CN108459112A - 中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 - Google Patents
中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108459112A CN108459112A CN201810478417.7A CN201810478417A CN108459112A CN 108459112 A CN108459112 A CN 108459112A CN 201810478417 A CN201810478417 A CN 201810478417A CN 108459112 A CN108459112 A CN 108459112A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- bhc
- eriocheir sinensis
- detection
- crab cream
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,所述方法包括标准曲线的制备、气相色谱检测及结果计算步骤。与现有技术相比,本发明具有以下优点:(1)本发明所述中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法针对油脂多,基质复杂的样品具有高灵敏度、高精确性地定性和定量检测;(2)本发明所述方法操作简便、干扰小、使用便捷,能够有效检测11中有机氯农药;(3)本发明所述方法的检测限为0.04‑0.2μg/kg,检测范围扩大,实用性强;(4)本发明所述方法具有普遍适用性,能够从特殊基质中锁定和提取目标化合物,去除其他杂质的干扰。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,涉及水产品质量安全控制的方法,具体为中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法。
背景技术
中华绒螯蟹主要分布于中国南北沿海的各地湖泊,是我国最负盛名的经济蟹类。因中华绒螯蟹市场需求的不断提高,各地也争相开始对其进行人工养殖。但随着环境的变化,水域及养殖环境受到各类农药残留的威胁。作为中华绒螯蟹营养价值最高的蟹黄部分,由于其脂肪含量较高,成为诸多脂溶性有机污染最易蓄积的部位。
有机氯农药一直以来是备受关注的持久性污染物,虽说大部分已经限制甚至禁止使用,但是水体及底泥环境中的残留仍然会蓄积到水生生物体内。中华绒螯蟹的生长环境同样会面临这一问题,所以需要加强对中华绒螯蟹中有机氯农药的检测,尤其是它的蟹黄部位。
目前,对有机氯农药检测方法的报道已有许多,主要是利用色谱类仪器对其进行检测。但是对蟹黄这类油脂多,基质复杂的样品来说,现有的处理及检测方式很难达到要求。如果要提高检测的灵敏度,则对实验设备及实验室条件有着较高的要求。为了能更加精确地进行有机氯农药在蟹黄内残留现状的检测,我们需要开发便捷有效的提取及纯化方法,并利用相应的仪器检测条件对中华绒螯蟹蟹黄内有机氯农药的残留进行精确定性和定量。
发明内容
解决的技术问题:为了克服现有技术中存在的不足,获得一种针对油脂多,基质复杂样品的高灵敏度、高精确性的定性和定量检测方法,本发明提供了中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法。
技术方案:中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,所述方法包括以下步骤:
第1步、制备标准曲线:准确量取有机氯农药混合标准溶液,用异辛烷稀释配制浓度为1μg·L-1、5μg·L-1、20μg·L-1、100μg·L-1、150μg·L-1的有机氯农药的梯度混标标准工作溶液,通过气相色谱仪对标准工作液进行检测,得到各物质的相应面积数据作为纵坐标;
第2步、检测:对待测样品进行处理,将处理后的样品用气相色谱仪进行检测,记录所得实测数据;
第3步、计算:将第2步所得实测结果代入第1步绘制的标准曲线中,获得的计算结果根据浓缩或稀释倍数进行换算,即得到样品中有机氯农药的含量。
优选的,第2步中,待测样品的处理方法为:
(1)干燥:将样品进行冷冻干燥,待样品完全干燥后,粉碎成粉末状;
(2)称重:精确称取样品和硅藻土于研钵中,样品和硅藻土的质量比为5:1,充分研磨均匀;
(3)提取:将步骤(2)所得转移至34mL ASE萃取池,以正己烷/丙酮等体积混合后作为提取剂,在设定条件下(温度:100℃,压力:10.3MPa,预热时间:5min)静态提取,采用60%萃取池提及的提取剂快速冲洗样品,氮气吹扫90s的条件下进行快速溶剂萃取,收集全部萃取液;将萃取液通过装有无水硫酸钠的漏斗,用正己烷/丙酮等体积混合液清洗收集瓶并过滤,再用正己烷/丙酮等体积混合液淋洗无水硫酸钠;
(4)浓缩:将步骤(3)所得萃取液转移至鸡心瓶,减压旋蒸至近干,采用正己烷溶解残渣,并转移至离心管中;
(5)净化:在上述样液中加入浓硫酸,涡旋;冷冻离心后取上层澄清有机溶剂,转移至鸡心瓶中,减压旋蒸干,用异辛烷溶解残渣,经0.22μm的有机相滤膜过滤,待上机测定。
