CN108495841B - 金刚烷衍生物及其应用 - Google Patents

金刚烷衍生物及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108495841B
CN108495841B CN201780008087.9A CN201780008087A CN108495841B CN 108495841 B CN108495841 B CN 108495841B CN 201780008087 A CN201780008087 A CN 201780008087A CN 108495841 B CN108495841 B CN 108495841B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
diastereomer
enantiomer
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780008087.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108495841A (zh
Inventor
森口茂树
福永浩司
岩渕好治
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Neurosignal Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Intelligent Innovation Co
Tohoku University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Intelligent Innovation Co, Tohoku University NUC filed Critical Intelligent Innovation Co
Publication of CN108495841A publication Critical patent/CN108495841A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108495841B publication Critical patent/CN108495841B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C233/00—Carboxylic acid amides
    • C07C233/01—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C233/45—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C07C233/46—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom
    • C07C233/47—Carboxylic acid amides having carbon atoms of carboxamide groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to a carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups with the substituted hydrocarbon radical bound to the nitrogen atom of the carboxamide group by an acyclic carbon atom having the carbon atom of the carboxamide group bound to a hydrogen atom or to a carbon atom of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C229/00—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C229/02—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton
    • C07C229/28—Compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having amino and carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms of the same carbon skeleton the carbon skeleton being saturated and containing rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/221—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin with compounds having an amino group, e.g. acetylcholine, acetylcarnitine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
    • A61K31/223—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of alpha-aminoacids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/655—Azo (—N=N—), diazo (=N2), azoxy (>N—O—N< or N(=O)—N<), azido (—N3) or diazoamino (—N=N—N<) compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C247/00—Compounds containing azido groups
    • C07C247/14—Compounds containing azido groups with azido groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/36—Radicals substituted by singly-bound nitrogen atoms
    • C07D213/40—Acylated substituent nitrogen atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

根据本发明，提供一种用于治疗或预防认知功能疾病或障碍的药物组合物，其含有式(I)所示的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。

Description

金刚烷衍生物及其应用
技术领域
本发明涉及金刚烷衍生物及其药学上可接受的盐。进一步地，本发明涉及含有该化合物的药物组合物及使用该化合物的疾病治疗方法或疾病预防方法。
背景技术
已知ATP敏感性K+通道(KATP通道)是将细胞内的代谢状态与细胞膜的兴奋性相连结的内向整流性K+通道，由属于ABC蛋白家族的磺酰脲受体(SUR)和2次跨膜型的Kir6.1及Kir6.2构成，具有异八聚体结构。KATP通道的活性通过各种K+通道开放剂、抑制剂或细胞内的核苷酸而受到控制。据报道，这些均在SUR亚单位中具有作用位点，反应根据SUR的亚型而各不相同(非专利文献1)。
具有笼型结构的金刚烷的衍生物也存在作为药物来利用的类型，金刚胺已被作为抗病毒药及帕金森病治疗药使用。盐酸美金刚在日本已被许可为中度/重度阿尔茨海默型痴呆的治疗药。美金刚为非竞争性NMDA受体抑制剂，已经报道了如下作用机制：防止由缺血引起的谷氨酸过量释放所导致的神经细胞死亡(非专利文献2)。
关于具有药物活性的金刚烷衍生物，已经报道了几种衍生物(专利文献1～3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2011-529057号
专利文献2:日本特开2010-522203号
专利文献3:日本特表2009-508956号
非专利文献
非专利文献1:日药理志、126、311～316(2005)
非专利文献2:日药理志、124、145～151(2004)
发明内容
发明要解决的课题
对于阿尔茨海默病等认知功能疾病或障碍，还不能说已经建立了可得到满意效果的治疗方法及预防方法，需要与现有药剂的作用机制不同的新的治疗剂及预防剂。另外，也强烈需要针对糖尿病的新的治疗剂及预防剂。
在一个方面中，本发明的目的在于，提供用于治疗或预防认知功能疾病或障碍的药物组合物。进一步地，本发明的目的在于，提供使用特定的金刚烷衍生物的认知功能疾病或障碍的治疗方法或预防方法。
在一个方面中，本发明的目的在于，提供用于治疗或预防糖尿病或糖尿病并发症的药物组合物。进一步地，本发明的目的在于，提供使用特定的金刚烷衍生物的糖尿病或糖尿病并发症的治疗方法或预防方法。
ATP敏感性K+通道(KATP通道)包含Kir6.1及Kir6.2，已知为抗糖尿病药等的作用位点。
在一个方面中，本发明的目的在于，提供KATP通道的Kir6.1通道抑制剂或Kir6.2通道抑制剂。进一步地，本发明的目的在于，提供用于治疗或预防与KATP通道的Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病的药物组合物。进一步地，本发明的目的在于，提供使用特定的金刚烷衍生物的与KATP通道的Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病的治疗方法或预防方法。
用于解决问题的方案
本发明人为了解决上述技术问题进行了深入研究，结果，在金刚烷衍生物中发现了Kir6.2通道抑制活性、Kir6.1通道抑制活性、认知功能疾病或障碍的治疗效果及血糖值降低作用，从而完成了本发明。本说明书的公开包含以下的[1-1]～[1-20]中记载的发明。
[1-1]一种式(I)所示的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，
[化1]
Figure BDA0001742041560000031
[式中，R1为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R2为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X为O或NR5；
R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基、可被选自X1中的1个以上取代基取代的5或6元环杂芳基或COOR6；
R4为氢原子、卤素原子、叠氮基、-OR7或-NHR8；
R5为氢原子或C1-6烷基；
R6为氢原子或C1-6烷基；
R7为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R8为氢原子、C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X1为C1-6烷基、卤素原子、C1-6烷氧基、硝基或氰基]。
[1-2]根据[1-1]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R4为氯原子或叠氮基。
[1-3]根据[1-1]或[1-2]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R1为三氟乙酰基。
[1-4]根据[1-1]～[1-3]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R2为可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基。
[1-5]根据[1-4]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R2为三氟乙酰基。
[1-6]根据[1-1]～[1-5]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基或可被选自X1中的1个以上取代基取代的吡啶基。
[1-7]根据[1-1]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其选自：
乙酸(R)-((1R,2S,3R,5R,7S)-5-叠氮基-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲酯；
(S)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
(R)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
2,2,2-三氟乙酸(1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-2-((S)-2-甲氧基-2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)金刚烷-1-基酯；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
(S)-2-氨基-2-((1R,2S,3R,5R,7S)-1,5-二羟基金刚烷-2-基)乙酸；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5R,7S)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(吡啶-3-基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
2,2,2-三氟-N-((R)-((1S,2R,3S,5R,7S)-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)乙酰胺；及
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-甲氧基-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯。
[1-8]一种药物组合物，其含有[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
[1-9]根据[1-8]所述的药物组合物，其用于治疗或预防认知功能疾病或障碍。
[1-10]根据[1-9]所述的药物组合物，其中，认知功能疾病或障碍选自阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病。
[1-11]根据[1-8]所述的药物组合物，其用于治疗或预防糖尿病或糖尿病并发症。
[1-12]一种Kir6.2通道抑制剂，其含有[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
[1-13]一种Kir6.1通道抑制剂，其含有[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
[1-14]一种认知功能疾病或障碍的治疗方法或预防方法，其包含：将治疗有效量的[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐给药于对象。
[1-15]根据[1-14]所述的方法，其中，认知功能疾病或障碍选自阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病。
[1-16]一种糖尿病或糖尿病并发症的治疗方法或预防方法，其包含：将治疗有效量的[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐给药于对象。
[1-17]一种与Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病的治疗方法或预防方法，其包含：将治疗有效量的[1-1]～[1-7]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐作为Kir6.1通道抑制剂或Kir6.2通道抑制剂给药于对象。
[1-18]根据[1-17]所述的方法，其中，与Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病为认知功能疾病或障碍、或者糖尿病或糖尿病并发症。
[1-19]根据[1-17]或[1-18]所述的方法，其中，与Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病为选自阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病中的认知功能疾病或障碍。
[1-20]根据[1-17]或[1-18]所述的方法，其中，与Kir6.1通道或Kir6.2通道有关的疾病为糖尿病或糖尿病并发症。
进一步地，本说明书的公开包含以下的[2-1]～[2-12]中记载的发明。
[2-1]一种式(I)所示的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，
[化2]
Figure BDA0001742041560000061
[式中，R1为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R2为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X为O或NR5；
R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基或COOR6；
R4为氢原子、卤素原子、叠氮基、-OR7或-NHR8；
R5为氢原子或C1-6烷基；
R6为氢原子或C1-6烷基；
R7为氢原子、C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R8为氢原子、C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X1为C1-6烷基、卤素原子、C1-6烷氧基、硝基或氰基]。
[2-2]根据[2-1]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R4为氯原子或叠氮基。
[2-3]根据[2-1]或[2-2]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R1为三氟乙酰基。
[2-4]根据[2-1]～[2-3]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R2为三氟乙酰基。
[2-5]根据[2-1]～[2-4]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基。
[2-6]根据[2-1]所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其选自：
乙酸(R)-((1R,2S,3R,5R,7S)-5-叠氮基-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲酯；
(S)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
(R)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
2,2,2-三氟乙酸(1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-2-((S)-2-甲氧基-2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)金刚烷-1-基酯；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；及
(S)-2-氨基-2-((1R,2S,3R,5R,7S)-1,5-二羟基金刚烷-2-基)乙酸。
[2-7]一种药物组合物，其含有[2-1]～[2-6]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
[2-8]根据[2-7]所述的药物组合物，其用于认知功能疾病或障碍的治疗或预防。
[2-9]根据[2-8]所述的药物组合物，其中，认知功能疾病或障碍选自阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病。
[2-10]根据[2-7]所述的药物组合物，其用于糖尿病或糖尿病并发症的治疗或预防。
[2-11]一种Kir6.2通道抑制剂，其含有[2-1]～[2-6]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
[2-12]一种Kir6.1通道抑制剂，其含有[2-1]～[2-6]中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
发明效果
在一个方面中，根据本发明，提供一种用于治疗或预防认知功能疾病或障碍的药物组合物。在另一方面中，根据本发明，提供一种KATP通道的Kir6.1通道抑制剂或Kir6.2通道抑制剂。
附图说明
图1是示出在Kir6.2通道的过量表达细胞(Neuro2A细胞)中由本发明化合物带来的CaMKII活性增强的图表。所显示的全部的显着性差异均针对对照(C、Kir6.2表达细胞中无药物处置组)。关于本申请的图中所示的显着性差异的表示，＊＊或++表示显着性差异为P＜0.01，+或＊表示P＜0.05。
图2a示出通过使用抗Kir6.2通道抗体的针对Kir6.2通道过量表达细胞的免疫印迹法来确认N2A细胞中的Kir6.2通道表达的结果。以＊＊示出相对于无药物处置组(-)的显着性差异。
图2b是示出在Kir6.2通道过量表达细胞中TP-014抑制向外的钾电流的、基于全细胞膜片钳法的分析结果。该结果表明，TP-014抑制Kir6.2通道，使钾电流减弱。
图3a是示出在Kir6.2通道过量表达细胞中通过给药TP-014而使细胞内的钙浓度上升的、基于钙成像法进行分析的结果。用4分钟来测定用本发明化合物及美金刚进行处置时的浓度依赖性的钙量经时变化。该结果表明，TP-014抑制Kir6.2通道，使细胞内钙浓度上升。
图3b是示出在Kir6.2通道过量表达细胞中通过给药TP-014而使细胞内的钙浓度上升的、基于钙成像法进行分析的结果。对在美金刚、本发明化合物处置起4分钟后的钙量进行测定。在Kir6.2表达细胞(Neuro2A细胞)中，确认到相对于无药物处置组(-)的显着性差异。该结果表明，TP-014抑制Kir6.2通道，使细胞内钙浓度上升。
图4a是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。
图4b是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将相对于APP23小鼠的记忆学习的正确率(alteration)与WT的比较中的显着性差异以**示出，将APP23小鼠的与对照(无处置组)的比较中的显着性差异以++示出。
图4c是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过新物体识别试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将各自的Novel(新物体)与Familiar(相同物体)相比时的显着性差异以**示出。
图4d是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过条件性恐惧试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将Retension试验中的与WT相比的显着性差异以**示出，将与APP23小鼠相比的显着性差异以+示出。
图4e是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图4f是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图4g是示出对阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠)(12月龄)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。将与WT相比的显着性差异以**示出，将与APP23小鼠相比的显着性差异以++或+示出。
图5a是示出通过免疫印迹法使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体来研究各蛋白质的磷酸化的结果的、对免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)。
图5b是将图5a的对免疫印迹进行电泳时得到的条带的信号强度进行定量化的分析结果。将与WT(-)(无药物处置组)相比的显着性差异以**示出，将与APP23小鼠的无药物处置组(-)相比的显着性差异以+示出。
图5c是示出通过免疫印迹法使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体来研究各蛋白质的磷酸化的结果的、对免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)。
图5d是将图5c的对免疫印迹进行电泳时得到的条带的信号强度进行定量化的分析结果。将与WT(-)(无药物处置组)相比的显着性差异以**示出，将与APP23小鼠的无药物处置组(-)相比的显着性差异以++示出。
图6a是对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月的结果，是示出通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。
图6b是对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月的结果，是示出通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将与WT相比相对于OBX小鼠的记忆学习的正确率(alteration)的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠的对照(无处置组)相比时的显着性差异用++示出。
图6c是对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月的结果，是示出通过新物体识别试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将各自的Novel(新物体)与Familiar(相同物体)相比时的显着性差异以**示出。
图6d是对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月的结果，是示出通过条件性恐惧试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将Retension试验中的与WT相比的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠相比的显着性差异以+示出。
图6e是示出对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图6f是示出对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图6g是示出对作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长增强现象(LTP)的结果。将与sham相比的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠相比的显着性差异以++或+示出。
图7a是示出通过免疫印迹法使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体来研究各蛋白质的磷酸化的结果的、对免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)。
图7b是将图7a的对免疫印迹进行电泳时得到的条带的信号强度进行定量化的分析结果。
图7c是示出通过免疫印迹法使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体来研究各蛋白质的磷酸化的结果的、对免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)。
图7d是将图7c的对免疫印迹进行电泳时得到的条带的信号强度进行定量化的分析结果。将与WT(-)(无药物处置组)相比的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠的无药物处置组(-)相比的显着性差异以++示出。
图8a是示出对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。
图8b是示出对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过Y型迷宫法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将与WT相比相对于Kir6.2缺损小鼠的记忆学习的正确率(alteration)的显着性差异以*或**示出。
图8c是示出对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过新物体识别试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将各自的Novel(新物体)与Familiar(相同物体)相比时的显着性差异以**示出。
图8d是示出对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过条件性恐惧试验法确认了认知功能改善效果的实验结果的图表。将Retension试验中的与WT相比的显着性差异以*示出。
图8e是对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图8f是对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。
图8g是对Kir6.2通道缺损小鼠给药TP-014 2个月并通过电生理学方法来研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。将与WT相比的显着性差异以**或*示出。
图9a是示出通过免疫印迹法使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体来研究各蛋白质的磷酸化的结果的、对免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)。
图9b是将图9a的对免疫印迹进行电泳时得到的条带的信号强度进行定量化的分析结果。将与WT(-)(无药物处置组)相比的显着性差异以**或*示出。
图10是示出本发明化合物对于APP23小鼠的Aβ凝集效果的脑薄切片染色结果。
图11a是用于确认本发明化合物的OBX小鼠的抑郁样症状的改善效果的试验结果。将与sham(对照组)相比的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠相比的显着性差异以+示出。
图11b是用于确认本发明化合物的OBX小鼠的抑郁样症状的改善效果的试验结果。将与sham(对照组)相比的显着性差异以**示出，将与OBX小鼠相比的显着性差异以+示出。
图12a是用于确认本发明化合物介由Kir6.1通道抑制作用而显示抑郁改善效果的试验结果。将与WT(对照组)相比的显着性差异以**示出。
图12b是用于确认本发明化合物介由Kir6.1通道抑制作用而显示抑郁改善效果的试验结果。将与WT(对照组)相比的显着性差异以**示出。
图13a是用于确认本发明化合物介由抑制Kir6.1通道、活化CaMKIV而显示抑郁改善效果的试验结果。将与WT(对照组)相比的显着性差异以**示出。
图13b是用于确认本发明化合物介由抑制Kir6.1通道、活化CaMKIV而显示抑郁改善效果的试验结果。将与WT(对照组)相比的显着性差异以**示出。
图14是用于确认本发明化合物具有血糖值降低作用的试验结果。Weeks表示慢性给药的周数，将各周的与ob/ob(saline)相比的显着性差异以*示出。
图15是说明TP-014的作用机制的图。可认为，当抑制定位于突起(スパイン；spine)的Kir6.2通道时，细胞内的钾由于Kir6.2通道的抑制而不能排出，细胞膜的阈值上升，其结果是，促进钙从细胞外流入，引起CaMKII的活化，作为CaMKII的下游的GluA1(Ser-831)(AMPA受体)得以活化，从而可确认到认知功能改善效果。另外，TP-014同样地抑制定位于神经细胞体的Kir6.1通道，通过同样的机制使钙流入细胞内。可认为，所流入的钙将CaMKIV活化，借助CREB(Ser-133)的活化而介导神经新生，显示抑郁症改善效果。TP-014是具有基于Kir6.2通道抑制作用的认知功能改善效果(阿尔茨海默病的核心症状)和基于Kir6.1通道抑制作用的抑郁症改善效果(阿尔茨海默病的附属症状)这两种作用的新的认知功能改善药。
