CN108401434A - 新的婴儿假丝酵母菌株及其突变体菌株和转化体菌株以及使用该菌株生产二元酸的方法 - Google Patents
新的婴儿假丝酵母菌株及其突变体菌株和转化体菌株以及使用该菌株生产二元酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108401434A CN108401434A CN201680055333.1A CN201680055333A CN108401434A CN 108401434 A CN108401434 A CN 108401434A CN 201680055333 A CN201680055333 A CN 201680055333A CN 108401434 A CN108401434 A CN 108401434A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- candida
- baby
- bacterial strain
- acid
- strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 117
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 title claims abstract description 96
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 68
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 241001622753 [Candida] infanticola Species 0.000 claims abstract description 62
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 claims abstract description 25
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 42
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 35
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 31
- 101150050575 URA3 gene Proteins 0.000 claims description 28
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 28
- 101100246753 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) pyrF gene Proteins 0.000 claims description 27
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 25
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 24
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 claims description 17
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 11
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 11
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 10
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N hexadecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QQHJDPROMQRDLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 8
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- PWLXTFFHCFWCGG-UHFFFAOYSA-N Heneicosanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O PWLXTFFHCFWCGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 claims description 6
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 6
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 claims description 6
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N sebacic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000305 Nylon 6,10 Polymers 0.000 claims description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N nonanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCC(O)=O BDJRBEYXGGNYIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N suberic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC(O)=O TYFQFVWCELRYAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QFGCFKJIPBRJGM-UHFFFAOYSA-N 12-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]-12-oxododecanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CCCCCCCCCCC(O)=O QFGCFKJIPBRJGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KBIWNQVZKHSHTI-UHFFFAOYSA-N 4-n,4-n-dimethylbenzene-1,4-diamine;oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O.CN(C)C1=CC=C(N)C=C1 KBIWNQVZKHSHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Natural products OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 claims 1
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 claims 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 claims 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002803 fossil fuel Substances 0.000 abstract description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 2
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 95
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 27
- TVIDDXQYHWJXFK-UHFFFAOYSA-N dodecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCC(O)=O TVIDDXQYHWJXFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 21
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- UQDUPQYQJKYHQI-UHFFFAOYSA-N methyl laurate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC UQDUPQYQJKYHQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 12
- DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N decane Chemical compound CCCCCCCCCC DIOQZVSQGTUSAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 9
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 8
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 7
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 7
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- -1 corrosion inhibiter Substances 0.000 description 4
- GJBRTCPWCKRSTQ-UHFFFAOYSA-N decanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O.OC(=O)CCCCCCCCC(O)=O GJBRTCPWCKRSTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- BECAJLQLTVHOIY-UHFFFAOYSA-N methyl dodecanoate;2-methyldodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OC.CCCCCCCCCCC(C)C(O)=O BECAJLQLTVHOIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 4
- 238000012549 training Methods 0.000 description 4
