CN108192945B - 一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒 - Google Patents

一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒。本发明提供的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；所述外周血Treg为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。本发明提供的试剂盒操作简单、方便实用，可以预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险，为降低单倍体相合造血干细胞移植术后并发症，优化单倍体相合造血干细胞移植术研究应用奠定了基础。

Description

一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的 试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险的试剂盒。
背景技术
血液***恶性疾病复发率高，长期生存率低，有相当比例的患者对于普通化疗不敏感。造血干细胞移植术为根治以上恶性疾病带来了希望。但是，供者选择是该治疗措施面临的最大问题。由于目前我国实行计划生育的基本国策，患者想要找到人类白细胞抗原(HLA)相合的供者存在很大的困难，研究结果显示仅有不到10％的患者能够找到HLA全相合的供者。而且，寻找非血缘供者的周期长，骨髓库志愿者库存容量不足，反悔率高等不利因素，严重限制了全相合造血干细胞移植术的开展。而单倍体相合造血干细胞移植术仅需要HLA单倍体相合即可开展移植，这极大地拓宽了供者来源，缓解了供者来源紧张的困难局面。从理论上说，几乎每个患者都能找到至少一个单倍体供者。此外，单倍体相合的移植物具有较强移植物抗肿瘤效应(GVL)，有利于抑制原发肿瘤复发。但是，正如一个硬币具有两面，单倍体相合造血干细胞移植术也具有显著的不足。因为移植物和受者并非HLA完全匹配，移植后常常引起更为严重的免疫排斥反应，导致了较严重的并发症如肺部感染、造血重建和免疫重建困难等等。其中，最为严重的是急性移植物抗宿主病(aGVHD)。
aGVHD是移植物中的免疫细胞(主要是T细胞)针对受者靶器官发生的免疫攻击活动。aGVHD发生的病理过程可大致分为4个阶段。首先，由预处理造成的组织损伤而引起抗原释放及炎症趋化因子的表达；然后，抗原呈递细胞活化；接下来，供者T细胞接受呈递的抗原，发生活化；最终，免疫细胞和细胞因子风暴对靶器官造成损伤，引起的皮肤、肺脏、肝脏及肠等多脏器损伤。而靶器官的损伤可进一步释放抗原，进入一个渐进的恶性循环。开展单倍体相合造血干细胞移植术时，移植物和受者之间的HLA不完全匹配，aGVHD的发生率更高，疾病程度更加严重。虽然目前临床采取了激素治疗、免疫抑制剂治疗和间充质干细胞输入等多种方案干预，但是aGVHD仍然是影响单倍体相合造血干细胞移植后患者生存率及生活质量的主要因素。一旦患者发生aGVHD，将严重影响移植后造血重建和免疫重建，甚至影响病人生命。目前aGVHD相关死亡率占移植后死亡的50％以上。为此，寻求有效的aGVHD预先诊断技术，提早防范aGVHD发生的风险，是单倍体相合造血干细胞移植术研究的热点之一。
调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫调节能力的T细胞，一般认为Treg是由初始CD4+T细胞在转化生长因子(TGF-β)的诱导下分化为而来的，主要包括天然产生的自然调节性T细胞(nTreg)和诱导产生的适应性调节性T细胞(iTreg)等多个亚群。前者产生于胸腺，以CD4+CD25+Foxp3+Treg为主，后者是成熟T细胞在某些条件下诱导产生，是Foxp3非依赖性的亚群。CD4+CD25+的Treg于1995年首次被报道，研究人员发现其在人类和鼠类的胸腺、淋巴组织及外周血中均有分布。而后Fontenot等研究发现，胞内表达的叉头样转录因子(Foxp3)是Treg的重要特征性标志，当Foxp3表达逐渐升高时，CD45RA+FoxP3low的幼稚Tregs也逐渐发育为CD45RA-FoxP3high的活化Tregs。进一步研究发现CD4+CD25+Foxp3+的Treg亚群免疫功能较强，可参与维持机体免疫功能的平衡，诱导免疫耐受。
因为Treg具有强大免疫抑制能力，且和免疫性疾病的发生进展密切相关，相关领域的研究人员和临床工作者已经尝试分析Treg的构成和功能，来判Treg和断类风湿性关节炎和***性红斑狼疮疾病进展之间的联系，并取得了不错的效果。Ponchel及同事研究后发现，患者外周血中Treg和