图16是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的结构的图。
图17-1是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的序列的图。
图17-2是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的序列的图。
图17-3是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的序列的图。
图17-4是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的序列的图。
图17-5是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2的序列的图。
图18a是示出在Kir6.1通道的过量表达细胞(Neuro2A细胞)中由本发明化合物带来的CaMKIV活性增强的图表。所显示的全部的显着性差异均针对对照(C、Kir6.1表达细胞中的无药物处置组)。
图18b示出通过使用抗Kir6.1通道抗体的针对Kir6.1通道过量表达细胞的免疫印迹法确认N2A细胞中的Kir6.1通道表达的结果。将相对于无药物处置组(-)的显着性差异以**示出。
图18c示出使用Kir6.1通道过量表达细胞通过常规膜片钳法测定从细胞内向细胞外排出的钾电流的结果。
图19a示出通过高架式十字迷宫法研究试验中使用的小鼠组对焦虑的易感性的结果。对于小鼠在open arm中的停留时间，将与WT(-)相比的显着性差异以**或*示出，将与WT(CORT)相比的显着性差异以++示出。
图19b是示出高架式十字迷宫法中使用的装置的照片。
图19c示出明暗试验法(light-dark法)的试验结果。将与WT(-)相比的显着性差异以**示出，将与WT(CORT)相比的显着性差异以++示出。
图19d是示出明暗试验法中使用的装置的照片。
图19e示出大理石埋藏试验法(Marble burying法)的结果。将与WT(-)相比的显着性差异以**示出，将与WT(CORT)相比的显着性差异以+示出。
图19f是示出大理石埋藏试验法中使用的装置的照片。
图19g示出旷场实验法(open field法)的试验结果。将与WT(-)相比的显着性差异以**示出，将与WT(CORT)相比的显着性差异以++示出。
图19h是示出旷场实验法中使用的装置的照片。
图19i示出条件恐惧试验法(fear conditining法)的试验结果。将与WT(-)相比的显着性差异以**或*示出，将与WT(CORT)相比的显着性差异以++示出。
图20是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的结构的图。
图21-1是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的序列的图。
图21-2是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的序列的图。
图21-3是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的序列的图。
图21-4是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的序列的图。
图21-5是示出质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1的序列的图。
具体实施方式
以下，更具体说明本发明。
根据本发明的1个方面，提供一种用于治疗或预防认知功能疾病或障碍的药物组合物，其含有式(I)所示的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。即，本发明的化合物包括下述的式(I)及(II)所示的化合物。
[化3]
Figure BDA0001742041560000151
在本说明书中，“C1-6烷基”是指碳数1～6的直链状、支链状、环状或局部环状的烷基，包括例如：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3-乙基丁基及2-乙基丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基及环丙基甲基等，也包括例如C1-4烷基及C1-3烷基等。
在本说明书中，“C1-6烷氧基”是指具有已定义的碳数1～6的烷基来作为烷基部分的烷氧基[-O-(C1-6烷基)]，包括例如：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、3-甲基丁氧基、2-甲基丁氧基、1-甲基丁氧基、1-乙基丙氧基、正己氧基、4-甲基戊氧基、3-甲基戊氧基、2-甲基戊氧基、1-甲基戊氧基、3-乙基丁氧基、环戊氧基、环己氧基、环丙基甲氧基等，还包括例如C1-4烷氧基及C1-3烷氧基等。另外，在本说明书中，“C1-4烷氧基”中还包括例如C1-3烷氧基等。
在本说明书中，“叠氮基”是指-N3。
在本说明书中，“(C1-6烷基)羰基”是指具有已定义的C1-6烷基作为烷基部分的烷基羰基，例如，除了包括甲基羰基(乙酰基)、乙基羰基、叔丁基羰基以外，还包括(C1-3烷基)羰基等。
在本说明书中，“5或6元环杂芳基”只要是含有选自氧原子、氮原子及硫原子中的1个以上杂原子的5元环或6元环的杂芳基则没有特别限定。其例子包括：吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、呋喃基(furyl)、噻吩基(thienyl)、噁唑基、噁二唑基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、***基、四唑基等。
在本说明书中，“C1-6烷氧基C1-6烷基”是指被作为C1-6烷氧基部分的、已定义的C1-6烷氧基取代后的C1-6烷基，C1-6烷基部分如“C1-6烷基”所定义。其例子包括：甲氧基甲基、乙氧基甲基、2-甲氧基乙基、1-甲氧基乙基、3-甲氧基丙基、2-甲氧基丙基、1-甲氧基丙基等。
作为卤素原子的例子，可列举氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。
在本说明书中，作为“可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基”的例子，可列举三氟乙酰基、二氟乙酰基、2,2,2-三氟乙基羰基、全氟乙基羰基等。
在式(I)的化合物形成水合物等溶剂化物的情况下，本发明可以使用该溶剂化物来实施。进一步地，本发明的化合物可以以混合物、溶液、多晶型等形式适当地实施。
在本说明书中，在被1个以上的取代基取代时，例如，可被1～3个取代基取代。
涉及上述式(I)所示的化合物的本发明包括互变异构体、几何异构体、光学异构体等各种立体异构体、非对映体及它们的混合物。例如，式(I)所示的化合物包括下述的式(Ia)～(Ih)的化合物。
[化4]
Figure BDA0001742041560000171
作为本发明的化合物，例如可以使用本说明书实施例中记载的化合物，更具体而言，可以使用以下的化合物：
乙酸(R)-((1R,2S,3R,5R,7S)-5-叠氮基-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲酯(TP-009)；
(S)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯(TP-010)；
(R)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯(TP-011)；
2,2,2-三氟乙酸(1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-2-((S)-2-甲氧基-2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)金刚烷-1-基酯(TP-012)；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯(TP-014)；
(S)-2-氨基-2-((1R,2S,3R,5R,7S)-1,5-二羟基金刚烷-2-基)乙酸(TP-015)；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺(TP-048)；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5R,7S)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯(TP-049)；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯(TP-050)；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(吡啶-3-基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺(TP-051)；
2,2,2-三氟-N-((R)-((1S,2R,3S,5R,7S)-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)乙酰胺(TP-052)；及
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-甲氧基-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯(TP-053)。
式(I)的化合物的“药学上可接受的盐”只要是能够作为药品使用的盐则没有特别限定。作为本发明化合物与碱形成的盐，可列举：与钠、钾、镁、钙、铝等无机碱的盐；与甲基胺、乙基胺、乙醇胺等有机碱的盐等。该盐可以为酸加成盐，作为所述盐，具体可列举：与盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸的酸加成盐；以及，与甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸等有机酸的酸加成盐。
式(I)所示的化合物中所含的原子(例如氢原子、碳原子、氧原子、氮原子及硫原子等)可以是各自的自然界中存在最多的同位素以外的同位素原子，该同位素原子也可以为放射性同位素原子。即，根据本发明的1个方面，可提供用同位素原子标记的本说明书中已定义的式(I)的化合物或其盐。在此，就用同位素原子标记而言，例如，可以为用放射性同位素标记(3H、14C、32P等)，从化合物的制备容易性方面出发，优选用3H标记。
在本发明的1个方式中，式(I)的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐以前药形式来给药，在生体内转变为活化合物。
本发明中的认知功能疾病或障碍的治疗中，包括对阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病的处置。另外，本发明中的药物组合物包括脑功能障碍的改善，例如脑血管损伤、脑外伤、脑肿瘤、病毒性脑炎、缺血性脑病、酒精中毒等引起的脑功能障碍的改善。本发明尤其可以应用于记忆障碍、注意力障碍、执行功能障碍、社会性行为障碍等认知功能障碍。认知功能障碍包括例如：神经退行性疾病(阿尔茨海默病、帕金森病、匹克病及亨延顿舞蹈病等)、精神疾病(感统失调症、双相性精神障碍、抑郁症、恐惧症、睡眠障碍、药物依赖症等)、广泛性发展迟缓(自闭症、艾斯伯格综合症、精神迟滞、多动性障碍、抽动障碍等)等。
本发明中的糖尿病并发症包括：高血糖症、糖尿病性昏迷、酮症昏迷、非酮症高浸性昏迷、乳酸酸中毒、低血糖性昏迷、急性感染症、微血管病变、糖尿病性视网膜病、糖尿病性肾病、糖尿病性神经病变、大血管病变、脑血管病变、缺血性心脏病、糖尿病性坏疽、高脂血症、慢性感染症、胆结石、白内障等。
在本发明的1个方式中，式(I)的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐作为Kir6.2通道抑制剂或Kir6.1通道抑制剂使用。即，式(I)的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐可以用于治疗或预防与Kir6.2通道有关的疾病，例如认知功能疾病或障碍、高血糖症、糖尿病、糖尿病并发症。可以用于治疗或预防与Kir6.1通道有关的疾病，例如认知功能疾病或障碍、高血糖症、糖尿病、糖尿病并发症、精神疾病。
本发明的药物组合物可以制成各种剂型，例如为了经口给药，可以制成片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、液剂、乳剂、悬浮液、溶液剂、醑剂、糖浆剂、浸出剂、酏剂；作为非经口剂，可以制成例如：皮下注射剂、静脉内注射剂、肌肉内注射剂、腹腔内注射剂等注射剂；经皮给药或贴附剂、软膏或洗剂；用于口腔内给药的舌下剂、口腔贴附剂；以及，用于经鼻给药的气溶胶剂，但不限于这些。这些制剂可以通过制剂工序中通常使用的公知方法来制造。
该药物组合物可含有通常所使用的各种成分，例如，可含有一种以上的药学上可接受的赋形剂、崩解剂、稀释剂、润滑剂、增香剂、着色剂、甜味剂、矫味剂、悬浮剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、辅助剂、防腐剂、缓冲剂、粘合剂、稳定剂、包衣剂等。另外，本发明的药物组合物可以为长效剂型或缓释剂型。
本发明的治疗剂、预防剂或药物组合物的给药量可以通过给药途径、患者的体型、年龄、身体状况、疾病程度、患病后的经过时间等适宜选择，本发明的药物组合物可以含有治疗有效量和/或预防有效量的上述式(I)的化合物。在本发明中，上述式(I)的化合物一般可以以1～1000mg/天/成人或0.01～20mg/天/kg体重的用量来使用。该药物组合物的给药可以为单次给药或多次给药。
本发明的药物组合物可以根据需要含有现有公知的着色剂、保存剂、香料、风味剂、包衣剂、抗氧化剂、维生素、氨基酸、肽、蛋白质及矿物质成分(铁、锌、镁、碘等)等成分。本发明的治疗剂或预防剂可以以适合于药物组合物、功能性食品、健康食品、饮料、补充剂等的方式来制备，例如，可以以颗粒剂(包括干糖浆)、胶囊剂(软胶囊剂、硬胶囊剂)、片剂(包括咀嚼片剂等)、散剂(粉末剂)、丸剂等各种固态制剂或内服用液剂(包括液剂、悬浮剂、糖浆剂)等液状制剂等方式来制备。另外，本发明的治疗剂或预防剂也可以直接作为药物组合物、功能性食品、健康食品、补充剂等来使用。
作为用于制剂化的添加物，可列举例如：赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、流化剂、分散剂、润湿剂、防腐剂、粘稠剂、pH调整剂、着色剂、矫味矫臭剂、表面活性剂、助溶剂。另外，在采取液剂方式时，可以配合果胶、黄原胶、瓜尔胶等增稠剂。另外，还可以使用包衣剂制成包衣片剂、或者制成膏状的胶剂。进一步地，在制备成其他形态的情况下，按照以往的方法即可。
实施例
以下，通过示出实施例来更详细地说明本发明，但本发明不受这些实施例限定。
实施例1
[化5]
Figure BDA0001742041560000211
在冰冷却下，向双((R)-1-苯基乙基)胺(1.8g，18mmol)的THF(30mL)溶液中滴加n-BuLi的己烷溶液(1.56M，4.8mL，7.33mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，将反应溶液冷却到-78℃后，加入三甲基氯硅烷(TMSCl、1.7mL，13.3mmol)，然后通过套管(日语：カニュレーション；英语：cannulation)加入7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(1.0g，16.6mmol)的THF(5mL)溶液。搅拌1小时后，向反应溶液中加入水，用***萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥后，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝9：1)，以无色油状物形式得到目标的TMS乙醇醚(1.24g，84％)。
将得到的TMS乙醇醚(400mg，1.80mmol)和用文献中的已知方法(Kobayashi S etal.,J.Combi.Chem.2001,3,401)制备的(E)-2-(乙酰基亚氨基)乙酸乙酯(5.4mmol)溶解于二氯甲烷(9mL)，冷却到0℃。向该溶液中加入三氟甲磺酸三甲基甲硅烷基酯(TMSOTf、240μL，900μmol)，在该温度下搅拌1小时后，加入饱和NaHCO3水溶液使反应停止，用乙酸乙酯萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥后，在减压下馏去溶剂，得到Mannich反应的粗产物(410mg、油状物)。将粗产物(400mg)溶解于二氯甲烷(7mL)，冷却到-30℃。向该溶液中加入TiCl4(120μL，1.09mmol)，在该温度下搅拌1小时后，加入水使反应停止，用***萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥后，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝10：1～9：1)，得到TP-010(148mg，25％)及TP-011(228mg，52％)。
TP-010(84％ee):无定形；[α]D 29＝3.4(c＝1.832,CHCl3)；(1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ6.15(d,J＝8.8Hz,1H),4.90(t,J＝9.6Hz,1H),4.22-4.15(m,2H),3.00(s,1H),2.29(br s,1H),2.15-1.95(m,8H),2.04(s,3H),1.85-1.78(m,2H),1.50(br d,J＝12.7Hz,1H),1.37(br d,J＝13.4Hz,1H),1.28(t,J＝7.3Hz,3H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ173.1,170.3,70.8,66.6,61.8,56.7,51.8,51.7,47.9,46.6,37.7,33.3,31.8,29.4,23.4,14.0；IR(neat,cm-1):3336,1725,1654；MS(EI):m/z 329(M+),256(100％)；HRMS(EI):计算值C16H24NO4Cl(M+)329.1394,实测值329.1399。
TP-011(84％ee):mp 65-68℃(Et2O-正己烷)；[α]D 29＝-2.4(c＝1.72,CHCl3)；(1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.64(br s,1H),4.42(d,J＝10.1,3.9Hz,1H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.70(s,1H),2.30(br s,1H),2.20-1.88(m,9H),1.98(s,3H),1.88(br d,J＝13.9Hz,1H),1.57(br d,J＝12.5Hz,1H),1.38(br d,J＝12.5Hz,1H),1.28(t,J＝7.1Hz,3H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ171.7,170.4,72.6,66.0,61.1,56.6,55.1,48.9,47.3,46.2,38.3,34.3,31.8,29.0,22.9,14.1；IR(neat,cm-1):3377,1739,1650；MS(EI):m/z 329(M+),256(100％)；HRMS(EI):计算值C16H24NO4Cl(M+)329.1394,实测值329.1415。
实施例2
[化6]
Figure BDA0001742041560000231
在冰冷却下，向(1R,2S,5S)-2-((R)-羟基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(通过J.Am.Chem.Soc.2014,136,17591-17600中记载的方法制备，750mg，2.9mmol)、叠氮磷酸二苯酯(DPPA、820μL，3.81mmol)、三苯基膦(1.20g，4.4mmol)的THF(15mL)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD、2.2mL，4.4mmol)。在该温度下搅拌1小时后，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(15mL)，在冰冷却下加入TiCl4(820μL，2.3mmol)。在室温下搅拌4小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液。用Celite(注册商标)进行过滤，用***对滤液进行萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝10：1)，以白色固体形式得到(1R,2S,3R,5R,7R)-2-((S)-叠氮基(苯基)甲基)-5-氯金刚烷-1-醇(756mg，92％)。
在冰冷却下，向得到的叠氮化合物(750mg，2.67mml)的THF(14mL)溶液中加入LiAlH4(300mg，8.00mmol)。在该温度下搅拌1小时后，向反应溶液中加入氨水。用Celite(注册商标)进行过滤，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(15mL)后，在冰冷却下加入三乙胺(2.2mL，16.0mmol)、三氟乙酸酐(TFAA、1.2mL，8.0mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷萃取。将得到的有机层用MgSO4干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝15：1)，以白色固体形式得到TP-013(871mg，56％)。
mp 83-85℃(无色针状结晶,正己烷-Et2O)；[α]D 31＝-84.1(c＝1.08,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.35-7.27(m,5H),6.63(d,J＝11.1Hz,1H),5.44(t,J＝10.4Hz,1H),3.26(d,J＝11.1Hz,1H),2.99(d,J＝11.1Hz,1H),2.45-2.41(m,3H),2.26-2.13(m,5H),1.96(br d,J＝12.4Hz,2H),1.47(br d,J＝14.0Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.2(q,J＝37.4Hz),154.9(q,J＝42.3Hz),139.1,129.2,128.7,127.1,115.8(q,J＝288.1Hz),113.3(q,J＝287.3Hz),86.6,65.1,53.4,50.2,48.0,46.9,46.1,35.6,34.6,31.7,28.5；IR(neat,cm-1):3296,2945,1775,1698；MS(EI):m/z 483(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值C21H20ClF6NO3(M+)483.1036,实测值483.1046。
在冰冷却下，向TP-013(550mg，1.14mmol)的乙腈(1.8mL)-四氯化碳(1.8mL)-水(1.8mL)的溶液中加入RuCl3·3H2O(114μmol)和HIO4·2H2O(3.6g，16.0mmol)，在该温度下剧烈搅拌8小时。向反应溶液中加入水，用二氯甲烷进行萃取。在冰冷却下，向得到的有机层中加入重氮甲烷的***溶液，直至溶液变成黄色。30分钟后向溶液中吹入氮气而除去重氮甲烷后，在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝15：1)，以白色固体形式得到TP-012(235mg，44％)。
[α]D 24＝-22.7(c＝1.84,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.10(d,J＝9.8Hz,1H),5.02(d,J＝10.1Hz,1H),3.76(s,3H),2.92(dd,J＝10.3,2.0Hz,1H),2.74(d,J＝11.5Hz,1H),2.69(dd,J＝11.5,1.7Hz,1H),2.43(br s,1H),2.30-2.10(m,7H),1.86(d,J＝14.1Hz,1H),1.46(d,J＝14.1Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ171.1,157.1(q,J＝37.9Hz),155.2(q,J＝41.2Hz),115.5(q,J＝285.4Hz),113.8(q,J＝284.6Hz),87.0,64.8,53.0,51.3,49.8,47.6,46.5,45.9,34.2,33.5,31.7,28.8；IR(neat,cm-1):3319,1780,1714；MS(EI):m/z 406(M-CO2CH3)；HRMS(EI):计算值C15H15NO3F6Cl(M+)406.0645,实测值406.0651。
在冰冷却下，向TP-012(256mg，550μmol)的THF(2.0mL)溶液中加入NaOH水溶液(2M、2.0mL)，搅拌2小时。馏去THF后，用10％HCl水溶液中和后，供于离子交换色谱(DOWEX50)，用0.23N氯化铵水溶液洗脱，冷冻干燥，以白色固体形式得到TP-015(48.5mg，34％)。
