CN108395349A - 一种复合生物菌肥及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生产肥料技术领域，具体是指一种复合生物菌肥及其制备方法。所述复合生物菌肥由以下原料制备而成：氮磷钾肥200‑300重量份，荧光假单孢杆菌菌液0.1‑0.5重量份，淡紫拟青霉菌菌液0.1‑0.5重量份，地衣芽孢杆菌菌液0.1‑0.5重量份，载体2‑5重量份，菌种保护剂3‑7重量份。本发明中各成分协同作用，既能保证农作物增产，又减少了化肥使用量，降低了成本，能改善土壤物理性状，有利于提高土壤肥力，在其制备过程中，加入菌种保护剂，从而保证了在较高氮、磷、钾含量的情况下生物菌种仍能够存活，并保持较高活性。
Description
技术领域
本发明属于生产肥料技术领域，具体是指一种复合生物菌肥及其制备方法。
背景技术
我国人口多、耕地少，且随着人口增长、工业和城市的发展耕地逐年递减。据统计，我国人口平均每年增加1600万，而耕地每年减少400万亩。目前，我国人均耕地水平大大低于世界人均耕地水平，也低于亚洲人均耕地水平。为此，我国增加农产品产量的唯一可行途径是提高单位面积产量，只有这样才能满足工业发展和人口增加对农产品的需求，化肥也就顺理成章的得到了广泛应用。
农业肥料包括化学肥料和生物肥料，是我国农业生产不可替代的重要生产资料，长期以来不合理使用化学肥料，造成了土壤板结、地力下降、生态破坏、环境污染以及农副产品品质下降等诸多问题。土壤主要由矿物质、有机质和微生物三大部分组成，土壤微生物的活性，对植物根部营养非常重要，因为土壤中的有益微生物直接参与土壤肥力的形成，包括土壤中物质和能量的转化、腐植质的形成和分解、养分的释放、氮素的固定等等。但纯自然状态下有益微生物数量不够，作用力也有限。因此，采用人为方式向土壤中添加有益微生物，就能够增加土壤中微生物的数量，增加微生物的整体活性，从而明显提高土壤的肥力。根据我国作物种类和土壤条件，采用微生物肥料与化肥配合施用，既能使作物增产，减少化肥使用量，降低成本，还能改善土壤及作物品质，减少污染。
复合生物肥料由于含有大量的生物菌，其中有益菌在土壤中的增殖及代谢会抑制有害菌的生长，从而减轻农作物病害的发生，对于维护土壤健康也有一定作用。通过生物菌的活动，不但可以改变土壤的理化性状，提高土壤有机质的含量和转化效率，而且具有解钾、释磷、固氮的功能。生物菌肥本身无毒、无残留，且能分解土壤中化肥、农药的残留，溶解污水灌溉后的重金属残留，净化和修复土壤，提高作物产量和农产品品质。
制造高养分复合微生物肥，必须将微生物菌剂与氮磷钾肥混合后进行，但是，目前使用的复合生物肥中，菌种在制备为复合生物肥后，在保藏过程中的存活能力下降，存活时间变短，活菌很快死亡，起不到菌肥的效果，在生产使用过程中表现为菌种活性下降，生产性能减弱，繁殖速度变慢，抗逆性差。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种复合生物菌肥及其制备方法。
本发明的内容包括：
一种复合生物菌肥，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 200-300重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.1-0.5重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1-0.5重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.1-0.5重量份
载体 2-5重量份
菌种保护剂 3-7重量份。
本发明中，作为一种优选的技术方案，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 230-270重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.2-0.3重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1-0.2重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.2-0.3重量份
载体 4-5重量份
菌种保护剂 4-5重量份。
本发明中，作为一种优选的技术方案，所述载体为滑石粉或硅藻土。
本发明中，作为一种优选的技术方案，所述菌种保护剂为二甲基亚砜、羧甲基纤维素钠、山梨醇、甘露醇、海藻糖、谷氨酸钠或磷酸盐中的一种或两种以上。
本发明配方中：
荧光假单孢杆菌，具有良好的促根生长效果，并可预防和抑制番茄、茄子、辣椒、烟草等茄科作物的青枯病、姜瘟病等土传病害的发生，且具有促进种子萌发、提高发芽势和出苗率等优点。