Figure BDA0001544805840000021
T细胞等亚群的变化可以预测类风湿性关节炎患者对甲氨蝶呤的反应性。而Janssen等则报道了Treg亚群在预测血清反应阳性的关节炎患者的预后时具有重要价值。He等则发现***性红斑狼疮的患者接受白细胞介素2治疗后，其外周血中的Treg亚群也发生了改变，提示活动性病变减少。
与类风湿性关节炎和***性红斑狼疮相似，aGVHD本质上也是一类免疫因素介导的疾病，因此Treg在aGVHD发生发展中的作用日益受到关注。Rieger等通过回顾分析发现患者肠粘膜的Foxp3+的Treg减少会导致aGVHD发生风险增高。同期，另一研究小组的动物实验研究结果表明：CD4+CD25+CD62L+的Treg亚群可以减少小鼠的致死性aGVHD。但是，这些结果虽然令人振奋，但是大都基于临床回顾性资料分析和动物实验得出的结果。因此，多个医疗中心观察了移植物内Treg和移植后患者体内Treg与造血干细胞移植后aGVHD发生发展之间的联系。令人遗憾的是，现有的结论并不统一，甚至自相矛盾。Zhai等报道移植后患者体内CD4+CD25+Treg亚群较高有助于降低II度以上aGVHD的发生率。而Magenau小组声称，只有CD4+CD25+Foxp3+的Treg亚群和aGVHD的发生相关。更晚一些发表的Rosenzwajg小组的结果则表明，移植物中的Treg不能预测aGVHD。更重要的是，相关结果均为全相合造血干细胞移植病例的结果。而单倍体相合造血干细胞移植具有预处理方案更加复杂、供者细胞来源更加多变、aGVHD发生率和致死率更高的特点，全相合病例的研究结果不能直接套用到单倍体相合病例中，目前相关的研究尚属空白。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险的试剂盒。
本发明提供的试剂盒，包括用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B；
所述外周血Treg细胞为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞。
上述健康人指给患者输入的外周血的来源人，为健康人接受动员剂后的血。
上述动员剂为粒细胞集落刺激因子；
上述试剂盒中，所述试剂盒还包括记载如下判断标准A的可读载体：
所述判断标准A为：若符合如下条件：移植术时待测患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD低风险，若不符合所述条件，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD非低风险。
上述试剂盒中，所述试剂盒还包括记载如下判断标准B的可读载体：
所述判断标准B为：移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重的待测患者术后发生aGVHD的风险低于移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量小于2.16×106个/公斤体重的待测患者。
上述试剂盒中，所述待测患者术后发生或候选发生aGVHD为待测患者术后2年或180天内发生或候选发生aGVHD。
上述试剂盒中的可读载体在制备预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后特定时间内发生aGVHD风险的产品中的应用也是本发明保护的范围。
上述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A和所述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B在制备预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后特定时间内发生aGVHD风险的产品中的应用也是本发明保护的范围。
上述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A、所述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B和所述可读载体在制备预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后特定时间内发生aGVHD风险的产品中的应用也是本发明保护的范围。
上述中，所述特点时间为2年或180天。
所述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A包括用于制备外周血中单个核细胞的试剂和用于Treg的免疫表型检测的试剂；
所述用于制备外周血中单个核细胞的试剂包括人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物，货号为LTS1077)和pH7.4、1M的PBS缓冲液；
所述用于Treg的免疫表型检测的试剂包括抗人CD4单克隆抗体(货号为11-0048)、抗人CD25单克隆抗体(货号为17-0259)、抗人Foxp3单克隆抗体(货号为25-4776)、固定液(货号为00-5521)和破膜液(货号为00-5523购自ebioscience公司)。
检测方法具体见实施例1。
所述用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B包括用于分离活化的CD3+淋巴细胞的物质。
本发明的发明人通过检测外周血内Treg的数量和功能，进而预测单倍体相合造血干细胞移植术后的严重并发症aGVHD发生风险。因为，Treg具有抑制CD3+T细胞增殖的作用，所以当供者外周血中的Treg数量高于一定数值(2.16×106个/公斤体重)时，单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险大大降低(P＜0.05)。因此，通过检测外周血内Treg的数量和功能，可以预测单倍体相合造血干细胞移植术后的aGVHD发生风险。本发明基于扎实的研究基础，是该领域的原始性创新，有助于优化现有的临床检测体系。本发明提供的试剂盒操作简单、方便实用，可以预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD的发生情况，为单倍体相合造血干细胞移植术的研究应用奠定了基础。
附图说明
图1为实施例1中外周血内Treg数量和比例。
图2为实施例2中外周血中的Treg抑制CD3+T淋巴细胞增殖的能力。
图3为实施例3中外周血中的Treg数量高于2.16×106个/公斤体重时，单倍体相合造血干细胞移植术后发生aGVHD风险大大降低(P＜0.05)。
图4为实施例4中Treg数量不影响单倍体相合造血干细胞移植术后的免疫重建。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
抗人CD4单克隆抗体(货号为11-0048)、抗人CD25单克隆抗体(货号为17-0259)和抗人Foxp3单克隆抗体(货号为25-4776)，固定液(货号为00-5521)，破膜液(货号为00-5523)购自ebioscience公司；
树突状细胞诱导物质(粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子货号为300-03和白细胞介素4货号为200-04购自Peprotech公司；
人淋巴细胞分离液：天津灏洋生物，货号为LTS1077。
RPMI培养基粉末：GIBCO公司，货号为31800-036。
RPMI配眼镜培养基的制备方法：取12.1g低糖DMEM粉末、2mmol L-谷氨酰胺、2.4gNaHCO3和25mmol HEPES，溶于水并用水定容至1L。人CD3+ T淋巴细胞：用免疫磁珠(MACS panT lymphocytes Isolation Kit，Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-096-535)从知情同意的健康献血者外周血中分离获得，分离纯度在90％以上。
人CD14+造血干细胞：用免疫磁珠(MACS CD34+ cell Isolation Kit，MiltenyiBiotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-096-537)从知情同意的健康献髓者外周血和/或骨髓中分离获得，分离纯度在90％以上。
人Treg：用免疫磁珠(MACS T regulatory cell Isolation Kit，MiltenyiBiotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-109-557)从知情同意的健康献髓者外周血和/或骨髓中分离获得，分离纯度在90％以上。
树突状细胞活化物质(寡脱氧核苷酸)由北京生工生物公司合成。
实施例中所用的PBS缓冲液，如无特殊说明，均为pH7.4、1M的PBS缓冲液。
实施例1、外周血中Treg数量和比例检测
10位知情同意的健康志愿者在接受了动员剂(粒细胞集落刺激因子，5-10微克/公斤体重静脉注射)之前的1天和之后的第1天，第3天和第5天，分别取外周血细胞和骨髓细胞。取外周血细胞样本的方式为无菌条件下穿刺抽取至抗凝管。
一、制备外周血单个核细胞或骨髓单个核细胞
(1)用PBS缓冲液吹打悬浮外周血细胞样本或骨髓细胞样本，得到细胞悬液。
(2)取1支试管，加入4毫升人淋巴细胞分离液和4毫升步骤(1)得到的细胞悬液，保持界面完整，1500rpm离心15分钟，取骨髓单个核细胞层(即自上而下的第二层)，用PBS缓冲液洗涤两遍(每次洗涤采用1500rpm离心10分钟的方式收集细胞)，对细胞进行计数，得到外周血单个核细胞或骨髓单个核细胞。
二、Treg的免疫表型检测
取外周血单个核细胞或骨髓单个核细胞，按照1×106个细胞/0.25微克的浓度加入抗人CD4单克隆抗体和抗人CD25单克隆抗体，避光孵育30分钟，以PBS缓冲液1500rpm离心15分钟。加入固定液作用15分钟，加入破膜液作用2小时，按照1×106个细胞/0.25微克的浓度加入抗人Foxp3抗体，避光孵育30分钟，以PBS缓冲液1500rpm离心15分钟。
上流式细胞仪分析，判定CD4+CD25+Foxp3+的亚群为Treg，统计出不同时间点的Treg数量和比例。
结果如图1A和1B所示，志愿者接受了动员剂之后，外周血内的Treg数量和比例都是显著提高的。外周血中的Treg数量从4000/1×106有核细胞提升到13000/1×106有核细胞(图1A)，Treg在CD4+细胞中的比例从不足8％提升到25％以上(图1B)。采用SPSS(version19)统计学软件处理后发现这种差别具有统计学意义。(*,P＜0.05，**,P＜0.01)。
实施例2、动员剂刺激下的Treg抑制T淋巴细胞增殖的功能分析
一、制备活化的树突状细胞
将实施例1的一中制备的外周血单个核细胞或骨髓单个核细胞以单核细胞分离免疫磁珠(MACS CD34+ cell Isolation Kit，Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-096-537)分离CD14+单核细胞，再加入树突状细胞诱导液(50ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、10ng/ml白细胞介素4和水组成)。在37℃、5％CO2条件下培养5天，每隔两天全量更换相同的树突状细胞诱导液，在第5天加入树突状细胞活化物质(10微克/毫升)在37℃、5％CO2条件下培养2天，得到活化的树突状细胞(外周血)或活化的树突状细胞(骨髓)。
二、制备活化的CD3阳性T淋巴细胞
将实施例1的一中制备的外周血单个核细胞或骨髓单个核细胞以CD3阳性的T淋巴细胞分离免疫磁珠(MACS pan T lymphocytes Isolation Kit，Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-096-535)获得单个核细胞内的CD3+淋巴细胞，对应加入上述步骤二中活化的树突状细胞，在37℃、5％CO2条件下培养3天，得到活化的CD3阳性T淋巴细胞(外周血)或活化的CD3阳性T淋巴细胞(骨髓)。
三、分离Treg
将实施例1的一中制备的外周血单个核细胞和骨髓单个核细胞以Treg分离免疫磁珠(MACS T regulatory cell Isolation Kit，Miltenyi Biotec,Bergisch Gladbach,Germany货号130-109-557)获得外周血Treg和骨髓Treg。
四、检测Treg对活化的CD3+淋巴细胞增殖是否有抑制作用
将上述三分离得到的外周血Treg或骨髓Treg按照不同比例(Treg比CD3阳性T淋巴细胞的个数比分别为0:1,0.5:1,和1:1)加入上述二获得活化的CD3阳性T淋巴细胞(外周血)或活化的CD3阳性T淋巴细胞(骨髓)，以H3掺入法(Stem Cells.2006Apr；24(4):992-1000.In vitro characteristics and in vivo immunosuppressive activity ofcompact bone-derived murinemesenchymal progenitor cells.Guo Z1,Li H,Li X,YuX,Wang H,Tang P,Mao N.)检测T细胞的增殖。
结果如图2A和图2B所示，志愿者接受了动员剂之后，外周血内的Treg免疫抑制能力是显著提高的。外周血中的Treg抑制活化的CD3+T细胞增殖的能力从低于骨髓中的Treg(图2A)，到高于骨髓中的Treg(图2B)，说明接受了动员剂后的外周血中的Treg免疫抑制能力显著增强，具有抑制T淋巴细胞增殖的功能，可用于单倍体相合造血干细胞移植。
采用SPSS(version 19)统计学软件处理后发现这种差别具有统计学意义。(*,P＜0.05)。
实施例3、单倍体相合造血干细胞移植术中外周血Treg输入量与患者发生aGVHD的风险的关系
一、移植
将61位知情同意的血液病患者进行单倍体相合造血干细胞移植，移植所用供者细胞(动员剂动员后，从健康供者体内采集的外周血细胞和骨髓细胞)包括Treg细胞，Treg细胞由外周血Treg和骨髓Treg组成。
在移植前，外周血Treg和骨髓Treg均按照实施例2的四进行检测，均具有抑制T淋巴细胞增殖功能。
移植所用供者细胞成份、数量及比例如表1所示，输入每个患者体内的Treg总数为3.49±2.23×106/公斤体重，输入患者体内的Treg比例为0.35±0.21％。
表1输入61例单倍体造血干细胞移植术接受者体内的供者细胞成份
Figure BDA0001544805840000071
二、临床诊断术后2年内患者发生aGVHD的人数
61位知情同意的血液病患者移植术后2年内的追踪结果显示造血干细胞移植术均已成功，存活状态良好。
2年内发生aGVHD的比例和等级如表2所示，发生了0-I度aGVHD(aGVHD低风险)的患者32人，占总人数的52％，II度aGVHD(aGVHD中风险)的患者22人，占总人数的36％，III-IV度aGVHD(aGVHD高风险)的患者7人，占总人数的12％。
表2为61例病人分析资料
Figure BDA0001544805840000072
Figure BDA0001544805840000081
三、输入患者体内的Treg数量和单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生之间的统计学相关性
检测61位知情同意的血液病患者移植术时输入细胞中输入的外周血Treg和骨髓Treg细胞的数量(按照实施例1的一和二方法进行检测)，并计算比例。
输入的外周血Treg比例为输入的外周血Treg数量/输入总细胞数量
输入的骨髓Treg比例为输入的骨髓Treg数量/输入总细胞数量
输入Treg细胞数量由输入的外周血Treg组成和输入的骨髓Treg数量组成。
检测61例患者输入的外周血Treg数量、61例患者输入的骨髓Treg数量、61例患者输入的Treg总数量，计算61例患者输入的外周血Treg比例和61例患者输入的骨髓Treg比例，得到61例患者输入的外周血Treg数量、61例患者输入的骨髓Treg数量、61例患者输入的Treg总数量、61例患者输入的外周血Treg比例、61例患者输入的骨髓Treg比例。
临床检测61例患者180天内aGVHD累积发生率(某天发生aGVHD的患者数量/61)。
将上述数据采用统计学软件R软件包分析输入患者体内的Treg数量或比例及180天内aGVHD累积发生率之间的关系，取中位数。
61例患者输入的外周血Treg数量中位值为2.16×106个/公斤体重(图3B)；
61例患者输入的骨髓Treg数量中位值为0.84×106个/公斤体重(图3C)；
61例患者输入的Treg总数量中位值为3.22×106个/公斤体重(图3D)；
61例患者输入的外周血Treg比例中位值为0.2％(图3E)；
61例患者输入的骨髓Treg比例中位值为0.08％(图3F)；
61例患者输入的Treg比例中位值为0.32％(图3G)。
进行单因素分析，结果如图3和表3所示，A为61例患者中180天内aGVHD累积发生率，B-G是按照不同中位值61例患者中180天内aGVHD累积发生率，可以看出，只有外周血中的Treg数量P＝0.046(图3B)。其他因素如外周血中的Treg比例，骨髓中的Treg数量和比例均不能预先诊断aGVHD。
进一步进行多因素分析，结果如表4所示，仍然是只有外周血中的Treg数量是和aGVHD发生密切相关的影响因素(P＝0.02)。
表3为移植物细胞成份与61例病人接受单倍体造血干细胞移植术后aGVHD发生相关的单因素分析
Figure BDA0001544805840000091
Figure BDA0001544805840000101
表4为移植物细胞成份与61例病人接受单倍体造血干细胞移植术后aGVHD发生相关的多因素分析
Figure BDA0001544805840000102
因此，只有输入具有抑制T淋巴细胞增殖功能外周血Treg数量可以预先诊断或预测aGVHD发生风险，输入外周血中的Treg数量大于等于2.16×106个/公斤体重的患者的术后发生aGVHD风险低于输入外周血中的Treg数量小于2.16×106个/公斤体重的患者。
输入外周血中的Treg数量大于等于2.16×106个/公斤体重的患者为32个；
输入外周血中的Treg数量小于2.16×106个/公斤体重的患者为29个。
四、输入患者体内的Treg数量在预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险性中的应用
追踪输入外周血中的Treg数量大于等于2.16×106个/公斤体重的32个患者在术后2年的发生aGVHD的人数及等级，结果如表2所示，发生了0-I度aGVHD，占总人数的52％。
追踪输入外周血中的Treg数量小于2.16×106个/公斤体重的32个患者在术后2年的发生aGVHD的人数及等级，结果如表2所示，I度aGVHD(aGVHD中风险)的患者22人，占总人数的36％，III-IV度aGVHD(aGVHD高风险)的患者7人，占总人数的12％。
因此，可以根据待测患者单倍体相合造血干细胞移植术中具有抑制T淋巴细胞增殖的外周血Treg细胞的输入量作为预测或辅助预测单倍体相合造血干细胞移植术后aGVHD发生风险，若符合如下条件：待测患者移植术中源于外周血的Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16×106个/公斤体重，则待测患者术后发生aGVHD低风险，若待测患者移植术中源于外周血的Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量小于2.16×106个/公斤体重，则待测患者术后发生aGVHD非低风险。
aGVHD低风险为0-I度aGVHD；
aGVHD非低风险由aGVHD中风险和aGVHD高风险组成，aGVHD中风险为I度aGVHD，aGVHD高风险为III-IV度aGVHD。
实施例4、输入Treg数量不影响单倍体相合造血干细胞移植术后的免疫重建
检测移植后不同时间点的患者体内Treg细胞数量和比例，根据移植时输入的细胞成分分析，采用R指数分析包分析输入患者体内的Treg和aGVHD发生之间的关系，此处和实施例3相似，所不同的是要分析输入的Treg数量和比例和移植后免疫重建的关系，而实施例4分析的是Treg和移植后aGVHD发生的关系，说明本方法安全可靠。
取中位数，61例患者以输入的Treg数量分为高于2.16×106个/公斤的Treg高剂量组和低于2.16×106个/公斤的Treg低剂量组。进一步进行单因素分析和多因素分析，结果如图4所示，输入的Treg数量的多少不影响单倍体相合造血干细胞移植术后的免疫重建。

Claims (3)

1.用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞数量的组件A、用于检测移植术时患者输入外周血Treg细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖功能的组件B、记载如下判断标准A的可读载体和记载如下判断标准B的可读载体在制备预测待测患者进行单倍体相合造血干细胞移植术后特定时间内发生aGVHD风险的试剂盒中的应用；
所述外周血Treg细胞为健康人接受动员剂后得到的外周血Treg细胞；
所述判断标准A为：若符合如下条件：移植术时待测患者输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16 × 106 个/公斤体重，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD低风险，若不符合所述条件，则待测患者术后发生或候选发生aGVHD非低风险；
所述判断标准B为：移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量大于等于2.16 × 106 个/公斤体重的待测患者术后发生aGVHD的风险低于移植术时输入外周血Treg细胞具有抑制T淋巴细胞增殖功能且输入量小于2.16 × 106 个/公斤体重的待测患者；
所述T淋巴细胞为CD3+淋巴细胞。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述待测患者术后发生或候选发生aGVHD为待测患者术后2年或180天内发生或候选发生aGVHD。
3.根据权利要求1-2中任一所述的应用，其特征在于：所述特定时间为2年或180天。
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Title
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