- LWBHHRRTOZQPDM-UHFFFAOYSA-N undecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCC(O)=O LWBHHRRTOZQPDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N (2R,3S,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O XDIYNQZUNSSENW-UUBOPVPUSA-N 0.000 description 3
- SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 5-fluoroorotic acid Chemical class OC(=O)C=1NC(=O)NC(=O)C=1F SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 101150105372 POX1 gene Proteins 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- DGXRZJSPDXZJFG-UHFFFAOYSA-N docosanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O DGXRZJSPDXZJFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- 108091060290 Chromatid Proteins 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N CoASH Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-IBOSZNHHSA-N 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- 230000010337 G2 phase Effects 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150059359 POX2 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 2
- ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N acetyl-CoA Chemical compound O[C@@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(=O)NCCSC(=O)C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZSLZBFCDCINBPY-ZSJPKINUSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000004756 chromatid Anatomy 0.000 description 2
- RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N coenzime A Natural products OC1C(OP(O)(O)=O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 RGJOEKWQDUBAIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005516 coenzyme A Substances 0.000 description 2
- 229940093530 coenzyme a Drugs 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N dephosphocoenzyme A Natural products OC1C(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(=O)NCCS)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 KDTSHFARGAKYJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXHHROBUZABRSD-UHFFFAOYSA-N dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC.CCCCCCCCCCCC LXHHROBUZABRSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N ethyl laurate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)OCC MMXKVMNBHPAILY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- YVSCCMNRWFOKDU-UHFFFAOYSA-N hexanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O.OC(=O)CCCCC(O)=O YVSCCMNRWFOKDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M lithium acetate Chemical compound [Li+].CC([O-])=O XIXADJRWDQXREU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- WPBWJEYRHXACLR-UHFFFAOYSA-N nonanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCC(O)=O.OC(=O)CCCCCCCC(O)=O WPBWJEYRHXACLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWHMVKPVFOOAMY-UHFFFAOYSA-N octanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCC(O)=O.OC(=O)CCCCCCC(O)=O TWHMVKPVFOOAMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIFHFRBCEUSGEE-UHFFFAOYSA-N oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O.OC(=O)C(O)=O NIFHFRBCEUSGEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YKEKYBOBVREARV-UHFFFAOYSA-N pentanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCC(O)=O.OC(=O)CCCC(O)=O YKEKYBOBVREARV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HJSRRUNWOFLQRG-UHFFFAOYSA-N propanedioic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O.OC(=O)CC(O)=O HJSRRUNWOFLQRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 201000003126 Anuria Diseases 0.000 description 1
- 101100139395 Candida tropicalis URA3 gene Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 101100009781 Danio rerio dmbx1a gene Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 101100084403 Homo sapiens PRODH gene Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 241000937897 Meyerozyma caribbica Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150053659 POX4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150004239 POX5 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 1
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 101100194320 Zea mays PER1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100029251 Zea mays PER2 gene Proteins 0.000 description 1
- QQGWBRJQPRTJDA-UHFFFAOYSA-N [Li].CC(O)=O Chemical compound [Li].CC(O)=O QQGWBRJQPRTJDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940100228 acetyl coenzyme a Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- IINXALNHMRMYDC-UHFFFAOYSA-N dodecanedioic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCC(O)=O.OC(=O)CCCCCCCCCCC(O)=O IINXALNHMRMYDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLGSIWNFEGRXDF-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCC(O)=O WLGSIWNFEGRXDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003822 epoxy resin Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 125000001924 fatty-acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940004975 interceptor Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical class O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 150000004667 medium chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 150000002762 monocarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 229920000647 polyepoxide Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/02—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
- C12Y103/03—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with oxygen as acceptor (1.3.3)
- C12Y103/03006—Acyl-CoA oxidase (1.3.3.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/72—Candida
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种使用婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株,从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的方法,以及用于该方法的婴儿假丝酵母(Candida infanticola)微生物。本发明降低了由于使用化石燃料引起的国际油价波动和环境污染负担所导致的成本增加,因此可以用于以DDDA为原料的各种工业领域中。
Description
技术领域
本发明涉及一种使用婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸(dioic acids)的方法,以及为此所使用的婴儿假丝酵母(Candidainfanticola)微生物。
背景技术
二元酸(dioic acids)是在化学工业中非常重要的化学物质,用于各种工业应用,例如在工程树脂、汽车零配件、体育用品、地毯和牙刷中使用的石油衍生的尼龙,以及其它聚合增塑剂,粘合剂,润滑剂、环氧树脂,缓蚀剂,涂层剂,加工塑料,香水和药品。在这些二元酸(dioic acids)中,每年从石化原料合成约15,000,000,000磅十二烷二酸。这些石化原料主要是稀缺的天然原料,其应用与全球环境破坏和变化密切相关,而且这些石化原料对价格波动敏感并且增加了环境污染的负担。
因此,需要可再生、可持续且能够减轻环境负担的二元酸的替代生产方法。
发明内容
发明要解决的问题
为了解决上述那样现有技术中存在的问题,本发明的目的在于,提供一种生产二元酸的方法和婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株。
解决问题的手段
为了实现上述目标,本发明提供了一种使用婴儿假丝酵母(Candidainfanticola)菌株,从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的方法。
所述生产二元酸的方法可以包括以下步骤:
(A)将婴儿假丝酵母菌株培养在酵母提取物葡萄糖培养基(YG Medium:yeastextract glucose medium)中以确保初始细胞质量,所述酵母提取物葡萄糖培养基补充有含烃类或脂肪酸的基质;
(B)将碳源或含烃类、脂肪酸或其衍生物的基质添加到在步骤(A)获得的培养溶液中,以诱导ω-氧化反应(ω-oxidation);和
(C)在步骤(B)获得的反应溶液中添加含烃类或脂肪酸的基质和葡萄糖,并进行培养。
步骤(A)的培养可以在30±5℃,10%或更高的溶解氧的条件下进行20小时至50小时。
进一步地,步骤(B)的反应可以使用0.5%至5%的碳源进行10小时至30小时。
进一步地,步骤(C)的培养使用0.1ml/L/h至2ml/L/h的基质和1g/L/h至3g/L/h的葡萄糖进行50小时至100小时。
在所述生产二元酸的方法中,所述二元酸可以选自由乙二酸(ethanedioicacid)、丙二酸(propanedioic acid)、丁二酸(butanedioic acid)、戊二酸(pentanedioicacid)、己二酸(hexanedioic acid)、辛二酸(octanedioic acid)、壬二酸(nonanedioicacid)、癸二酸(decanedioic acid)、十一烷二酸(undecanedioic acid)、十二烷二酸(dodecanedioic acid)、十六烷二酸(hexadecanedioic acid)和它们的组合组成的组。
在所述生产二元酸的方法中,所述婴儿假丝酵母菌株可以是婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP),婴儿假丝酵母突变体菌株(Candidainfanticola LC-DA01;KCTC13099BP),婴儿假丝酵母转化体菌株(Candida infanticola;KCTC13103BP,KCTC13104BP,KCTC13105BP,KCTC13106BP)或它们的组合。
进一步地,本发明提供了从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株。
发明的效果
本发明涉及一种使用婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的方法,并且涉及为此所使用的婴儿假丝酵母(Candidainfanticola)微生物。本发明降低了由于使用化石燃料引起的国际油价波动和环境污染负担所导致的成本增加,因此可以用于以DDDA为原料的各工业领域中。
附图说明
图1是简要表示诱导竞争连续式培养装置的图。
图2是示出在诱导竞争连续式培养中,微生物的OD值随时间变化的图。
图3是示出在诱导竞争连续式培养中,微生物的稀释率(dilution rate)随时间变化的图。
图4是示出分离菌株的18s rRNA碱基序列的图。
图5是示出分离菌株(婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP))在不同pH下的生长速率的图。
图6是示出婴儿假丝酵母野生型菌株(KCTC 12820BP)和热带假丝酵母(Candidatropicalis;ATCC 20336)随时间的十二烷消耗速率和所产生的细胞的量的图表。
图7是示出十二烷通过婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)进行十二烷二酸(DDDA:dodecanedioic acid)转化的图表。
图8是示出十二烷通过热带假丝酵母(Candida tropicalis;ATCC20336)进行十二烷二酸(DDDA:dodecanedioic acid)转化的图表。
图9是关于使用蒸汽制造固体培养基的示意图。
图10是示出按照单一碳源的存在或不存在,婴儿假丝酵母突变体菌株(Candidainfanticola LC-DA01:KCTC13099BP)的OD值的图表。
图11是示出突变体菌株使用脂肪酸转化二元酸的结果的图表。
图12是示出突变体菌株使用十二烷转化二元酸的结果的图表。
图13是示出突变体菌株使用癸烷转化二元酸的结果的图表。
图14是示出通过热处理(heat-shock)对菌株进行转化的结果的图。
图15是示出根据羟基脲浓度的细胞状态的相差显微镜照片。
图16是制造尿嘧啶营养缺陷型菌株的盒式模拟图和gDNA PCR的结果。
图17是用于制造CiPOX1基因缺陷型菌株的盒式模拟图和gDNA PCR的结果。
图18是用于制造CiPOX2基因缺陷型菌株的盒式模拟图和gDNA PCR的结果。
图19是用于制造CiPOX1和CiPOX2基因缺陷型菌株的盒式模拟图和gDNA PCR的结果。
图20是示出野生型菌株、CiPOX1基因缺陷型菌株和CiPOX1/CiPOX2基因缺陷型菌株在摇瓶中生产二元羧酸的能力的结果。
图21是示出CiPOX1/CiPOX2基因缺陷型菌株在5L发酵罐中生产二元羧酸的能力的结果。
具体实施方式
可以对本公开的实施方式进行形式和细节上的各种改变,因此不应该被解释为受限于本文所阐述的各方面。本公开的实施方式不限于本说明书中描述的各方面,因此应该理解的是,本公开的实施方式包括在本公开的实施方式的精神和范围内所包含的各种变型例或替代等同物。而且,在描述本发明时,如果认为对相关公知技术的具体描述反而误导本发明的宗旨或者使其不清楚的,则省略该详细描述。
在下文中,将对本发明进行详细描述。
本文中使用的术语“阻断”可以与术语“抑制”互换,并且可意味着阻断一些通路或反应。
进一步地,术语“烃”可以指仅由碳和氢组成的有机化合物。
进一步地,“脂肪酸”可以指链式饱和或不饱和的一元羧酸。
进一步地,术语“ω-氧化(ω-oxidation)”可以指其中将脂肪酸的末端甲基氧化成二元羧酸的反应,并且术语“β-氧化(β-oxidation)”可以指其中羧基的β-碳原子被氧化降解,同时释放乙酰辅酶A(CoA)的反应。通常,脂肪酸的氧化主要是脂肪酸从末端羧基被切割成两个碳的单元的β-氧化,并且ω-氧化被理解为是用于碳数为10至12的中链脂肪酸的补充通路。
根据本发明的生产二元酸的方法,可以使用婴儿假丝酵母(Candidainfanticola)菌株,从含有烃类或脂肪酸的基质生产二元酸。
所述生产二元酸的方法的特征在于包括以下步骤:(A)将婴儿假丝酵母菌株培养在酵母提取物葡萄糖培养基(YG培养基)中以确保初始细胞质量,所述酵母提取物葡萄糖培养基补充有含烃类或脂肪酸的基质;
(B)将碳源或含烃类、脂肪酸或其衍生物的基质添加到步骤(A)的培养溶液中,以诱导ω-氧化反应;和
(C)在步骤(B)的反应溶液中添加含烃类或脂肪酸的基质和葡萄糖,并进行培养。
步骤(A)的培养可以在30±5℃,10%或更高的溶解氧的条件下进行20小时至50小时,优选可以在30±3℃,30±3%的溶解氧的条件下进行24小时至48小时。进一步地,所述基质可以是月桂酸甲酯(methyl laurate),但不限于此。
步骤(B)的反应可以使用基质或0.5%至5%的碳源进行10小时至30小时,优选可以使用基质或0.5%至3%的碳源进行15小时至25小时,更优选可以使用约1%的十二烷进行15小时至25小时。
步骤(C)的培养可以使用0.1ml/L/h至2ml/L/h的基质和1g/L/h至3g/L/h的葡萄糖进行50小时至100小时,优选可以使用0.5ml/L/h至1ml/L/h的基质和1.5g/L/h至2.5g/L/h的葡萄糖进行80小时至100小时。所述基质可以是月桂酸甲酯(methyl laurate),但不限于此。
所述二元酸可以选自由乙二酸(ethanedioic acid)、丙二酸(propanedioicacid)、丁二酸(butanedioic acid)、戊二酸(pentanedioic acid)、己二酸(hexanedioicacid)、辛二酸(octanedioic acid)、壬二酸(nonanedioic acid)、癸二酸(decanedioicacid)、十一烷二酸(undecanedioic acid)、十二烷二酸(dodecanedioic acid)、十六烷二酸(hexadecanedioic acid)和它们的组合组成的组、优选所述二元酸可以包括十二烷二酸。
所述婴儿假丝酵母菌株可以选自野生型菌株、突变体菌株、转化体菌株和它们的组合。
具体地,所述野生型菌株可以是未经基因操作的婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP),所述突变体菌株可以是婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;KCTC13099BP),所述转化体菌株可以是婴儿假丝酵母转化体菌株(Candida infanticola;KCTC13103BP,KCTC13104BP,KCTC13105BP,KCTC13106BP)。
根据一个实施方式,所述婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)可以是使用选自由烃类、脂肪酸及其组合组成的组中的碳源的菌株。
所述碳源可以选自碳数为6至30的烃类或脂肪酸,优选碳数为8至20的烷烃类或脂肪酸。例如,所述碳源可以是十二烷(dodecane)、月桂酸甲酯(methyl laulate)、月桂酸(lauric acid)、其衍生物或其组合,并且月桂酸的衍生物可以是月桂酸C1-8烷基酯。优选地,所述碳源可以选自由月桂酸甲酯(methyl laulate)、月桂酸乙酯、月桂酸丙酯及其组合组成的组。
另外,婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;KCTC13099BP)可以是使用选自烃类、脂肪酸及其组合中的基质的菌株。所述突变体菌株可通过对野生型菌株进行处理(例如甲磺酸乙酯(EMS:ethyl methanesulfonate)、紫外线(UV:ultraviolet)或其组合)的方法来制造,但不限于此。
另外,婴儿假丝酵母转化体菌株(Candida infanticola;KCTC13103BP,KCTC13104BP,KCTC13105BP,KCTC13106BP)可以使用选自烃类、脂肪酸及其组合中的基质。可以通过例如热处理和电穿孔等物理刺激,例如羟基脲处理等化学刺激等等诱导形态性质转化,来制造转化体菌株,并且可以例如通过使用聚乙二醇(PEG)、乙酸锂、二甲基亚砜(DMSO)等进行热处理(heatshock)来提高转化效率。一般来说,已知的是,根据细胞周期,调节真核生物例如酵母的同源重组和非同源重组。同源重组可能主要发生在使用染色单体进行DNA复制的S期和G2期,并且例如,为了增加同源重组的可能性,可以使用羟基脲(hydroxyurea)来调节细胞周期。具体而言,羟基脲(hydroxyurea)可以抑制核糖核苷酸还原酶并减少用于DNA合成的dNTP的量,从而将细胞周期阻滞在S期中。因此,可以增加转化时的同源重组的可能性。
根据一个实施方式,转化体菌株可包括使用URA3和POX基因进行缺失的菌株。可以通过例如对野生型婴儿假丝酵母菌株实施热处理(heatshock)、羟基脲(hydroxyurea)处理或其组合,并且可以由本领域技术人员适当地选择施用的顺序和次数,来诱导基因缺陷型菌株的转化。进一步地,根据一个实施方式,转化体菌株可以是单倍体的。例如,一般而言,与热带假丝酵母(Candida tropicalis)(其是主要用于二元羧酸工业生产的二倍体)相比,其多倍体是单倍的婴儿假丝酵母菌株在基因操作中可能是有利的。
下文中,本发明通过以下实施例进行更详细的解释。以下实施例旨在进一步阐明本发明。因此,本领域的普通技术人员将认识到,在不脱离本发明的范围和精神的情况下,可以对本文所描述的实施方式进行各种改变和修改。
实施例1:婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的分离
从石油化工过程的废水处理设施的油分离器(CPI:Coagulated PlateInterceptor)、曝气池和沉淀池收集样品,其中石油化工过程的废水处理设施在油分离器(CPI)中进行第一次处理之后通过均质池(equalization tank)、曝气池、沉淀池等对废水进行加工,以处理来自石化厂的含高浓度的各种碳源的废水。
通过将来自油分离器的进水、油分离器的出水、均质池的出水、曝气池的进水、曝气池的出水、沉淀池的进水和沉淀池的出水的废水样品收集到1L无菌水样品容器中来制备样品,并且将收集的样品放入冰盒中,转移至实验室。首先将一部分收集的样品涂布(spread)在由下表1所示的原代培养基组合物制成的固体培养基(琼脂平板,ager plate)上,并在30℃恒温培养箱中培养1周。培养之后,为了在含有十二烷(Dodecane,C12烷烃)的培养液中选择生长速率高的菌株,而收集在固体培养基上生成的菌落(colony),接种到含十二烷(Dodecane,C12烷烃)作为仅有碳源、由下述表1中所示的继代培养基组合物制成的诱导竞争连续式培养基中,然后在30℃、1v/v/m的气流量、400rpm的搅拌速度和pH5.0(由10NNaOH控制)的条件下培养在诱导竞争连续式培养装置(图1)中。在诱导竞争连续式培养期间消耗掉最初添加的20g/L的十二烷后,再另外添加下表2的含有40g/L十二烷的额外培养基,然后将稀释率(dilution rate)从0增加至0.4,由此作为具有最佳生长的菌株而最终分离出婴儿假丝酵母野生型菌株。该分离出的婴儿假丝酵母野生型菌株被命名为Candidainfanticola DS02,并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC 12820BP,2015年5月29日)。在这个实验中,使用25mg/L的抗生素卡那霉素来抑制一些微生物的生长。上述实验的结果示于图2和图3中。
[表1]
测试例1:对分离菌株的18s rRNA的基因分析
通过对18s rRNA碱基序列的分析,分析了在实施例1中分离出的分离菌株。使用Yeast gDNA prep试剂盒(PureHelixTM,NANOHELIX)提取实施例1的分离菌株的基因组DNA(genomic DNA),然后提取的基因组DNA作为模板,使用下表2所示的18s ITS1/4引物进行PCR扩增。在克隆TA载体后,通过DNA测序反应获得18s rRNA的碱基序列,并且碱基序列显示为图4中的SEQ ID NO.1。
[表2]
碱基序列(5'→3') | SEQ ID NO. | |
正向引物 | TCC GTA GGT GAA CCT GCG G | SEQ ID NO.2 |
反向引物 | TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC | SEQ ID NO.3 |
对于图4所示的分离菌株的碱基序列(SEQ ID NO.1),使用NCBI(美国国立生物技术信息中心)的BLAST(基本局部比对搜索工具)检测了菌株的同源性。检测结果示于下表3中。
如下表3所示,可以证实分离菌株是与婴儿假丝酵母CBS11940具有高度同源性的近似种。
[表3]
分离菌株 | 序列长度 | 近似种 | 同源性 |
婴儿假丝酵母DS02 | 441bp | 婴儿假丝酵母菌株CBS11940(HQ695010) | 99% |
测试例2:婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的碳源同化能力分析
为了检查上述菌株(婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC12820BP))的碳源同化能力,使用API 20c AUX(Biomerieux公司)进行了分析。通过使用API20c AUX(Biomerieux公司)分析的实验结果与现有的婴儿假丝酵母库兹曼(Candidainfanticola kurtzman)和婴儿假丝酵母菌种(Candida infanticola sp.)进行比较,结果示于下表4中。
[表4]
如上表4所示,当对比例1(Candida infanticola kurtzman)和对比例2(Candidainfanticola sp.)与婴儿假丝酵母野生型菌株(KCTC 12820BP)(实施例1)进行比较时,可以证实,对比例1和对比例2的先前已知的婴儿假丝酵母菌株对碳源,即葡萄糖、甘油、D-半乳糖和D-山梨醇具有同化能力,而婴儿假丝酵母野生型菌株(KCTC 12820BP)仅可使用葡萄糖作为碳源。如上述实验结果所示,可以发现,与现有菌株相比,本发明的新的婴儿假丝酵母野生型菌株(KCTC 12820BP)在碳同化能力上示出很大差异。
测试例3:婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的最适生长pH
为了检查婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的最适生长pH,将无氨基酸的酵母氮源(YNB:yeast nitrogen base(without aminoacid))培养基的初始pH以不同方式设定为4至7,并将菌株培养于该培养基中。实验结果示于图5中。
如图5所示,可以证实婴儿假丝酵母野生型菌株(KCTK 12820BP)的最适生长pH为pH 7。
测试例4:当使用烷烃(C12)作为仅有碳源培养婴儿假丝酵母野生型菌株(Candidainfanticola DS02;KCTC 12820BP)时,烷烃(C12)基质吸收速率的对比
为了检查在婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC12820BP)的烷烃(C12)基质培养物中,烷烃(C12)的消耗速率和所产生的细胞的量,将实施例1的婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)和作为对比标准菌株的热带假丝酵母(Candida tropicalis;ATCC 20336)培养在含20g/L十二烷作为仅有碳源的酵母提取物培养基中,如下表5所示。实验结果示于图6中。
[表5]
如图6所示,可以证实,婴儿假丝酵母DS02的十二烷消耗速率为每天6.2g/L,这比用作对比菌株的热带假丝酵母的每天3.7g/L的十二烷消耗速率快1.6倍。另外,可以证实生产的细胞的量也提高了17%。
实施例2:十二烷(dodecane)通过婴儿假丝酵母野生型菌株(Candidainfanticola DS02;KCTC 12820BP)转化成DDDA(十二烷二酸)
为了获得婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC12820BP),野生型菌株属于与该菌株相同物种且未经遗传操作的热带假丝酵母(ATCC20336)、***滑假丝酵母(Candida parapsilosis)和卡利比克毕赤酵母(Pichiacaribbica)将十二烷转化成DDDA(十二烷二酸)的初始细胞质量,而将实施例1的婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)在含50g/L葡萄糖的酵母提取物(yeast extract)培养基中,并且使用月桂酸甲酯(methyl laurate)基质,在30℃、1v/v/m的气流量、30%的溶解氧(DO:dissolved oxygen)的搅拌速度(取决于DO值为100rpm至900rpm)和pH 5的条件下,培养24小时至48小时,然后使用1%十二烷在pH 7下诱导ω-氧化(ω-oxidation)12小时至20小时。然后,继续培养9小时,同时添加0.5ml/L/h至1.0ml/L/h的月桂酸甲酯和2g/L/h的葡萄糖,以在pH 7至pH 8进行DDDA转化。实验结果示于图7、图8和下表6中。
[表6]
如上表6所示,作为培养144小时的结果,可以证实实施例1(Candida infanticolaDS02;KCTC 12820BP)示出O.D(光密度)值为157且DDDA浓度为14.0g/L,这比对比例3(Candida tropicalis;ATCC 20336)的133.1的OD值和0.62g/L的DDDA浓度高得多,并且在对比例4和对比例5中,没有DDDA转化且添加的碳源仅用于细胞生长。
实施例3:野生型婴儿假丝酵母菌株的突变体的诱导和筛选
野生型婴儿假丝酵母(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)菌株可以使用十二烷作为单一碳源来生长,但其中β-氧化(β-oxidation)通路被阻断的突变体菌株使用十二烷作为单一碳源基本不能生长。“基本不能生长”意味着“不生长”或“少量生长”。因此,通过比较在含葡萄糖(glucose)或十二烷(dodecane)作为单一碳源的固体培养基中的菌株生长,来选择突变体菌株。
为了诱导突变以选择突变体菌株,使用了甲基磺酸乙酯(EMS:ethyl methanesulfonate)和UV。使用磷酸盐缓冲盐水(PBS)缓冲液,制备了OD(光密度600nm)为0.01~0.1的婴儿假丝酵母(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)菌株悬浮液,向其中添加2%EMS(甲基磺酸乙酯)诱变剂以调整到1ml。悬浮液在30℃、150rpm条件下反应120分钟,离心去除上清液,然后用20%硫代硫酸钠洗涤两次以除去EMS。然后,将菌株悬浮在1ml的PBS缓冲液中。将10μl悬浮液涂布在YPD固体培养基上,在30℃培养3天,以获得存活率10%以内的初级突变体菌株。
将经EMS诱变剂处理的菌株悬浮于PBS(磷酸盐缓冲盐水:phosphate bufferedsaline)中,OD为0.01至0.1。将10μl悬浮液涂布在YPD固体培养基上,用UV(紫外线254nm)辐照120秒,并在30℃培养3天,以获得存活率约10%以内的次级突变体菌株。诱变过程可以通过EMS处理后的UV辐照,UV辐照后的EMS处理,或单独的EMS或UV来进行,并且突变的次数可以由本领域技术人员进行适当选择。
为了选择其中β-氧化(β-oxidation)通过诱变被阻断的突变体菌株,比较了在含葡萄糖(glucose)或十二烷(dodecane)作为单一碳源的固体培养基上的菌株生长。所使用的固体培养基的组成如下:使用葡萄糖(glucose)作为单一碳源6.7g/L、葡萄糖10g/L)的固体培养基(YNB,无氨基酸酵母氮源),和使用十二烷作为单一碳源6.7g/L、十二烷10g/L)的固体培养基(YNB,无氨基酸酵母氮源)。在含十二烷的固体培养基(其颜色为不透明的白色)的情况下,不易于鉴定生长的菌落。因此,使用十二烷蒸气制备了固体培养基,并有效比较了菌株生长。固体培养基示于图9中。
该程序如下进行:将灭菌的纸滤器放入固体培养基中,将固定量的十二烷施加在滤器上,使十二烷在固体培养过程中作为蒸气在固体培养基中扩散,并且菌株使用十二烷。将候选突变体菌株悬浮于PBS缓冲液中,以获得OD为0.01至0.1的菌株悬浮液,使用微量移液器将10μl悬浮液接种于上述两种固体培养基上,然后在30℃培养3天。通过选择在葡萄糖固体培养基上生长良好、但在十二烷固体培养基上不生长(因为β-氧化被阻断)的菌株进行初选。
经初选的突变体菌株在含十二烷作为单一碳源的液体培养基中生长,以二次选择β-氧化基因被阻断的菌株。在本实施例中,总共选择了6株菌株进行液体培养。液体培养如下进行:将所选择的每株菌株均接种在250ml摇瓶(锥形瓶,Erlnmeyer flask)中的含70ml十二烷作为单一碳源的培养溶液中,初级培养物OD为1,并在30℃、150rpm条件下培养6天。所使用的液体培养基的组成为使用十二烷作为单一碳源20g/L、十二烷20g/L)的培养基(YNB,无氨基酸酵母氮源)。各培养结果示于图10的曲线图中,其中示出对于不使用十二烷作为碳源的突变体菌株和使用十二烷的突变体菌株所测量的OD值。将不使用十二烷的菌株确定为其中β-氧化被阻断的菌株,以完成二次选择。将β-氧化被阻断的突变体菌株命名为婴儿假丝酵母LC-DA01(Candida infanticola LC-DA01),并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC13099BP,2016年9月8日)。
如图10所示,主要可以证实突变体菌株(登记号:KCTC13099BP)的β-氧化通路被阻断了。
实施例4:使用脂肪酸基质的婴儿假丝酵母突变体菌株的二元酸转化培养
为了获得婴儿假丝酵母突变体菌株(登记号:KCTC13099BP)用于月桂酸甲酯的十二烷二酸(DDDA)转化的初始细胞质量,将婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticolaLC-DA01;登记号:KCTC13099BP)在含葡萄糖50g/L并补充月桂酸甲酯基质的酵母提取物培养基中,在30℃、30%的溶解氧(DO)的搅拌速度(取决于DO值为100rpm至900rpm,)且pH 5下,培养24小时至48小时。在培养12小时至24小时期间,在完全消耗了50g/L的葡萄糖后,以1g/L/h至4g/L/h添加葡萄糖直至培养结束。
获得初始细胞质量后,使用1%十二烷,在pH7诱导ω-氧化(ω-oxidation)12小时至20小时,并且继续培养96小时至144小时,同时以0.5ml/L/h至4.0ml/L/h的月桂酸甲酯并且以1g/L/h至4g/L/h的葡萄糖,以在pH7至pH8下进行DDDA转化。结果示于图11和表7中。
[表7]
可以证实,培养108小时后,β-氧化(β-oxidation)被阻断的婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;登记号:KCTC13099BP)示出OD(光密度,最大/最终)值为62.1/36.2,DDDA浓度为140.9g/L(转化产率为90%)且DDDA生产率为1.67g/L/h,该DDDA浓度是其中β-氧化未被阻断的野生型婴儿假丝酵母菌株(Candida infanticolaDS02;KCTC 12820BP)的10.6g/L DDDA浓度的13倍或更高。
实施例5:婴儿假丝酵母突变体菌株使用烃基质的二元酸转化的培养
为了获得婴儿假丝酵母突变体菌株(KCTC13099BP)用于十二烷和癸烷的二元酸转化的初始细胞质量,婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;登记号:KCTC13099BP)在含葡萄糖50g/L并且补充月桂酸甲酯(methyl laurate)基质的酵母提取(yeast extract)培养基中,在30℃、1v/v/m的气流量、30%的溶解氧(DO)搅拌速度(取决于DO值为100rpm至900rpm)且pH 5的条件下,培养24小时至48小时。在培养12小时至24小时期间,完全消耗了50g/L的葡萄糖后,以1g/L/h至4g/L/h添加葡萄糖直至培养结束。
获得初始细胞质量后,使用1%十二烷,在pH7诱导ω-氧化(ω-oxidation)12小时至20小时,并且继续培养96小时至144小时,同时以0.5ml/L/h至4.0ml/L/h加入十二烷(dodecane)和癸烷(decane)基质并且以1g/L/h至4g/L/h加入葡萄糖,以在pH 7至pH 8进行DDDA转化。十二烷基质的结果示于图12中,而癸烷基质的结果示于图13和表8中。
[表8]
可以证实,培养96小时后,β-氧化(β-oxidation)被阻断的婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;登记号:KCTC13099BP)的十二烷基质发酵结果示出OD(光密度,最大/最终)值为64.2/42.6,DDDA浓度为122.5g/L(转化产率为99%)且DDDA生产率为1.70g/L/h,因此,通过使用烃类作为基质,可以因β-氧化(β-oxidation)的阻断而提高二元酸的生产率。
进一步地,可以证实,培养96小时后,β-氧化(β-oxidation)被阻断的婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;登记号:KCTC13099BP)的癸烷基质发酵结果示出OD(光密度,最大/最终)值为66.9/40.0,癸二酸(sebacic acid)浓度为77.6g/L(转化产率为99%)且癸二酸生产率为0.75g/L/h,因此,通过使用烃类作为基质,可以因β-氧化(β-oxidation)的阻断而提高二元酸的生产率。
测试例5:转化方法的优化
为了获得转化体菌株,作为导入外源基因的转化方法,使用了主要用于酵母的使用聚乙二醇(PEG)和乙酸锂的热处理(heatshock)法。菌株在YPED固体培养基上,在30℃培养20小时至24小时。收集2×106个婴儿假丝酵母(Candida infanticola DS02;KCTC12820BP)细胞,并且悬浮于含有50%聚乙二醇和乙酸锂混合物的缓冲液中。该悬浮液在30℃反应45分钟并且在42℃反应15分钟,然后除去上清液。将细胞重悬于YPED培养基中,在30℃振荡培养6小时,涂布在含抗生素的YEPD培养基上,并且在30℃培养3天。为了提高转化效率,通过在热处理过程中加入二硫苏糖醇(DTT)和二甲基亚砜(DMSO)等化学物质,对最有效的方法进行了对比。结果证实,用DMSO处理的热处理(heatshock)法效率最高,结果示于图14中。
测试例6:使用羟基脲进行细胞周期调节
同源重组可主要发生在使用染色单体进行DNA复制的S期和G2期。因此,为了增加同源重组的可能性,而使用羟基脲调节细胞周期。用0.2M羟基脲处理在YEPD培养基中生长的107个细胞/20ml的婴儿假丝酵母(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)并反应2小时。结果证实,最频繁地观察到S期细胞。结果示于图15中。
实施例6:获得尿嘧啶营养缺陷型菌株
作为婴儿假丝酵母(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的细胞周期通过上述热处理和羟基脲处理被阻滞在S期的细胞的形态性质转化结果,获得其中在URA3基因的位置被外源基因取代的尿嘧啶营养缺陷型菌株(Candida infanticola DS02 Ura3-),并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC13103BP,2016年9月8日)。
作为选择性培养基,使用了补充尿嘧啶和5-氟乳清酸(5'-FOA)的基本培养基,图16示出了用于制造尿嘧啶营养缺陷型菌株的模拟图和使用gDNA PCR确认序列的结果。
在合成尿嘧啶的过程中,5-氟乳清酸(5'-FOA:5-Fluoroorotic acid)转化为5-氟尿嘧啶(一种有害物质),从而导致细胞凋亡。因此,URA3基因缺陷型菌株可在含尿嘧啶和5'-FOA的培养基上生长,但不能在没有尿嘧啶的培养基上生长。
实施例7:β-氧化基因的选择
为了除去酰基辅酶A(acyl-CoA)氧化酶(pox基因),一种在β-氧化的第一步骤中将脂肪酰基辅酶A转化为2-反式-烯脂酰-辅酶A的酶,而对比了热带假丝酵母20336的POX4、POX5和POX2基因的氨基酸序列。作为结果,两个基因CINF_04670和CINF_13455的同源性最高,为40%或更高,将这些基因命名为CiPOX1和CiPOX2。氨基酸序列进行了对比并示于下表9中。进一步地,对于CINF_04670,核酸以SEQ ID NO.4示出且氨基酸序列以SEQ ID NO.5示出。进一步地,对于CINF_13455,核酸序列以SEQ ID NO.6示出且氨基酸序列以SEQ ID NO.7示出。
[表9]
SEQ ID NO.4(核酸)
TAGTGTCATGAAGCCTTTCTTCACCCGCAAGTTCAACGACGACCCTGATCTCAGTGCTCTTGAGGAAGAGGAGGCCGAGGAGAACGAGTAA
SEQ ID NO.5(氨基酸)
MTKSLSTNPANDVVIDGKKYNTFTEPPKAMAAERAKASFPVREMTYYLDGGEKVTEYNEAVWEQLERAPAFDNTDYYDVCGDHELLRARTLAKVGAIAEIVTDGRSERDIQKVLSFVSVIDPGAMTRIGVHFGLFLNGVRGSGTSEQFNYWVGEGAANLSNFFGCFCMTELGHGSNVAGVETTATFDRNTEEFVINTPTIAASKWWIGGAAHTATHGLVFARLIVDGKDYGVKNFVVPLRDRNTWNLMPGVSIGDIGKKMGRDGIDNGWVQFSNVRIPRLFMMMKYAKVSKDGKVTQPPLAQLAYGALISGRVSMVYDSYTWARRFLTIAIRYACCRRQFSSSPGGLETKLIDYTFHQRRLLPRLAYAYAMNAGSAELYKIYFAATDRLASTKPTDKEGLQSAIDDVKELFSVSAGLKAFSTWGTAQIIDECRQACGGLGYSGYNGFGQGYNDWVVQCTWEGDNNVLTLSAGRSLIQSGLAIRKGEHVGAAASYLKRELNAKLNGRSLEDLNVLIDGWEHVSAVGISQAVDRYVELEKEGVSQTEAFERLSQQRYDVTRVHTRMYLIKSFFENLKTASPALQPVLTDLALLFALWSIEIDASVFLRYGFLEPKDISTITVLVNKYTGKVREQAIPLTDAFNQSDFVINAPIGNYNGDVYNNYFAKTKAANPPINTHPPYYDSVMKPFFTRKFNDDPDLSALEEEEAEENE
SEQ ID NO.6(核酸)
CGCATTCTTCAAGCGCACTCCCTATGAGCAACCCAGGCTCGATGAGATTTAA
SEQ ID NO.7(氨基酸)
MKANNTASLLKDGKELNTFTRPASDMQAERDRTSFPVREMTHFFNNGKENTEFLEKLFERIQRDPAFNNKDFYDLDYKPLRQRTFEQIGRMWSYLDELGADSPLARRFLSPFGMINPSAQTRVSVHYGLFVSALRGQGTDKQYEFWKSQGCLSLNRFYGCFGMTELGHGSNVAELETTATFDRATDEFIIHTPNTAATKWWIGGAAHSSNHTVCFARLIVDGKDYGVRNFVVPLRDPESHNLLPGIAVGDIGKKMGRDGIDNGWIQFSNVRIPRTYMLMRYSQVTPEGKVIEPPLAQLTYGALINGRVAMAYDSWVWARRFLTIALRYAAVRRQFSSTEGREESKLLDYVLHQRRLIPLLAQAIGIEAAATELYRLFDEVTHHQASLDTSDRKAVSDMVDKTKELFSLSAGLKAFSTWATVDTIDECRQACGGLGYLSATGFGQGFDDWVVNCTWEGDNNVLCLSAGRSLIQSGCKVLDGKHVTGAADYLGRIKTLRGKSLASGDLRDPKVLVGAWESVAAQAVMDAAEAYKKLRARGVSDKAAFEELSIDRFNIARLHTRCFQIKALFRKIANANPSIQKVLTNVGLLFALWSIEKNGSPFLQYGFLTSDDMNKVIDLVTFYCGEVRDQVIGITDSFNISDFFLNSPIGNYDGNAYENLMDSVTERNVPGTPCPYQDAMNAFFKRTPYEQPRLDEI
实施例8:CiPOX1基因缺陷型菌株的选择
使用在CiPOX1基因的两端含500bp同源区的URA3弹出式载体,来制造CiPOX1基因缺失盒,然后将CiPOX1基因缺失盒通过转化导入经调节处于S期的尿嘧啶营养缺陷型菌株(登记号:KCTC13103BP)。URA3弹出式载体含有用于在无尿嘧啶培养基中存活的热带假丝酵母URA3(Ct.URA3)基因,和用于缺失(弹出)Ct.URA3基因的、位于Ct.URA3基因两端的来源于枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的重复序列,并且可以通过Ct.URA3基因在表10的无尿嘧啶培养基上选择经转化的菌株。SEQ ID NO.8示出热带假丝酵母URA3(Ct.URA3)序列,而SEQ ID NO.9示出来源于枯草芽孢杆菌的重复序列。图17中示出载体和缺失盒的模拟图,和使用gDNA PCR证实序列的结果。该选择出的CiPOX1基因缺陷型菌株被命名为Candidainfanticola DS02 pox1-,并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC13104BP,2016年9月8日)。
[表10]
培养基组成 | g/L |
右旋糖 | 20 |
无氨基酸的YNB | 6.7 |
琼脂 | 20 |
SEQ ID NO.8
cgggacatggggggtagagaagaagggtttgattggatcatcatgacgcctggtgtggggttggatgataaaggcgatgcgttgggccagcagtataggactgttgatgaggtggttctgactggtaccgatgtgattattgtcgggagagggttgtttggaaaaggaagagaccctgaggtggagggaaagagatacagggatgctggatggaaggcatacttgaagagaactggtcagttagaataaatattgtaataaataggtctatatacatacactaagcttctaggacgtcattgtagtcttcgaagttgtctgctagtttagttctcatgatttcgaaaaccaataacgcaatggatgtagcagggatggtggttagtgcgttcctgacaaacccagagtacgccgcctcaaaccacgtcacattcgccctttgcttcatccgcatcacttgcttgaaggtatccacgtacgagttgtaatacaccttgaagaacggcttcgtctgacccttgagcttcgcctcgttgtaatgattatacacatccaacgcttccaacctcgataaatggatcttctgcacttttgaaatcgggtactggatcgcaagcaacgagaacgccgccgatgctccggcaagcaacacaaacgaggacttcaagatc
SEQ ID NO.9
gtttaatactggttttcggagaagcgcctgtacctccgtcatagccgctgatcacaatgacatctgcagtcgctttggcaacacctgcagcgattgttcctacacctgcttttgacaccagctttacgctgattcttgcgtcacggttggcatttttcaaatcgtggatcagctgggctaaatcctcaatcgaataaatgtcatggtgtggcggaggtgagattaatccgacacctggcgttgacccacggacatcggcaacccatggatataccttgttgccaggaagctgcccgccttcacccggcttagcaccttgagccattttaatctgcagctcatcagcattgacgaggtaatggcttttgacaccaaaccgtccggatgcaatttgtttgatcgcacttcttctatcatcgccgttctcatctggaacaaagcgtttgggatcttctccgccttcaccgctgttgctttttcctccaagacggttcattgcgattgctaaagcttcgt
实施例9:CiPOX2基因缺陷型菌株的选择
使用在CiPOX2基因的两端含500bp同源区的URA3弹出式载体,来制造CiPOX2基因缺失盒,然后将CiPOX2基因缺失盒通过转化导入经调节处于S期的尿嘧啶营养缺陷型菌株(登记号:KCTC13103BP)。URA3弹出式载体含有用于在无尿嘧啶培养基中存活的热带假丝酵母URA3(Ct.URA3)基因,和用于缺失(弹出,pop-out)Ct.URA3基因的、位于Ct.URA3基因两端的来源于枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的重复序列(repeated sequence),并且可以在无尿嘧啶培养基上选择经转化的菌株。图18中示出载体和缺失盒的模拟图,和使用gDNAPCR证实序列的结果。该选择出的CiPOX2基因缺陷型菌株被命名为Candida infanticolaDS02 pox2-,并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC13105BP,2016年9月8日)。
实施例10:CiPOX1和CiPOX2基因缺陷型菌株的选择
使用在CiPOX2基因的两端含500bp同源区的URA3弹出式载体,来制造CiPOX2基因缺失盒,然后将CiPOX2基因缺失盒通过转化导入经调节处于S期的CiPOX1和CtURA3缺陷型菌株。通过从CiPOX1缺陷型菌株(登记号:KCTC13104BP)弹出Ct.URA3来制造CiPOX1和CtURA3缺陷型菌株。URA3弹出式载体含有用于在无尿嘧啶培养基中存活的热带假丝酵母URA3(Ct.URA3)基因,和用于缺失(弹出,pop-out)Ct.URA3基因的、位于Ct.URA3基因两端的来源于枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)的重复序列(repeated sequence)。可以通过Ct.URA3基因,在无尿嘧啶培养基上选择经转化的菌株。图19中示出载体和缺失盒的模拟图,和使用gDNA PCR证实序列的结果。该选择出的CiPOX1和CiPOX2基因缺陷型菌株命名为Candida infanticola DS02 pox1-,pox2-,并保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(登记号:KCTC13106BP,2016年9月8日)。
实施例11:用于二元酸转化的婴儿假丝酵母转化体菌株的摇瓶培养
为了检查本发明的转化体菌株的二元羧酸生产率,将各菌株(野生型菌株(登记号:KCTC 12820BP),POX1基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13104BP),CiPOX2基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13105BP),CiPOX1/CiPOX2基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13106BP))进行摇瓶培养。在500ml带挡板的烧瓶中进行50ml液体培养。培养条件如下:使用YPED培养基,总培养时间为72小时,30℃,200rpm,pH为6至7.5。为了确保足够量的细胞生长,菌株使用葡萄糖作为碳源培养24小时,然后向其中加入十二烷1%和调节至pH7.5的磷酸钾(potassiumphosphate)。从加入十二烷开始,每6小时加入一次0.5%的葡萄糖。作为在72小时证实转化的十二烷二酸的浓度的结果,野生型菌株(登记号:KCTC 12820BP)的浓度为0g/L,POX1基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13104BP)的浓度为9.39g/L,POX1和POX2基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13106BP)的浓度为9.32g/L。证实了CiPOX1缺陷型菌株不使用十二烷作为碳源,并且十二烷以92%(摩尔/摩尔)或更高的量转化为十二烷二酸。结果示于图20中。
实施例12:用于二元酸转化的婴儿假丝酵母转化体菌株的5L发酵罐培养
为了检查本发明的转化体菌株的二元羧酸生产力,使用CiPOX1和CiPOX2基因缺陷型菌株(登记号:KCTC13106BP)进行5L规模的发酵罐培养。初级培养条件是培养体积为2L,pH为5至6,温度为30℃,气流量为1vvm,且搅拌速度为200rpm。使用10N NaOH来调节pH,并且随着培养溶液中溶解氧的减少,控制转速(rpm)以保持溶解氧为30%或更高。对于12小时后用于二元酸转化的次级培养,在初始培养基中消耗葡萄糖用于细胞生长的时间点,加入20ml十二烷烷作为ω-氧化诱导物质用于二元酸转化的次级培养,并且以4g/hr的速率加入用于提供还原能力的葡萄糖。将培养条件改变为pH 7.5,气流量为0.5vvm。在12小时次级培养后,以1.2ml/hr至1.5ml/hr的速率加入作为基质的月桂酸甲酯,培养合计48小时。证实了,在48小时以17.64g/L产生转化的十二烷二酸,并且转化产率为90%(摩尔/摩尔)或更高。结果示于图21中。
Claims (14)
1.一种使用婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株,从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的方法。
2.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括以下步骤:
(A)将婴儿假丝酵母菌株培养在酵母提取物葡萄糖培养基(YG培养基)中以确保初始细胞质量,所述酵母提取物葡萄糖培养基补充有含烃类或脂肪酸的基质;
(B)将碳源或含烃类、脂肪酸或其衍生物的基质添加到步骤(A)的培养溶液中,以诱导ω-氧化反应;和
(C)在步骤(B)的反应溶液中添加含烃类或脂肪酸的基质和葡萄糖,并进行培养。
3.根据权利要求2所述的方法,其中,步骤(A)的培养在30±5℃,10%或更高的溶解氧的条件下进行20小时至50小时。
4.根据权利要求2所述的方法,其中,步骤(B)的反应使用0.5%至5%的碳源进行10小时至30小时。
5.根据权利要求2所述的方法,其中,步骤(C)的培养使用0.1ml/L/h至10ml/L/h的基质和1g/L/h至3g/L/h的葡萄糖进行50小时至100小时。
6.根据权利要求1所述的方法,其中,所述二元酸选自由乙二酸,丙二酸,丁二酸,戊二酸,己二酸,辛二酸,壬二酸,癸二酸,十一烷二酸,十二烷二酸,十六烷二酸和它们的组合组成的组。
7.根据权利要求1所述的方法,其中,所述婴儿假丝酵母菌株是婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP),婴儿假丝酵母突变体菌株(Candidainfanticola LC-DA01;KCTC13099BP),婴儿假丝酵母转化体菌株(Candida infanticola;KCTC13103BP,KCTC13104BP,KCTC13105BP,KCTC13106BP)或它们的组合。
8.一种从含烃类或脂肪酸的基质生产二元酸的婴儿假丝酵母(Candida infanticola)菌株。
9.根据权利要求8所述的婴儿假丝酵母菌株,所述婴儿假丝酵母菌株包括婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)。
10.根据权利要求8所述的婴儿假丝酵母菌株,所述婴儿假丝酵母菌株包括婴儿假丝酵母突变体菌株(Candida infanticola LC-DA01;KCTC13099BP)。
11.根据权利要求8所述的婴儿假丝酵母菌株,所述婴儿假丝酵母菌株包括缺失了婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的URA3基因的转化体菌株(登记号:KCTC13103BP)。
12.根据权利要求8所述的婴儿假丝酵母菌株,所述婴儿假丝酵母菌株包括缺失了婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的URA3基因和CiPOX1基因的转化体菌株(登记号:KCTC13104BP)。
13.根据权利要求8所述的婴儿假丝酵母菌株,所述婴儿假丝酵母菌株包括缺失了婴儿假丝酵母野生型菌株(Candida infanticola DS02;KCTC 12820BP)的URA3基因、CiPOX1基因和CiPOX2基因的转化体菌株(登记号:KCTC13106BP)。
14.一种生产婴儿假丝酵母(Candida infanticola)转化体菌株的方法,所述方法包括以下步骤:
从废水处理设施中分离出婴儿假丝酵母野生型菌株;
对所述野生型菌株进行羟基脲处理并热处理;
使用含尿嘧啶的培养基,制造和选择尿嘧啶营养缺陷型菌株;和
缺失β-氧化基因。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR10-2015-0134598 | 2015-09-23 | ||
KR1020150134598A KR101722328B1 (ko) | 2015-09-23 | 2015-09-23 | 캔디다 인판티콜라 균주를 이용한 디오익 산류의 생산방법 |
KR1020160121723A KR101847731B1 (ko) | 2016-09-22 | 2016-09-22 | 디오익 산류를 생산하는 캔디다 인판티콜라 균주 |
KR1020160121725A KR101887272B1 (ko) | 2016-09-22 | 2016-09-22 | 디오익 산류를 생산하는 캔디다 인판티콜라 형질전환 균주 |
KR10-2016-0121725 | 2016-09-22 | ||
KR10-2016-0121723 | 2016-09-22 | ||
PCT/KR2016/010706 WO2017052299A1 (ko) | 2015-09-23 | 2016-09-23 | 신규한 캔디다 인판티콜라 균주, 이의 변이균주 및 형질전환균주, 및 이를 이용하여 디오익 산류를 생산하는 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108401434A true CN108401434A (zh) | 2018-08-14 |
CN108401434B CN108401434B (zh) | 2021-10-22 |
Family
ID=58386608
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201680055333.1A Active CN108401434B (zh) | 2015-09-23 | 2016-09-23 | 新的婴儿假丝酵母菌株及其突变体菌株和转化体菌株以及使用该菌株生产二元酸的方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10604775B2 (zh) |
EP (1) | EP3354743B1 (zh) |
JP (1) | JP6577666B2 (zh) |
CN (1) | CN108401434B (zh) |
WO (1) | WO2017052299A1 (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111850060A (zh) * | 2019-04-25 | 2020-10-30 | 上海凯赛生物技术股份有限公司 | 一种发酵生产十六碳二元酸的方法、十六碳二元酸及其制备方法 |
CN110628759A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-31 | 西南科技大学 | 一种耐辐射野生型丛枝菌根真菌诱变筛选富集植物共生菌新种质的方法 |
CN111334441B (zh) * | 2020-02-24 | 2021-06-08 | 华中农业大学 | 一种降酸酵母菌株及其应用 |
US20230089404A1 (en) | 2021-09-18 | 2023-03-23 | Indian Oil Corporation Limited | Bioassisted Process For Selective Conversion Of Alkane Rich Refinery Stream |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1233658A (zh) * | 1999-05-28 | 1999-11-03 | 清华大学 | 高产长链二元酸的假丝酵母的筛选方法 |
WO2000017380A1 (en) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | General Electric Company | Method for high specific bioproductivity of alpha, omega-alkane dicarboxylic acids using candida tropicalis |
CN1570124A (zh) * | 2004-05-12 | 2005-01-26 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种正长链二元酸的生产方法 |
CN102839133A (zh) * | 2011-06-21 | 2012-12-26 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种长链二元酸生产菌株及其应用 |
CN102994402A (zh) * | 2012-03-09 | 2013-03-27 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种生产二元酸的菌株及其发酵方法 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3843466A (en) | 1969-11-10 | 1974-10-22 | Ajinomoto Kk | Method of producing dicarboxylic acids by fermentation |