[α]D 28＝-46.3(c＝0.78,MeOH)；(1H-NMR(600MHz,CD3OD):δ3.87(d,J＝9.6Hz,1H),2.26(br s,1H),2.19(br s,1H),2.12(d,J＝10.9Hz,1H),2.08(d,J＝12.4Hz,1H),1.80-1.62(m,5H),1.66(br s,2H),1.50(br d,J＝12.4Hz,1H),1.37(br d,J＝13.1Hz,1H)；13C-NMR(150MHz,CD3OD):δ174.6,70.3,68.6,54.7,53.8,49.4,44.3,43.4,38.7,32.9,30.9,29.2；IR(neat,cm-1):3336,1730；MS(FAB):m/z 242(M+1)；HRMS(FAB):计算值C12H20NO4(M+1)242.1387,实测值252.1383。
实施例3
[化7]
Figure BDA0001742041560000251
在冰冷却下，向(1R,2S,5S)-2-((R)-羟基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(256mg，1.00mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入三甲基胺(0.42mL，3mmol)、二甲基氨基吡啶(DMAP、12mg，0.1mmol)、乙酸酐(0.14mL，1.5mmol)。在室温下搅拌20分钟后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4干燥，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝4：1)，以白色固体形式得到(1R,2S,5S)-2-((R)-乙酰氧基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(289mg，97％)。
在-20℃下，向得到的产物(75.2mg，0.252mmol)的二氯甲烷(2.5mL)溶液中加入叠氮基三甲基硅烷(TMSN3、0.10mL，0.76mmol)、BF3·OEt3(0.04mL，0.30mmol)。将反应溶液逐渐升温到室温，搅拌3小时。然后，在冰冷却下，向反应溶液中加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4干燥，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝2：1)，以白色固体形式得到TP-009(33.5mg，39％)。
mp 114℃(无色结晶,正己烷-Et2O)；[α]D 19＝+56.0(c＝0.67,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.37-7.31(m,5H),6.01(d,J＝10.6Hz,1H),2.95(br s,1H),2.27(br s,1H),2.25(d,J＝10.6Hz,1H),2.15(d,J＝13.0Hz,1H),2.01(s,3H),1.89-1.83(m,2H),1.76-1.61(m,7H),1.18(d,J＝13.0Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ169.6,138.9,128.7,128.5,127.3,77.0,71.3,60.0,51.9,50.7,41.6,40.4,38.8,32.5,30.6,29.3,21.6；IR(neat,cm-1):3460,2931,2091,1732；MS(EI):m/z 323(M+-H2O),107(100％)；HRMS(EI):计算值C19H21N3O2(M+-H2O)323.1634,实测值:323.1613。
实施例4
[化8]
Figure BDA0001742041560000261
在冰冷却下，向双((S)-1-苯基乙基)胺(10.0mL，44mmol)、氯化锂(3.4g，80mmol)的THF(100mL)溶液中滴加正丁基锂的己烷溶液(1.56M，28.2mL，44mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，将反应溶液冷却到-78℃。通过套管向反应混合物中加入7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(6.00g，40mmol)的THF(60mL)溶液。搅拌1小时后，通过套管加入苯甲醛(6.1mL，60mmol)的THF(40mL)溶液。搅拌2小时后，向反应溶液中依次加入乙酸、饱和氯化铵水溶液，用***进行萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝4：1)，以白色固体形式得到(1S,2R,5R)-2-((S)-羟基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(8.3g，81％)。利用***对其进行重结晶，从而得到无色针状晶体。
mp 122℃；[α]D 21＝-17.9(c＝0.32,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.38-7.25(m,5H),4.79(d,J＝1.8Hz,1H),4.76(d,J＝1.8Hz,1H),4.71(d,J＝6.8Hz,1H),2.90(s,1H),2.64(dd,J＝15.7,6.8Hz,1H),2.48-2.18(m,6H),2.01(br d,J＝14.3Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ211.0,141.6,128.8,127.6,114.8,74.6,62.7,45.7,42.2,41.3,32.4,31.9,28.4；IR(neat,cm-1):3390,1711；MS(EI):m/z 256(M+),95(100％)；HRMS(EI):计算值C17H20O2(M+)256.1463,实测值256.1450。
在冰冷却下，向(1S,2R,5R)-2-((S)-羟基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(2.00g，7.5mmol)、DPPA(2.3mL，11mmol)、三苯基膦(3.0g，11mmol)的THF(38mL)溶液中加入DIAD(2.2mL，11mmol)。在该温度下搅拌1小时后，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(38mL)，在冰冷却下加入TiCl4(0.8mL，7.5mmol)。在室温下搅拌4小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液。用Celite(注册商标)进行过滤，用***对滤液进行萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，向残渣中加入四氢吡喃(THP、40mL)。在冰冷却下，向其中加入LiAlH4(430mg，11mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，向反应溶液中加入氨水。进行Celite(注册商标)过滤，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(40mL)后，在冰冷却下加入三乙胺(6.3mL，45mmol)、TFAA(3.2mL，23mmol)。在室温下搅拌过夜后，加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝15：1)，以白色固体形式得到粗产物。利用***-己烷对其进行重结晶，以白色固体形式得到TP-014(1.27g，35％)。
mp 89℃；[α]D 21＝+89.1(c＝0.31,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.35-7.27(m,5H),6.63(d,J＝11.1Hz,1H),5.44(t,J＝10.4Hz,1H),3.26(d,J＝11.1Hz,1H),2.99(d,J＝11.1Hz,1H),2.45-2.41(m,3H),2.26-2.13(m,5H),1.96(br d,J＝12.4Hz,2H),1.47(br d,J＝14.0Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.2(q,J＝37.4Hz),154.9(q,J＝42.3Hz),139.1,129.2,128.7,127.1,115.8(q,J＝288.1Hz),113.3(q,J＝287.3Hz),86.6,65.1,53.4,50.2,48.0,46.9,46.1,35.6,34.6,31.7,28.5；IR(neat,cm-1):3296,2945,1775,1698；MS(EI):m/z 483(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值for C21H20ClF6NO3(M+)483.1036,实测值483.1046；元素分析:计算值C21H20ClF6NO3:C,52.13；H,4.17；N,2.89.实测值C,52.27；H,4.18；N,2.88。
实施例5
[化9]
Figure BDA0001742041560000281
在冰冷却下，向TP-014(84.7mg，0.175mmol)的THF(2mL)溶液中加入0.5M NaOH水溶液(1mL)。在该温度下搅拌15分钟后，加入饱和NH4Cl水溶液，用乙酸乙酯萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝8：1～4：1)，以白色固体形式得到TP-048(65.5mg，96％)。
[α]D 26＝+109.2(c＝0.772,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.41-7.32(m,5H),6.98(br,1H),5.34(t,J＝9.7Hz,1H),2.36-2.29(m,3H),2.19-2.00(m,7H),1.77(br d,J＝11.6Hz,1H),1.41-1.33(m,2H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.2(q,J＝37.1),140.5,129.4,128.6,127.4,115.8(q,J＝288.1Hz),72.3,66.1,56.7,54.2,52.4,47.7,46.3,38.6,34.4,31.8,28.8；IR(neat,cm-1):3553,3297,2940,1698,1552,1208,1183,1165；MS(EI):m/z 387(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值C19H21ClF3NO2(M+)387.1213,实测值387.1196。
实施例6
[化10]
Figure BDA0001742041560000291
在室温下，向TP-014(30.0mg，0.062mmol)的甲苯(2mL)溶液中加入三(三甲基甲硅烷基)硅烷(29μL,0.095mmol)、偶氮双异丁腈(AIBN、2.0mg，0.012mmol)。加热回流过夜后，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝15：1)，以白色固体形式得到TP-049(23.0mg，83％)。
[α]D 29＝+106.4(c＝0.385,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.33-7.27(m,5H),6.31(br d,J＝10.1Hz,1H),5.50(dd,J＝10.9,10.1Hz,1H),3.20(br d,J＝10.9Hz,1H),2.60(br d,J＝11.6Hz,1H),2.45(br d,J＝12.1Hz,1H),2.28-2.27(m,3H),2.04-1.80(m,6H),1.72(br s,2H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.0(q,J＝37.1Hz),155.1(q,J＝41.8Hz),139.8,129.0,128.4,127.2,115.8(q,J＝288.1Hz),113.5(q,J＝287.3Hz),87.5,53.6,49.4,41.3,37.2,36.1,33.0,30.6,30.4,30.2；IR(neat,cm-1):3335,2927,1775,1700,1556,1218,1169；MS(EI):m/z 449(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值C21H21F3NO3(M+)449.1426,实测值449.1447。
在冰冷却下，向TP-049(61.5mg，0.137mmol)的THF(1.4mL)溶液中加入NaOH水溶液(0.5M、0.5mL)。在该温度下搅拌5分钟后，向反应溶液中加入2M盐酸，用乙酸乙酯萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝4：1～2：1)，以白色固体形式得到TP-052(49.4mg，quant.)。
TP-052：[α]D 14＝+130.7(c＝0.243,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.39-7.31(m,5H),6.77(br d,J＝8.9Hz,1H),5.40(dd,J＝9.7,8.9Hz,1H),2.32(br d,J＝9.7Hz,1H),2.31-2.07(m,4H),1.85-1.79(m,2H),1.72-1.57(m,5H),1.52-1.44(m,2H),1.29(br,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.1(q,37.1Hz),140.7,129.4,128.5,127.5,115.9(q,288Hz),77.2,54.3,53.0,50.5,48.5,41.4,39.6,39.4,33.2,30.6,29.6；IR(neat,cm-1):3566,3291,2919,1698,1183；MS(EI):m/z 353(M+),151(100％)；HRMS(EI):计算值C19H22F3NO2(M+)353.1603,实测值353.1604。
实施例7
[化11]
Figure BDA0001742041560000301
在冰冷却下，向(1S,2R,5R)-2-(R-叠氮基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1.]壬-3-酮(57.4mg，0.204mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中依次加入2-甲氧基乙醇(78μL，1.0mmol)、三氟甲磺酸钪(5.0mg，0.01mmol)。在室温下搅拌2天后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4干燥，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝1：2～1：1)，以无色油状物形式得到(1S,2R,3S,5S,7S)-2-((R)-叠氮基(苯基)甲基)-5-(2-甲氧基乙氧基)金刚烷‐1-醇(41.2mg，56％)。
在冰冷却下，向得到的叠氮化合物(39.6mg，0.111mmol)的THF(1mL)溶液中加入LiAlH4(8.0mg，0.21mmol)。缓慢升温到室温并搅拌1小时后，用冰对反应溶液进行冷却，加入LiAlH4(8.0mg，0.21mmol)。在室温下搅拌1小时后，在冰冷却下向反应溶液中加入氨水。用Celite(注册商标)进行过滤，将滤液用Na2SO4进行干燥，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(1mL)，在冰冷却下加入三乙胺(77μL，0.56mmol)、三氟乙酸酐(TFAA、47μL，0.33mmol)。在室温下搅拌5小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝1：4～1：2)，以无色油状物形式得到TP-050(31.6mg，54％)。
[α]D 25＝+72.1(c＝0.965,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.34-7.23(m,5H),6.33(br d,J＝9.9Hz,1H),5.44(dd,J＝10.9,9.9Hz,1H),3.59-3.56(m,2H),3.51-3.48(m,2H),3.37(s,3H),3.17(br d,J＝10.9Hz,1H),2.65(br d,J＝10.6Hz,1H),2.43-2.37(m,3H),1.95-1.81(m,7H),1.38(br d,J＝11.6Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.1(q,J＝37.4Hz),154.9(q,J＝42.1Hz),139.4,129.1,128.5,127.2,115.8(q,J＝288.1Hz),113.4(q,J＝287.3Hz),87.6,73.7,72.3,60.2,59.1,53.5,48.5,45.0,41.1,39.9,36.3,30.5,29.2；IR(neat,cm-1):3303,2936,1775,1698,1554,1221,1172；MS(EI):m/z 523(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值C24H27F6NO5(M+)523.1793,实测值523.1797。
实施例8
[化12]
Figure BDA0001742041560000321
在冰冷却下，向(1S,2R,5R)-2-(R-叠氮基(苯基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1.]壬-3-酮(238mg，0.848mmol)的甲醇(8.5mL)溶液中加入三氟甲磺酸钪(20mg，0.04mmol)。在室温下搅拌18小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用乙酸乙酯萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥后，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝1：4～1：2)，以无色油状物形式得到(1S,2R,3S,5S,7S)-2-((R)-叠氮基(苯基)甲基)-5-甲氧基金刚烷‐1-醇(225mg，85％)。
在冰冷却下，向得到的叠氮化合物(225mg，0.716mmol)的THF(4mL)溶液中加入LiAlH4(41mg，1.1mmol)。在同温度下搅拌1小时后，向反应溶液中加入氨水。用Celite(注册商标)进行过滤，在减压下馏去溶剂。向残渣中加入二氯甲烷(4mL)，在冰冷却下加入三乙胺(497μL，3.86mmol)、三氟乙酸酐(TFAA、299μL，2.15mmol)。在室温下搅拌40小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液,用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝1：8～1：2)，以白色固体形式得到TP-053(262mg，75％)。
[α]D 14＝+97.2(c＝0.179,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ7.33(m,5H),6.35(brd,J＝9.9Hz,1H),5.45(dd,J＝10.6,9.9Hz,1H),3.25(s,3H),3.17(br d,J＝10.6Hz,1H),2.61(br d J＝10.6Hz,1H),2.45-2.37(m,3H),1.97-1.73(m,7H),1.39(br d,J＝13.5Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.0(q,J＝37.4Hz),155.0(q,J＝41.8Hz),139.4,129.1,128.6,127.1,115.8(q,288.1Hz),113.4(q,287.0Hz),87.7,75.5,53.5,48.7,48.6,44.5,40.8,39.5,36.3,33.3,30.4,29.3；IR(neat,cm-1):3299,2941,1776,1697,1221,1172；MS(EI):m/z 479(M+),202(100％)；HRMS(EI):计算值C22H23F6NO4(M+)479.1531,实测值479.1486。
实施例9
[化13]
Figure BDA0001742041560000331
在冰冷却下，向双((S)-1-苯基乙基)胺(2.5mL，11mmol)、氯化锂(850mg，20mmol)的THF(25mL)溶液中滴加正丁基锂的己烷溶液(1.56M，7.1mL，11mmol)。在该温度下搅拌30分钟后，将反应溶液冷却到-78℃。通过套管向反应混合物中加入7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(1.52g，10mmol)的THF(15mL)溶液。搅拌30分钟后，通过套管加入烟碱醛(1.1mL，12mmol)的THF(10mL)溶液。搅拌40分钟后，向反应溶液中依次加入乙酸、饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用K2CO3干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐丙酮＝3：2～1：2)，以白色固体形式得到(1S,2R,5R)-2-((S)-羟基(吡啶-3-基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(2.7g，81％)。用乙酸乙酯对其进行重结晶，从而得到无色晶体(99％ee)。
在冰冷却下，向得到的乙醇(258mg，1.0mmol)、叠氮磷酸二苯酯(DPPA、237μL，1.1mmol)、三苯基膦(239mg，1.1mmol)的THF(5mL)溶液中加入偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD、214μL，1.1mmol)。缓慢升温到室温并搅拌5小时后，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(己烷‐乙酸乙酯＝4：1～2：1)，以无色油状物形式得到(1S,2R,5R)-2-((R)-叠氮基(吡啶-3-基)甲基)-7-亚甲基双环[3.3.1]壬-3-酮(187mg，66％)。
在冰冷却下，向得到的叠氮化合物(187mg，0.66mmol)的二氯甲烷(7mL)溶液中加入TiCl4(300μL，0.27mmol)。在室温下搅拌3小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用***萃取。将得到的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4进行干燥。在减压下馏去溶剂，将得到的固体用冷***洗涤，得到(1S,2R,3S,5S,7S)-2-((R)-叠氮基(吡啶-3-基)甲基)-5-氯金刚烷-1-醇(98.5mg，92％)。
在冰冷却下，向得到的化合物(75.4mg，0.257mmol)的THF(2mL)溶液中加入LiAlH4(23mg，0.61mmol)。在该温度下搅拌1小时后，在冰冷却下向反应溶液中加入氨水。用Celite(注册商标)进行过滤，在减压下馏去溶剂。将残渣供于硅胶柱色谱(CHCl3-甲醇＝1：0～4：1)，得到粗胺。
向得到的粗胺中加入二氯甲烷(2mL)后，在冰冷却下加入三乙胺(178μL，1.28mmol)、三氟乙酸酐(TFAA、107μL，0.76mmol)。升温到室温并搅拌4小时后，在冰冷却下加入饱和NaHCO3水溶液，用二氯甲烷进行萃取。将得到的有机层用Na2SO4干燥。在减压下馏去溶剂，将残渣供于硅胶柱色谱(己烷-乙酸乙酯＝2：1～1：4)，以白色固体形式得到TP-051(48.8mg，49％)。
[α]D 20＝+53.9(c＝0.379,CHCl3)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ8.57(d,J＝1.0Hz,1H),8.50(dd,J＝4.9,1.5Hz,1H),7.72(br d,J＝7.8Hz,1H),7.41(br d,J＝9.8Hz,1H),7.32(dd,J＝7.8,4.9Hz,1H),5.35(dd,J＝9.8,9.3Hz,1H),2.40-2.38(m,2H),2.29(br s,1H),2.22-1.99(m,7H),1.75(br,1H),1.68(br d,J＝13.7Hz,1H),1.48(br d,J＝13.2Hz,1H),1.42(br d,J＝13.2Hz,1H)；13C-NMR(100MHz,CDCl3):δ156.4(q,J＝37.1Hz),148.2,147.7,138.3,136.5,124.0,115.8(q,J＝287.8Hz),71.9,66.1,57.3,52.6,51.7,47.6,46.3,38.3,34.3,31.6,28.6；IR(neat,cm-1):3292,2938,1700,1558,1212,1184,1161,759；MS(EI):m/z 388(M+),203(100％)；HRMS(EI):计算值C18H20ClF3N2O2(M+)388.1165,实测值388.1177。
试验例1