优选的,有机氯农药包括:α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、o,p'-DDT、p,p'-DDT、p,p'-DDE、p,p'-DDD、五氯硝基苯、反式氯丹和/或顺式氯丹。
优选的,气相色谱仪的检测条件如下:检测器:ECD检测器,检测温度310℃;色谱柱:DB-5毛细管色谱柱,规格为30m×0.25mm×0.25μm;进样条件:脉冲不分流方式进样,进样量1μL;进样口温度260℃;升温程序:初始温度100℃,保持1min,以30℃/min升至250℃,再以10℃/min,升至290℃,保持5min。
优选的,所述方法对有机氯农药含量的检测限为0.04-0.2μg/kg。
优选的,标准曲线的公式为:
α-BHC:y=0.0021x;
β-BHC:y=0.0136x;
γ-BHC:y=0.0025x;
δ-BHC:y=0.0024x;
五氯硝基苯:y=0.0034x;
反式氯丹:y=0.003x;
顺式氯丹:y=0.0031x;
p,p'-DDE:y=0.0028x;
p,p'-DDD:y=0.003x;
o,p'-DDT:y=0.0057x;
p,p'-DDT:y=0.0047x。
有益效果:(1)本发明所述中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法针对油脂多,基质复杂的样品具有高灵敏度、高精确性地定性和定量检测;(2)本发明所述方法操作简便、干扰小、使用便捷,能够有效检测11中有机氯农药;(3)本发明所述方法的检测限为0.04-0.2μg/kg,检测范围扩大,实用性强;(4)本发明所述方法具有普遍适用性,能够从特殊基质中锁定和提取目标化合物,去除其他杂质的干扰。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容,但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换,均属于本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,所述方法包括以下步骤:
第1步、制备标准曲线:准确量取有机氯农药混合标准溶液,用色谱纯的异辛烷稀释配制浓度为1μg·L-1、5μg·L-1、20μg·L-1、100μg·L-1、150μg·L-1的指示性多氯联苯和有机氯农药的梯度混标标准工作溶液,通过气相色谱仪对标准工作液进行检测,得到各物质的相应面积数据作为纵坐标;
第2步、检测:对待测样品进行处理,将处理后的样品用气相色谱仪进行检测,记录所得实测数据;
第3步、计算:将第2步所得实测结果代入第1步绘制的标准曲线中,获得的计算结果根据浓缩或稀释倍数进行换算,即得到样品中有机氯农药的含量。
其中,第2步中,待测样品的处理方法为:
(1)干燥:将样品进行冷冻干燥,待样品完全干燥后,粉碎成粉末状;
(2)称重:精确称取10g样品和2g硅藻土于研钵中,充分研磨均匀;
(3)提取:将步骤(2)所得转移至34mL ASE萃取池,以正己烷/丙酮等体积混合后作为提取剂,在设定条件下(温度:100℃,压力:10.3MPa,预热时间:5min)静态提取10min,采用60%萃取池提及的提取剂快速冲洗样品,氮气吹扫90s的条件下进行快速溶剂萃取,收集全部萃取液;将萃取液通过装有无水硫酸钠的漏斗(80%滤纸体积),用2mL正己烷/丙酮等体积混合液清洗收集瓶并过滤,再用5mL正己烷/丙酮等体积混合液淋洗无水硫酸钠;
(4)浓缩:将步骤(3)所得萃取液转移至鸡心瓶,在35℃条件下减压旋蒸至近干,以3×10mL采用正己烷溶解残渣,并转移至50mL离心管中;
(5)净化:在上述样液中加入5mL浓硫酸,在2000r/min条件下涡旋5min;6000r/min冷冻离心10min后取上层澄清有机溶剂(若仍有颜色存在,可重复上述步骤),转移至鸡心瓶中,在40℃条件下减压旋蒸干,用1mL异辛烷溶解残渣,经0.22μm的有机相滤膜过滤,待上机测定。
其中,有机氯农药包括:α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、o,p'-DDT、p,p'-DDT、p,p'-DDE、p,p'-DDD、五氯硝基苯、反式氯丹和/或顺式氯丹。混合标准溶液均购自美国o2si试剂公司。
气相色谱仪的检测条件如下:检测器:ECD检测器,检测温度310℃;色谱柱:DB-5毛细管色谱柱,规格为30m×0.25mm×0.25μm;进样条件:脉冲不分流方式进样,进样量1μL;进样口温度260℃;升温程序:初始温度100℃,保持1min,以30℃/min升至250℃,再以10℃/min,升至290℃,保持5min。
其中,标准曲线的公式为:
α-BHC:y=0.0021x;
β-BHC:y=0.0136x;
γ-BHC:y=0.0025x;
δ-BHC:y=0.0024x;
五氯硝基苯:y=0.0034x;
反式氯丹:y=0.003x;
顺式氯丹:y=0.0031x;
p,p'-DDE:y=0.0028x;
p,p'-DDD:y=0.003x;
o,p'-DDT:y=0.0057x;
p,p'-DDT:y=0.0047x。
采用本实施例的方法检测购买于江阴某市场的中华绒螯蟹的蟹黄,检测结果如下:
Claims (6)
1.中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
第1步、制备标准曲线:准确量取有机氯农药混合标准溶液,用异辛烷稀释配制浓度为1μg·L-1、5μg·L-1、20μg·L-1、100μg·L-1、150μg·L-1的有机氯农药的梯度混标标准工作溶液,通过气相色谱仪对标准工作液进行检测,得到各物质的相应面积数据作为纵坐标;
第2步、检测:对待测样品进行处理,将处理后的样品用气相色谱仪进行检测,记录所得实测数据;
第3步、计算:将第2步所得实测结果代入第1步绘制的标准曲线中,获得的计算结果根据浓缩或稀释倍数进行换算,即得到样品中有机氯农药的含量。
2.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,第2步中,待测样品的处理方法为:
(1)干燥:将样品进行冷冻干燥,待样品完全干燥后,粉碎成粉末状;
(2)称重:精确称取样品和硅藻土于研钵中,样品和硅藻土的质量比为5:1,充分研磨均匀;
(3)提取:将步骤(2)所得转移至34mL ASE萃取池,以正己烷/丙酮等体积混合后作为提取剂,在设定条件下静态提取,采用60%萃取池提及的提取剂快速冲洗样品,氮气吹扫90s的条件下进行快速溶剂萃取,收集全部萃取液;将萃取液通过装有无水硫酸钠的漏斗,用正己烷/丙酮等体积混合液清洗收集瓶并过滤,再用正己烷/丙酮等体积混合液淋洗无水硫酸钠;
(4)浓缩:将步骤(3)所得萃取液转移至鸡心瓶,减压旋蒸至近干,采用正己烷溶解残渣,并转移至离心管中;
(5)净化:在上述样液中加入浓硫酸,涡旋;冷冻离心后取上层澄清有机溶剂,转移至鸡心瓶中,减压旋蒸干,用异辛烷溶解残渣,经0.22μm的有机相滤膜过滤,待上机测定。
3.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,有机氯农药包括:α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、o,p'-DDT、p,p'-DDT、p,p'-DDE、p,p'-DDD、五氯硝基苯、反式氯丹和/或顺式氯丹。
4.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,气相色谱仪的检测条件如下:检测器:ECD检测器,检测温度310℃;色谱柱:DB-5毛细管色谱柱,规格为30m×0.25mm×0.25μm;进样条件:脉冲不分流方式进样,进样量1μL;进样口温度260℃;升温程序:初始温度100℃,保持1min,以30℃/min升至250℃,再以10℃/min,升至290℃,保持5min。
5.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,所述方法对有机氯农药含量的检测限为0.04-0.2μg/kg。
6.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法,其特征在于,标准曲线的公式为:
α-BHC:y=0.0021x;
β-BHC:y=0.0136x;
γ-BHC:y=0.0025x;
δ-BHC:y=0.0024x;
五氯硝基苯:y=0.0034x;
反式氯丹:y=0.003x;
顺式氯丹:y=0.0031x;
p,p'-DDE:y=0.0028x;
p,p'-DDD:y=0.003x;
o,p'-DDT:y=0.0057x;
p,p'-DDT:y=0.0047x。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810478417.7A CN108459112B (zh) | 2018-05-18 | 2018-05-18 | 中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810478417.7A CN108459112B (zh) | 2018-05-18 | 2018-05-18 | 中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108459112A true CN108459112A (zh) | 2018-08-28 |
CN108459112B CN108459112B (zh) | 2020-12-29 |
Family
ID=63215697
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810478417.7A Active CN108459112B (zh) | 2018-05-18 | 2018-05-18 | 中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108459112B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110161144A (zh) * | 2019-06-13 | 2019-08-23 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种食品中有机氯类和拟除虫菊酯类农药残留量的检测方法 |
CN114414677A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-29 | 广东信科检测有限公司 | 一种土壤中有机氯农药含量的检测方法 |
CN114965774A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-08-30 | 江苏省淡水水产研究所 | 一种检测水产品中208种农药及其代谢物残留的方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1341855A (zh) * | 2001-08-23 | 2002-03-27 | 中国科学院南京土壤研究所 | 禽蛋中微量有机氯农药及多氯联苯残留量的测定方法 |
CN1563976A (zh) * | 2004-03-24 | 2005-01-12 | 南京大学 | 一种用于有机氯、有机磷农药分析的同步净化提取方法 |
CN101793879A (zh) * | 2010-02-05 | 2010-08-04 | 云南省烟草农业科学研究院 | 同时测定有机氯类和拟除虫菊酯类农药多项残留物的方法 |
CN102565240A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 烟台大学 | 一种对食品中有机氯农药残留检测的样品前处理方法 |
CN104165953A (zh) * | 2014-08-15 | 2014-11-26 | 余新威 | 一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法 |
-
2018
- 2018-05-18 CN CN201810478417.7A patent/CN108459112B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1341855A (zh) * | 2001-08-23 | 2002-03-27 | 中国科学院南京土壤研究所 | 禽蛋中微量有机氯农药及多氯联苯残留量的测定方法 |
CN1563976A (zh) * | 2004-03-24 | 2005-01-12 | 南京大学 | 一种用于有机氯、有机磷农药分析的同步净化提取方法 |
CN101793879A (zh) * | 2010-02-05 | 2010-08-04 | 云南省烟草农业科学研究院 | 同时测定有机氯类和拟除虫菊酯类农药多项残留物的方法 |
CN102565240A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 烟台大学 | 一种对食品中有机氯农药残留检测的样品前处理方法 |
CN104165953A (zh) * | 2014-08-15 | 2014-11-26 | 余新威 | 一种海洋贝类组织中有机氯农药分析的提取净化方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
PETR SUCHAN等: "Pressurized liquid extraction in determination of polychlorinated biphenyls and organochlorine pesticides in fish samples", 《ANALYTICA CHIMICA ACTA》 * |
史艳伟等: "水产品中有机氯残留检测分析方法的研究进展", 《齐鲁渔业》 * |
叶玫等: "闽东沿岸生态监控区经济水产品中六六六、滴滴涕残留与风险评价", 《水产学报》 * |
田良良等: "气相色谱法测定虾中有机氯农药和多氯联苯残留量", 《分析试验室》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110161144A (zh) * | 2019-06-13 | 2019-08-23 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种食品中有机氯类和拟除虫菊酯类农药残留量的检测方法 |
CN114414677A (zh) * | 2021-12-23 | 2022-04-29 | 广东信科检测有限公司 | 一种土壤中有机氯农药含量的检测方法 |
CN114965774A (zh) * | 2022-05-25 | 2022-08-30 | 江苏省淡水水产研究所 | 一种检测水产品中208种农药及其代谢物残留的方法 |
CN114965774B (zh) * | 2022-05-25 | 2024-02-06 | 江苏省淡水水产研究所 | 一种检测水产品中208种农药及其代谢物残留的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108459112B (zh) | 2020-12-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
de Faubert Maunder et al. | Clean-up of animal fats and dairy products for the analysis of chlorinated pesticide residues | |
Nam et al. | Supercritical fluid extraction and enzyme immunoassay for pesticide detection in meat products | |
CN108459112A (zh) | 中华绒螯蟹蟹黄中有机氯农药含量的检测方法 | |
CN102980961B (zh) | 鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其残留物检测的前处理方法 | |
Liu et al. | Simultaneous determination of total fatty acid esters of chloropropanols in edible oils by gas chromatography–mass spectrometry with solid-supported liquid–liquid extraction | |
CN102288720A (zh) | 油茶籽油中苯并(a)芘的检测方法 | |
CN101629937A (zh) | 一种土壤中五氯苯酚的定量检测方法 | |
CN108572231A (zh) | 疏水性低共熔溶剂涡旋辅助分散液液微萃取-高效液相色谱法检测苏丹红i的方法 | |
CN101813677B (zh) | 水产品中持久性含氯有机物的分析测定方法 | |
CN108693262B (zh) | 一种化妆品中多种防腐剂的测定方法 | |
CN101721516B (zh) | 栀子提取物的制备方法 | |
CN106770863A (zh) | 检测液态乳制品中残留农药含量的方法 | |
Dunn et al. | Sample extraction and purification for determination of polycyclic aromatic hydrocarbons by reversed-phase chromatography | |
Nitschke et al. | Analysis of ethoxylated alcohol surfactants in water by HPLC | |
Jimenez et al. | CGC/AED and CGC/ECD/NPD comparison for the determination of acaricides in honey after hexane/acetone extraction | |
Wood | Extraction and clean-up of organochlorine pesticide residues by column chromatography | |
Liu et al. | Determination of polychlorinated biphenyls and organochlorine pesticides in Chinese mitten crabs (Eriocheir sinensis) using modified QuEChERS followed by GC-MS | |
Muíño et al. | Simplified method for the determination of organochlorine pesticides in honey | |
Saraji et al. | Dispersive liquid-liquid microextraction of chloroacetic acids from water samples using a syringe-like glass extraction vessel | |
Ng et al. | A quick analytical method using direct solid sample introduction and GC-ECD for pesticide residues analysis in crops | |
CN109265494A (zh) | 从滇山茶中提取山奈酚葡萄糖苷类化合物的方法 | |
Hou et al. | Determination of halocarbons in drinking water by direct aqueous injection gas chromatography | |
CN106645465A (zh) | 一种测定石斛鲜条中有机氯和拟除虫菊酯农药残留的方法 | |
CN108387412A (zh) | 检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法 | |
Velasco | Determination of aflatoxin in cottonseed by ferric hydroxide gel cleanup |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |