CN108309998B - 一种天然产物组合及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种天然产物组合及其医药用途。所述天然产物组合是采用非固定化生物材料毛细管电泳(NIBCE)方法筛选获得，包含五种天然化合物黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁。所述天然产物组合具有高效、低毒、靶向性强的特点，可用来制备药物，用于治疗肺癌、原发性肝癌、直肠癌等肿瘤，还可作为寻靶物质，用于靶向肿瘤治疗及诊断制剂的开发或者靶向肿瘤给药***的设计。

Description

一种天然产物组合及其医药用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及天然产物组合及其医药用途，尤其涉及一种天然产 物组合及其用于制备药物和靶向制剂方面的用途。所述天然产物组合可用于肿瘤治 疗，肿瘤靶向诊断，或肿瘤靶向给药***设计。

背景技术

肿瘤是如今困扰人类生存发展的一大类严重的疾病。数据显示，目前，中国癌 症发病率和死亡率持续上升，已经成为最主要的疾病死亡原因之一。肿瘤的病理过 程复杂，具有复发、耐药性等问题，对药物研发构成很大的挑战。在抗肿瘤药物中， 化疗药广泛用于临床，但由于其副作用及肿瘤组织的耐药性，导致患者依从性不好， 药效降低。目前，抗体药物是肿瘤研究的热点，然而抗体药物的副作用以及肿瘤的 反应性也存在许多不明之处。传统中药经过多年临床实践，其有效性和副作用较为 明确，在肿瘤治疗的过程中，传统中药可以从提高机体免疫功能、减轻放化疗毒副 作用、抑制肿瘤细胞增殖、逆转多药耐药等多个方面起到抗肿瘤作用。

目前，多种中药注射剂在肿瘤治疗中发挥着重要的辅助作用，例如消癌平、艾 迪注射液(Aidi Injection,ADI)、复方苦参注射液等。一方面，这些中药制剂在中医 理论的基础上向现代化精确用药做出了一步推进，众多临床前与临床研究数据也证 明了其抗肿瘤的效用。另一方面，中药制剂成分的复杂性对制剂分析也提出了巨大 挑战，制剂分析的不足会侧面导致制剂在临床使用过程中一些不良反应事件的发生， 尤其中药注射剂与传统中药给药方式(口服、皮肤给药)有所不同，其安全性及有 效性都需要经过全面***地评价，而非简单继承中药方剂。因此，针对中药制剂， 阐明其有效物质、确定合适剂量、调整工艺、降低毒性等就变得意义重大。

在生物医学科研领域，肿瘤靶向药物的研究脚步从来没有停止过。随着肿瘤表 面异常表达受体的发现，很多人开始以受体为靶向肿瘤的目标进行先导化合物的研 究(如治疗性靶标：表皮生长因子受体、整合素等，和非治疗性靶标：叶酸受体、 转铁蛋白等)，这其中包括有机合成化合物，天然产物等。而根据国家部颁药品标准 WS₃-B-3809-98中给出的配方和提取工艺而成的艾迪注射液(ADI)，是以斑蝥、人 参、黄芪、刺五加为原料提取得到(具体可参考专利CN102078368B)，是一种临床 上用于治疗肺癌、肝癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科恶性肿瘤等疾病的纯中药注射 剂。但是，ADI中成分复杂，现阶段文献中最多鉴别出22种化合物，且尚未有对其 中靶向肿瘤成分进行综合分析的报道。此外，其中的斑蝥首载于《神农本草经》，虽 能入药但有较大毒性，且鉴别出的ADI中含有的斑蝥素在世界卫生组织国际癌症研 究机构公布的3类致癌物清单中，大剂量使用有严重的毒副作用。

发明内容

本发明提供了一种天然产物组合及其医药用途。所述天然产物组合能够用于肿瘤治疗，肿瘤靶向诊断，或肿瘤靶向给药***设计。

本发明通过寻找ADI中与肿瘤表面受体发生相互作用的直接物质基础，从而得 到ADI中靶向肿瘤表面受体的、高效、低毒的抗肿瘤组分。

本发明使用非固定化生物材料毛细管电泳(Non-immobilized biomaterialscapillary electrophoresis,NIBCE)方法，筛选出ADI中五种对非小细胞肺癌A549细 胞及肿瘤组织具有特异性结合作用的化合物，通过分子对接研究了结合活性物质潜 在的结合受体，并运用细胞、动物水平生物活性实验考察了五种组分组成的天然产 物组合的药效。

一方面，本发明提供了一种天然产物组合，其由下述活性成分组成：黄芪甲苷、 紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁。

其中，所述活性成分的重量百分含量为：黄芪甲苷(20～25％)、紫丁香苷 (20～25％)、人参皂苷Rb₃(15～20％)、人参皂苷Re(15～20％)和人参皂苷Rg₁ (15～20％)。

所述活性成分是由天然产物获得。优选地，所述活性成分是采用非固定化生物 材料毛细管电泳方法经过筛选获得。

所采用的非固定化生物材料毛细管电泳方法包括下述步骤：

(1)制备用于天然产物筛选的毛细管，包括：

对毛细管进行前处理；

对柱筛材料进行预处理并形成柱筛，使所述柱筛设置在所述毛细管的中间 部位或端部，或者使所述柱筛连接于所述毛细管的端部，从而形成带有柱筛的 毛细管；其中，若所述柱筛被设置在所述毛细管的端部或连接于毛细管的端部， 则需将毛细管端部与具有检测窗口的毛细管的端部通过连接器进行连接；

对作为相互作用相的生物材料进行培养或处理并进行固定；以及将固定后 的所述生物材料注入所述带有柱筛的毛细管中，使得所述生物材料被拦截于柱 筛后端作为相互作用相；

其中所述前处理步骤可包括将毛细管依次用甲醇、超纯水、0.1M HCl、超 纯水、0.1M NaOH、超纯水进行冲洗；所述对生物材料的固定步骤可包括对所 述生物材料采用4％多聚甲醛进行处理；

(2)提供电泳装置；

(3)采取进样前处理并确定电泳条件，其中进样分析的生物材料表面的受体保 持天然构象和生物活性；

(4)将样品注入所述毛细管；

(5)对样品通过电泳过程进行筛选；

(6)对筛选后的成分进行检测分析，从而鉴定得到与生物材料表面存在相互作 用的天然产物组合的成分。

另一方面，本发明还提供了所述天然产物组合的医药用途，包括肿瘤治疗，肿 瘤靶向诊断，或肿瘤靶向给药***设计。

所述天然产物组合可以用来制备药物的用途包括提供药学有效量的所述天然产物组合作为药物活性成分，其中所述药物用于肿瘤靶向治疗，所述肿瘤包括肺癌、 原发性肝癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、或妇科恶性肿瘤。所述妇科恶性肿瘤包括宫颈 癌、乳腺癌、卵巢癌等。

所述药物还可进一步包括药学上可接受的稀释剂，分散剂，乳化剂或载体。所 述载体可以为固态载体或液态载体。

所述天然产物组合制备的药物的剂型包括但不限于注射剂、粉针剂、滴丸剂、 胶囊剂、悬浮剂、粉末剂、栓剂等。例如，所述天然产物组合制备的药物可以利用 固态载体制备为带有药物的栓剂，用于局部给药。

所述天然产物组合可单独或与其他药剂组合制备药物。

所述天然产物组合制备的药物可以通过多种给药途径施用于患者。所述给药途径包括但不限于静脉内、肌肉内、局部或皮下方式给药。所述局部方式包括将所述 药物直接注射到实体瘤中或将带有药物的栓剂施用于肿瘤相关部位。

所述天然产物组合还可以作为寻靶物质用于肿瘤靶向诊断。其中所述靶向诊断包括靶向肿瘤表面的高表达受体，其包括但不限于多药耐药相关性蛋白1、表皮生 长因子受体、***1。

所述天然产物组合还可以用于肿瘤靶向给药***的设计。

附图说明

图1为根据本发明的具体实施方式所建立的NIBCE方法的HPCE图。其中：A、 B、C、D、E分别为A549细胞作为相互作用相时，阴性化合物DMSO、阳性化合 物叶酸(FA)、ADI、所筛选的化合物中阴性化合物代表黄芪皂苷II、阳性化合物代 表黄芪甲苷的电泳图；F、G、H、I分别为正常肺组织和肿瘤组织作为相互作用相时， 阴性化合物DMSO、阳性化合物FA、所筛选的化合物中阴性化合物代表黄芪皂苷I、 阳性化合物代表黄芪甲苷的电泳图。

图2描述了根据本发明的具体实施方式通过NIBCE方法测定的FA与A549细 胞相互作用时的日内、日间、批间精密度。

图3为根据本发明的具体实施方式所筛选的18个化合物的结构。

图4为根据本发明的具体实施方式所筛选的18个化合物的结果。

图5为根据本发明的具体实施方式所筛选的化合物黄芪甲苷与潜在受体的分子对接结果。其中：A、B、C分别为黄芪甲苷与MRP1、EGFR、IGF1R的对接结果 (左图为对接结果的宏观结合图，右图为具体结合位点图)。

图6为根据本发明的具体实施方式所筛选的五种活性化合物与潜在受体对接的E_model值。

图7为ADI、黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁、组合一(黄芪 甲苷+紫丁香苷+人参皂苷Rb₃+Re+Rg₁)以及组合二(黄芪甲苷+紫丁香苷)的细胞 水平抗肿瘤活性实验结果。

图8为动物水平抗肿瘤活性实验结果。其中：A、B为给药9次后动物处死时， 生理盐水组(NS组)、ADI组(200μL/只)、组合一组(黄芪甲苷+紫丁香苷+人参 皂苷Rb₃+Re+Rg₁，各40mg/kg)和组合二组(黄芪甲苷+紫丁香苷，各40mg/kg) 的肿瘤生长情况；C为给药后各组动物瘤体积变化情况；D为给药9次后动物处死 时，各组肿瘤的瘤重情况；E为给药后各组动物体重变化情况。*代表与NS组相比 具有显著性差异(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)。

具体实施方式

在下文中结合一些具体的实施方式对本发明作进一步的、示例性的描述，包括 通过NIBCE对ADI中活性物质的筛选，分子对接对活性组分的潜在结合受体的确 认，细胞水平抗肿瘤生物活性实验，动物水平抗肿瘤生物活性实验。应该理解，这 些描述不是用来限制本申请要求保护的范围。

实施例1、使用NIBCE筛选ADI中靶向非小细胞肺癌的活性物质

NIBCE方法的建立可参考本发明人的中国专利申请201710564781.0，发明名称 为“生物材料作为相互作用相的毛细管及其制备和应用”，其内容通过引用在此纳入 本文。

在本实施例中，所用HPCE为Beckman P/ACETM MDQ***(Beckman-Coulter，Fullerton，CA，USA)，配有一个二级阵列检测器以及32KaratSoftware工作站(version5.0，Beckman)，外层为聚酰亚胺涂层的熔融石英具筛毛细管柱。长30.2cm，200μm I.D.的熔融石英毛细管依次用甲醇、超纯水、0.1M HCl、超纯水、0.1M NaOH、超 纯水冲洗，吹干后制备键合柱筛，获得柱筛毛细管，室温保存，备用。将培养好 的A549细胞从培养皿中消化离心后，细胞计数，用3-5％多聚甲醛避光固定15 -25min后，根据计数结果用PBS将细胞密度调整至1.0×10⁴-1.0×10⁷个/mL，保 存在4℃冰箱待用。实验时，将上述固定后的细胞注入毛细管柱中，在细胞处 于“动态”时进行实验。将小鼠正常肺组织、人源A549肺癌细胞建立的异种 移植性肿瘤的肿瘤组织剥离后，用3-5％多聚甲醛避光固定12-48h后，置于 75％乙醇中，保存在4℃冰箱待用。实验时，将上述固定后的离体组织或者肿 瘤组织注入柱筛毛细管柱中，长度为0.5-5mm，用30-40mM pH 6.8-7.4的磷 酸盐缓冲液冲洗平衡后备用。

由于多种肿瘤细胞表面都高表达叶酸受体，因此，在本实验中将叶酸(FA)作 为阳性化合物，DMSO作为阴性化合物，分别研究了其在柱筛毛细管柱、A549细胞 作为相互作用相的毛细管柱中的色谱行为。比较DMSO在不同毛细管柱中的电泳图 发现，其峰高峰形没有显著区别，实验结果如图1(A)所示。而10μM的FA在柱 筛毛细管中的响应值几乎达到5mAU，但同浓度进样到A549细胞作为相互作 用相的毛细管柱中，10μM FA表现为贴附在基线上的一个宽的平伏峰形，存在 较强的特异性相互作用，实验结果如图1(B)所示。每组实验平行进行三次， 结果显示重现性良好。

亲和色谱中的色谱峰形的变化是化合物与相互作用相间的特异性或非特性相互作用的结果。通常，由于化合物与固定相的解离速率高于结合速率，使得色谱峰表 现为展宽拖尾的非高斯峰形。在色谱容量一定的情况下，化合物峰形偏离高斯峰的 程度与化合物的浓度相关。而NLC理论正好解释了浓度与峰形变化的关系以及各种 动力学参数的计算方法。本实验用A549细胞作为相互作用相的毛细管柱对阳性化 合物FA进行电泳分析。所得的不对称峰形可用非线性色谱模型进行解释，并用软 件拟合峰形，计算结合常数(K)、结合速率常数(k_a)、解离速率常数(k_d)以及 容量因子(k’)。通过计算我们得到10μM FA与A549细胞的结合常数K为(1.64±0.22) ×10⁴M^-1，且其保留时间和峰高的日内、日间、批间精密度良好，具体见图2。

活性物质的筛选：本发明将所建立的NIBCE药物筛选方法，用于筛选ADI中 靶向A549肿瘤细胞及肿瘤组织的活性成分。图1(C)中ADI原液的色谱行为结果 显示，当A549细胞作为相互作用相时，ADI中的主要组分保留时间延迟，峰高降 低，且某些组分的峰形严重拖尾，为进一步发现何种物质与A549细胞发生特异相 互作用提供了科学依据。

在此基础上，NIBCE被用于筛选如图3所示的18个化合物，主要为已鉴定出 的ADI中的主要成分，分别研究了这些化合物在柱筛毛细管柱中A549细胞作为相 互作用相的电泳行为。观察到黄芪皂苷II、异黄芪皂苷I、人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rc、 Rd、Rf、芒柄花素、毛蕊异黄酮-7-O-β-d-葡萄糖苷、绿原酸、异嗪皮啶在两种毛细 管柱中的电泳峰形基本保持不变，和DMSO的峰形变化一致，属于阴性化合物，如 图1(D)中显示了其中的代表性黄芪皂苷II在两种毛细管柱中的对比峰形。相反， 黄芪皂苷I、黄芪甲苷、紫丁香苷、刺五加皂苷E、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁在两种 毛细管柱中的峰形变化与FA类似，如图1(E)中显示了其中代表性黄芪甲苷在两 种毛细管柱中的对比峰形，化合物在A549细胞作为相互作用相的毛细管柱中，保留时间延迟且峰高降低、拖尾严重，判断它与A549细胞表面的某些受体存在特异 性结合，属于阳性化合物，并通过NLC理论对筛选出的活性化合物的动力学参数进 行了计算，相关参数结果见图4。

在此基础上，本实验使用离体正常肺组织和肿瘤组织作为相互作用相，研究了 上述所筛选出的七个阳性化合物与肿瘤组织是否存在相互作用。而通过对化合物在 柱筛毛细管柱、正常肺组织作为相互作用相的毛细管柱、肿瘤组织作为相互作用相 的毛细管柱中的峰形对比，对于DMSO、黄芪皂苷I、刺五加皂苷E，由于离体肺组 织和肿瘤组织采用稳态形式，在一定程度上增加了***的压力，所以出峰时间出现 延迟。但其他电泳行为基本一致，峰高峰形没有显著区别，展现出典型的阴性化合 物特点。只有FA、黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁在肿瘤组织作为 非固定相的毛细管柱中，保留时间延迟、峰高降低明显、拖尾严重，判断它们与肿 瘤组织之间存在特异性相互作用，进一步说明这些物质与肿瘤组织表面高表达的某 些受体存在相互作用，这也说明肿瘤微环境的不同会造成与使用肿瘤细胞进行实验 的结果的差异。因此，通过上述NIBCE的方法，发现了五种与非小细胞肺癌存在特 异性结合作用的活性物质，为后续细胞水平和动物水平药效学实验提供科学依据。

实施例2、分子对接研究结合活性物质潜在的结合受体

根据前期文献调研得知，黄芪甲苷能降低患者的多药耐药性，而且A549细胞 表面表达多药耐药相关性蛋白1(Multidrug Resistance-Associated Protein 1,MRP1)。 此外，A549细胞表面还高表达表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)，***1(Insulin-like Growth Factor 1Receptor，IGF1R)等受 体。因此，对活性物质的潜在受体进行了分子对接和模拟确认，这里分子对接的研 究是使用FirstDiscovery 2.7(Schrodinger，薛定谔)的Glide模块来进行的。Glide是 基于网格的对接方法和评分功能，进行柔性配体与刚性受体的对接。如果化合物与 潜在的受体没有相互作用，化合物就无法进入到受体的活性口袋或者不能与活性中 心结合。本实验将黄芪甲苷与MRP1、EGFR、IGF1R三种受体进行了对接(如图5)， 将紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁与EGFR、IGF1R两种受体进行了对接。结合 活性物质分子对接的初步结果如图6所示，五种物质对于IGF1R的结合作用都较强， IGF1R作为治疗性靶标，五种化合物通过这一特异性结合作用对于肿瘤细胞存活、 细胞周期等的影响值得进一步加以研究。此外，黄芪甲苷、人参皂苷Rb₃、Rg₁与 EGFR的结合作用较强，在肿瘤的发展和转移等多方面也可能发挥着重要作用。

实施例3、细胞水平抗肿瘤活性实验

针对NIBCE初步筛选得到的活性化合物，本实验采用MTT法研究ADI、五种 结合活性成分、不同活性组分组合对于A549肿瘤细胞增殖的抑制作用。收集对数 期的细胞，用含10％FBS的DMEM培养基将A549细胞接种于96孔板，每孔3000 个细胞。在37℃、5％CO₂环境下培养18h，确认细胞贴壁后，弃去旧培养基。根据 分组每孔加入含不同浓度的药物培养基200μL，ADI浓度选取8个点，分别为：30、 60、90、120、150、180、210、240mg/mL(按生药量计，注：每支ADI含生药量 3.015g)；黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁浓度选择分别为5、10、20、 40、60、80、100、200、400μmol/L；天然产物组合一(C_黄芪甲苷：C_紫丁香苷：C_Rb3：C_Re： C_Rg1＝1：1：1：1：1)浓度选择分别为5、10、20、40、80、120、160、200μmol/L； 天然产物组合二(C_黄芪甲苷：C_紫丁香苷＝1：1)浓度选择分别为5、10、20、40、80、120、 160、200、400μmol/L。每个浓度设置3-5个复孔，同时设空白对照。继续培养36h 后每孔加入含5mg/mL MTT的培养基20μL，继续避光培养4h后，每孔加入DMSO 150μL，30min后在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。计算每个浓度 下的平均抑制率＝[1-(实验组平均OD值-空白组平均OD值)]×100％，绘制抑制率- 药物浓度曲线并计算每个给药组的IC₅₀值，见图7。结果显示，ADI、黄芪甲苷、紫 丁香苷、人参皂苷Rb₃、Re、Rg₁的IC₅₀分别为：111.76mg/mL(按生药量)、139.22、170.21、＞400、＞400、＞400μmol/L。其中，化合物的IC₅₀值越小，表明药物的抑 制作用越强。根据上述结果可以看出，人参皂苷类的体外抗肿瘤增殖效果较小，无 法准确得出其IC₅₀值，这提示我们此类化合物不能单独成药，但可能作为辅助药物 进行肿瘤治疗。而当对上述药物进行组合后，上述天然产物的抗肿瘤效果明显增强， 组合一、组合二的IC₅₀分别为：60.13、119.20μmol/L。由此可见，通过分子水平筛 选与细胞水平抗肿瘤活性实验，本实验筛选出了靶向抗肿瘤效果较好的五个天然产 物的组合，且分子水平筛选结果与细胞水平抗肿瘤活性实验结果基本一致。

实施例4、动物水平抗肿瘤活性实验

针对NIBCE初步筛选得到的活性天然产物以及体外抗肿瘤活性实验结果，本实 验进一步研究了组合一与组合二对小鼠体内非小细胞肺癌A549肿瘤生长的作用。 选用处于对数生长期的A549和6～8周龄的Balb/nu-nu裸鼠构建荷瘤模型，包括生 理盐水组作为空白对照组，给药ADI(200μL/只)作为阳性对照组，研究了组合一 组(40mg/kg)和组合二组(40mg/kg)对于肿瘤模型的作用，进行药效学评价。于 实验第1天对裸鼠称重并且于右侧腋下注射A549细胞(5×10⁶个/只)，注入细胞2 周后(肿瘤达到约50mm³)，将裸鼠按照每组10只随机分成4组，开始给药。每两 天给药一次，每次给药前对裸鼠进行体重称重和瘤体积测量。共给药9次，给药后 第18天对小鼠进行处死，剥离肿瘤、称瘤重。计算每组瘤重的平均值及肿瘤抑制率， 肿瘤抑制率＝(空白组平均瘤重-实验组平均瘤重)/空白组平均瘤重×100％。

如图8的结果显示，与生理盐水组相比，ADI、组合一和组合二对肿瘤抑制情 况均有显著性差异(***P<0.001,**P<0.01,*P<0.05)，抑瘤率分别为：50.90％,43.04,33.35％。但五种组分的组合与两种组分的组合相比，抗肿瘤效果更好，且与ADI的 抗肿瘤效果接近。在给药过程中，生理盐水组小鼠死亡2只，死亡率为20％，说明 了不给药组中肿瘤的生长对小鼠的健康造成了一定的影响；ADI组小鼠死亡4只， 死亡率为40％，此外，ADI组对存活小鼠体重影响与生理盐水组相比也有显著性差 异(P<0.05)，这提示ADI有一定的毒副作用，而ADI中的组分斑蝥素在体内确实 有较强的毒性，该结果也对此有所印证；而组合一对小鼠体重影响无显著性差异， 说明五种组分的组合毒性较小。由此可见，本发明发现的五种天然产物组合在体内 抗肿瘤效果要强于两种组分的组合，且与ADI的效果接近，并且显示出高效、低毒、 靶向性强的特点。这可能是由于，人参皂苷Rb₃、Re和Rg₁单独使用在体外抗肿瘤 的效果虽然不佳，但众多研究表明其在体内可以提高机体免疫能力和白细胞水平， 降低对正常细胞的细胞毒作用，再加之其有一定的抗肿瘤增殖的效果，从而起到减毒增效的作用。

综上所述，本发明首次发现并鉴定了一种由黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁组成的天然产物组合，其高效、低毒、靶向性强，可用 于多种肿瘤的治疗，或作为寻靶物质在医药领域进行应用。

本文对一些具体的实施例进行了详细的描述，然而这只是作为对发明目的实例说明，而不限制下述权利要求书的范围。应当理解，对本文所述具体方案的不同取 代、改变和修饰都不偏离本发明权利要求所定义的内涵和外延，从而应当属于本申 请所要求保护的发明范围。

Claims (7)

1.一种天然产物组合物，其由下述活性成分组成：黄芪甲苷、紫丁香苷、人参皂苷Rb₃、人参皂苷Re和人参皂苷Rg₁；

其中所述活性成分的重量百分含量为：黄芪甲苷，20～25％；紫丁香苷，20～25％；人参皂苷Rb₃，15～20％；人参皂苷Re，15～20％；和人参皂苷Rg₁，15～20％；

其中所述活性成分是由天然产物获得，并且是采用非固定化生物材料毛细管电泳方法经过筛选获得；所述非固定化生物材料毛细管电泳方法包括下述步骤：

(1)制备用于天然产物筛选的毛细管，包括：

对毛细管进行前处理，包括将毛细管依次用甲醇、超纯水、0.1M HCl、超纯水、0.1MNaOH、超纯水进行冲洗；

对柱筛材料进行预处理并形成柱筛，使所述柱筛设置在所述毛细管的中间部位或端部，或者使所述柱筛连接于所述毛细管的端部，从而形成带有柱筛的毛细管；其中，若所述柱筛被设置在所述毛细管的端部或连接于毛细管的端部，则需将毛细管端部与具有检测窗口的毛细管的端部通过连接器进行连接；

对作为相互作用相的生物材料进行培养或处理并进行固定，包括对所述生物材料采用4％多聚甲醛进行处理；以及将固定后的所述生物材料注入所述带有柱筛的毛细管中，使得所述生物材料被拦截于柱筛后端作为相互作用相；

(2)提供电泳装置；

(3)采取进样前处理并确定电泳条件，其中进样分析的生物材料表面的受体保持天然构象和生物活性；

(4)将样品注入所述毛细管；

(5)对样品通过电泳过程进行筛选；

(6)对筛选后的成分进行检测分析，从而鉴定得到与生物材料表面存在相互作用的天然产物组合物的成分。

2.权利要求1所述的天然产物组合物用来制备药物的用途，其包括提供药学有效量的所述天然产物组合物作为药物活性成分，其中所述药物用于肿瘤靶向治疗，所述肿瘤为肺癌肿瘤。

3.根据权利要求2所述的制备药物的用途，其中所述药物还可进一步包括药学上可接受的稀释剂，分散剂，乳化剂。

4.根据权利要求2所述的制备药物的用途，其中所述药物的剂型为注射剂、或滴丸剂。

5.根据权利要求4所述的制备药物的用途，其中所述注射剂为粉针剂。

6.权利要求1所述的天然产物组合物用来制备靶向制剂的用途，其包括提供药学有效量的所述天然产物组合物，其中所述靶向制剂作为寻靶物质用于肿瘤靶向诊断；并且所述靶向诊断包括靶向肿瘤表面的高表达受体，其包括多药耐药相关性蛋白1、表皮生长因子受体、***1。

7.根据权利要求6所述的制备靶向制剂的用途，其中所述靶向制剂作为寻靶物质用于设计肿瘤靶向给药***。

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