淡紫拟青霉菌，属于内寄生性真菌，是一些植物寄生线虫的重要天敌，能够寄生于卵，也能侵染幼虫和雌虫，可明显减轻多种作物根结线虫、胞囊线虫、茎线虫等植物线虫病的危害；对多种农业致病菌也有很好的抑菌效果。
地衣芽孢杆菌，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。
菌种保护剂，可提高菌种的存活率，延长菌种的存活时间。
一种复合生物菌肥的制备方法，包括以下步骤：
(1)荧光假单孢杆菌菌液的制备
将荧光假单胞杆菌接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，然后将荧光假单胞杆菌划线接种到金氏B培养基平板上，于30～35℃培养箱中培养18～20小时，挑取单菌落再次接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，得荧光假单胞杆菌培养液，将荧光假单胞杆菌培养液接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，得荧光假单胞杆菌种子液，然后将荧光假单胞杆菌种子液接种到含有金氏B培养基的发酵罐中，连续培养24～30小时，得荧光假单胞杆菌液；
(2)淡紫拟青霉菌菌液的制备
将淡紫拟青霉菌接入PDA液体培养基，于25～28℃、60～120r/min条件下在摇床上振荡培养48～72小时，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上，于25～28℃、60～120r/min条件下培养3～5天，待长出粗壮菌丝后，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得到一级斜面菌种，将所述一级斜面菌种接入PDA液体培养基，于25～28℃、60～120r/min条件下培养48～72小时，得二级摇瓶种子液，将所述二级摇瓶种子液接入PDA液体培养基，于PH7.0～7.2、25～28℃条件下发酵3～5天，即得淡紫拟青霉菌菌液；
(3)地衣芽孢杆菌菌液的制备
将地衣芽孢杆菌于20～35℃，密闭条件下，在活化培养基中接种、活化培养10～36小时，然后PH7.0～7.2、温度20～35℃下将培养好的菌种在发酵培养基中发酵扩繁24～72小时，在所述活化培养和发酵扩繁过程中不断摇动或搅拌，即得地衣芽孢杆菌菌液；
(4)复合生物菌剂的制备：将上述所得的荧光假单孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌菌液和地衣芽孢杆菌菌液分别经载体吸附、烘干、粉碎，得荧光假单孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌菌粉和地衣芽孢杆菌菌粉，将三种菌粉，混合，得复合微生物菌剂；
(5)复合生物菌肥的制备：将所述复合微生物菌剂与氮磷钾肥及菌种保护剂混合均匀，即得。
本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述活化培养基为蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水；
本发明中，作为一种优选的技术方案，所述蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水的质量百分比为8∶3∶5∶13∶1000。
本发明中，作为一种优选的技术方案，步骤(3)中，所述发酵培养基为蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水。
本发明中，作为一种优选的技术方案，所述蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水的质量百分比为180∶8∶4∶400∶300∶100∶8∶5∶2000。
本发明的有益效果是，
本发明提供的复合生物菌肥，方中各成分协同作用，既能保证农作物增产，又减少了化肥使用量，降低了成本，复合生物菌肥能产生占土壤有机质0.1％的糖类物质，糖类物质与植物粘液、矿物胚体和有机胶体结合在一起，可以改善土壤团粒结构，增强土壤的物理性能和减少土壤颗粒的损失，在一定的条件下，还能参与腐殖质形成，所以该复合生物菌肥能改善土壤物理性状，有利于提高土壤肥力；在其制备过程中，加入菌种保护剂，从而保证了在较高氮、磷、钾含量的情况下生物菌种仍能够存活，并保持较高活性。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种复合生物菌肥，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 200重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.5重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.3重量份
