CN108250122B - 磺酰胺-芳基酰胺类化合物及其治疗乙型肝炎的药物用途 - Google Patents

磺酰胺-芳基酰胺类化合物及其治疗乙型肝炎的药物用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种磺酰胺‑芳基酰胺类化合物及其治疗乙型肝炎的药物用途。具体地，本发明公开了一种可作为HBV复制抑制剂的具有化学式(A)所示结构的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐，水合物或溶剂化物，各基团的定义详见说明书。本发明还涉及包含上述化合物的药物组合物及其在治疗乙型肝炎中的用途。

Description

磺酰胺-芳基酰胺类化合物及其治疗乙型肝炎的药物用途
技术领域
本发明属于化学医药领域，具体地，本发明涉及一种磺酰胺-芳基酰胺类化合物及其治疗乙型肝炎的药物用途。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)是一种有包膜的、部分双链DNA(dsDNA)的、嗜肝病毒DNA家族(肝病毒科(Hepadnaviridae))的病毒。它的基因组包含4个重叠阅读框：前核/核基因，聚合酶基因，UM和S基因(它们编码三个包膜蛋白质)，以及X基因。在感染前时，该部分双链DNA基因组在宿主细胞核中(开环DNA；rcDNA)转变为共价闭合环状DNA(cccDNA)并且该病毒mRNA进行转录。一旦被壳体化，该前基因组RNA(pgRNA)(其还为核心蛋白和Pol编码)作为模板用于逆转录，这种逆转录在核衣壳中再生该部分dsDNA基因组(rcDNA)。
HBV在亚洲和非洲的部分地区造成了流行病，并且它在中国是地方性的。HBV已经在全球感染了大约20亿人，其中大约3.5亿人发展成了慢性传染病。该病毒造成了乙型肝炎疾病并且慢性传染病与肝硬化和肝癌的发展的高增加风险相关联。
乙型肝炎病毒的传播来源于暴露于传染性的血液或体液，同时在血清中具有高效价DNA的慢性携带者的唾液、泪液以及尿液中检测到了病毒DNA。
虽然目前存在一种有效的并且具有良好耐受性的疫苗，但是直接治疗的选择目前还限于干扰素以及以下的抗病毒药；替诺福韦、替诺福韦艾拉酚胺(TAF)、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦以及替比夫定。
此外，杂芳基二氢嘧啶(HAPs)在组织培养以及动物模型中被鉴别作为一类HBV抑制剂(韦伯(Weber)等人，《抗病毒研究》(Antiviral Res.)54:69-78)。
WO 2013/006394(公开于2013年1月10日)和WO 2013/096744(公开于2013年6月27日)还公开了涉及抗HBV活性的氨磺酰基-芳基酰胺。
然而，在这些直接的HBV抗病毒药中会遇到毒性、致突变性、缺乏选择性、疗效差、生物利用度差以及合成困难等问题。
因此，为了克服以上曲线，需要开发具有效价高、毒性更低等优点的HBV抑制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一类可用作HBV抑制剂的结构新颖的化合物。
本发明第一方面提供了一种如式A所示的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，
Figure BDA0001531209650000021
其中，
R1、R2各自独立地为氢、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；或R1、R2与和它们相连的氮原子共同构成取代或未取代的具有1个N和0-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基；
R3为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R4、R5和R6为苯环上任意位置的取代基，其各自独立地为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R1、R2、R3、R4、R5和R6中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、氧代、-CN、羟基、氨基、羧基、C6-C10芳基、卤代的C6-C10芳基、具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
M为O、S、CR7R7’或NR8；其中，R7、R7’、R8各自独立地为氢、卤素、-CN、羟基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C8环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、-CN、羟基、氨基、羧基；
X为NR9、羰基(-(CO)-)、卤代亚C1-C4烷基(如CF2)或羟肟(＝N-OH)；其中，R9为氢、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C8环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、-CN、羟基、氨基、羧基；
Y为羰基(-(CO)-)或磺酰基(-SO2-)；
且满足以下条件：X、Y不能同时为羰基，X为羰基时Y不能为磺酰基；
Z为N或CR10；其中，R10各自独立地为氢、卤素、-CN、羟基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、氧代、-CN、羟基、氨基、羧基、C6-C10芳基、卤代的C6-C10芳基、具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基。
在另一优选例中，所述化合物中，
R1、R2各自独立地为氢、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；或R1、R2与和它们相连的氮原子共同构成取代或未取代的具有1个N和0-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基；
R3为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R4、R5和R6为苯环上任意位置的取代基，其各自独立地为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R1、R2、R3、R4、R5和R6中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、氧代、-CN、羟基、氨基、羧基、C6-C10芳基、卤代的C6-C10芳基、具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
M为NR8；其中，R8为甲基；
X为NR9；其中，R9为氢；
Y为磺酰基(-SO2-)；
Z为N或CR10；其中，R10各自独立地为氢。
在另一优选例中，所述化合物中，
R1、R2各自独立地为氢、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；或R1、R2与和它们相连的氮原子共同构成取代或未取代的具有1个N和0-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基；
R3为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R4、R5和R6为苯环上任意位置的取代基，其各自独立地为氢、卤素、-CN、羟基、氨基、羧基、-(C＝O)-取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C1-C8烷基、取代或未取代的C2-C6烯基、取代或未取代的C2-C6炔基、取代或未取代的C1-C8烷胺基、取代或未取代的C1-C8烷氧基、取代或未取代的C3-C10环烷基、取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、和取代或未取代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
R1、R2、R3、R4、R5和R6中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代的C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、卤代的C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、卤代的C3-C8环烷基、氧代、-CN、羟基、氨基、羧基、C6-C10芳基、卤代的C6-C10芳基、具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基、卤代的具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基；
M为NR8；其中，R8为甲基；
X为NR9；其中，R9为氢；
Y为磺酰基(-SO2-)；
Z为CR10；其中，R10为氢。
在另一优选例中，R1、R2各自独立地为氢、取代或未取代的C2-C8烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：氟、氯、溴、碘。
在另一优选例中，R1、R2各自独立地为氢、取代或未取代的C2-C4烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：氟、氯、溴、碘。
在另一优选例中，R3为氢、氟、氯、溴、碘、-CN、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C4烷基、卤代的C1-C4烷基、-CN、羟基。
在另一优选例中，R3为氢、氟、氯、溴、碘。
在另一优选例中，R4、R5和R6各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、-CN、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：氟、氯、溴、碘、C1-C4烷基、卤代的C1-C4烷基。
在另一优选例中，R4、R5和R6各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、-CN、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：氟、氯、溴、碘。
在另一优选例中，X为NH、CF2或羟肟(＝N-OH)。
在另一优选例中，M为NR8；其中，R8为氢、卤素、-CN、羟基、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4烷氧基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：卤素、C1-C4烷基、卤代的C1-C4烷基、-CN、羟基、氨基、羧基。
在另一优选例中，Z为N或CR10；其中，R10各自独立地为氢、氟、氯、溴、碘、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C3-C4环烷基；其中，所述“取代”是指被选自下组的一个或多个(例如2个、3个、4个等)取代基所取代：氟、氯、溴、碘、C1-C4烷基、卤代的C1-C4烷基。
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
Figure BDA0001531209650000061
Figure BDA0001531209650000071
Figure BDA0001531209650000081
本发明第二方面提供了一种第一方面所述的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物的制备方法，
方法(a)：所示式A化合物为式VIII-1所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000082
(a1)在惰性溶剂中，将化合物III-1与化合物IV-1进行反应，从而形成化合物V-1；
(a2)在惰性溶剂中，将化合物V-1进行水解反应，从而形成化合物VI-1；
(a3)在惰性溶剂中，将化合物VI-1与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物VIII-1；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前；
或方法(a’)：所述式A化合物为式XIII-3所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000091
(a’1)在惰性溶剂中，将化合物IX-3进行水解反应，从而形成化合物X-3；
(a’2)在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物XI-3；
(a’3)在惰性溶剂中，将化合物XI-3进行还原反应，从而形成化合物XII-3；
(a’4)在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物IV-1进行反应，从而形成化合物XIII-3；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Z和M的定义同前；
或方法(b)：所示式A化合物为式VIII-2所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000092
(b1)在惰性溶剂中，将化合物VII-2和羟胺进行反应，从而形成化合物VIII-2；各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前；
或方法(c)：所示式A化合物为式IX-2所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000093
(c1)在惰性溶剂中，将化合物VII-2与氟化试剂进行反应，从而形成化合物IX-2；各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前；
或方法(d)：所示式A化合物为式IX-3所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000101
(d1)在惰性溶剂中，将化合物V-3与磺酰氯进行反应，从而形成化合物VI-3；
(d2)在惰性溶剂中，将化合物VI-3与HNR1R2进行反应，从而形成化合物VII-3；
(d3)在惰性溶剂中，将化合物VII-3进行水解反应，从而形成化合物VIII-3；
(d4)在惰性溶剂中，将化合物VIII-3与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物IX-3；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义同前；
或方法(e)：所示式A化合物为式VI-5所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure BDA0001531209650000102
(e1)在惰性溶剂中，将化合物I-5与氟化试剂进行反应，从而形成化合物II-5；
(e2)在惰性溶剂中，将化合物II-5进行水解反应，从而形成化合物III-5；
(e3)在惰性溶剂中，将化合物III-5与R1R2NH进行反应，从而形成化合物IV-5；
(e4)在惰性溶剂中，将化合物IV-5进行水解反应，从而形成化合物V-5；
(e5)在惰性溶剂中，将化合物V-5与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物VI-5；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义同前。
在另一优选例中，所述式VII-2化合物可由式I-2化合物为起始原料制备得到。具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000111
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前。
在另一优选例中，所述式V-3化合物可由式I-3化合物为起始原料制备得到。
具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000112
各式中，R3的定义同前。
发明第三方面提供了如下式所示的中间体，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，
Figure BDA0001531209650000113
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前。
在另一优选例中，所述式V-1所示的中间体为
Figure BDA0001531209650000121
在另一优选例中，所述式VI-1所示的中间体为
Figure BDA0001531209650000122
本发明第四方面提供了一种药物组合物，包含(1)第一方面所述的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物；(2)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述药物组合物还包含其它用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染的药物。
在另一优选例中，所述其它用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染的药物可选自下组：免疫调节剂(例如干扰素-α(IFN-α)、聚乙二醇化干扰素-α)或先天免疫***的刺激剂(如Toll样受体7和/或8激动剂)。
在另一优选例中，所述其它用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染的药物可选自下组：替诺福韦、替诺福韦艾拉酚胺(TAF)、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦以及替比夫定。
本发明第五方面提供了第一方面所述的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物或第四方面所述的药物组合物的用途，用于制备预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染的药物。
本发明第六方面提供了一种治疗乙型肝炎的方法，对有需要的个体施用第一方面所述的化合物，或其立体异构体、顺反异构体或互变异构体，或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物或第四方面所述的药物组合物。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，发现了一类对乙型肝炎具有优异的治疗效果的新型化合物。在此基础上，发明人完成了本发明。
定义
如本文所用，术语“烷基”包括直链或支链的烷基。例如C1-C8烷基表示具有1-8个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。
如本文所用，术语“烯基”包括直链或支链的烯基。例如C2-C6烯基指具有2-6个碳原子的直链或支链的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或类似基团。
如本文所用，术语“炔基”包括直链或支链的炔基。例如C2-C6炔基是指具有2-6个碳原子的直链或支链的炔基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、或类似基团。
如本文所用，术语“C3-C10环烷基”指具有3-10个碳原子的环烷基。其可以是单环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或类似基团。也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。
如本文所用，术语“C1-C8烷胺基”是指被C1-C8烷基所取代的胺基，可以是单取代或双取代的；例如，甲胺基、乙胺基、丙胺基、异丙胺基、丁胺基、异丁胺基、叔丁胺基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二异丙胺基、二丁胺基、二异丁胺基、二叔丁胺基等。
如本文所用，术语“C1-C8烷氧基”是指具有1-8个碳原子的直链或支链的烷氧基；例如，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
如本文所用，“具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的3-10元杂环烷基”是指具有3-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组N、S和O的杂原子的饱和或部分饱和的环状基团。其可以是单环，也可以是双环形式，例如桥环或螺环形式。具体的实例可以为氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、四氢-2H-吡喃基、哌啶基、四氢呋喃基、吗啉基和吡咯烷基等。
如本文所用，术语“C6-C10芳基”是指具有6-10个碳原子的芳基，例如，苯基或萘基等类似基团。
如本文所用，术语“具有1-3个选自下组N、S和O的杂原子的5-10元杂芳基”指具有5-10个原子的且其中1-3个原子为选自下组N、S和O的杂原子的环状芳香基团。其可以是单环，也可以是稠环形式。具体的实例可以为吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-***基以及(1,2,4)-***基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异恶唑基、噻唑基、恶唑基等。
本发明所述的基团除非特别说明是“取代的或未取代的”，否则本发明的基团均可被选自下组的取代基所取代：卤素、腈基、硝基、羟基、氨基、C1-C6烷基-胺基、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、卤代C1-C6烷基、卤代C2-C6烯基、卤代C2-C6炔基、卤代C1-C6烷氧基、烯丙基、苄基、C6-C12芳基、C1-C6烷氧基-C1-C6烷基、C1-C6烷氧基-羰基、苯氧羰基、C2-C6炔基-羰基、C2-C6烯基-羰基、C3-C6环烷基-羰基、C1-C6烷基-磺酰基等。
如本文所用，“卤素”或“卤原子”指F、Cl、Br、和I。更佳地，卤素或卤原子选自F、Cl和Br。“卤代的”是指被选自F、Cl、Br、和I的原子所取代。
除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
如本文所用，术语“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1H-吲唑与2H-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。
如本文所用，术语“溶剂合物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。
如本文所用，术语“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
活性成分
如本文所用，“本发明化合物”指式(A)所示的化合物，并且还包括及式(A)化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
如本文所用，“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
制备方法
本发明化合物可根据本领域常用方法制备得到。也可按照本发明如下给出的方案路线，采用常规的合成条件(例如反应温度或反应时间等)制备得到。其中，反应温度和反应时间可由本领域技术人员根据该反应的常规反应条件确定。反应温度可以为-78℃～回流；较佳地，为-20℃～回流或0～100℃等。反应时间可以为0.1小时～3天或0.1小时～24小时或0.1小时～5小时等更短的时间。
方案一：
Figure BDA0001531209650000151
(1)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物I-1进行硝化反应一段时间，从而形成化合物II-1；
(2)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物II-1进行还原反应一段时间，从而形成化合物III-1；
(3)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物III-1与化合物IV-1进行反应一段时间，从而形成化合物V-1；
(4)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物V-1进行水解反应一段时间，从而形成化合物VI-1；和
(5)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VI-1与化合物VII-1进行反应一段时间，从而形成化合物VIII-1；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前。
方案二和方案三：
Figure BDA0001531209650000152
(i)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物I-2进行水解反应一段时间，从而形成化合物II-2；
(ii)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物II-2与苯胺化合物进行反应一段时间，从而形成化合物III-2；
(iii)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物III-2与化合物IV-2进行反应一段时间从而形成化合物V-2；
(iv)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物V-2进行水解反应一段时间，从而形成化合物VI-2；
(v)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VI-2与HNR1R2进行反应一段时间，从而形成化合物VII-2；和
(vi-1)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VII-2和羟胺进行反应一段时间，从而形成化合物VIII-2；或
(vi-2)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VII-2与氟化试剂进行反应一段时间，从而形成化合物IX-2；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前。
在另一优选例中，所述氟化试剂为可以将羰基转化为二氟亚甲基的亲核氟化试剂，例如DAST、BAST、石川试剂1-氟吡啶四氟硼酸盐等常规试剂。
方案四：
Figure BDA0001531209650000161
(a)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物I-3与甲基肼进行反应一段时间，从而形成化合物II-3；
(b)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物II-3与进行溴化反应一段时间，从而形成化合物III-3；
(c)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物III-3进行反应一段时间，从而形成化合物IV-3；
(d)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物IV-3进行胺化反应一段时间，从而形成化合物V-3；
(e)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物V-3与磺酰氯进行反应一段时间，从而形成化合物VI-3；
(f)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VI-3与HNR1R2进行反应一段时间，从而形成化合物VII-3；
(g)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VII-3进行水解反应一段时间，从而形成化合物VIII-3；
(h)在惰性溶剂中，在一定温度下，将化合物VIII-3与苯胺进行反应一段时间，从而形成化合物IX-3；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义同前。
方案五：
Figure BDA0001531209650000171
(a’1)在惰性溶剂中，将化合物IX-3进行水解反应，从而形成化合物X-3；
(a’2)在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物XI-3；
(a’3)在惰性溶剂中，将化合物XI-3进行还原反应，从而形成化合物XII-3；
(a’4)在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物IV-1进行反应，从而形成化合物XIII-3；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Z和M的定义同前。
方案六：
Figure BDA0001531209650000172
(e1)在惰性溶剂中，将化合物I-5与氟化试剂进行反应，从而形成化合物II-5；
(e2)在惰性溶剂中，将化合物II-5进行水解反应，从而形成化合物III-5；
(e3)在惰性溶剂中，将化合物III-5与R1R2NH进行反应，从而形成化合物IV-5；
(e4)在惰性溶剂中，将化合物IV-5进行水解反应，从而形成化合物V-5；
(e5)在惰性溶剂中，将化合物V-5与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物VI-5；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5和R6的定义同前。
中间体
适用于制备本发明化合物的中间体包括如下化合物：
Figure BDA0001531209650000181
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前。
在另一优选例中，所述式V-1所示的中间体为
Figure BDA0001531209650000182
在另一优选例中，所述式VI-1所示的中间体为
Figure BDA0001531209650000183
所述式V-1化合物可由式I-1化合物为起始原料制备得到。具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000184
各式中，R1、R2、R3和Z的定义同前。
所述式VI-1化合物可由式I-1化合物为起始原料制备得到。具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000191
各式中，R1、R2、R3和Z的定义同前。
所述式VII-3化合物可由式I-1化合物为起始原料制备得到。具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000192
各式中，R1、R2和R3的定义同前。
所述式VIII-3化合物可由式I-3化合物为起始原料制备得到。具体地制备方法可包括如下步骤：
Figure BDA0001531209650000193
各式中，R1、R2和R3的定义同前。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的乙型肝炎病毒(HBV)的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗(稳定、减轻或治愈)乙型肝炎病毒感染或用于预防和/或治疗(稳定、减轻或治愈)乙型肝炎病毒相关疾病(例如，乙型肝炎、进展性肝纤维化、导致肝硬化的炎症和坏死、末期肝病、乙基肝癌)。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(
Figure BDA0001531209650000201
)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和***胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物(例如抗-HBV剂)联合给药。
联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物(例如抗-HBV剂)。该其他药学上可接受的化合物(例如抗-HBV剂)中的一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)可与本发明的化合物同时、分开或顺序地用于预防和/或治疗HBV感染或HBV相关疾病。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
本发明的主要优点包括：
本发明的化合物结构新颖且具有优异的抗乙肝病毒感染的作用。
本发明的化合物可有效抑制乙肝病毒核衣壳的组装，从而有效抑制乙肝病毒。
本发明的化合物对正常细胞的毒性非常低。
本发明化合物以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染。
本发明化合物以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗乙型肝炎病毒相关疾病(例如，乙型肝炎、进展性肝纤维化、导致肝硬化的炎症和坏死、末期肝病、乙基肝癌)。
本发明化合物显示出优于参比化合物的溶解性质及良好的药代动力学性质。
下面结合具体实施，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。本发明实施例中所用原料或仪器，若非特别说明，均市售可得。
实施例1：化合物8的合成
Figure BDA0001531209650000221
步骤1：化合物2的合成
Figure BDA0001531209650000222
将底物1(1.0g)溶于乙酸酐(2mL)，将体系温度降至0度，然后将发烟硝酸(0.5mL)加入反应体系，0度反应3h，然后将碘甲烷(668mg)加入反应体系，室温下反应3h。TLC检测原料反应完全，将水(20mL)加入反应体系，乙酸乙酯(3*30mL)萃取，有机相干燥、旋干，粗品柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)，得产物2(400mg)。MS(M+1＝219)。
步骤2：化合物3的合成
Figure BDA0001531209650000223
将底物2(0.4g)溶于乙酸(5mL)，室温下将铁粉(1.8g)加入反应体系，室温反应3h，TLC检测原料反应完全，将乙酸旋干后，调节残留物的pH值至9-10，乙酸乙酯(3*25mL)萃取，有机相干燥、旋干，粗品柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)，得产物3(200mg)。MS(M+1＝189)。
步骤3：化合物5的合成
Figure BDA0001531209650000224
将底物3(0.2g)溶于乙腈(8mL)，室温下将三乙胺(0.6g)加入反应体系，然后将化合物4(0.35g)加入反应体系，加热回流8h，TLC检测原料反应完全，有新点生成，向反应体系中加水(20mL),乙酸乙酯(3*25mL)萃取，有机相干燥、旋干，粗品柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)，得产物5(80mg)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.33(d,J＝6.8Hz,3H)，3.85(s,3H),3.86(s,3H),3.95-4.02(m,1H),4.80(d,J＝9.2Hz,1H)，6.19(s,1H),6.90(s,1H).
步骤4：化合物6的合成
Figure BDA0001531209650000231
将底物5(80mg)溶于四氢呋喃(2mL)，甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)中，然后将氢氧化锂(0.21g)加入反应体系，室温下反应8h，TLC检测原料有少量剩余，有新点生成。将水(20mL)加入反应体系，用1N盐酸调pH值至3-4，二氯甲烷(3*25mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得黄色固体化合物6(50mg)。MS(M+1＝350)。
步骤5：化合物8的合成
Figure BDA0001531209650000232
将底物6(50mg)溶于DMF(36mL)中，然后将化合物7(20mg)，DIPEA(74mg)，加入反应体系，0度下将HATU(78mg)加入反应体系约30度下反应5h，TLC检测原料反应完全，有新点生成。将饱和食盐水20mL加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品高效液相(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得粉红色固体化合物8(5mg)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.16(d,J＝6.8Hz,3H)，3.76(s,3H),3.92-3.99(m,1H)，7.52-7.57(m,1H),7.67(s,1H),7.94-7.98(m,1H),8.16-8.18(m,1H),8.49(br,1H)10.68(s,1H).MS(M+1＝468)。
实施例2 化合物8a的合成
Figure BDA0001531209650000233
根据步骤5，只需将化合物7用化合物7a代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物8a。MS(M+1＝461)。
实施例3 化合物8b的合成
Figure BDA0001531209650000241
根据步骤5，只需将化合物7用化合物7b代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物8b。MS(M+1＝457)。
实施例4 化合物8c的合成
Figure BDA0001531209650000242
根据步骤5，只需将化合物7用化合物7c代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物8c。MS(M+1＝477)。
实施例5 化合物8d的合成
Figure BDA0001531209650000243
根据步骤5，只需将化合物7用化合物7d代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物8d。MS(M+1＝495)。
实施例6 化合物18的合成
Figure BDA0001531209650000251
步骤11：化合物12的合成
Figure BDA0001531209650000252
将底物11(0.2g)溶于四氢呋喃(2mL)，甲醇(0.5mL)和水(0.5mL)中，然后将氢氧化锂(0.24g)加入反应体系，室温下反应8h，TLC检测原料有少量剩余，有新点生成。将水(20mL)加入反应体系，用1N盐酸调pH值至3-4，二氯甲烷(3*25mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得白色固体化合物12(0.16g)。MS(M+1＝160)。
步骤12：化合物13的合成
Figure BDA0001531209650000253
将底物12(120mg)溶于DMF(3mL)中，然后将化合物12a(112mg)，DIPEA(292mg)，加入反应体系，0度下将HATU(372mg)加入反应体系，约30度下反应5h，TLC检测原料反应完全，有新点生成。将饱和食盐水(20mL)加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得黄色固体化合物13(90mg)。MS(M+1＝278)。
步骤13：化合物15的合成
Figure BDA0001531209650000254
将底物13(90mg)溶于DCM(3mL)中，将体系温度降至0度，然后将化合物14(112mg)的二氯甲烷溶液加入反应体系，在0度下搅拌30min，然后将三氯化铝(144mg)分批加入反应体系，0度反应3h，TLC检测原料反应完全，有新点生成。将反应液倒入冰水(10mL)中，二氯甲烷(3*25mL)萃取，有机相用饱和食盐水20mL洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：8)分离得黄色固体化合物15(55mg)。MS(M+1＝378)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.38-1.42(m,3H)，4.02(s,3H),4.35-4.41(m,1H)，7.19-7.21(m,1H),7.67-7.72(m,1H),7.92(s,1H),8.06-8.08(m,1H),8.66(br,1H).
步骤14：化合物16的合成
Figure BDA0001531209650000261
将底物15(50mg)溶于四氢呋喃(1mL)和乙醇(3mL)中，然后将体系内加入氢氧化钠(16mg)水溶液，30度反应0.5h，TLC检测原料反应完全，有新点生成。将水(20mL)加入反应体系，用1N盐酸调pH值至3-4，二氯甲烷(3*25mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，得黄色固体化合物16(0.16g)。
步骤15：化合物17的合成
Figure BDA0001531209650000262
将底物16(25mg)溶于DMF(2mL)中，然后将叔丁胺(6.8mg)，DIPEA(74mg)，加入反应体系，0度下将HATU(37mg)加入反应体系，约30度下反应5h，TLC检测原料反应完全，有新点生成。将饱和食盐水(20mL)加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经高效液相柱(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得淡红色固体化合物17(5mg)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.41(s,9H)，4.00(s,3H),7.19-7.23(m,1H),7.69-7.77(m,1H),8.04-8.06(m,1H),8.54(br,1H)8.68(s,1H).Ms(ESI)m/z＝403(M-1)。
步骤16：化合物18的合成
Figure BDA0001531209650000263
将底物17(15mg)溶于乙醇(2mL)中，然后将盐酸羟胺(13mg)的加入反应体系，将反应温度升至60度反应10h。旋干反应液，用乙腈将残留固体溶解后，高效液相反相分离得到化合物18-1(1.8mg)，18-2(2.0mg)。18-1的1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.42(s,9H)，3.96(s,3H),6.54-6.57(m,1H),7.16-7.20(m,1H),7.69-7.72(m,1H),8.02(s,1H)8.53(d,J＝8.0Hz,1H).18-2的1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.42(s,9H)，3.96(s,3H),6.54-6.57(m,1H),7.16-7.20(m,1H),7.69-7.72(m,1H),8.02(s,1H)8.53(d,J＝8.0Hz,1H).
实施例7 化合物18a的合成
Figure BDA0001531209650000271
根据步骤11-15制备化合物17a，不同点在于用异丙胺代替叔丁胺。
根据步骤16，只需将化合物17用化合物17a代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物18a。
实施例8 化合物18b的合成
Figure BDA0001531209650000272
根据步骤11-15制备化合物17b，不同点在于用乙胺代替叔丁胺。
根据步骤16，只需将化合物17用化合物17b代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物18b)。
实施例9 化合物18c的合成
Figure BDA0001531209650000273
根据步骤11-15制备化合物17c，不同点在于用三氟异丙胺(CH3(CF3)CHNH2)代替叔丁胺。
根据步骤16，只需将化合物17用化合物17c代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物18c。
实施例10 化合物18d的合成
Figure BDA0001531209650000281
根据步骤11-15制备化合物17d，不同点在于用环丙胺代替叔丁胺。
根据步骤16，只需将化合物17用化合物17d代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物18d。
实施例11 化合物19的合成
Figure BDA0001531209650000282
步骤19-A
Figure BDA0001531209650000283
化合物19-1(1g，5.8mmol，1equiv)溶解在DCM(30mL)中，草酰氯单乙酯(2g，14.5mmol，2.5euqiv)于Ar保护和0度下滴加入上述溶液中。AlCl3(3.9g，29mmol，5euqiv)加入反应液中升至室温搅拌过夜。在冰浴下向反应液中滴加水(2.25mL)和EtOAc(7.5mL)。反应液倒入冰水，并以稀盐酸稀释，以EtOAc提取。有机相干燥浓缩后MPLC(庚烷:EtOAc＝50:50)得棕色油状物LW107-44-56(125mg)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.80(s,1H),4.37(q,J＝7.1Hz,2H),3.95(s,3H),3.91(s,3H),1.40(t,J＝7.2Hz,3H).
步骤19-B
Figure BDA0001531209650000284
19-2(100mg，0.38mmol，1equiv)和DAST(1.2g，7.3mmol，20equiv)溶解在DCM(5mL)中，氩气保护在40度下搅拌过夜。反应液倒入NaHCO3饱和水溶液并以DCM提取，有机相经饱和食盐水洗后干燥，由制备TLC(庚烷：EtOAc＝3：1)得到棕色油状-固体LW107-44-73(35mg)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.04(s,1H),4.35(q,J＝7.1Hz,2H),3.90(d,J＝7.9Hz,6H),1.34(t,J＝7.1Hz,3H).
步骤19-C
Figure BDA0001531209650000291
19-3(60mg，0.2mmol，1equiv)，LiOH H2O(9mg,0.2mmol,1equiv)在5度下在Dioxane：H2O(5mL：1mL)中搅拌2.5h。反应液加水和EtOAc分液，水相在冰浴下以浓盐酸酸化至pH 2-3并以EtOAc提取后以Na2SO4干燥，浓缩得到白色固体LW107-44-83(40mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.53(s,1H),3.85(s,3H),3.80(s,3H).MS(ESI+):m/z calcd.for[M+H]+:268,found:268.
步骤19-D
Figure BDA0001531209650000292
19-4(1235mg，4.63mmol，1equiv)，叔丁胺(1350mg，18.5mmol，4equiv)，DIPEA(3g，23.2mmol，5euqiv)溶解在DMF(60mL)中。HATU(3581mg，9.26mmol，2equiv)在0度下加入上述反应液，并恢复至室温过夜。反应液加入食盐水和EtOAc分液，有机相以食盐水清洗浓缩。由MPLC(庚烷：EtOAc＝88：21-82：18)得到白色固体LW107-44-87(960mg)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.45(s,1H),4.08(d,J＝1.7Hz,6H),1.61(s,9H).MS(ESI+):m/z calcd.for[M+H]+:323,found:323.
步骤19-E
Figure BDA0001531209650000293
19-5(300mg，0.93mmol，1equiv)和LiOH H2O(313mg，7.45mmol，8equiv)在MeOH：THF：水(3：12：3mL)中室温搅拌过夜。反应液加水和EtOAc分液，水相在冰浴下以浓盐酸酸化至pH 2-3并以EtOAc提取后以Na2SO4干燥，浓缩得到白色固体LW107-68-5(258mg)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.05(s,1H),8.00(s,1H),7.36(s,1H),3.84(s,3H),1.32(s,9H).MS(ESI+):m/z calcd.for[M+H]+:309,found:309.
步骤19-F
Figure BDA0001531209650000301
19-6(80mg，0.26mmol，1equiv)，3-氟-4-氰基-苯胺(71mg，0.52mmol，2equiv)和TEA(131mg，1.3mmol，5equiv)溶解在DCM(5mL)。TBTU(167mg，0.52mmol，2equiv)在0度下加入并恢复至室温搅拌过夜。反应液加8％盐酸酸化并以DCM分液，有机相以NaHCO3溶液清洗，浓缩MPLC(Heptane：EtOAc＝70：30)得粗品(81mg)。制备LC(水:ACN＝45:55,C-18,Det＝260nm,峰＝50min,v＝17ml/min)冻干得白色固体19(25mg)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.11(d,J＝8.5Hz,1H),7.64–7.40(m,3H),7.36(s,1H),6.47(s,1H),3.95(s,3H),1.46(s,9H).
实施例13 化合物19b的合成
Figure BDA0001531209650000302
根据步骤19-A-19-E制备化合物19-6b，不同点在于用乙胺代替叔丁胺。
根据步骤19-F的合成，只需将化合物19-6用化合物19-6b代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物19b。
实施例14 化合物19c的合成
Figure BDA0001531209650000303
根据步骤19-A-19-E制备化合物19-6c，不同点在于用三氟异丙胺(CH3(CF3)CHNH2)代替叔丁胺。
根据步骤19-F的合成，只需将化合物19-6用化合物19-6c代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物19c。
实施例15 化合物19d的合成
Figure BDA0001531209650000311
根据步骤19-A-19-E制备化合物19-6d，不同点在于用环丙胺代替叔丁胺。
根据步骤19-F的合成，只需将化合物19-6用化合物19-6d代替即可，其他条件不变，经高效液相色谱分离得目标产物19d。
实施例16 化合物20的合成
Figure BDA0001531209650000312
步骤18：化合物22的合成
Figure BDA0001531209650000313
将化合物甲基肼(10g)溶于甲醇(20mL)和水(10mL)中，降温至0度，搅拌15min后然后将化合物21(12g)滴加入反应体系，加热至70度反应10h，然后将体系温度回复至室温，反应12h，抽滤，滤饼用水(5mL)洗涤，得22淡黄色固体5g，MS(M+1＝157)。
步骤19：化合物23的合成
Figure BDA0001531209650000314
将底物22(5g)溶于DMF(10mL)，室温下将三氯氧磷(10mL)加入反应体系，升温至100度，反应5h，将反应体系倒入冰水中，乙酸乙酯(3*30mL)萃取，有机相干燥、旋干，粗品柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)，得产物23(2g)。MS(M+1＝219)。
步骤20：化合物24的合成
Figure BDA0001531209650000321
将底物23(2g)溶于乙腈(10mL)，室温下将NBS(4g)加入反应体系，然后将体系温度升至60度，向反应体系中加水(20mL),乙酸乙酯(3*25mL)萃取，有机相干燥、旋干，粗品柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)，得产物5(1g)。MS(M+1＝299)。
步骤21：化合物25的合成
Figure BDA0001531209650000322
将底物24(1g)溶于二氯甲烷(10mL)，然后将氨水(5mL)加入反应体系，室温下反应2h，将水(20mL)加入反应体系，用1N盐酸调pH值至3-4，二氯甲烷(3*25mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：5)分离得黄色固体化合物25(300mg)。MS(M+1＝234)。
步骤22：化合物26的合成
Figure BDA0001531209650000323
将底物25(300mg)溶于二氯甲烷(3mL)中，然后将磺酰氯(1mL)，加入反应体系，40度下反应5h，将饱和食盐水20mL加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物26(150mg)。MS(M+1＝332)。
步骤23：化合物27的合成
Figure BDA0001531209650000324
将底物26(150mg)溶于乙腈(5mL)中，然后将三乙胺(0.1mL)加入反应体系，然后将三氟甲基乙胺盐酸盐(0.5g)加入反应体系，80度下反应5h，将饱和食盐水20mL加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物27(120mg)。MS(M+1＝409)。
步骤24：化合物28的合成
Figure BDA0001531209650000331
将底物27(120mg)溶于四氢呋喃(2mL)，水(0.5mL)和甲醇(0.5mL)中，然后将一水合氢氧化锂(100mg)加入反应体系，然后40度下反应8h，用1N盐酸调pH至3-4，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物27(80mg)。MS(M+1＝395)。
步骤25：化合物20的合成
Figure BDA0001531209650000332
将底物28(80mg),化合物29(50mg)和DIPEA(70mg)溶于DMF(5mL)中，然后将HATU(130mg)加入反应体系，然后40度下反应8h，加水(20mL),乙酸乙酯(3*20mL)萃取，有机相无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物20(10mg)。
实施例17 化合物20b的合成
Figure BDA0001531209650000333
根据步骤25，将化合物29用29b取代，其他不变，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物20b(8mg)。
实施例18 化合物20c的合成
Figure BDA0001531209650000341
根据步骤25，将化合物29用29c取代，其他不变，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物20c(11mg)。
实施例19 化合物30a的合成
Figure BDA0001531209650000342
步骤26:化合物32的合成
Figure BDA0001531209650000343
将底物31(0.8g)溶于四氢呋喃(12mL)，甲醇(3mL)和水(3mL)中，然后将体系内加入氢氧化钠(0.44g)，55度反应1h，TLC检测原料有反应完全，有新点生成。1N盐酸调pH值至3-4，水20mL加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干，粗品经柱层析分离得黄色固体32(0.5g)。
步骤27:化合物33的合成
Figure BDA0001531209650000344
将底物32(100mg)溶于DMF(3mL)中，然后将4-F-3-氰基-苯胺(40mg)，DIPEA(84mg)，加入反应体系，0度下将TBTU(78mg)加入反应体系，室温(30度)反应5h，TLC检测原料有反应完全，有新点生成。饱和食盐水20mL加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，旋干，粗品柱层析得黄色固体33(100mg)。
步骤28:化合物34的合成
Figure BDA0001531209650000351
将底物33(0.3g)溶于乙酸(5mL)，室温下将铁粉(1.0g)加入反应体系，室温反应3h，TLC检测原料反应完全，将乙酸旋干调pH值至9-10，乙酸乙酯(3*45mL)萃取，干燥旋干，柱层析得产物0.15g。
步骤29:化合物30a的合成
Figure BDA0001531209650000352
将化合物34(80mg)和化合物34a(63mg)溶于乙腈(3mL),然后将三乙胺(83mg)，将反应体系升至85度反应8h，将水(10mL)加入反应体系，乙酸乙酯(3*20mL)萃取，无水硫酸钠干燥，将有机相旋干，高效液相制备得白色固体(8mg)。Ms/ESI＝411.6(M-1)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:1.11(d,J＝6.4Hz，6H)，3.41-3.49(m,1H),3.74(s,3H)，6.93(d,J＝7.2Hz，1H),7.06(s,1H),7.52-7.56(m,1H),7.96-8.00(m,1H),8.19-8.21(m,1H),8.76(s,1H)，10.31(s,1H)Ms/ESI＝411.6(M-H).
实施例20 化合物30b的合成
Figure BDA0001531209650000353
根据步骤29，将化合物34a用34b取代，其他不变，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物30b(11mg)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.33(s,1H),8.94(s,1H),8.20(dd,J＝5.8,2.6Hz,1H),7.99(ddd,J＝9.1,4.8,2.7Hz,1H),7.60(s,1H),7.54(t,J＝9.1Hz,1H),7.12(s,1H),4.72(d,J＝6.0Hz,2H),4.19(d,J＝6.1Hz,2H),3.75(s,3H),1.65(s,3H).
实施例21 化合物30c的合成
Figure BDA0001531209650000361
根据步骤29，将化合物34a用34c取代，其他不变，柱层析(正庚烷：乙酸乙酯＝1：3)分离得黄色固体化合物30c(11mg)。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:10.33(s,1H),8.94(s,1H),8.20(dd,J＝5.8,2.6Hz,1H),7.99(ddd,J＝9.1,4.8,2.7Hz,1H),7.60(s,1H),7.54(t,J＝9.1Hz,1H),7.12(s,1H),4.72(d,J＝6.0Hz,2H),4.19(d,J＝6.1Hz,2H),3.75(s,3H),1.65(s,3H).
根据本发明化合物8、18、19、20和30a的合成方法，合成了表1中的其它化合物。
表1
Figure BDA0001531209650000362
Figure BDA0001531209650000371
Figure BDA0001531209650000381
Figure BDA0001531209650000391
Figure BDA0001531209650000401
Figure BDA0001531209650000411
Figure BDA0001531209650000421
Figure BDA0001531209650000431
Figure BDA0001531209650000441
生物学实施例--抗-HBV活性实验
实验一：体外抗乙肝病毒核衣壳组装活性试验方法
主要试剂和原料：
C150蛋白为药明康德公司表达和纯化；
Figure BDA0001531209650000442
购自赛默飞世尔科技公司。
蛋白荧光标记：
向96孔板每孔加入150μL 2％w/v脱脂牛奶，室温孵育2小时。吸掉脱脂牛奶，用去离子水清洗后烘干，室温保存。将C150蛋白(每管3毫克)用5mlHitrap脱盐柱脱盐。向每管脱盐后的C150蛋白加入50mM
Figure BDA0001531209650000447
荧光染料20μl混合均匀，4℃避光孵育过夜。用Sephadex G-25凝胶过滤去除未与C150结合的荧光染料。计算C150的荧光标记效率，公式如下：
Figure BDA0001531209650000443
Figure BDA0001531209650000444
Figure BDA0001531209650000445
其中，
Figure BDA0001531209650000446
表示荧光标记的浓度；
[C150Bo]表示荧光标记蛋白的浓度；
A504表示波长504nM的吸光值；
A280表示波长280nM的吸光值；
M-1表示摩尔浓度的倒数。
化合物稀释：
将化合物母液用DMSO稀释到6mM，再用50mM HEPES稀释到600μM，然后用10％DMSO/50mM HEPES进一步3倍系列稀释8个浓度。
将C150Bo用50mM HEPES稀释到2μM。取37.5μL C150Bo和2.5μL各个浓度的化合物加入到96孔反应板中混匀，室温孵育15分钟。取10μl的750mM NaCl/50mM HEPES加入到反应孔中，NaCl的终浓度为150mM。
0％蛋白组装对照孔，加入10μL的50mM HEPES，NaCl的终浓度为0mM。
100％蛋白组装对照孔，加入10μL的5M NaCl/50mM HEPES，NaCl的终浓度为1M。
DMSO终浓度为0.5％，化合物最高终浓度为30μM，C150Bo终浓度为1.5μM。室温孵育1小时。测量荧光信号(激发光485nm；发射光535nm)。
数据分析
％蛋白组装＝【1-(样品荧光值–1M NaCl荧光值)/(0M NaCl荧光值-1M NaCl荧光值)】×100.
IC50值通过prism软件计算，方程如下：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10((LogIC50-X)*HillSlope))；
其中，
X表示浓度的对数值，Y表示效应值，Y从底部起始以S型拟合至顶部；
Bottom表示表示曲线的底部；
Top表示Top表示曲线的顶部；
HillSlope表示：曲线的最大斜率的绝对值。
实验二：在HepG2.2.15细胞的抗乙肝病毒活性测定
主要试剂：
QIAamp 96DNA血液试剂盒(12)(Qiagen，货号51162)；
FastStart Universal Probe Master(Roche，货号04914058001)；
Cell–titer Glo检测试剂(Promega，货号G7573)。
化合物稀释：体外抗HBV活性实验和细胞毒性实验所有化合物均3倍系列稀释，8个浓度。受试化合物最终起始浓度为30μM，参照化合物GLS4最终起始浓度为1μM，DMSO终浓度为0.5％。
种HepG2.2.15细胞(4×104细胞/孔)到96孔板，在37℃，5％CO2培养过夜。第二天，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液到培养孔中。第五天，吸除培养孔中旧的培养液，加入含不同浓度化合物的新鲜培养液。
第八天，收集培养孔中的上清，用于提取上清中的HBV DNA，qPCR检测HepG2.2.15上清中的HBV DNA含量。收集上清后，再向培养孔中补加培养基和Cell-titer Glo试剂，酶标仪检测各孔的化学发光值。
活性计算公式如下:
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10((LogIC50-X)*HillSlope))；
其中，
X表示浓度的对数值，Y表示效应值，Y从底部起始以S型拟合至顶部；
Bottom表示曲线的底部；
Top表示曲线的顶部；
HillSlope表示：曲线的最大斜率的绝对值。
实验三：细胞毒性测定
待测化合物的细胞毒性是使用HepG2细胞进行测试的，将这些细胞在待测化合物存在下孵育4天。使用刃天青测定来评估细胞活力。
上述实验的结果在表2中展示。
表2 化合物活性数据
Figure BDA0001531209650000461
Figure BDA0001531209650000471
表中：a1表示IC50(μM)在0.001～10之间；
a2表示IC50(μM)在10～100之间；
a3表示IC50(μM)在100～10000之间；
b1表示EC50(μM)在0.001～1之间；
b2表示EC50(μM)在1～100之间；
其中，对照化合物为：
Figure BDA0001531209650000472
(参见WO2014184350A1)。
另外，经过常规的溶解度实验和药代动力学实验证明，与上述对照化合物相比，本发明的化合物的溶解性和药代动力学性能均优于对照化合物。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (4)

1.一种如式A所示的化合物，或其药学上可接受的盐，
Figure DEST_PATH_IMAGE002
A
其中，
所述化合物具有选自下组的结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE004
。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，
方法(a)：所示式A化合物为式VIII-1所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure DEST_PATH_IMAGE006
(a1) 在惰性溶剂中，将化合物III-1与化合物IV-1进行反应，从而形成化合物V-1；
(a2) 在惰性溶剂中，将化合物V-1进行水解反应，从而形成化合物VI-1；
(a3) 在惰性溶剂中，将化合物VI-1与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物VIII-1；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和Z的定义同前；
或方法(a’)：所述式A化合物为式XIII-3所示的化合物，所述方法包括步骤：
Figure DEST_PATH_IMAGE008
(a’1) 在惰性溶剂中，将化合物IX-3进行水解反应，从而形成化合物X-3；
(a’2) 在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物VII-1进行反应，从而形成化合物XI-3；
(a’3) 在惰性溶剂中，将化合物XI-3进行还原反应，从而形成化合物XII-3；
(a’4) 在惰性溶剂中，将化合物X-3与化合物IV-1进行反应，从而形成化合物XIII-3；
各式中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、Z和M的定义同前。
3.一种药物组合物，其特征在于，包含(1)如权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐；(2)药学上可接受的载体。
4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或如权利要求3所述的药物组合物用于制备预防和/或治疗乙型肝炎病毒感染的药物的用途。
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