CN108450231A - 一种野生桑黄仿生境扩繁方法 - Google Patents

一种野生桑黄仿生境扩繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种野生桑黄仿生境扩繁方法，其步骤：野生桑黄菌种采集和菌丝培养、桑黄接种剂制备、仿生境扩繁床的选择和管理、接种扩繁、扩繁床营养补充、仿生境扩繁条件管理、出黄管理、病虫害管理。本发明的优点在于：本发明直接将野生桑黄直接制得的桑黄孢子液，以微注射方式直接接种到老桑树墩，不仅减少桑黄原种制备过程、减短桑黄培养周期、减少污染概率；同时以老桑树墩作为桑黄生长基质，完全呈现野生桑黄生长的原生境、保证桑黄良好的野生特性和营养价值；另外添加营养剂，有助于桑黄生长和桑树生长，保证桑黄的品质。

Description

一种野生桑黄仿生境扩繁方法
技术领域
本发明涉及农业栽培领域，具体说是一种野生桑黄仿生境扩繁技术。
背景技术
桑黄，又称桑耳，是一种珍贵稀有的药用真菌，—般寄生生长于桑、杨、柳、桦、栎等树干或枯桩上，其中以寄生于桑树上的桑黄效用价值最好。寄生在桑树中的桑黄含有的多糖含量最高，其含有的多糖能激活人体内免疫***，增强人体抗癌活性、免疫活性，具有明显的抗肿瘤效果。因此，桑黄是目前全球公认生物致癌药剂中有效率排在第一位的高等真菌，具有极大的药用价值和开发潜力。
野生桑黄由于受生理生态的特殊性和复杂性以及外部环境条件的制约，在自然界中形成的子实体稀少，加之桑黄的生长周期长，导致野生桑黄供不应求、价格高昂，对桑黄产业的稳定健康发展不利。
因此，通过人工栽培来解决野生资源不足问题具有重要的意义。但是由于桑黄对于环境条件和营养条件具有很强的敏感性和专一性，人工培养条件难以完全拟合野生桑黄生长原生境，所以人工培养容易导致桑黄菌种退化等问题。但以桑树或其它等部位采用原生态仿野生栽培，可以有效解决这一问题。授权号CN103598010的发明专利公开了一种桑黄原生态仿野生栽培方法，该方法包括如下步骤：（1）从野生桑黄子实体上分离的菌株经纯化后接种到母种培养基中培养获得桑黄母种；（2）桑黄母种接种到原种培养基上培养获得桑黄原种；（3）将桑黄原种接种到栽培袋内的木钉培养基中培养获得木钉栽培种；（4）将长满桑黄菌丝体的木钉栽培种接种到桑树活体上进行自然培养。该方法提供了一种新的桑黄原生态仿野生栽培方法，但是由于其过程较为复杂，木钉培养种桑树钻孔培养容易对活体桑树主干和维管束等造成创伤，影响桑黄营养生长期营养供给不足，也会引起桑黄产量低的问题，同时伤口易引起污染，影响桑黄品质，故需要对现有原生态仿野生栽培方法进行改进，便于技术熟化后进行推广应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简单、成活率高、出芝周期短、产量相对高的桑黄仿生境扩繁技术。
本发明的技术方案为：一种野生桑黄仿生境扩繁方法，其步骤：
（1）野生桑黄菌种采集和菌丝培养：将从树龄为15年以上的桑树上采集获得的野生桑黄，进行离体菌丝培养，切取尺寸为1.8-2.2cm×0.9-1.3cm×0.35-0.55cm的方形小块，75%乙醇表面消毒后，研磨进行培养基培养，培养基配方重量份为：桑枝液2-3份、葡萄糖10-12份、磷酸二氢钾1-2份、硫酸镁0.5-0.8份、蛋白胨4-6份、琼脂粉3-5份、50mg/L链霉素2-3份、水1000份，培养温度28℃，培养湿度30-45%，培养时间3-5天。其中桑枝液的制备：摘取500-800份新鲜桑叶，加入100-300份水，研磨，过滤，300rmp/min常温离心制得。
（2）桑黄接种剂制备：将纯培养好的桑黄菌丝接入培养基中，进行摇床培养48小时，然后制成每毫升106个孢子的桑黄菌液。
（3）仿生境扩繁床的选择和管理：桑黄仿生境扩繁床选用树龄为15年以上的桑树树墩，树墩长度不低于70cm，竖立于保水性好的沙壤土面上，宜阴凉处为宜。树墩可直接摆放一起，也可以单独摆放。
（4）接种扩繁：接种前，桑树墩先用巴氏消毒水进行消毒，消毒6小时后，将制得的浓度为106个/毫升的孢子菌液，采用10mL的玻璃针筒注射器于向上15度斜插注射到老桑树墩上面进行扩繁；注射部位应选择桑拳下面的皮质部，每个桑树墩错开接种5-6个部位，注射后采用圆形特制无菌PE保护膜，粘贴注射部位，待桑黄原基凸起时，移除PE保护膜。
（5）扩繁床营养补充：老桑树墩接种桑黄后，在离注射点10cm范围内，分别采用5ml的玻璃注射器，斜插注射20-25ml营养剂，一般选择在注射点上下两个方位注射。注射时间为接种桑黄后，每隔15天注射一次，直到采收。营养剂配方重量为：维生素A 10-12份、维生素B 25-28份、维生素D 2-3份、氨基酸1.5-2份 、活性果糖5-8份、葡萄糖13-15份、硫酸锌20-30份、硫酸镁35-38份、三十烷醇1-2份、尿素100-110份、磷酸二氢钾3-4份、水1000-1200份。
（6）仿生境扩繁条件管理：老桑树墩接种桑黄后宜放置在阴凉湿润地方，一般控制在温度24-28℃，湿度80%以上。阴天或雨天不喷水，睛天每天采用喷雾方式喷4-5次水，每次8-10分钟。
（7）出黄管理：当原基膨大形成菌盖时，要增加喷雾次数，提高湿度，保持湿度在90%以上，温度20-25℃。桑黄子实体成熟时即可采收。
病虫害管理: 桑黄出黄后容易感染霉菌和病毒，以及螨虫的危害，因此一般在桑黄出黄后到采摘，需定期喷洒75%酒精进行预防，发生后要喷洒4%-5%的石灰水或者0.15%百菌清进行防治。
注意事项:
（1）仿生境扩繁床内老桑树墩是指树龄为15年以上的老桑树，需竖直摆放，老桑树墩之间必须留有至少30cm空隙，有助于空气流动，减少和避免桑黄出黄后，病害的发生。
（2）光照时间与桑黄生长负相关，因此老桑树墩宜放在树荫处，或者搭建遮荫棚，须有加湿设备如喷雾装备或滴灌***。
本发明的优点在于：（1）本发明直接将野生桑黄直接制得的桑黄孢子液，以微注射方式直接接种到老桑树墩，不仅减少桑黄原种制备过程、减短桑黄培养周期、减少污染概率；（2）同时以老桑树墩作为桑黄生长基质，完全呈现野生桑黄生长的原生境、保证桑黄良好的野生特性和营养价值；（3）另外添加营养剂，有助于桑黄生长和桑树生长，保证桑黄的品质。本发明方法简便、快捷、生产成本及劳动强度低，所育桑黄品质好、周期短、经济效应好，推广应用前景广。
附图说明
图1为桑黄接种剂接种示意图；
图2为桑树墩桑黄场景图一；
图3为桑树墩桑黄场景图二。
图中：A-桑树墩、B-桑拳、C-桑黄接种点、D-桑黄接种剂、E-桑黄微接种器。
具体实施方式
实施例1：
（1）野生桑黄菌种采集和菌丝培养：将从树龄为15年的桑树上采集获得的野生桑黄，进行离体菌丝培养，切2cm×1cm×0.5cm的方形小块，75%乙醇表面消毒后，研磨进行培养基培养，培养基配方为：桑枝液2份、葡萄糖10份、磷酸二氢钾1.5份、硫酸镁0.5份、蛋白胨3份、琼脂粉3份、链霉素（50mg/L）0.2份、水1000份，培养温度28℃，培养湿度30%，培养时间3-5天。其中桑枝液的制备：摘取600份新鲜桑叶，加入180份水，研磨，过滤，300rmp/min常温离心制得。
（2）桑黄接种剂制备：将纯培养好的桑黄菌丝接入培养基中，进行摇床培养48小时，然后制成每毫升106个孢子的桑黄菌液。
（3）接种扩繁：选用树龄为15年以上且不低于70cm长的桑树树墩作为仿生境扩繁床，4月中下旬将桑黄菌液向上15度斜插注射1ml到树龄为15年以上的老桑树墩上面进行扩繁；老桑树墩竖直摆放，老桑树墩之间留有空隙，利于通风；注射部位应选择桑拳下面的皮质部，每个桑树墩错开接种5-6个部位。
（4）扩繁床营养补充：老桑树墩接种桑黄后，在离注射点10cm范围内，分别采用5ml的玻璃注射器，斜插注射20ml营养剂，一般选择在注射点上下两个方位注射。注射时间为接种桑黄后，每隔15天注射一次，直到采收。营养剂配方为：维生素A 10份、维生素B 25份、维生素D 2份、氨基酸1.5份、活性果糖5份、葡萄糖13份、硫酸锌20份、硫酸镁35份、三十烷醇1份、尿素100份、磷酸二氢钾3份、水1000份。
（5）仿生境扩繁床的选择和管理：观察温湿度计，在4月中下旬温度24±2℃度时置于树荫或竹林下弱光条件下扩繁，阴天或雨天不喷水，睛天每天采用喷雾方式喷4次水，每次8分钟，保持湿度在80%以上。当原基膨大形成菌盖时，要增加喷雾次数，提高湿度，保持湿度在90%以上，温度20-25度。5月下旬至6月中旬为出黄期，桑黄子实体成熟时即可采收。
（6）病虫害管理: 桑黄出黄后容易感染霉菌和病毒，以及螨虫的危害，因此一般在桑黄出黄后到采摘，需定期喷洒75%酒精进行预防，发生后要喷洒4%的石灰水或者0.15%百菌清进行防治。
实施例2：
（1）获取菌种和菌丝培养：野生桑黄菌种采集和菌丝培养：将从树龄为18年的桑树上采集获得的野生桑黄，进行离体菌丝培养，切取1.9cm×0.9cm×0.45cm的方形小块，75%乙醇表面消毒后，研磨进行培养基培养，培养基配方为：桑枝液3份、葡萄糖12份、磷酸二氢钾1.5份、硫酸镁0.8份、蛋白胨5份、琼脂粉5份、链霉素（50mg/L）3份、水1000份，培养温度28℃，培养湿度30-45%，培养时间3-5天。其中桑枝液的制备：摘取800份新鲜桑叶，加入200份水，研磨，过滤，300rmp/min常温离心制得。
（2）桑黄接种剂制备：将纯培养好的桑黄菌丝接入培养基中，进行摇床培养48小时，然后制成每毫升106个孢子的桑黄菌液。
（3）接种扩繁：将桑黄菌液向上15度斜插注射1ml到树龄为15年以上的老桑树墩上面进行扩繁；老桑树墩竖直摆放，老桑树墩之间留有空隙，利于通风；注射部位应选择桑拳下面的皮质部，每个桑树墩错开接种5-6个部位。
（4）扩繁床营养补充：老桑树墩接种桑黄后，在离注射点10cm范围内，分别采用5ml的玻璃注射器，斜插注射25ml营养剂，一般选择在注射点上下两个方位注射。注射时间为接种桑黄后，每隔15天注射一次，直到采收。营养剂配方为：维生素A 12份、维生素B 28份、维生素D 3份、氨基酸2份 、活性果糖8份、葡萄糖15份、硫酸锌26份、硫酸镁38份、三十烷醇1.5份、尿素105份、磷酸二氢钾4份、水1200份。
（5）仿生境扩繁条件选择和管理：选择有树荫、靠近水源、保温、保湿、通风的地方搭建桑黄大棚，并进行严格消毒。将接种野生桑黄菌液的老桑树墩置于大棚内，控制温度27±1℃度，注意遮阳保湿，在弱光或散射光条件下扩繁，阴天或雨天不喷水，自然雨水浇水，睛天每天采用喷雾方式喷6次水，每次10分钟，保持湿度在80%以上。当原基膨大形成菌盖时，要增加喷雾次数，提高湿度，保持湿度在90%以上，温度20-25度，注意通风，桑黄子实体成熟时即可采收。
（6）病虫害管理: 桑黄出黄后容易感染霉菌和病毒，以及螨虫的危害，因此一般在桑黄出黄后到采摘，需定期喷洒75%酒精进行预防，发生后要喷洒5%的石灰水或者0.15%百菌清进行防治。
实施例3：
（1）获取菌种和菌丝培养：野生桑黄菌种采集和菌丝培养：将从树龄为15年的桑树上采集获得的野生桑黄，进行离体菌丝培养，切取2.12cm×0.87cm×0.512cm的方形小块，75%乙醇表面消毒后，研磨进行培养基培养，培养基配方为：桑枝液3份、葡萄糖11份、磷酸二氢钾1.5份、硫酸镁0.6份、蛋白胨4份、琼脂粉4份、链霉素（50mg/L）2份、水1000份，培养温度28℃，培养湿度38%，培养时间3-5天。其中桑枝液的制备：摘取600份新鲜桑叶，加入150份水，研磨，过滤，300rmp/min常温离心制得。
（2）桑黄接种剂制备：将纯培养好的桑黄菌丝接入培养基中，进行摇床培养48小时，然后制成每毫升106个孢子的桑黄菌液。
（3）接种扩繁：将桑黄菌液向上15度斜插注射1ml到树龄为18年的老桑树墩上面进行扩繁；老桑树墩竖直摆放，老桑树墩之间留有空隙，利于通风；注射部位应选择桑拳下面的皮质部，每个桑树墩错开接种5个部位。
（4扩繁床营养补充：老桑树墩接种桑黄后，在离注射点8cm范围内，分别采用5ml的玻璃注射器，斜插注射22ml营养剂，一般选择在注射点上下两个方位注射。注射时间为接种桑黄后，每隔15天注射一次，直到采收。营养剂配方为：维生素A 11份、维生素B 26份、维生素D 2.5份、氨基酸1.5份 、活性果糖7份、葡萄糖14份、硫酸锌28份、硫酸镁36份、三十烷醇1.5份、尿素110份、磷酸二氢钾3.5份、水1150份。
（5）仿生境扩繁条件选择和管理：选择有树荫、靠近水源、保温、保湿、通风的地方搭建桑黄大棚，并进行严格消毒。将接种野生桑黄菌液的老桑树墩置于大棚内，控制温度25±1℃度，注意遮阳保湿，在弱光或散射光条件下扩繁，阴天或雨天不喷水，自然雨水浇水，睛天每天采用喷雾方式喷5次水，每次9分钟，保持湿度在80%以上。当原基膨大形成菌盖时，要增加喷雾次数，提高湿度，保持湿度在90%以上，温度20-25度，注意通风，桑黄子实体成熟时即可采收。
（6）病虫害管理: 桑黄出黄后容易感染霉菌和病毒，以及螨虫的危害，因此一般在桑黄出黄后到采摘，需定期喷洒75%酒精进行预防，发生后要喷洒5%的石灰水或者0.15%百菌清进行防治。

Claims (1)

1.一种野生桑黄仿生境扩繁方法，其步骤：
（1）野生桑黄菌种采集和菌丝培养：将从树龄为15年以上的桑树上采集获得的野生桑黄，进行离体菌丝培养，切取尺寸为1.8-2.2cm×0.9-1.3cm×0.35-0.55cm的方形小块，75%乙醇表面消毒后，研磨进行培养基培养，培养基配方重量份为：桑枝液2-3份、葡萄糖10-12份、磷酸二氢钾1-2份、硫酸镁0.5-0.8份、蛋白胨4-6份、琼脂粉3-5份、50mg/L链霉素2-3份、水1000份，培养温度28℃，培养湿度30-45%，培养时间3-5天；其中桑枝液的制备：摘取500-800份新鲜桑叶，加入100-300份水，研磨，过滤，300rmp/min常温离心制得；
（2）桑黄接种剂制备：将纯培养好的桑黄菌丝接入培养基中，进行摇床培养48小时，然后制成每毫升106个孢子的桑黄菌液；
（3）仿生境扩繁床的选择和管理：桑黄仿生境扩繁床选用树龄为15年以上的桑树树墩，树墩长度不低于70cm，竖立于保水性好的沙壤土面上，宜阴凉处为宜；树墩可直接摆放一起，也可以单独摆放；
（4）接种扩繁：接种前，桑树墩先用巴氏消毒水进行消毒，消毒6小时后，将制得的浓度为106个/毫升的孢子菌液，采用10mL的玻璃针筒注射器于向上15度斜插注射到老桑树墩上面进行扩繁；注射部位应选择桑拳下面的皮质部，每个桑树墩错开接种5-6个部位，注射后采用圆形特制无菌PE保护膜，粘贴注射部位，待桑黄原基凸起时，移除PE保护膜；
（5）扩繁床营养补充：老桑树墩接种桑黄后，在离注射点10cm范围内，分别采用5ml的玻璃注射器，斜插注射20-25ml营养剂，一般选择在注射点上下两个方位注射；注射时间为接种桑黄后，每隔15天注射一次，直到采收；营养剂配方重量份为：维生素A 10-12份、维生素B25-28份、维生素D 2-3份、氨基酸1.5-2份、活性果糖5-8份、葡萄糖13-15份、硫酸锌20-30份、硫酸镁35-38份、三十烷醇1-2份、尿素100-110份、磷酸二氢钾3-4份、水1000-1200份；
（6）仿生境扩繁条件管理：老桑树墩接种桑黄后宜放置在阴凉湿润地方，一般控制在温度24-28℃，湿度80%以上；阴天或雨天不喷水，睛天每天采用喷雾方式喷4-5次水，每次8-10分钟；
（7管理：当原基膨大形成菌盖时，要增加喷雾次数，提高湿度，保持湿度在90%以上，温度20-25℃；桑黄子实体成熟时即可采收。
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