载体 2重量份
菌种保护剂 3重量份。
其中，载体为硅藻土，菌种保护剂为甘露醇。
其制备过程如下：
(1)荧光假单孢杆菌菌液的制备
将荧光假单胞杆菌接种到金氏B培养基中，于35℃、150r/min振荡培养18小时，然后将荧光假单胞杆菌划线接种到金氏B培养基平板上，于35℃培养箱中培养18小时，挑取单菌落再次接种到金氏B培养基中，于35℃、150r/min振荡培养18小时，得荧光假单胞杆菌培养液，将荧光假单胞杆菌培养液接种到金氏B培养基中，于35℃、150r/min振荡培养18小时，得荧光假单胞杆菌种子液，然后将荧光假单胞杆菌种子液接种到含有金氏B培养基的发酵罐中，连续培养30小时，得荧光假单胞杆菌液；
(2)淡紫拟青霉菌菌液的制备
将淡紫拟青霉菌接入PDA液体培养基，于25℃、120r/min条件下在摇床上振荡培养48小时，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上，于25℃、120r/min条件下培养3天，待长出粗壮菌丝后，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得到一级斜面菌种，将所述一级斜面菌种接入PDA液体培养基，于25℃、120r/min条件下培养48小时，得二级摇瓶种子液，将二级摇瓶种子液接入PDA液体培养基，于PH7.0、25℃条件下发酵3天，即得淡紫拟青霉菌菌液；
(3)地衣芽孢杆菌菌液的制备
将地衣芽孢杆菌于20℃、密闭条件下，在活化培养基中接种、活化培养36小时，活化培养基为质量百分比为8∶3∶5∶13∶1000的蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水，然后于PH7.0、20℃下将培养好的菌种在发酵培养基中发酵扩繁72小时，发酵培养基为质量百分比为180∶8∶4∶400∶300∶100∶8∶5∶2000的蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水，在所述活化培养和发酵扩繁过程中不断摇动或搅拌，即得地衣芽孢杆菌菌液；
(4)复合生物菌剂的制备：将上述所得的荧光假单孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌菌液和地衣芽孢杆菌菌液分别经载体吸附、烘干、粉碎，得荧光假单孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌菌粉和地衣芽孢杆菌菌粉，将三种菌粉，混合，得复合微生物菌剂；
(5)复合生物菌肥的制备：将所述复合微生物菌剂与氮磷钾肥及菌种保护剂混合均匀，即得。
实施例2
一种复合生物菌肥，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 250重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.3重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.2重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.1重量份
载体 4重量份
菌种保护剂 7重量份。
其中，载体为滑石粉，菌种保护剂为羧甲基纤维素钠。
其制备过程如下：
(1)荧光假单孢杆菌菌液的制备
将荧光假单胞杆菌接种到金氏B培养基中，于30℃、150r/min振荡培养20小时，然后将荧光假单胞杆菌划线接种到金氏B培养基平板上，于30℃培养箱中培养20小时，挑取单菌落再次接种到金氏B培养基中，于30℃、150r/min振荡培养20小时，得荧光假单胞杆菌培养液，将荧光假单胞杆菌培养液接种到金氏B培养基中，于30℃、150r/min振荡培养20小时，得荧光假单胞杆菌种子液，然后将荧光假单胞杆菌种子液接种到含有金氏B培养基的发酵罐中，连续培养24小时，得荧光假单胞杆菌液；
(2)淡紫拟青霉菌菌液的制备
将淡紫拟青霉菌接入PDA液体培养基，于26℃、80r/min条件下在摇床上振荡培养60小时，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上，于26℃、80r/min条件下培养5天，待长出粗壮菌丝后，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得到一级斜面菌种，将所述一级斜面菌种接入PDA液体培养基，于26℃、80r/min条件下培养60小时，得二级摇瓶种子液，将二级摇瓶种子液接入PDA液体培养基，于PH7.1、26℃条件下发酵5天，即得淡紫拟青霉菌菌液；
