc
7081 atcatggctt ggtttcttac tatccatctt acaagtattt tcttacattt ctttctactt
7141 aattgcagaa tgagaaaact cgtgtgcagt cagagaaaac aactgctagc ggtgaaaaag
7201 aaatgttact ggaagagcta gaaactaaac gaaaagaagt tgagagtttg cagcaacata
7261 ttggagaatt cgaggcaaag tctaaagcag atataaaagt tcttgttaaa gaggtgaaat
7321 ctcttcggaa ctcccaaaaa gagatgaaga aagtgctgaa tcagtatcat gaggagaaga
7381 ctgaattaga ggtataaatg taaatttaaa gcttttcttt ctcgcagaac tatgatagta
7441 tctataaatt gtgtgaaatt gttgctatgg ctggcctctc attgctcaaa gccaggagag
7501 cataaccctt tacaagttgc aaactagatt ttggttgtag ctaagagaaa gtggcttgtc
7561 aaagtcatta gacaagtccc cacaaaaaaa aaagtcatta gacaagagta agcctttgaa
7621 agcatgcaag ccatcttgag tgtttgcttt tccacttcta acttattacc ctgatttctg
7681 catctccacc acccatgcaa catgttgtcc atttttggaa tattatcatg aattgttgta
7741 cttgcctact tggtatctga caagatgagc ttaacagtct tcttttgatc aacaaacata
7801 tggacctttt ccctttttta ttatataacc agcacagcca tctattcttt atgtgattcc
7861 ttttgtcaag gccggctgaa taaagatttc tatctacaca agctagattc aacagcgatt
7921 tctttatcta tatataatca ctcttggagg acaattgaat taatttaatg ctacctgttt
7981 gtacaccact taactaaaga aattgagaga gagaatgaag gggtgaggtg ttcttttgtt
8041 gttttgcttt gcacactaat gatatggttg atcataagac caaggatagt gcgatcttct
8101 caggtcgtgt gggcttgtcc tggcacggct agaggctttg attagctagg gtttgggcag
8161 aaaccttacc ttttataggg ataactcaag actgctgcta tacacacccg tgggtatttt
8221 tcatgtaaat agtagtttga ccctcaagaa ggtcattact cttccgttca ggaatataag
8281 gtgtattttg actgtccaat tttgaagagc tttgacgaac tattaatcca ataatattta
8341 ggttttacca taagaaaagg atattattgg attcatgttt gaaattactt tcttatgact
8401 ctgattttga cagtgtaaaa gtaccttaaa aaacatcttt aattttccag ctaaatcaga
8461 tccttcctaa gtcctaactg atagataggg tacaaaataa ccaatcccat gctttgaaac
8521 taataattat ttaggcaata gatattcttg gaaggtatgt aaacccttcc catattctgt
8581 tctacaatat gcattactgt ccgtgcttca agcatcaacg ctcataacag ctgatttatc
8641 aacaactttg atccaatcta tccctattac cattttttgt tttcttaaat tcaagcttct
8701 ggtagttata cttcttgcaa tcggcattct ctctagctac taattgtatt tattatatat
8761 tacagaggat tgttaacagg gagaaacagc ggtcaacacg tgcaaggttc tcccgtgaaa
8821 aaattcttca cgaatgcaga ctgctccgtg agcgtctaca ggaatgtact gccaagtttg
8881 ttgcagatga gcaagacact atgactattg atttatcatc tttgcctgat gctttagatc
8941 ttgtgacgac atcagacaat agaatacgtt tgcttgttgc tgaggtaatg ttttaaatat
9001 cttttgatta gttattgtca ttcaaactcc ttctagcttc tcacgggaaa ggcacactta
9061 gaaagttgag ctcaaactcc gacggaaaca tcagacacta cctgacacta gattcttcaa
9121 aggatctgga gtcagatttg gaacaactcc tggcctaaat tgatttgtag tttcctcagc
9181 ctctgcttat gtttgaagtt tgagccacct agttgggcct tcaaagctgc attcttgatt
9241 ctattggaac aaggtttagg tgttagtttt ggttagctct ggggaacagt tttcatcttc
9301 ccagctgaag agtgatatca tttcagagtc agtaaaacta tatttaacaa aatgagtaaa
9361 atgatctata ttttcacaaa ctttttttcc tattttacag tcatagatgc atttacttta
9421 gattacatac tggcgccact atacctaaaa aagaagtctt gccaatgacc aatgtaatgg
9481 tcatcttggt acagaagaca ttgttttcag tgttatgtac ctgtccattt agaaattgat
9541 tttgaatatt caaagttacg cttctgtttt catgaagttc tcacttcctt gtgcccatga
9601 aagcggatct gttagttaca tttacattca caatctgtgt tctataatga tcctctctca
9661 atctctcagg ctcaacttct gtcacgagat gatgaacagg gctcttctga tgatggtgat
9721 aattctgatg gtaaatcctc agttaccatg agcagtgaag atgcatatgt tactgatgaa
9781 gagacaacaa aaatgttatc tgatctgctt attgacaatg cacaactgag gttgcgcttg
9841 aattctctca tccgtaatgc tgtaaatact gctgtgaaga cggagaaaga aggtagtgat
9901 ggaaccgtgc caaaaaagac ggtgcttaat tggttattgg acagatagaa aaaccagtat
9961 atattcttgt gaattagctc ttctagttat gcggccttct caaagttata tgatgagtat
10021 tgttataatg tgggagtaac aggagtggag aaaaaaaaat caaaatcttc cttacatgca
10081 gatcaagcat gtggtggtgt tgtatctctt atttacaaag attgatcaag gataatatat
10141 ttaggaggct tctgagcctg gcctcctagc gggagaacgg tagggctcat atggttttgg
10201 ggaggcttgc aactggagtg gtagagaaca tgggtccccc ttttttgcac catacttcaa
10261 tttgtaattg ccgagctgat ggatagctgc atggttgtat ctttgtacag atgtttcaga
10321 tggtgagttc ccagcaggaa agcattgtac actatagtta aactctggat taatcttctt
10381 cacccataga gtgctcaact gttaaatcag tacttcttac tcatgcagtt gcacctcttc
10441 cagactgaaa acttctcaaa gttctcatgt tgcatacagc tggtaataag agcgtaattt
10501 actcaggcat ggacacctga ccctgcctga tgtttagatc attacgtgcg tacctttata
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10621 tttcaagtcg ctttctattt tactttatta aatgttcttg acaagattaa aaggcgtatc
10681 ctgaaatttt ttatccagat gttctttttt agataataga atctctacta ttataaaaat
10741 taaaaatgtt tttgccggta ctttggtacg tcatccatgt gatcgttcgc ttttagaaat
10801 atagataagt atttgactcg gattttaagt tcgtttgttt taggaaatat aaaactaagt
10861 cgtataaaaa aatcttttaa aaaaactcac atactaactt gagataaaag ttggactcct
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10981 acggatgtac tccgtagtat gggtttgttc ggtagcccaa attttacagc cgtcttgctg
11041 cattggacaa ccaattcgtt cggctgcaca caaactattg ctccctacac ttgctagctt
11101 caacatctat aggttgtagc tactattggc tagctgcagc cgctggttgt ttgcgctgta
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11521 cgaggaggcg ggcggccgcg cgcgatggtg tggcgatgcg gggaggcagt aggcaagacg
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11941 tagccggttt tggctggcca actttagcta gtctggtggg gaatttagac agccggatgg
12001 cttggagagg catttggcta gtctgttgga gtagattttt tttgtgtaag ttagccaaat
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12181 aaattgaatt tttaagttgc tcaaagtata tgtatataaa atttacacat tattttttcg
12241 ctattaagcg ttgctgctta tccaaacatt agcattgttt agataggtgt tgtattcgct
12301 cggtcttatc tctattctag gtttcggcaa taaacctact aaatatactt taattaaacg
12361 tatagagaaa acacctctag aactatgtat ttacggttaa agacttttgt cctacttgct
12421 agcgactcaa ttacatttat aaccttccta gccactttcc tcattttccc ctttttcaac
12481 atttcctctt cctctcccct gagggtgcgc caccctaacc cgatcttccc tatctccagc
12541 gtcacctcca tctccctacc ctacgatgcc actcaagcta tcctgttaac atagaaccat
12601 ctcgaaattg cttcgtagtc atcacgcgac gtgtgattcg ttagaatcgc tctttgcaga
12661 tctacctctc agtgtccaaa t

Claims (4)

1.一种培育谷蛋白分选正常的转基因植物的方法,是将含有编码由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的基因导入谷蛋白分选异常水稻中,得到谷蛋白分选正常的转基因水稻;其中所述谷蛋白分选异常为OsGPA5基因突变导致的谷蛋白前体异常积累,所述OsGPA5基因编码由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述基因在其末端增加有标签序列。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述标签序列为Poly-Arg、Poly-His、FLAG、Strep-tag II或c-myc。
4.含有编码由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌中的至少一种在培育谷蛋白分选正常的转基因水稻中的应用。
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CN113150090B (zh) * 2021-02-05 2022-04-29 南京农业大学 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA7及其编码基因与应用
CN115786367B (zh) * 2022-12-20 2024-03-19 中国水稻研究所 控制稻米谷蛋白含量基因lgc2及其应用
CN116715741B (zh) * 2023-08-01 2023-11-14 中国农业科学院作物科学研究所 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA16及其编码基因与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102603878A (zh) * 2012-03-26 2012-07-25 南京农业大学 一个植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsVps9a 及其编码基因与应用
CN102617717A (zh) * 2012-03-26 2012-08-01 南京农业大学 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA3及其编码基因与应用
CN106432444A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 南京农业大学 一个植物谷蛋白转运储藏相关蛋白gpa4及其编码基因与应用
CN107337720A (zh) * 2017-08-14 2017-11-10 南京农业大学 一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102603878A (zh) * 2012-03-26 2012-07-25 南京农业大学 一个植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsVps9a 及其编码基因与应用
CN102617717A (zh) * 2012-03-26 2012-08-01 南京农业大学 一种植物谷蛋白分选相关蛋白OsGPA3及其编码基因与应用
CN106432444A (zh) * 2016-10-12 2017-02-22 南京农业大学 一个植物谷蛋白转运储藏相关蛋白gpa4及其编码基因与应用
CN107337720A (zh) * 2017-08-14 2017-11-10 南京农业大学 一种植物谷蛋白转运储藏相关蛋白OsNHX5及其编码基因与应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GenBank: AP014962.1,Oryza sativa Japonica Group DNA, chromosome 6, cultivar: Nipponbare, complete sequence;Kawahara,Y.等;《GenBank》;20151010;CDS、ORIGIN *
NCBI Reference Sequence: XM_015788550.1,PREDICTED: Oryza sativa Japonica Group uncharacterized LOC4341636 (LOC4341636), mRNA;None;《GenBank》;20160301;CDS、ORIGIN *
None.NCBI Reference Sequence: XM_015788550.1,PREDICTED: Oryza sativa Japonica Group uncharacterized LOC4341636 (LOC4341636), mRNA.《GenBank》.2016, *
水稻谷蛋白转运关键基因Gpa2的图位克隆与功能分析;刘峰;《万方博士学位论文》;20160329;全文 *

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