US4925798A (en) * | 1985-04-23 | 1990-05-15 | Huels Aktiengesellschaft | 3-hydroxydicarboxylic acids and process for their production |
GB9220667D0 (en) * | 1992-09-30 | 1992-11-11 | Unilever Plc | Improvements in or relating to dioic acids |
CA2633020C (en) * | 2005-12-30 | 2014-04-15 | Council Of Scientific & Industrial Research | Process for preparing long-chain dicarboxylic acids |
GB0603865D0 (en) * | 2006-02-27 | 2006-04-05 | Unichema Chemie Bv | Methods for production of dioic acids |
US8158391B2 (en) | 2009-05-06 | 2012-04-17 | Dna Twopointo, Inc. | Production of an α-carboxyl-ω-hydroxy fatty acid using a genetically modified Candida strain |
WO2013131277A1 (en) * | 2012-03-09 | 2013-09-12 | Cathay R & D Center Co., Ltd | A new candida sake strain for producing long chain dicarboxylic acids |
JP2014201554A (ja) * | 2013-04-05 | 2014-10-27 | 東レ株式会社 | セバシン酸の製造方法 |
KR20150078989A (ko) * | 2013-12-31 | 2015-07-08 | 한화종합화학 주식회사 | 숙신산 생산용 재조합 효모균주 및 이를 이용한 숙신산의 제조방법 |
-
2016
- 2016-09-23 WO PCT/KR2016/010706 patent/WO2017052299A1/ko active Application Filing
- 2016-09-23 US US15/762,294 patent/US10604775B2/en active Active
- 2016-09-23 JP JP2018515663A patent/JP6577666B2/ja active Active
- 2016-09-23 EP EP16849024.1A patent/EP3354743B1/en active Active
- 2016-09-23 CN CN201680055333.1A patent/CN108401434B/zh active Active
-
2020
- 2020-02-14 US US16/791,141 patent/US10837032B2/en active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000017380A1 (en) * | 1998-09-21 | 2000-03-30 | General Electric Company | Method for high specific bioproductivity of alpha, omega-alkane dicarboxylic acids using candida tropicalis |
CN1233658A (zh) * | 1999-05-28 | 1999-11-03 | 清华大学 | 高产长链二元酸的假丝酵母的筛选方法 |
CN1570124A (zh) * | 2004-05-12 | 2005-01-26 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种正长链二元酸的生产方法 |
CN102839133A (zh) * | 2011-06-21 | 2012-12-26 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种长链二元酸生产菌株及其应用 |
CN102994402A (zh) * | 2012-03-09 | 2013-03-27 | 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 | 一种生产二元酸的菌株及其发酵方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
CLETUS P KURTZMAN: "New anamorphic yeast species: Candida infanticola sp.nov., Candida polysorbophila sp. nov., Candida transvaalensis sp. nov. and Trigonopsis californica sp. nov", 《ANTONIE VAN LEEUWENHOEK》 * |
CLETUS P KURTZMAN: "New anamorphic yeast species: Candida infanticola sp.nov., Candida polysorbophila sp. nov., Candida transvaalensis sp. nov. and Trigonopsis californica sp. nov.", 《ANTONIE VAN LEEUWENHOEK》 * |
王基铭等(主编): "《石油化工技术进展》", 30 April 2002, 中国石化出版社 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US10604775B2 (en) | 2020-03-31 |
JP6577666B2 (ja) | 2019-09-18 |
CN108401434B (zh) | 2021-10-22 |
US20200172940A1 (en) | 2020-06-04 |
JP2018527942A (ja) | 2018-09-27 |
EP3354743A1 (en) | 2018-08-01 |
WO2017052299A1 (ko) | 2017-03-30 |
US10837032B2 (en) | 2020-11-17 |
EP3354743B1 (en) | 2020-06-10 |
US20190040422A1 (en) | 2019-02-07 |
EP3354743A4 (en) | 2019-05-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9845485B2 (en) | Microalgae of the genus Euglena, method for producing polysaccharides, and method for producing organic compound | |
US10837032B2 (en) | Candida infanticola strain, mutant strain and transformant strain thereof, and method for producing dioic acids using same | |
CN103992959B (zh) | 长链二元酸生产菌株及其制备方法和应用 | |
Alhamdani et al. | Isolation and identification of lipase producing bacteria from oil-contaminant soil | |
CN107208035A (zh) | 含油酵母变体、其获得方法及其用于脂质生产的用途 | |
JP5667174B2 (ja) | 新規微生物並びにそれを用いた水素製造方法、1,3−プロパンジオール製造方法及びバイオディーゼル廃液の処理方法 | |
JP5219050B2 (ja) | 油脂分解菌及び油脂分解剤 | |
JP2012139216A (ja) | 新規微生物、当該新規微生物を用いた廃水処理方法及び廃水処理装置 | |
CN106414743A (zh) | 提高微生物生物质合成能力的方法及其改良微生物 | |
JP2020096583A (ja) | クロロフィル含有率が減少し、且つ油脂生産性が増加した緑藻変異体及びその利用 | |
KR101722328B1 (ko) | 캔디다 인판티콜라 균주를 이용한 디오익 산류의 생산방법 | |
KR101847731B1 (ko) | 디오익 산류를 생산하는 캔디다 인판티콜라 균주 | |
CN111334445B (zh) | 长链二元酸生产菌株及其制备方法和应用 | |
Jung et al. | Cellular growth and fatty acid content of Arctic chlamydomonadalean | |
JP5521146B2 (ja) | 油脂分解菌及び油脂分解剤 | |
KR101900152B1 (ko) | 캔디다 인판티콜라 균주를 이용한 디오익 산류의 생산 방법 | |
JP2015039347A (ja) | 微生物によるフマル酸生産 | |
JP6019305B1 (ja) | 新規のユーグレナ属微細藻類 | |
KR20230042652A (ko) | 변동광 조건에서 세포 성장성 및 지질 생산성이 우수한 돌연변이 미세조류 | |
EP3363891A1 (en) | Process to produce biomass and biogenic substances under selective conditions | |
CN108130291A (zh) | 一株石油芳香烃降解酵母菌及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
TA01 | Transfer of patent application right | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20180919 Address after: Seoul, South Korea Applicant after: Lotte Chemical Corporation Address before: Seoul, South Korea Applicant before: Lotte Chemical Corporation Applicant before: Korea Institute of biological sciences and Biotechnology |
|
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |