CN108434171A - 一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法，涉及医药和农产品加工技术领域。该组合物是由慈姑多糖和辅料成分组成，其中慈姑多糖质量分数10‑50，辅助成分的质量分数分别为糊精5‑10、淀粉5‑20、蜂蜡1‑5、十二烷基硫酸1‑5，依照上述比例配制而成，并根据需要制成粉剂、胶囊、片剂和颗粒剂等口服制剂。本发明通过生物追踪法明确了慈姑预防化学性肝损伤的有效部位和成分，为慈姑资源精准开发预防化学性肝损伤的药物或营养保健产品提供新资源。本发明提供了预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法，该组合物以功能明确的慈姑多糖为主，加入部分辅料制备而成、操作过程简单、易于工业化放大。
Description
技术领域
本发明属于农产品加工技术领域，具体涉及一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法。
背景技术
慈姑(Sagittaria sagittifolia Linm)，又名茨菰、茨菇，为泽泻科慈姑属多年生宿根浅水草本植物。我国是慈姑的原产地，以南方水乡为主，且多以栽培居多，尤其以江苏省扬州市宝应县慈姑种植面积大，品质好，素有“中国慈姑之乡”的美誉，并作为国家地理标志产品。慈姑的可食球茎富含淀粉、蛋白质和多种维生素，膳食纤维、生物碱、多酚以及铁、钙、锌等多种人体所需的微量元素，其平均营养价值均高于莲藕、菱白及菱角等水生蔬菜的平均营养价值，被认为是无公害绿色保健食品中的上等珍品。慈姑即是营养价值颇高的美味佳肴。现代药理学研究表明，慈姑具有抗氧化、解毒、降血糖、抗肿瘤等多种功效，同时对镉、异烟肼、利福平诱导的肝损伤具有保护作用。
吴小南等报道预先给予慈菇汁可降低镉和CCl4致急、慢性肝损伤(中国公共卫生，2002，18:1312-1313；中国公共卫生，1999，15:16-18)。陆祖福和吴小南等报道慈菇汁对镉致大鼠肝脂质过氧化反应具有拮抗作用(中国公共卫生学报1999，18:348-350；中国公共卫生2002，18：388-389；福建医科大学学报，2001，35：116-118)。廖艳等报道慈菇汁对异烟肼和利福平合用致大鼠肝损伤具有保护作用(北京中医药大学学报，2012，35:761-764)。从以上研究表明，慈姑汁中含有预防和治疗化学性或药物肝损伤的有效成分，但上述报道所用慈姑汁均是将慈姑风干后，按重量比1:1加蒸馏水于磨浆机中磨碎，压滤后制得的慈姑汁，实际上是冷水短时浸提得到的慈姑水提液，此慈姑液中含有一定量的营养成分和活性物质，也含有对肝损伤有预防或治疗作用的有效成分，但现有文献均未继续跟踪慈姑具有预防化学性肝损伤作用的有效成分。本发明通过生物追踪法确定了慈姑中预防化学性肝损伤的有效部位和成分，并将其制备成组合物加以利用。
发明内容
本发明的目的是提供一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物及其制备方法，为预防化学性肝损伤提供新的药物资源，同时也解决慈姑预防或治疗化学性肝损伤的有效部位和成分不明确的问题。
一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物，其由下列质量份数的原料组成：
上述一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法，按照下述步骤进行：
(1)慈姑多糖的制备
①慈姑预处理：将新鲜慈姑除杂、清洗、切片后，备用。
②打浆：切片后立即加入质量体积比1:10(g:mL)的水打浆，打浆液过60目工业滤布。
③亚临界水萃取：将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜，控制磁耦合搅拌器300-600转/min，萃取压力1-12MPa，温度100-180℃，萃取10-30min，结束后，离心，收集上清液，即为慈姑亚临界水萃取液。
④浓缩：将经过③得到的慈姑液浓缩至原体积的1/2。
⑤醇沉：向浓缩液加入其4倍体积的95％乙醇，静置24h后，离心分离沉淀。
⑥富集/分离：将沉淀复溶后，上已经平衡好的DEAE-52纤维素，以去离子水为洗脱液，收集水洗的部分，经加压浓缩得到浓缩液。
⑦干燥：将浓缩液干燥后，即为慈姑多糖。
(2)组合物的制备
组合物中慈姑多糖质量分数10-50，辅助成分的质量分数分别为糊精5-10、淀粉5-20、蜂蜡1-5、十二烷基硫酸1-5，依照上述比例配制而成，并根据需要制成粉剂、胶囊、片剂和颗粒剂等口服制剂。
本发明的有益效果：
(1)本发明通过生物追踪法明确了慈姑预防化学性肝损伤的有效部位和成分，为慈姑资源精准开发预防化学性肝损伤的药物或营养保健产品提供新资源。
(2)本发明提供了预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法，该组合物以功能明确的慈姑多糖为主，加入部分辅料制备而成、操作过程简单、易于工业化放大。
(3)本发明制得的预防化学性肝损伤的组合物粉末，可以直接加入医学上可接受的辅料或辅助成分制成粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊等等口服制剂，能满足不同人群需求。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面通过本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