从东北大学大学院生命科学研究科石塚塚博士处得到***有Kir6.2通道的cDNA的质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.2。将pcDNA3.1-Kir6.2用GenElute HP Plasmid MaxiprepKit(Sigma-Aldrich公司制)按照附带的手册进行了制备。将培养在DMEM培养液(Gibco)中的Neuro2A细胞(N2A细胞、药物基盘研究所)的培养液(组成：在DMEM培养液450ml中加入了50ml的牛血清、青霉素·链霉素100单位)更换成加入了上述制备的pcDNA3.1-Kir6.2(1μg/μl)的Opti-Mem(Gibco)(以1ug/1ml加入了Lipofectamine R2000)，培养5小时，由此得到过量表达Kir6.2通道的N2A细胞。再次更换成DMEM培养液后，培养2天。然后，以相对于培养液(DMEM、Gibco)为10nM的浓度添加美金刚(Sigma-Aldrich公司制)及本发明化合物(对于各组，n＝4)后，静置1小时。静置后，回收Kir6.2通道过量表达N2A细胞，向该细胞中加入SDS样品缓冲液而悬浮后，通过免疫印迹法且使用抗磷酸化CaMKII抗体(Fukunaga K et al.,J.Biol.Chem.1992,267,22527-22533)为一抗、使用抗兔IgG抗体(SouthernBiotech公司制)作为二抗，来测定CaMKII的活化(除了使用前述抗体以外的条件遵循常规的免疫印迹法)。其结果是，在TP-009、TP-010、TP-011、TP-012、TP-014、TP-015、TP-048、TP-049、TP-050、TP-051、TP-052、TP-053中得到与磷酸化CaMKII的抗体反应的条带，确认CaMKII的活化增加。将其结果示于图1。在图1中，将未添加试验化合物时(对照：c)的结果设为100％来示出添加美金刚、TP-009、TP-010、TP-011、TP-012、TP-014、TP-015、TP-048、TP-049、TP-050、TP-051、TP-052、TP-053(分别对应于M、9、10、11、12，12、15、48、49、50、51、52及53)时的CaMKII的活化。
试验例2
使用试验例1中得到的Kir6.2通道过量表达细胞，按照常规的膜片钳法测定从细胞内向细胞外排出的钾电流。将结果示于图2。ATP敏感性钾通道(Kir6.2通道)定位于神经细胞的细胞膜，当通道受到抑制而关闭时，神经细胞膜的阈值上升，形成类似于产生瞬时的活动电位的状况，从细胞内向细胞外排出钾电流，作为替代则从细胞外向细胞内流入钙电流。图2a中，通过使用抗Kir6.2通道抗体(基于常规方法制作)的针对Kir6.2通道过量表达细胞(利用上述方法)的免疫印迹法(除了使用抗Kir6.2通道抗体以外的条件与试验例1的条件相同，n＝5)，确认N2A细胞中过量表达Kir6.2通道(上图为利用免疫印迹法得到的染色图像，下图为将该染色图像的条带信号强度进行量化表示的图)。对于作为管家基因的β微管蛋白，则没有观察到变动(抗β微管蛋白抗体从Sigma-Aldrich获得，其它条件与Kir6.2的检测相同)。图2b为对如下事项进行确认的结果：在添加TP-014且使其在电生理学实验用缓冲液中的浓度为10nM的电生理学实验用缓冲液中静置Kir6.2通道过量表达细胞时，当使神经细胞的膜电位向正值侧变化时流动的、向外流出的钾电流受到抑制(各组n＝5)。该结果表明TP-014抑制Kir6.2通道、抑制从细胞内向细胞外排出的钾电流。
试验例3
使用与试验例1同样的Kir6.2通道过量表达细胞，通过钙成像法测定由于TP-014处置而从细胞外向细胞内流入的钙量。将结果示于图3。钙成像法为如下方法：对于所培养的神经细胞，按照钙荧光色素(Fura2、同仁化学研究所制)在培养液中为4μM的方式来调整、处置，通过荧光强度来测定钙量。使用成像装置(SUTTER INSTRUMENT公司制、LAMBDA10-2)并按照该装置的手册进行成像。图3a是在4分钟内测定用TP-014(1～100nM)及美金刚(100nM)处置时的TP-014浓度依赖性的钙量经时变化的结果。图3b是测定从美金刚(100nM)、TP-014(1-100nM)处置起4分钟后的钙量的结果(各组n＝5)。TP-014具有比美金刚更强的钙浓度增加作用，已确认：通过TP-014处置，由于试验例2所确认的向细胞外的钾排出抑制作用而使细胞内的钙量显著增加。
试验例4
对于阿尔茨海默病模型小鼠(APP23小鼠、Sturchler-Pierrat et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1997,94,13287-13292)(12月龄)，用TP-014(1mg/kg)以1天1次进行2个月的慢性处置(经口给药)，结果确认到显著的认知功能改善效果。将结果示于图4。图4a-d示出行为分析的结果。图4a及图4b示出利用常规的Y型迷宫法研究野生型小鼠(C57BL/6J、日本SLC)及APP23小鼠(各n＝5)的注意功能的结果，可看到TP-014处置带来的显著的注意功能改善效果。Y型迷宫法为在8分钟内使小鼠在3个臂内自由走动的方法。若将臂分别设为A、B、C，则位于A中的小鼠进入B或C的臂，假设小鼠进入B之后、接着小鼠会进入C，将如此地进入A-B-C的情况设为正确。另一方面，将A-B-A之类的不进入新的臂的情况设为不正确，将小鼠所进出的臂的位置记录为选择顺序，对小鼠在测定时间内在各臂中进出的次数进行计数，将其作为臂进入总次数。进一步地，对其中的正确的情况(连续选择不同的三条臂的组合)进行计数，将该数值作为交替行为次数(No.of alternation)，将交替行为次数相对于用臂进入总次数减去2而得的数的比例作为正常的交替行为的指标(空间作业记忆的正确率)，用alternation(％)表示。
小鼠有喜好新事物的倾向，通常的小鼠会显示70％的正确率，APP23小鼠则下降为50％左右。以该百分比为指标来分析注意功能(认知功能)。
图4c示出通过常规的新物体识别试验法以n＝5来测定野生型小鼠、App23小鼠对新物体的记忆的结果。就新物体识别试验法而言，将2块相同形状的积木放入小鼠笼中，供小鼠游戏(10分钟，将其称为训练尝试)。训练尝试1小时后，将一块积木变更为其它形状的积木。通常的小鼠对新物体感兴趣，因此玩其它形状的积木的时间会增加。阿尔茨海默病小鼠不识别新物体，可看到记忆障碍。在将一块积木换成另一积木的状态下进一步使其自由探索5分钟(将其称为保持尝试)。在训练尝试及保持尝试中，测定对2个物体各自的接触次数，计算与替换后的另一积木的接触次数相对于保持尝试中的总接触次数的比例(％)，作为分辨指数(Discrimination index)。
图4d示出通过常规的条件性恐惧试验法测定恐惧记忆(各n＝5)的结果。条件性恐惧试验法是利用与明亮场所相比、小鼠更喜欢黑暗场的特征的分析，第1天将小鼠置于明亮的场所。小鼠因为喜欢黑暗的场所而会进入黑暗的场所(暗箱)，在此时对其给予电刺激。小鼠受惊而回到明亮的场所，此后不再返回黑暗的场所。第2天，将小鼠置于明亮的场所(与第1天相同的场所)，对小鼠是否进入黑暗的场所这一点进行5分钟测定。如果小鼠立即进入黑暗的场所，则恐惧记忆是下降的。“Latency”为测定第2天将小鼠置于明亮的场所时至进入暗室为止的时间的秒数。APP23小鼠会立即进入黑暗的场所，因此确认恐惧记忆下降，当用TP-014处置2个月时，确认到改善效果。
图4e～图4g示出通过电生理学方法研究作为记忆形成指标的长期增强现象(LTP)的结果。脑部的海马对于记忆而言很重要，将海马制成薄片状(400微米厚)，将该薄片在用95％O2/5％CO2气体饱和的人工脑脊髓液(126mM NaCl,5mM KCl,26mM NaHCO3,1.3mMMgSO4-7H2O,1.26mM KH2PO4,2.4mM CaCl2-2H2O,10mM葡萄糖)中、在34℃下恢复2小时。将海马薄片转移到测定室内，将TP-014添加到人工脑脊髓液中，用于灌注。记录由电刺激引起的神经细胞活动和测定突触后动作电位(fEPSP)，评价LTP的改善程度。将所记录的波形示于图4e。然后，施加100Hz的电刺激而使海马产生稀疏的变化(通常认为海马通过稀疏的变化来形成记忆)。确认神经细胞的兴奋性的上升率在APP23小鼠中是下降的，通过TP-014慢性处置而改善，显示出由LTP的改善带来的记忆学习改善效果。
试验例5
摘出APP23小鼠的海马，向海马切片添加SDS样品缓冲液而进行悬浮后，通过免疫印迹法，使用针对CaMKII、CaMKIV、ERK的抗体(CaMKII：Fukunaga et al.,J.Biol.Chem.1992,267,22527-22533、CaMKIV：Kasahara et al.,J.Biol.Chem.2001,276,24044-24050、ERK：Sigma-Aldrich公司制)来研究各蛋白质的磷酸化。将结果示于图5a及图5b。CaMKII、CaMKIV、ERK均为通常认为对于记忆形成而言重要的分子。其结果是，通常的APP23小鼠中可见CaMKII的磷酸化下降，而PT-014慢性处置(处置条件与试验例4时相同)的APP23小鼠中可见CaMKII的磷酸化亢进。该结果表明，CaMKII的活化对于APP23小鼠的由PT-014处置带来的记忆改善效果很重要。
关于已知会通过CaMKII的活化而诱导活化的分子的GluA1(Ser-831)、Synapsin I(Ser-603)、CREB(Ser-133)，向海马切片加入SDS样品缓冲液进行悬浮后，通过免疫印迹法进行了研究。针对各分子的抗体均由Milipore公司获得。将结果示于图5c及图5d。表明GluA1(Ser-831)及CREB(Ser-133)的活化被CaMKII的活化诱导。图5a及图5c为对实时免疫印迹进行电泳时得到的条带(图像)，图5b及图5d为对图5a及图5c的条带的信号强度进行定量的分析结果。
试验例6
以作为神经退行性疾病模型小鼠的嗅球摘除小鼠(OBX小鼠)进行了与图4同样的实验确认。将结果示于图6a～图6g。OBX小鼠的认知功能障碍通过TP-014的慢性给药(2周)而显著改善。OBX小鼠是使用10周龄的DDY雄性小鼠(Nippon SLC,Hamamatsu,Japan)制作的。嗅球摘除手术在戊巴比妥钠(50mg/kg i.p.；Dainippon,Osaka,Japan)麻醉的条件下实施。将小鼠固定于脑固定器，用钻头将嗅球上的头盖骨穿孔，开出直径1mm的孔。在不伤及额前皮质的条件下用抽吸泵抽吸除去嗅球。Sham组中，除了嗅球的抽吸除去以外进行与OBX组相同的操作。
试验例7
与图5同样地研究OBX小鼠的认知功能障碍的细胞内机制。将其结果示于图7a～图7d。获知在作为对于记忆形成重要的部位的海马中、CaMKII和CaMKIV的活化是重要的。另外确认，作为CaMKII和CaMKIV的活化的下游分子的GluA1(Ser-831)、CREB(Ser-133)的活化也同样重要。针对GluA1(Ser-831)、CREB(Ser-133)的抗体均由Milipore公司获得。由图4～7的结果获知，对于TP-014的认知功能改善效果而言，CaMKII和CaMKIV的活性亢进是重要的。在CaMKIV基因缺损的小鼠中未观察到认知功能障碍，因此认为对于认知功能改善效果而言CaMKII是重要的。
试验例8
为了确认TP-014的作用为Kir6.2通道抑制作用，使用Kir6.2通道缺损小鼠进行与图4同样的行为实验(图8a及图8b：Y型迷宫试验、图8c：新物体识别试验法、图8d：条件性恐惧试验法、图8e～图8g：LTP改善评价、各组中n＝5)来鉴定TP-014的作用部位。将结果示于图8。确认在Kir6.2缺损小鼠中诱发了认知功能障碍。该结果表明，Kir6.2通道对于记忆形成是重要的。另外获知，Kir6.2缺损小鼠的记忆障碍及LTP的减弱未由于TP-014慢性处置(2个月)而改善。该结果表明，TP-014的作用部位为Kir6.2通道。分析方法与试验例4～7相同。需要说明的是，Kir6.2缺损小鼠由神户大学医学部、清野进教授处获得(Miki T et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1998,95,10402-10406)。
试验例9
通过与图4～7同样的方法，对于已知会由于CaMKII的活化及CaMKII的活化而诱导活化的分子-GluA1(Ser-831)，向海马切片中加入SDS样品缓冲液而进行悬浮后，进行免疫印迹法，来研究Kir6.2缺损小鼠的认知功能障碍的细胞内机制。将结果示于图9(图9a：由免疫印迹法得到的条带图像、图9b：条带的信号强度的定量化结果)。在Kir6.2缺损小鼠的海马中，CaMKII的活化亢进，TP-014的慢性处置也未观察到影响。由于Kir6.2通道的缺损，观察到细胞内外的钙的稳定性(平衡)的异常，CaMKII的磷酸化亢进。表明TP-014对CaMKII的活化没有影响，TP-014的作用部位为Kir6.2通道。
试验例10
关于阿尔茨海默病病因的淀粉样蛋白-β(Aβ)假说目前仍然受到重视。通过免疫染色法已确认，在APP23小鼠(14个月龄)中发生Aβ的凝聚。图10中示出将脑制成50微米的薄切片、用6E10(Aβ的抗体、abcam公司制)及Thioflavin对WT即野生型(对照小鼠)、APP23小鼠分别进行染色的结果(评价凝聚体的指标)。这以外的条件遵照常规的免疫染色法。获知在APP23小鼠中Aβ的凝聚受到促进，尤其在大脑皮质(PFC)中观察到较多凝聚。另一方面，在海马(CA1)中几乎观察不到。通过TP-014慢性处置，Aβ的凝聚受到抑制。该结果表明，TP-014有Aβ的凝聚抑制效果。
试验例11
使用OBX小鼠作为抑郁症模型小鼠，确认TP-014的抑郁样症状的改善效果。将结果示于图11。就OBX小鼠而言，虽然也观察到认知功能下降，但原本是作为抑郁症模型小鼠而建立的小鼠，作为抑郁症的测定法，用tail-suspension法(a)和forced swim法(b)进行了分析。tail-suspension法是夹住小鼠的尾巴并将其倒立吊起的方法，被吊起的小鼠如果为抑郁症则静止时间(immobility time)变长。通常的小鼠即使被吊起也会动，因此静止时间短。forced swim法则在烧杯中装水并使小鼠在烧杯中游泳。抑郁症小鼠不游泳也不动(漂浮状态)，对该不动的时间(静止时间、immmobility time(s))进行测定。已确认OBX小鼠在tail-suspension法(a)和forced swim法(b)中静止时间增加。通过TP-014的慢性给药(2周、给药方法与前例相同)，静止时间得到改善。由该结果获知，TP-014有OBX小鼠的抑郁样症状改善效果(各组都是n＝5)。
试验例12
小鼠使用的是Kir6.1缺损小鼠(杂合型、各组n＝5)，通过与图11同样的方法测定tail-suspension法(a)和forced swim法(b)中的静止时间。杂合型小鼠与纯合型(完全缺损小鼠)不同，是Kir6.1通道的表达量减半的小鼠(如果为纯合型，则出生后发生心律失常而死亡)。将结果示于图12。Kir6.1缺损小鼠显示出抑郁样症状加重，由该结果可知，Kir6.1为对抑郁症而言重要的分子。另外确认，TP-014的慢性处置不显示效果、TP-014介由Kir6.1通道抑制作用而显示抑郁改善效果。Kir6.1缺损小鼠从神户大学医学部、清野进教授处获得(Miki T et al.,Nature Medicine 2002,8,466-472)。
试验例13
与图12同样地，使用CaMKIV缺损小鼠(各组n＝5*)对由Kir6.1通道诱导的CaMKIV进行分析。将结果示于图13。CaMKIV缺损小鼠也同样确认到抑郁样症状加重，由该结果可知，CaMKIV对于抑郁症的发症机制也是重要的。TP-014对CaMKIV的抑郁症状(静止时间延长)不显示效果。确认TP-014抑制Kir6.1通道，介由活化CaMKIV而显示抑郁症改善效果。CaMKIV缺损小鼠从北里大学医学部坂上洋行教授处获得(Takao K et al.,PLoS One2010,5,e9460)。
试验例14
使用测定试剂盒(assay kit)(Technicon International co公司制)测定血液中的葡萄糖浓度，确认TP-014的血糖值降低作用。将结果示于图14。测定进行了4周，用TP-014(1mg/kg)进行4周慢性处置，结果在第3周以后确认到显著的血糖值下降。作为对照，使用甲磺丁脲。Kir6.2通道在细胞膜上与SUR1(脲受体)结合而形成通道，可认为作用机制基于Kir6.2通道抑制作用。甲磺丁脲结合于SUR1、抑制Kir6.2通道。
试验例15
***有Kir6.1通道的cDNA的质粒载体：pcDNA3.1-Kir6.1从东北大学大学院生命科学研究科、石塚彻博士处获得。除了使用该质粒载体以外，通过与试验例1的Kir6.2通道过量表达N2A细胞的制备同样的方法得到过量表达Kir6.1通道的N2A细胞。
使用所得到的Kir6.1通道过量表达细胞测定CaMKIV的活化的测定方法为与试验例1同样的免疫印迹法，一抗使用抗磷酸化CaMKIV抗体(Kasahara J et al.,J.Biol.Chem.2001,276,24044-50)，二抗使用抗兔IgG抗体(SouthernBiotech公司制)。
进一步地，使用所得到的Kir6.1通道过量表达细胞，通过常规的膜片钳法测定从细胞内向细胞外排出的钾电流。将结果示于图18。ATP敏感性钾通道(Kir6.1通道)定位于神经细胞的细胞膜，当通道受到抑制而关闭时，神经细胞膜的阈值上升，形成类似于产生瞬时的活动电位的状况，从细胞内向细胞外排出钾电流，作为替代则从细胞外向细胞内流入钙电流。图18a中，通过使用抗Kir6.1通道抗体(基于常规方法制作)的针对Kir6.1通道过量表达细胞(利用上述方法)的免疫印迹法(除了使用抗Kir6.1通道抗体以外的条件与试验例1的条件相同，n＝5)，确认N2A细胞中过量表达Kir6.1通道(上图为利用免疫印迹法得到的染色图像，下图为将该染色图像的条带信号强度进行量化表示的图)。对于作为管家基因的β微管蛋白则没有观察到变动(抗β微管蛋白抗体由Sigma-Aldrich获得，其它条件与Kir6.1的检测相同)。图18b为对如下事项进行确认的结果：在添加TP-014且使其在电生理学实验用缓冲液中的浓度为10nM的电生理学实验用缓冲液中静置Kir6.2通道过量表达细胞时，当使神经细胞的膜电位向正值侧变化时流动的、向外流出的钾电流受到抑制(各组n＝5)。该结果表明TP-014抑制Kir6.1通道、抑制从细胞内向细胞外排出的钾电流。
试验例16
作为显示焦虑样症状的疾病模型小鼠，使用给药了皮质酮的野生型小鼠(C57BL/6J、日本SLC、2个月龄、以5mg/kg、1天1次给药2周)及给药了皮质酮的Kir6.1缺损小鼠，进行与焦虑相关行为有关的5个行为试验。需要说明的是，Kir6.1缺损小鼠从神户大学医学部、清野进教授处获得(Miki T et al.,Nature Mededicine2002,8,466-472)。
对于皮质酮给药野生型小鼠及皮质酮给药Kir6.1缺损小鼠，1天1次地用TP-014(1mg/kg)进行2周慢性处置(经口给药)，结果确认到焦虑症状加重的显著改善效果。将结果示于图19。
图19a示出通过高架式十字迷宫法(elevated-plus maze法、图19b)研究各组(各n＝5)对于焦虑的易感性的结果。这里所使用的装置中，在高处设置有形成十字路口形的臂，各臂呈下部可见的状态或者闭合的状态中的任一种。容易感到焦虑的小鼠会长时间停留在闭合的臂(close arm)中，对焦虑有抵抗性的小鼠则停留在下部可见的臂(open arm)中。图19a的纵轴表示在open arm中的停留时间。
图19c示出明暗试验法(light-dark法、图19d)的试验结果(各组n＝5)。对于进入了黑箱中(黑暗的场所)的小鼠对光感到焦虑而直至走到外面(明亮的场所)所需要的时间进行测定。图19c的纵轴表示直至走到外面的时间(entory of open compartment)。
图19e示出大理石埋藏试验法(Marble burying法、图19f)的结果(各组n＝5)。在装小鼠的笼子中铺设碎屑(日语：床敷チップ)，在其上按照小鼠能看见的方式放置20个大理石。让小鼠自由探索30分钟，测定埋入碎屑中而隐藏的大理石个数。小鼠不喜欢发亮的物体，因此不易焦虑的小鼠会接触更多的大理石。图19e的纵轴表示被埋藏的大理石的个数。
图19g示出旷场实验法(open field法、图19h)的试验结果(各组n＝5)。让进入长方形箱中的小鼠探索箱内30分钟。通常，小鼠具有焦虑感强、沿着箱的角落走动的习性，但是，不易焦虑的小鼠从箱的中心部分通过的比例增加，以此作为指标。图19g示出在箱的中心部分停留的时间。
图19i示出条件恐惧试验法(fear conditining法)的试验结果(各组n＝5)。使用明暗试验法的试验装置，使小鼠进入黑暗的场所，使声音(高音)响30秒，然后给予电刺激3秒。将声音之后进行电刺激重复进行3次，使小鼠认识到一旦声音响起则会受到电刺激。第二天，对声音持续响5分钟时感到恐惧焦虑的小鼠的静止时间(immobility time)进行测定。图19i的纵轴表示小鼠的静止时间。
在上述全部试验的结果中，均确认到TP-014的慢性给药(2周)改善了焦虑样症状的加重。另外，虽然Kir6.1缺损小鼠也由于给药皮质酮而显示焦虑样症状，但没有观察到给药TP-014所带来的改善效果。由该结果可确认，本发明化合物的焦虑样症状亢进的改善效果是Kir6.1介导的。
需要说明的是，关于本申请的图中所示的显着性差异的表示，＊＊或++表示显着性差异为P＜0.01，+或＊表示P＜0.05。
序列表
<110> 东北大学
<120> 金刚烷衍生物及其应用
<130> FA5026-16272
<150> JP 2016-012392
<151> 2016-01-26
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6631
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 1
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagt 900
taagcttggt accgagctcg gatccgccac catgctgtcc cgaaagggca ttatccctga 960
ggaatatgtg ctgacccggc tggcagagga ccctacagag cccaggtacc gtactcggga 1020
gaggagggcc cgcttcgtgt ccaagaaagg caactgcaac gtcgcccaca agaacatccg 1080
agagcagggc cgcttcctgc aagatgtgtt caccacgctg gtggacctca agtggcccca 1140
cacgctgctc attttcacca tgtccttcct gtgcagctgg ctgctcttcg ccatggtctg 1200
gtggctcatc gcctttgccc acggtgactt ggcccccgga gagggcacca atgtgccctg 1260
cgtcacaagc atccactcct tttcgtctgc cttccttttc tccatcgagg tccaggtgac 1320
cattggtttc ggcgggcgca tggtgacaga ggaatgtccc ctggccatcc ttattctgat 1380
cgtgcagaat atcgtagggc taatgatcaa cgccatcatg ctgggctgca tcttcatgaa 1440
aacggcacag gcccatcggc gggcagaaac cctcatcttc agcaagcatg ccgtgatcac 1500
cctgcgacat ggccgcctgt gcttcatgct tcgcgtaggg gacctccgaa aaagcatgat 1560
cattagcgcc accattcata tgcaggtggt gcgcaagacc accagcccgg agggcgaggt 1620
tgtgcctctc caccaggtgg acatccccat ggagaacggt gtgggtggta acagcatctt 1680
tctggtggcc ccactcatca tctaccacgt catcgactcc aacagcccgc tctacgacct 1740
ggctcctagt gacctgcacc accaccagga cctggagatc attgtcatct tggaaggtgt 1800
ggtagaaacc acaggcatta ccacccaggc ccgcacctcc tatctggctg acgagattct 1860
gtgggggcag cgttttgtcc ccatcgtggc cgaggaggat ggccgctatt ctgtggacta 1920
ctccaaattc gggaacaccg ttaaagtgcc cacaccactc tgcacagccc gccagcttga 1980
tgaggaccgc agcctgctgg atgccctgac cctcgcctcg tcgcgagggc ccctgcgcaa 2040
gcgcagtgtg gctgtggcaa aggccaagcc caagtttagc atctctccgg attccttgtc 2100
ctgatagcgg ccgctcgagt ctagagggcc cttcgaacaa aaactcatct cagaagagga 2160
tctgaatatg cataccggtc atcatcacca tcaccattga gtttaaaccc gctgatcagc 2220
ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt 2280
gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca 2340
ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga 2400
ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggatgcggtg ggctctatgg cttctgaggc 2460
ggaaagaacc agctggggct ctagggggta tccccacgcg ccctgtagcg gcgcattaag 2520
cgcggcgggt gtggtggtta cgcgcagcgt gaccgctaca cttgccagcg ccctagcgcc 2580
cgctcctttc gctttcttcc cttcctttct cgccacgttc gccggctttc cccgtcaagc 2640
tctaaatcgg gggctccctt tagggttccg atttagtgct ttacggcacc tcgaccccaa 2700
aaaacttgat tagggtgatg gttcacgtag tgggccatcg ccctgataga cggtttttcg 2760
ccctttgacg ttggagtcca cgttctttaa tagtggactc ttgttccaaa ctggaacaac 2820
actcaaccct atctcggtct attcttttga tttataaggg attttgccga tttcggccta 2880
ttggttaaaa aatgagctga tttaacaaaa atttaacgcg aattaattct gtggaatgtg 2940
tgtcagttag ggtgtggaaa gtccccaggc tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg 3000
catctcaatt agtcagcaac caggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt 3060
atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accatagtcc cgcccctaac tccgcccatc 3120
ccgcccctaa ctccgcccag ttccgcccat tctccgcccc atggctgact aatttttttt 3180
atttatgcag aggccgaggc cgcctctgcc tctgagctat tccagaagta gtgaggaggc 3240
ttttttggag gcctaggctt ttgcaaaaag ctcccgggag cttgtatatc cattttcgga 3300
tctgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg attgcacgca 3360
ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca acagacaatc 3420
ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt tctttttgtc 3480
aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg aggcagcgcg gctatcgtgg 3540
ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga agcgggaagg 3600
gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca ccttgctcct 3660
gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct tgatccggct 3720
acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac tcggatggaa 3780
gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc gccagccgaa 3840
ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt gacccatggc 3900
gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt catcgactgt 3960
ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg tgatattgct 4020
gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat cgccgctccc 4080
gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc gggactctgg 4140
ggttcgcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac 4200
cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat 4260
cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc 4320
ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc 4380
actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc 4440
gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg 4500
ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 4560
tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 4620
gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt 4680
gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct 4740
gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga 4800
taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc 4860
cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 4920
ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 4980
aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 5040
tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 5100
gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 5160
cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 5220
ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 5280
cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct 5340
gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac 5400
cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc 5460
tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg 5520
ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta 5580
aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca 5640
atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc 5700
ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc 5760
tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc 5820
agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat 5880
taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt 5940
tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc 6000
cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag 6060
ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt 6120
tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac 6180
tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg 6240
cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat 6300
tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc 6360
gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc 6420
tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa 6480
atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg 6540
tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg 6600
cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c 6631
<210> 2
<211> 6733
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 载体
<400> 2
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagt 900
taagcttggt accgagctcg gatccgccac catgctggcc aggaagagca tcatcccgga 960
ggagtatgtg ctggcccgca tcgcggcgga gaacctgcgc aaaccgcgca tccgcgaccg 1020
cctccccaaa gcccgcttca tcgccaagag cggagcctgc aacctggctc acaagaacat 1080
ccgagagcaa ggtcgcttcc tgcaggacat cttcaccacc ttggtagacc tgaagtggcg 1140
tcacacgctg gtcatcttca ccatgtcctt cctctgcagc tggctgctct tcgctatcat 1200
gtggtggctg gtggccttcg cccacgggga catctatgct tacatggaga aaggcatcac 1260
ggagaagagt ggcctggagt ctgccgtctg tgtgaccaat gtcaggtcat tcacttctgc 1320
gtttctcttc tccatcgagg ttcaagtgac cattgggttt ggagggagaa tgatgactga 1380
ggagtgccct ctggccatca cggttttgat tctgcagaac attgtgggtc tgatcatcaa 1440
cgcggtcatg ttgggctgca tcttcatgaa gacggcccag gcccacagaa gggcagagac 1500
gctgattttc agccgccatg ctgtaattgc ggtccgtaat ggcaagctgt gcttcatgtt 1560
ccgggtgggt gacctgagga aaagcatgat cattagcgcc tcggtgcgca tccaggtggt 1620
caagaaaacc acgacgccag aaggagaggt ggtgcctatt caccagcagg acatccctgt 1680
ggataatccc atcgagagca ataacatctt cctagtggcc cctttgatca tctgccatgt 1740
gattgataag cgtagccccc tgtacgatat ctcagccact gaccttgtca accaagacct 1800
ggaggtcata gtgattctcg agggcgtggt ggaaaccacg ggcatcacca cgcaagcgcg 1860
gacctcctac attgcagagg agatccagtg gggacaccgc ttcgtgtcga ttgtgactga 1920
ggaggaggga gtgtactctg tggactattc taaatttggt aatactgtga gagtggcggc 1980
gccaagatgc agtgcccggg agctggacga gaaaccttcc atcttgattc agaccctcca 2040
aaagagtgaa ctgtcgcacc agaattctct gaggaagcgc aactctatga gaagaaacaa 2100
ctccatgagg aggagcaact ccatccggag gaataactct tccctcatgg tgcccaaggt 2160
gcaattcatg actccagaag gaaaccagtg cccatcagaa tcatgatagc ggccgctcga 2220
gtctagaggg cccttcgaac aaaaactcat ctcagaagag gatctgaata tgcataccgg 2280
tcatcatcac catcaccatt gagtttaaac ccgctgatca gcctcgactg tgccttctag 2340
ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc ttgaccctgg aaggtgccac 2400
tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg cattgtctga gtaggtgtca 2460
ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg gaggattggg aagacaatag 2520
caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat ggcttctgag gcggaaagaa ccagctgggg 2580
ctctaggggg tatccccacg cgccctgtag cggcgcatta agcgcggcgg gtgtggtggt 2640
tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg cccgctcctt tcgctttctt 2700
cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa gctctaaatc gggggctccc 2760
tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc aaaaaacttg attagggtga 2820
tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt cgccctttga cgttggagtc 2880
cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca acactcaacc ctatctcggt 2940
ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc tattggttaa aaaatgagct 3000
gatttaacaa aaatttaacg cgaattaatt ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga 3060
aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca 3120
accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc 3180
aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct aactccgccc 3240
agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag 3300
gccgcctctg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc 3360
ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata tccattttcg gatctgatca agagacagga 3420
tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg caggttctcc ggccgcttgg 3480
gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa tcggctgctc tgatgccgcc 3540
gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg tcaagaccga cctgtccggt 3600
gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt ggctggccac gacgggcgtt 3660
ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa gggactggct gctattgggc 3720
gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc ctgccgagaa agtatccatc 3780
atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg ctacctgccc attcgaccac 3840
caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg aagccggtct tgtcgatcag 3900
gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg aactgttcgc caggctcaag 3960
gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg gcgatgcctg cttgccgaat 4020
atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact gtggccggct gggtgtggcg 4080
gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg ctgaagagct tggcggcgaa 4140
tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc 4200
ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct ggggttcgcg aaatgaccga 4260
ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag 4320
gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc cggctggatg atcctccagc gcggggatct 4380
catgctggag ttcttcgccc accccaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata 4440
aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg 4500
tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttatca tgtctgtata ccgtcgacct ctagctagag 4560
cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc 4620
acacaacata cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta 4680
actcacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca 4740
gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc 4800
cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc 4860
tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat 4920
gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt 4980
ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg 5040
aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc 5100
tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt 5160
ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa 5220
gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta 5280
tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa 5340
caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa 5400
ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt 5460
cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt 5520
ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat 5580
cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat 5640
gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc 5700
aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc 5760
acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta 5820
gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga 5880
cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg 5940
cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc 6000
tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat 6060
cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag 6120
gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat 6180
cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa 6240
ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa 6300
gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga 6360
taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg 6420
gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc 6480
acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg 6540
aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact 6600
cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat 6660
atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt 6720
gccacctgac gtc 6733

Claims (13)

1.一种式(I)所示的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0002959560480000011
式中，R1为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R2为氢原子或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X为O或NR5；
R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基、可被选自X1中的1个以上取代基取代的5或6元环杂芳基或COOR6；
R4为氢原子、卤素原子、叠氮基、-OR7或-NHR8；
R5为氢原子或C1-6烷基；
R6为氢原子或C1-6烷基；
R7为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
R8为氢原子、C1-6烷基或可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基；
X1为C1-6烷基、卤素原子、C1-6烷氧基、硝基或氰基。
2.根据权利要求1所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R4为氯原子或叠氮基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R1为三氟乙酰基。
4.根据权利要求1或2所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R2为可被1个以上卤素原子取代的(C1-6烷基)羰基。
5.根据权利要求4所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R2为三氟乙酰基。
6.根据权利要求1或2所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其中，R3为可被选自X1中的1个以上取代基取代的苯基或可被选自X1中的1个以上取代基取代的吡啶基。
7.根据权利要求1所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐，其选自：
乙酸(R)-((1R,2S,3R,5R,7S)-5-叠氮基-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲酯；
(S)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
(R)-2-乙酰胺-2-((1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)乙酸乙酯；
2,2,2-三氟乙酸(1R,2S,3R,5R,7R)-5-氯-2-((S)-2-甲氧基-2-氧代-1-(2,2,2-三氟乙酰胺)乙基)金刚烷-1-基酯；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
(S)-2-氨基-2-((1R,2S,3R,5R,7S)-1,5-二羟基金刚烷-2-基)乙酸；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5R,7S)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯；
N-((R)-((1S,2R,3S,5S,7S)-5-氯-1-羟基金刚烷-2-基)(吡啶-3-基)甲基)-2,2,2-三氟乙酰胺；
2,2,2-三氟-N-((R)-((1S,2R,3S,5R,7S)-1-羟基金刚烷-2-基)(苯基)甲基)乙酰胺；及
2,2,2-三氟乙酸(1S,2R,3S,5S,7R)-5-甲氧基-2-((R)-苯基(2,2,2-三氟乙酰胺)甲基)金刚烷-1-基酯。
8.一种药物组合物，其含有权利要求1～7中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其用于治疗或预防认知功能疾病或障碍。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中，认知功能疾病或障碍选自阿尔茨海默型痴呆、脑血管性痴呆、路易体痴呆、额颞叶痴呆、帕金森病、精神疾病、神经退行性疾病。
11.根据权利要求8所述的药物组合物，其用于治疗或预防糖尿病或糖尿病并发症。
12.一种Kir6.2通道抑制剂，其含有权利要求1～7中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
13.一种Kir6.1通道抑制剂，其含有权利要求1～7中任一项所述的化合物、其对映体、其非对映体或其药学上可接受的盐。
CN201780008087.9A 2016-01-26 2017-01-26 金刚烷衍生物及其应用 Active CN108495841B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016-012392 2016-01-26
JP2016012392 2016-01-26
PCT/JP2017/002760 WO2017131097A1 (ja) 2016-01-26 2017-01-26 アダマンタン誘導体およびその使用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108495841A CN108495841A (zh) 2018-09-04
CN108495841B true CN108495841B (zh) 2021-06-15

Family

ID=59398520

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780008087.9A Active CN108495841B (zh) 2016-01-26 2017-01-26 金刚烷衍生物及其应用

Country Status (13)

Country Link
US (1) US10487045B2 (zh)
EP (1) EP3409659B1 (zh)
JP (1) JP6808154B2 (zh)
KR (1) KR20180104100A (zh)
CN (1) CN108495841B (zh)
AU (1) AU2017213377B2 (zh)
CA (1) CA3012312C (zh)
DK (1) DK3409659T3 (zh)
EA (1) EA201891688A1 (zh)
ES (1) ES2852275T3 (zh)
PL (1) PL3409659T3 (zh)
PT (1) PT3409659T (zh)
WO (1) WO2017131097A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20180104100A (ko) 2016-01-26 2018-09-19 고쿠리츠다이가쿠호진 도호쿠다이가쿠 아다만탄 유도체 및 그 사용
WO2018181986A1 (ja) * 2017-03-31 2018-10-04 国立大学法人東北大学 アダマンチルメチルアミン誘導体およびその医薬としての使用
KR102663372B1 (ko) * 2017-08-02 2024-05-03 뉴시그널 테라퓨틱스 가부시키가이샤 아다만틸메틸아민 유도체 및 그 의약으로서의 사용

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101309922A (zh) * 2005-09-23 2008-11-19 艾博特公司 氨基-氮杂-金刚烷衍生物和使用方法
WO2009020140A1 (ja) * 2007-08-06 2009-02-12 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. アダマンチルウレア誘導体
CN101641357A (zh) * 2007-03-23 2010-02-03 艾博特公司 4-取代的氮杂金刚烷衍生物及其使用方法
WO2010043953A2 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Orchid Research Laboratories Ltd. Novel bridged cyclic compounds as histone deacetylase inhibitors
CN102105437A (zh) * 2008-07-25 2011-06-22 H.隆德贝克有限公司 金刚烷基二酰胺衍生物及其应用
WO2011142246A1 (ja) * 2010-05-12 2011-11-17 花王株式会社 電位依存性カチオンチャネル抑制方法
CN104001150A (zh) * 2013-02-27 2014-08-27 中国药科大学 光学纯的二肽类衍生物及其制备方法和在医药上的用途
WO2015087262A1 (en) * 2013-12-11 2015-06-18 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of saxagliptin and its intermediates

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1836161B1 (en) 2004-12-22 2016-07-20 BHI Limited Partnership Methods and compositions for treating amyloid-related diseases
US7897766B2 (en) 2005-09-23 2011-03-01 Abbott Laboratories Amino-aza-adamantane derivatives and methods of use
EP2125750B1 (en) 2007-02-26 2014-05-21 Vitae Pharmaceuticals, Inc. Cyclic urea and carbamate inhibitors of 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1
WO2012175520A1 (en) * 2011-06-20 2012-12-27 Novartis Ag Hydroxy substituted isoquinolinone derivatives
KR20180104100A (ko) 2016-01-26 2018-09-19 고쿠리츠다이가쿠호진 도호쿠다이가쿠 아다만탄 유도체 및 그 사용
CN107556244B (zh) 2016-07-01 2021-09-03 上海迪诺医药科技有限公司 并环化合物、其药物组合物及应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101309922A (zh) * 2005-09-23 2008-11-19 艾博特公司 氨基-氮杂-金刚烷衍生物和使用方法
CN101641357A (zh) * 2007-03-23 2010-02-03 艾博特公司 4-取代的氮杂金刚烷衍生物及其使用方法
WO2009020140A1 (ja) * 2007-08-06 2009-02-12 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. アダマンチルウレア誘導体
CN102105437A (zh) * 2008-07-25 2011-06-22 H.隆德贝克有限公司 金刚烷基二酰胺衍生物及其应用
WO2010043953A2 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Orchid Research Laboratories Ltd. Novel bridged cyclic compounds as histone deacetylase inhibitors
WO2011142246A1 (ja) * 2010-05-12 2011-11-17 花王株式会社 電位依存性カチオンチャネル抑制方法
CN104001150A (zh) * 2013-02-27 2014-08-27 中国药科大学 光学纯的二肽类衍生物及其制备方法和在医药上的用途
WO2015087262A1 (en) * 2013-12-11 2015-06-18 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of saxagliptin and its intermediates

Also Published As

Publication number Publication date
US10487045B2 (en) 2019-11-26
EP3409659A4 (en) 2019-09-18
PL3409659T3 (pl) 2021-08-02
PT3409659T (pt) 2021-02-22
EP3409659A1 (en) 2018-12-05
CA3012312C (en) 2024-01-02
JP6808154B2 (ja) 2021-01-06
ES2852275T3 (es) 2021-09-13
WO2017131097A1 (ja) 2017-08-03
KR20180104100A (ko) 2018-09-19
CA3012312A1 (en) 2017-08-03
EA201891688A1 (ru) 2018-12-28
US20190055191A1 (en) 2019-02-21
EP3409659B1 (en) 2020-12-30
AU2017213377B2 (en) 2021-05-20
CN108495841A (zh) 2018-09-04
DK3409659T3 (da) 2021-03-22
JPWO2017131097A1 (ja) 2018-12-13
AU2017213377A1 (en) 2018-08-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2020277224B2 (en) Compounds for improving mRNA splicing
KR102523318B1 (ko) 증진된 ｈＡＴ 패밀리 트랜스포존 매개 유전자 전달 및 연관된 조성물, 시스템, 및 방법
AU2021204620A1 (en) Central nervous system targeting polynucleotides
US6699686B1 (en) Modified nuclear glucocorticoid receptor, fusion protein, and DNA fragments coding for said receptor and said fusion protein
CN108495841B (zh) 金刚烷衍生物及其应用
CN113559281A (zh) 再生用于在神经***中治疗疾病和损伤的功能性神经元
JP2024001178A (ja) 血流の途絶に起因する神経損傷の治療のための機能性ニューロンの再生
KR20210069652A (ko) 피리다지논 및 이의 사용 방법
CN108707626B (zh) 一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法
CN113604469B (zh) 基于CRISPR/CasRx的基因编辑方法及其应用
KR102663372B1 (ko) 아다만틸메틸아민 유도체 및 그 의약으로서의 사용
DE10257421A1 (de) Regulatorische Elemente im 5&#39;-Bereich des VR1-Gens
CN109468244B (zh) 一种抗酸型高密度生长的大肠杆菌及其应用
KR102461837B1 (ko) Cd80 세포외도메인 및 항 lag3 항체 단편을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
KR101748823B1 (ko) 마이오스타틴 유전자를 표적으로 하는 talen 및 이를 이용한 마이오스타틴 유전자가 녹아웃된 동물을 제조하는 방법
CN110446782A (zh) 利用细胞内在性的dna修饰酶将靶向化的dna的核酸碱基特异地替换的、细胞的核酸序列的替换方法、以及用于该方法的分子复合体
CN110777147A (zh) 一种ikzf3基因沉默的t细胞及其应用
CN111849920B (zh) 一种t淋巴细胞
US11225666B2 (en) Plasmid vector for expressing a PVT1 exon and method for constructing standard curve therefor
CN102698291A (zh) 一种可提高细胞免疫应答的布鲁菌抗原基因组合rob
CN109957578A (zh) 双基因表达载体及其制备方法和应用
CN112725290A (zh) 一种重组溶瘤病毒及其制备方法与用途
KR101952102B1 (ko) 단백질 발현량이 증대된 인자 ⅷ 변이체 발현벡터
KR102422842B1 (ko) 크리스퍼 간섭을 이용한 rna 번역 조절용 조성물
CN116650667A (zh) 纳米脂质体包装的gp96 mRNA在制备治疗非酒精性脂肪肝的产品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190712

Address after: Miyagi Prefecture in Japan

Applicant after: TOHOKU University

Applicant after: Intelligent Innovation Co.

Address before: Miyagi Prefecture in Japan

Applicant before: TOHOKU University

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20220106

Address after: Miyagi Prefecture, Japan

Patentee after: TOHOKU University

Address before: Miyagi Prefecture, Japan

Patentee before: TOHOKU University

Patentee before: Intelligent Innovation Co.

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240115

Address after: Tokyo

Patentee after: Neurosignal Pharmaceutical Co.,Ltd.

Address before: Miyagi Prefecture, Japan

Patentee before: TOHOKU University

TR01 Transfer of patent right