(3)地衣芽孢杆菌菌液的制备
将地衣芽孢杆菌于28℃、密闭条件下，在活化培养基中接种、活化培养24小时，活化培养基为质量百分比为8∶3∶5∶13∶1000的蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水，然后于PH7.0、28℃下将培养好的菌种在发酵培养基中发酵扩繁36小时，发酵培养基为质量百分比为180∶8∶4∶400∶300∶100∶8∶5∶2000的蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水，在所述活化培养和发酵扩繁过程中不断摇动或搅拌，即得地衣芽孢杆菌菌液；
(4)复合生物菌剂的制备：将上述所得的荧光假单孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌菌液和地衣芽孢杆菌菌液分别经载体吸附、烘干、粉碎，得荧光假单孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌菌粉和地衣芽孢杆菌菌粉，将三种菌粉，混合，得复合微生物菌剂；
(5)复合生物菌肥的制备：将所述复合微生物菌剂与氮磷钾肥及菌种保护剂混合均匀，即得。
实施例3
一种复合生物菌肥，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 300重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.1重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.5重量份
载体 3重量份
菌种保护剂 4重量份。
其中，载体为滑石粉，菌种保护剂为二甲基砜。
其制备过程如下：
(1)荧光假单孢杆菌菌液的制备
将荧光假单胞杆菌接种到金氏B培养基中，于33℃、150r/min振荡培养19小时，然后将荧光假单胞杆菌划线接种到金氏B培养基平板上，于33℃培养箱中培养19小时，挑取单菌落再次接种到金氏B培养基中，于33℃、150r/min振荡培养19小时，得荧光假单胞杆菌培养液，将荧光假单胞杆菌培养液接种到金氏B培养基中，于33℃、150r/min振荡培养19小时，得荧光假单胞杆菌种子液，然后将荧光假单胞杆菌种子液接种到含有金氏B培养基的发酵罐中，连续培养26小时，得荧光假单胞杆菌液；
(2)淡紫拟青霉菌菌液的制备
将淡紫拟青霉菌接入PDA液体培养基，于28℃、60r/min条件下在摇床上振荡培养72小时，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上，于28℃、60r/min条件下培养4天，待长出粗壮菌丝后，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得到一级斜面菌种，将所述一级斜面菌种接入PDA液体培养基，于28℃、60r/min条件下培养72小时，得二级摇瓶种子液，将二级摇瓶种子液接入PDA液体培养基，于PH7.2、28℃条件下发酵4天，即得淡紫拟青霉菌菌液；
(3)地衣芽孢杆菌菌液的制备
将地衣芽孢杆菌于35℃、密闭条件下，在活化培养基中接种、活化培养10小时，活化培养基为质量百分比为8∶3∶5∶13∶1000的蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水，然后于PH7.0、28℃下将培养好的菌种在发酵培养基中发酵扩繁48小时，发酵培养基为质量百分比为180∶8∶4∶400∶300∶100∶8∶5∶2000的蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水，在所述活化培养和发酵扩繁过程中不断摇动或搅拌，即得地衣芽孢杆菌菌液；
(4)复合生物菌剂的制备：将上述所得的荧光假单孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌菌液和地衣芽孢杆菌菌液分别经载体吸附、烘干、粉碎，得荧光假单孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌菌粉和地衣芽孢杆菌菌粉，将三种菌粉，混合，得复合微生物菌剂；
(5)复合生物菌肥的制备：将所述复合微生物菌剂与氮磷钾肥及菌种保护剂混合均匀，即得。
对实施例1-3制得的复合生物菌肥存储一段时间后进行有效活菌数检测，其检测结果见下表：
从表中可以看出，本发明提供的复合生物菌肥，在存储一段时间后，有效活菌数不但没有减少，而且比初始时的有效活菌数增加很多，说明本发明提供的复合生物菌肥在在较高氮、磷、钾含量的情况下生物菌种仍能够存活，且可保持较高活性。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种复合生物菌肥，其特征是，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 200-300重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.1-0.5重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1-0.5重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.1-0.5重量份
载体 2-5重量份
菌种保护剂 3-7重量份。
2.如权利要求1所述的复合生物菌肥，其特征是，由以下原料制备而成：
氮磷钾肥 230-270重量份
荧光假单孢杆菌菌液 0.2-0.3重量份
淡紫拟青霉菌菌液 0.1-0.2重量份
地衣芽孢杆菌菌液 0.2-0.3重量份
载体 4-5重量份
菌种保护剂 4-5重量份。
3.如权利要求1所述的复合生物菌肥，其特征是，所述载体为滑石粉或硅藻土。
4.如权利要求1所述的复合生物菌肥，其特征是，所述菌种保护剂为二甲基亚砜、羧甲基纤维素钠、山梨醇、甘露醇、海藻糖、谷氨酸钠或磷酸盐中的一种或两种以上。
5.一种复合生物菌肥的制备方法，其特征是，包括以下步骤：
(1)荧光假单孢杆菌菌液的制备
将荧光假单胞杆菌接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，然后将荧光假单胞杆菌划线接种到金氏B培养基平板上，于30～35℃培养箱中培养18～20小时，挑取单菌落再次接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，得荧光假单胞杆菌培养液，将荧光假单胞杆菌培养液接种到金氏B培养基中，于30～35℃、150r/min振荡培养18～20小时，得荧光假单胞杆菌种子液，然后将荧光假单胞杆菌种子液接种到含有金氏B培养基的发酵罐中，连续培养24～30小时，得荧光假单胞杆菌液；
(2)淡紫拟青霉菌菌液的制备
将淡紫拟青霉菌接入PDA液体培养基，于25～28℃、60～120r/min条件下在摇床上振荡培养48～72小时，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培养基上，于25～28℃、60～120r/min条件下培养3～5天，待长出粗壮菌丝后，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得到一级斜面菌种，将所述一级斜面菌种接入PDA液体培养基，于25～28℃、60～120r/min条件下培养48～72小时，得二级摇瓶种子液，将所述二级摇瓶种子液接入PDA液体培养基，于PH7.0～7.2、25～28℃条件下发酵3～5天，即得淡紫拟青霉菌菌液；
(3)地衣芽孢杆菌菌液的制备
将地衣芽孢杆菌于20～35℃、密闭条件下，在活化培养基中接种、活化培养10～36小时，然后于PH7.0～7.2、20～35℃下将培养好的菌种在发酵培养基中发酵扩繁24～72小时，在所述活化培养和发酵扩繁过程中不断摇动或搅拌，即得地衣芽孢杆菌菌液；
(4)复合生物菌剂的制备：将上述所得的荧光假单孢杆菌菌液、淡紫拟青霉菌菌液和地衣芽孢杆菌菌液分别经载体吸附、烘干、粉碎，得荧光假单孢杆菌菌粉、淡紫拟青霉菌菌粉和地衣芽孢杆菌菌粉，将三种菌粉，混合，得复合微生物菌剂；
(5)复合生物菌肥的制备：将所述复合微生物菌剂与氮磷钾肥及菌种保护剂混合均匀，即得。
6.如权利要求5所述的复合生物菌肥的制备方法，其特征是，步骤(3)中，所述活化培养基为蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水。
7.如权利要求6所述的复合生物菌肥的制备方法，其特征是，所述蛋白胨、牛肉浸取物、氯化钠、琼脂和无菌水的质量百分比为8∶3∶5∶13∶1000。
8.如权利要求5所述的复合生物菌肥的制备方法，其特征是，步骤(3)中，所述发酵培养基为蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水。
9.如权利要求8所述的复合生物菌肥的制备方法，其特征是，所述蛋白胨、牛肉膏、氯化镁、玉米粉、蔗糖、淀粉、硫酸亚铁、磷酸二氢钾和无菌水的质量百分比为180∶8∶4∶400∶300∶100∶8∶5∶2000。
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