本专利慈姑多糖组合物对CCl4或酒精致肝细胞损伤的预防作用均使用人肝癌细胞HepG2为细胞模型，该细胞购自北京中科院生物化学和细胞生物学研究所，HepG2细胞培养于含10％灭活新生牛血清DMEM培养液中，置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养，细胞贴壁生长，每2-3d传代1次。实验用CCl4溶于0.5％二甲基亚砜(DMSO)溶液中，配置成24mM的CCl4溶液，酒精用完全培养液配成终浓度2.4％的酒***。组合物预防作用研究的方法如下：
将对数生长期的HepG2细胞按1×104个/孔接种于96孔板，于37℃、5％CO2培养箱中孵育24h，预先用终浓度为300μg/mL的组合物孵育4h后，再用终浓度24mM CCl4处理细胞12h或终浓度2.4％的乙醇溶液处理细胞12h，结束后，吸除培养液，用PBS清洗2次，每孔加入100μL MTT(1mg/mL)，继续培养4h，去上清液，每孔加入150μL DMSO，充分振荡10min，用酶标仪在490nm处测定吸光度值，计算细胞存活率，其存活率(％)＝(给药组吸光度值/对照组吸光度值)×100％。
实施例1
慈姑多糖的制备：将新鲜慈姑除杂、清洗、切片后，立即加入质量体积比1:10(g:mL)的水打浆，打浆液过60目工业滤布；将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜中，控制磁耦合搅拌器300转/min，萃取压力1MPa，温度100℃，萃取10min，结束后，离心，收集上清液；将上清液浓缩至原体积的1/2；向浓缩液中加入其4倍体积的95％乙醇，静置24h后，离心分离沉淀；将沉淀复溶后，上已经平衡好的DEAE-52纤维素，以去离子水为洗脱液，收集水洗的部分，浓缩后干燥，即为慈姑多糖，得率为10.57％，其中多糖含量80.13％，蛋白含量2.54％。
组合物的制备：组合物中慈姑多糖质量分数10，辅助成分的质量分数分别为糊精10、淀粉20、蜂蜡5、十二烷基硫酸5，直接制成粉剂或胶囊，或者以水为溶剂制成片剂和颗粒剂等口服制剂。该组合物对CCl4和酒精致肝细胞损伤的预防作用效果见表1。
实施例2
慈姑前处理方法同实施例1，将得到过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜，控制磁耦合搅拌器400转/min，萃取压力5MPa，温度140℃，萃取20min，结束后，离心，收集上清液；其后续处理同实施例1，得到慈姑多糖得率为17.72％，其中多糖含量84.31％，蛋白含量1.18％。
组合物的制备：组合物中慈姑多糖质量分数30，辅助成分的质量分数分别为糊精8、淀粉7、蜂蜡3、十二烷基硫酸3，直接制成粉剂或胶囊，或者以水为溶剂制成片剂和颗粒剂等口服制剂。该组合物对CCl4和酒精致肝细胞损伤的预防作用效果见表1。
实施例3
慈姑前处理同实施例1，将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜中，控制磁耦合搅拌器600转/min，萃取压力12MPa，温度180℃，萃取10min，结束后，离心，收集上清液；其后续处理同实施例5，该慈姑多糖得率为18.67％，多糖含量86.09，蛋白含量1.39％。
组合物的制备：组合物中慈姑多糖质量分数50，辅助成分的质量分数分别为糊精5、淀粉5、蜂蜡1、十二烷基硫酸1，直接制成粉剂或胶囊，或者以水为溶剂制成片剂和颗粒剂等口服制剂。该组合物对CCl4和酒精致肝细胞损伤的预防作用效果见表1。
表1组合物对CCl4诱导的肝细胞损伤的预防作用
| 组别 | 存活率(％) |
| 正常对照 | 100±2.54 |
| 0.5％DMSO | 98.72±3.87 |
| 24mM CCl4 | 34.03±0.45 |
| CCl4+实施例1 | 75.42±2.46 |
| CCl4+实施例2 | 83.95±5.08 |
| CCl4+实施例3 | 90.49±2.45 |
| 2.4％酒精 | 63.68±3.46 |
| 酒精+实施例1 | 81.06±5.10 |
| 酒精+实施例2 | 85.03±3.76 |
| 酒精+实施例3 | 92.18±5.69 |
Claims (3)
1.一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物，其特征在于其由下列质量份数的原料组成：
2.根据权利要求1所述的一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：
(1)慈姑多糖的制备
①慈姑预处理：将新鲜慈姑除杂、清洗、切片后，备用；
②打浆：切片后立即加入质量体积比1:10(g:mL)的水打浆，打浆液过60目工业滤布；
③亚临界水萃取：将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜，控制磁耦合搅拌器300-600转/min，萃取压力1-12MPa，温度100-180℃，萃取10-30min，结束后，离心，收集上清液，即为慈姑亚临界水萃取液；
④浓缩：将经过③得到的慈姑液浓缩至原体积的1/2；
⑤醇沉：向浓缩液加入其4倍体积的95％乙醇，静置24h后，离心分离沉淀；
⑥富集/分离：将沉淀复溶后，上已经平衡好的DEAE-52纤维素，以去离子水为洗脱液，收集水洗的部分，经加压浓缩得到浓缩液；
⑦干燥：将浓缩液干燥后，即为慈姑多糖；
(2)组合物的制备
组合物中慈姑多糖质量分数10-50，辅助成分的质量分数分别为糊精5-10、淀粉5-20、蜂蜡1-5、十二烷基硫酸1-5，依照上述比例配制而成。
3.根据权利要求2所述的一种预防化学性肝损伤的慈姑多糖组合物的制备方法，其特征在于亚临界水萃取条件为：将过滤液经压力泵注入亚临界萃取釜，控制磁耦合搅拌器300-600转/min，萃取压力1-12MPa，温度100-180℃，萃取10-30min，结束后，离心，收集上清液，即为慈姑亚临界水萃取液。
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