CN108191875B - 化合物及其在制备治疗免疫相关疾病药物中的应用 - Google Patents

化合物及其在制备治疗免疫相关疾病药物中的应用 Download PDF

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CN108191875B CN201810044047.6A CN201810044047A CN108191875B CN 108191875 B CN108191875 B CN 108191875B CN 201810044047 A CN201810044047 A CN 201810044047A CN 108191875 B CN108191875 B CN 108191875B
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    • C07D513/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明属于生物医药领域，具体涉及化合物及其在制备治疗免疫相关疾病药物中的应用。本发明公开了利用一类小分子化合物及其药用盐或其药学上可接受的盐或其溶剂合物在治疗炎性相关疾病中的应用。所述一类小分子化合物及其药用盐或其药学上可接受的盐或其溶剂合物可以有效抑制免疫细胞中TNF‑α的表达并且促进IL‑10的表达，从而抑制机体免疫***的异常活化，发挥抗炎作用，故可用于制备治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等免疫相关疾病的药物。

Description

化合物及其在制备治疗免疫相关疾病药物中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一类化合物、其药用盐，及其在制备抑制免疫细胞异常活化相关疾病中的应用，尤其是在制备治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等免疫相关疾病中的应用。
背景技术
广义的免疫相关疾病是指由于各种环境及基因因素的共同作用下导致免疫调节失去平衡，具体表现为多种免疫细胞被激活进而行使免疫应答功能。但是当机体免疫调节机制功能异常时，机体内免疫细胞会持续异常激活进而分泌大量的炎症介质，最终诱导炎性相关的疾病发生。伴随免疫相关疾病的炎症反应和疼痛严重影响了患者的生存质量，而且部分免疫相关疾病迁延不愈，甚至有癌变可能。免疫相关疾病包括肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等。在免疫相关疾病发生过程中诸多免疫细胞异常活化，分泌大量炎症因子，比如白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等，其中TNF-α发挥促炎作用最为明显，其可促进组织损伤，进一步激活巨噬细胞自身以及T辅助细胞(TH1/TH17)，从而激化炎症反应。而此外白细胞介素10(IL-10)具有抑制巨噬细胞的异常活化，促进调节性T细胞(Treg)的增生，调节免疫反应的作用，发挥抑制炎症的作用。然而现有的针对免疫相关疾病的治疗药物主要集中在水杨酸制剂、糖皮质类固醇、免疫抑制剂等，其治疗靶点尚不明确，副作用较大，而且停药后易复发。因此如何从疾病发病机理出发，寻找安全有效的药物可同时上调抑炎因子表达，抑制促炎因子表达对于免疫相关疾病的治疗极为重要。
本申请涉及的系列化合物属于一类全新的化合物，也从未有过与这类化合物类似的化合物在在制备抑制免疫细胞异常活化相关疾病中的应用，尤其是在制备治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等免疫相关疾病中的应用。因此，探索性的发现本申请相关的系列化合物的功能具有重要的应用价值。
发明内容
本发明需要解决的问题就是偶然性的找到了一系列可以有效抑制促炎因子TNF-α并提升抑炎因子IL-10的小分子化合物及其药用盐。
本发明涉及到的化合物通式(1)如下：
所述的一类小分子化合物及其药学上可接受的盐，该类化合物的通式如下：
Figure GDA0002755788260000021
其特征为所述化合物的具体取代基团如下面1-102#任意一项所述：
1#:n＝0；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
2#:n＝1；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
3#:n＝2；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
4#:n＝3；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
5#:n＝4；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
6#:n＝5；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
7#:n＝6；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
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11#:n＝1；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
12#:n＝2；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
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101#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝t-Bu；
102#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝t-Bu。
或其药学上可接受的盐或其溶剂合物。
“药学上可接受的盐”是包含式(1)的化合物与与酸发生成盐反应的产物，包括无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐或硫酸盐等；有机酸盐，如乙酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、富马酸眼、马来酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐或对甲苯甲酸盐等。
含有本发明化合物的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的符合通式(1)的化合物作为活性成分；一种或多种药用载体物质和/或稀释剂。
本发明的技术方案，但不仅限于下列方法，其方案如下：
针对化合物的合成方法：
在25ml的圆底烧瓶中加入1-102#化合物所对应的不同原料：杂环化合物(0.85mmol)和四氢呋喃(3.0mL)，其中杂环化合物(0.85mmol)可以是咪唑、氮唑、呋喃、噻唑等多种杂环或者其并环化合物。在-78度下加入LDA(二异丙基胺基锂)(2M in THF(四氢呋喃),0.47mL)。然后在-78度下手性亚胺(0.5mmol)的四氢呋喃溶液(2.0mL)，手性亚胺可以是氟代甲基亚胺、氟代乙基亚胺、三氟甲基取代的N-叔丁基亚磺酰基亚胺或者其他不同取代基的亚胺化合物。然后混合物搅拌2小时。反应结束后，用饱和NH4Cl(3.0mL)淬灭反应。然后用乙酸乙酯提取，最后柱层析分离得到对应的1-102#化合物。
除非另有说明，下列用在权利要求书和说明书中的术语有如下含义：
“药学上可接受的盐”“药学上可接受的盐”是包含式(1)的化合物与酸反应形成的盐，表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐，这类盐包括：无机酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐或硫酸盐等；有机酸盐，如乙酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、富马酸眼、马来酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐或对甲苯甲酸盐等。
“药用组合物”指的是在此描述的一种或多种化合物或者它们的药学上可接受的盐和前药与其他的化学成分，例如药学上可接受的载体和赋形剂的混合物，药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
“溶剂合物”是本发明的符合通式(1)特征的化合物或其盐，其还包括含有非共价分子间力结合的化学计算量或非化学计算量的溶剂。当所述溶剂是水时，所述溶剂合物是水合物。
“水合物”是指本发明的符合通式(1)特征的化合物与水相互作用过程中形成的固态结晶物质。
进一步，本发明的又一目的在于，提供上述化合物在免疫调节药物中的应用。这项发明首先在体外免疫细胞层次对该类化合物的免疫调节活性进行例证。此处所用的免疫细胞类型包括但是不限于巨噬细胞、树突状细胞、粒细胞、T细胞、B细胞、NK细胞以及肥大细胞。此处的免疫细胞来源于动物包括但是不限于：小鼠和大鼠；驯养动物包括但是不限于猫和狗；以及其它一些动物例如但是不限于牛、羊、猪和马；灵长类动物例如但是不限于猴子和人。小鼠免疫细胞分泌的细胞因子水平检测是被广泛认可和接受的抗炎药物活性检测的体外模型，同时也可以为来源于其它生物种群的免疫细胞例如但是不限于人提供参考。本发明对所合成的化合物在小鼠巨噬细胞系中的抗炎结果如表1所示。上述目的是通过体外细胞层次的生物活性测定实验实现的，但是以下实施例不应被视作对此化合物的功能范围的限定。
本项发明的这个小分子化合物可以通过口腔，静脉，鼻腔，直肠或其他任何可以输送有效剂量的活性物质的方式给药。合适的剂量是那些能得到所需要的最终量的剂量。而治疗不同的疾病也可能需要不同的剂量。该试剂的有效量是能导致炎症反应降低明显降低的量。
具有常规技术的研究人员将能够确定本项发明所提供的试剂的最有效的给药剂量和时间，考虑给药方式，药物代谢，以及其他一些药代动力学参数例如药物分布、清除率等。
进一步，本发明提供所述化合物在制备免疫调节药物中的应用，因为本发明所述化合物可能是基于的分子机制而发挥免疫调节作用。因此所述的免疫相关疾病包括自身免疫疾病，如关节炎、肾炎、肠炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等，以及病毒及微生物感染导致的炎性疾病，如肝炎、肺炎、胃炎等。
这项发明通过体内对各种模式动物的相关免疫疾病模型进行例证。此处的动物包括但是不限于：小鼠和大鼠；驯养动物包括但是不限于猫和狗；以及其它一些动物例如但是不限于牛、羊、猪和马；灵长类动物例如但是不限于猴子和人。小鼠肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎模型以及大鼠的关节炎模型的体内检测是被广泛认可和接受的体内药物活性检测的模型，同时也可以为其它生物例如但是不限于人提供参考。本项发明的更进一步的目标在于通过给予具有生物活性的剂量的以下化合物，提供一种治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化、强直性脊柱炎等免疫相关疾病的方法：
下面的例子用以解释这项发明的具体细节，但是不应被视作对这项发明的功能范围的限定。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在炎症性肠病治疗中的应用：
1.使用三硝基苯磺酸(TNBS)的50％乙醇溶液于BALB/C小鼠灌肠，建立TNBS型炎症性肠病模型。
2.将配制好的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在建立TNBS型炎症性肠病模型同时进行腹腔注射，对炎症性肠病进行治疗。
3.治疗后每天测定小鼠体重，并于治疗3天后处死小鼠，取结肠组织，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α炎症因子水平测定。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在肺炎治疗中的应用：
1.使用戊巴比妥钠麻醉BALB/C小鼠，鼻咽滴注含有脂多糖(LPS)的生理盐水溶液，建立LPS鼻腔吸入型小鼠急性肺炎模型。
2.将配制好的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在建立LPS诱导的急性肺炎模型的同时进行腹腔注射，对肺炎进行治疗。
3.于治疗2天后处死小鼠，取肺部组织进行病理切片，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α炎症因子水平测定。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在肾炎治疗中的应用：
1.选用正常ICR小鼠，取小鼠肾脏组织，制备肾匀浆液，联合LPS+肾匀浆液针对健康ICR小鼠进行腹腔注射，建立小鼠急性肾炎模型。
2.将配制好的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在建立LPS诱导的急性肾炎模型的同时进行腹腔注射，对肾炎进行治疗。
3.于治疗2天后处死小鼠，取肾脏组织进行病理切片，做组织学评分和IL-10和TNF-α炎症因子水平测定。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在胃炎治疗中的应用：
1.选用正常健康BALB/C小鼠，禁食，用碳酸氢钠溶液灌胃，15min后灌胃给入幽门螺旋杆菌，在实验第3、5天重复上述操作，建立小鼠胃炎模型。
2.将配制好的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在建立幽门螺旋杆菌导致的胃炎模型的同时进行腹腔注射，对胃炎进行治疗。
3.于模型建立4周后处死小鼠，取胃组织进行病理切片，做组织学评分和IL-10和TNF-α炎症因子水平测定。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在肝炎治疗中的应用：
1.使用D-氨基半乳糖和LPS于ICR小鼠腹腔注射，建立小鼠肝炎模型。
2.将配制好的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在建立肝炎模型的同时进行腹腔注射，对肝炎进行治疗。
3.在治疗5天后处死小鼠，选取肝组织进行IL-10和TNF-α炎症因子水平测定，取小鼠血液测定其中的谷丙转氨酶活性来判断肝功能。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在类风湿关节炎(RA)治疗中的应用：
1.使用完全弗氏佐剂于C57BL/6小鼠右足跖部皮下注射，建立佐剂型关节炎模型(CFA)。
2.在佐剂诱导两周后，于小鼠腹腔注射本发明化合物的DMSO溶液，对关节炎进行治疗。
3.在治疗两周后处死小鼠，治疗结束时观察小鼠脚踝肿胀程度，进行关节疾病评分，取小鼠右足做关节组织切片，通过病理评分来评价治疗效果。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在红斑狼疮治疗中的应用：
1.选用MRL/lpr自发狼疮小鼠作为疾病模型。
2.在MRL/lpr小鼠6周龄时开始于腹腔注射本发明化合物的DMSO溶液，此后每两周给药一次，对红斑狼疮进行治疗。
3.在MRL/lpr小鼠22周龄时处死小鼠，治疗结束时测量小鼠尿液中蛋白含量和血清中尿素氮含量以及血液中的IL-10和TNF-α炎症因子水平。
本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在多发性硬化治疗中的应用：
1.联合百日咳毒素尾静脉注射，不完全弗氏佐剂，结核分枝杆菌，髓磷脂寡聚糖蛋白(MOG)皮下注射于C57/B6小鼠，建立小鼠多发性硬化模型(EAE)。
2.本发明化合物的DMSO溶液在小鼠模型建立同时进行腹腔注射，对多发性硬化进行治疗。
3.治疗25天后处死小鼠，治疗结束时根据小鼠行为进行评分，评价治疗效果。本发明所述的本发明化合物的DMSO溶液注射制剂在强直性脊椎炎(AS)治疗中的应用：
1.人软骨蛋白，不完全弗氏佐剂，完全弗氏佐剂联合皮下注射BALB/C小鼠。
2.在模型建立六周后开始小鼠腹腔注射本发明化合物的DMSO溶液，每四周给药一次，对强直性脊椎炎进行治疗。
3.36周时处死小鼠，取小鼠脊柱进行组织学染色，通过评分来评价治疗效果，并取脊柱组织做IL-10和TNF-α炎症因子水平检测。
四、具体实施方式
实施例1本申请1-102#化合物的合成
在25ml的圆底烧瓶中加入1-102#化合物所对应的不同原料：杂环化合物(0.85mmol)和四氢呋喃(3.0mL)，其中杂环化合物(0.85mmol)可以是咪唑、氮唑、呋喃、噻唑等多种杂环或者其并环化合物。在-78度下加入LDA(2M in THF,0.47mL)。然后在-78度下加入手性亚胺(0.5mmol)的四氢呋喃溶液(2.0mL)，手性亚胺可以是氟代甲基亚胺、氟代乙基亚胺、三氟甲基取代的N-叔丁基亚磺酰基亚胺或者其他不同取代基的亚胺化合物。然后混合物搅拌2小时。反应结束后，用饱和NH4Cl(3.0mL)淬灭反应。然后用乙酸乙酯提取，最后柱层析分离得到对应的1-102#化合物。
表1 1-102#化合物合成中所涉及的原料
Figure GDA0002755788260000091
Figure GDA0002755788260000101
Figure GDA0002755788260000111
Figure GDA0002755788260000121
实施例2本申请系列化合物在小鼠巨噬细胞上的抗炎活性筛选
将本系列化合物溶于二甲亚砜(DMSO)配置成测试储液(100mg/ml)，选用小鼠巨噬细胞系(ANA-1)培养于含10％胎牛血清的RPMI 1640培养液中。当ANA-1细胞生长密度达到70％-80％收集细胞，制备得到细胞悬液，96孔培养板每孔接种细胞悬液200μl(细胞密度为2×104个/ml)，在37℃，100％相对湿度、含5％CO2培养箱中培养24h，按以下处理分组：DMSO组(含有1‰DMSO的培液处理)；DMSO+LPS组(含有1μg/ml的LPS+1‰DMSO的培液处理)；DMSO+LPS+本发明化合物组(含有1μg/ml的LPS以及100μg/ml本发明化合物含有培液处理，其中DMSO终浓度为1‰)每组均设5个复孔，上述各组处理12h后，收集细胞上清，使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)通过检测细胞上清中的TNF-α和IL-10的水平。结果如表2和3所示，该系列化合物均可抑制巨噬细胞分泌TNF-α，同时可以促进IL-10的表达，提示该系列化合物可以抑制巨噬细胞的活化，其中75#化合物抑制效率最高，为此将以75#进行后续的体内的实施例。
表2本申请系列化合物对小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α表达水平的影响
Figure GDA0002755788260000131
Figure GDA0002755788260000141
Figure GDA0002755788260000151
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与DMSO+LPS对照组相比。
表3本申请系列化合物对小鼠腹腔巨噬细胞IL-10表达水平的影响
Figure GDA0002755788260000152
Figure GDA0002755788260000161
Figure GDA0002755788260000171
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。*代表P≤0.05，与DMSO+LPS对照组相比。
实施例3 75#化合物对TNBS导致的小鼠肠炎模型的治疗
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠三硝基苯磺酸(TNBS)肠炎模型，即取雌性BALB/C小鼠30只，体重16-18g，将TNBS溶液(溶于50％乙醇)0.1mL灌肠，TNBS剂量为2.5mg/kg小鼠体重，并于建模当日，将小鼠随机分成两组即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每天给药一次。模型建立3天后处死，取病变结肠组织，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α细胞因子水平检测。
(一)组织学损伤评分
取部分结肠组织固定，进行HE染色，做病理切片，显微镜(Nikon TE2000U)下观察，进行组织学损伤评分，每张切片由两位病理医生双盲法分别评分，取平均值，评分标准如表4所示。
表4结肠炎组织学损伤标准
Figure GDA0002755788260000181
(二)细胞因子测定
切取部分病变结肠组织并称重，每100mg结肠组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测结肠组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
从表5可以看出腹腔注射75#化合物可以有效缓解小鼠结肠炎发作，治疗组的结肠组织损伤明显低于对照组，并呈一定的剂量依赖性。细胞因子水平也是衡量组织炎症程度的一个重要标准。从表6可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。由此可见，75#化合物可以通过抑制肠道组织炎症反应，从而抑制结肠组织损伤进而有效控制结肠炎的发展，减轻疾病损害。
表5 75#化合物给药治疗肠炎小鼠结肠组织学评分
Figure GDA0002755788260000191
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
表6 75#化合物给药治疗肠炎小鼠结肠组织炎症因子水平检测
Figure GDA0002755788260000192
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
实施例4 75#化合物对LPS导致的小鼠肺炎模型的治疗
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立LPS导致的小鼠肺炎模型，即取雄性BALB/C小鼠30只，体重16-18g。首先使用22mg/mL的戊巴比妥钠生理盐水溶液，按每只小鼠50μl用量，腹腔注射，待小鼠进入深度麻醉状态后。鼻咽滴注167μg/mL LPS生理盐水溶液，每只小鼠滴注60μL。然后将小鼠随机分成两组即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每天给药一次。模型建立2天后处死，取病变肺组织，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α细胞因子水平检测。
(一)组织学损伤评分
取部分肺组织固定，进行HE染色，做病理切片，显微镜(Nikon TE2000U)下观察，进行组织学损伤评分，每张切片由两位病理医生双盲法分别评分，取平均值，评分标准如下表7所示。
表7肺损伤病理学评分标准
Figure GDA0002755788260000193
(二)细胞因子测定
切取部分病变肺组织并称重，每100mg肺组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测肺组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
从表8可以看出腹腔注射75#化合物可以有效缓解小鼠肺炎发作，治疗组的肺组织损伤明显低于对照组，并呈一定的剂量依赖性。细胞因子水平也是衡量组织炎症程度的一个重要标准。从表9可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。由此可见，75#化合物可以通过抑制肺组织炎症反应，从而抑制肺组织损伤进而有效控制肺炎的发展，减轻疾病损害。
表8 75#化合物给药治疗肺炎小鼠肺组织学评分
Figure GDA0002755788260000201
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
表9 75#化合物给药治疗肺炎小鼠肺组织炎症因子水平检测
Figure GDA0002755788260000202
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
实施例5 75#化合物注射制剂在肾炎治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠肾炎模型，即取ICR雄性小鼠，体重16-18g，取其肾脏进行按照每100mg组织加入1ml生理盐水进行组织匀浆，制备得到肾组织匀浆液。然后使用脂多糖(LPS)按300μg/kg的用量联合50μl肾匀浆组织液进行腹腔注射，建立急性肾炎模型。然后将小鼠随机分成两组即75#化合物75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每天给药一次。模型建立2天后处死，取病变肾脏组织，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α细胞因子水平检测。
(一)组织学损伤评分
取部分肾组织固定，进行HE染色，做病理切片，显微镜(Nikon TE2000U)下观察，进行组织学损伤评分，评分标准如下：肾小管间质损伤程度，根据蛋白管型和肾小管的扩张，坏死，萎缩：炎性细胞浸润：间质纤维化的程度，每个参数按0-3分评定(0：正常，1：轻度受损，2：中度受损，3：重度受损)，每张切片由两位病理医生双盲法分别评分，取平均值。
(二)细胞因子测定
切取部分病变肾脏组织并称重，每100mg肾组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测肾组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
从表10可以看出腹腔注射75#化合物可以有效缓解小鼠肾炎发作，治疗组的肾组织损伤明显低于对照组，并呈一定的剂量依赖性。细胞因子水平也是衡量组织炎症程度的一个重要标准。从表11可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。由此可见，75#化合物可以通过抑制肾组织炎症反应，从而抑制肾组织损伤进而有效控制肾炎的发展，减轻疾病损害。
表10 75#化合物给药治疗肾炎小鼠肾小管组织学评分
Figure GDA0002755788260000211
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
表11 75#化合物给药治疗肾炎小鼠肾组织炎症因子水平检测
Figure GDA0002755788260000212
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
实施例6 75#化合物注射制剂在胃炎治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠胃炎模型，即取BALB/C雄性小鼠，体重16-18g。禁食24h，使用胃管灌入0.2mol/L的碳酸氢钠溶液0.25ml，15min后灌胃给入幽门螺旋杆菌菌株(109CFU/ml，0.5ml)，在实验第3、5天重复上述操作。然后将小鼠随机分成两组即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每周给药一次。模型建立4周后处死，取病变胃组织，做组织学损伤评分和IL-10和TNF-α细胞因子水平检测。
(一)组织学损伤评分
取部分胃组织固定，进行HE染色，做病理切片，显微镜(Nikon TE2000U)下观察，进行组织学损伤评分，评分标准如下表12，每张切片由两位病理医生双盲法分别评分，取平均值。
表12胃损伤病理学评分标准
Figure GDA0002755788260000221
(二)细胞因子测定
切取部分病变胃组织并称重，每100mg胃组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测胃组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
从表13可以看出腹腔注射75#化合物可以有效缓解小鼠胃炎发作，治疗组的胃组织损伤明显低于对照组，并呈一定的剂量依赖性。细胞因子水平也是衡量组织炎症程度的一个重要标准。从表14可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。由此可见，75#化合物可以通过抑制胃组织炎症反应，从而抑制胃组织损伤进而有效控制胃炎的发展，减轻疾病损害。
表13 75#化合物给药治疗胃炎小鼠胃组织学评分
Figure GDA0002755788260000222
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
表14 75#化合物给药治疗胃炎小鼠胃组织炎症因子水平检测
Figure GDA0002755788260000223
Figure GDA0002755788260000231
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
实施例7 75#化合物注射制剂在肝炎治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠肝炎模型，即取雌性ICR小鼠，6-8周龄。700mg/kg体重的D-氨基半乳糖加250ng/kg体重的LPS小鼠仔细称量体重后，进行腹腔注射，建立小鼠重症肝炎模型。然后将小鼠随机分成两组即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。在模型建立1h后，75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每天给药1次。模型建立5天后处死小鼠，取小鼠肝组织进行炎症因子水平测定，取小鼠血液进行谷丙转氨酶活性测定。
(一)谷丙转氨酶活性测定
小鼠血浆内的转氨酶水平采用南京建成生物技术公司的检测试剂盒进行检测，所用步骤参照试剂盒使用说明。
(二)细胞因子测定
切取部分病变肝组织并称重，每100mg肝组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测肝组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
从表15可以看出腹腔注射75#化合物可以有效缓解小鼠肝炎发作，治疗组的肝组织损伤明显低于对照组。细胞因子水平也是衡量组织炎症程度的一个重要标准。从表16可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。由此可见，75#化合物可以通过抑制肝织炎症反应，从而抑制肝组织损伤进而有效控制肝炎的发展，减轻疾病损害。
表15 75#化合物给药治疗肝炎小鼠血浆谷丙转氨酶活性测定
Figure GDA0002755788260000232
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
表16 75#化合物给药治疗肝炎小鼠肝组织炎症因子水平检测
Figure GDA0002755788260000241
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05，与对照组相比
实施例8 75#化合物注射制剂在类风湿关节炎治疗中的治疗
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠CFA型关节炎模型，即取雌性C57BL/6小鼠30只，体重16-18g，使用完全弗氏佐剂于小鼠右足跖部皮下注射20μl，建立佐剂型关节炎模型。在佐剂诱导两周后，将小鼠随机分为2组，即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每两天给药1次。在治疗两周后处死小鼠，治疗结束时取小鼠右足做关节组织切片，通过病理评分来评价治疗效果，取小鼠关节组织进行炎症因子水平测定。
(一)小鼠关节病理评分
给药4周后处死动物，取踝关节及膝关节，4％甲醛固定24小时，包埋切片，HE染色，显微镜观察其病理变化。显微镜(Nikon TE2000U)下关节炎症评分标准：0分：关节具有正常的结构，如关节间隙、软骨、骨、滑膜组织等。1分：关节组织中有空泡形成和轻度的关节炎症，并有滑膜增生，血管数量增加，以及小的炎性细胞灶，可见软骨的轻微破坏，无骨的侵蚀破坏。2分：关节有明显的软骨侵蚀破坏，有中度的关节炎症.血管翳形成.无骨破坏，关节结构无破坏。3分：有严重的血管翳形成，广泛的软骨侵蚀破坏，可见骨破坏.关节结构遭破坏。关节炎病理评分(AS)为每只鼠各关节病变分数的总和，每足不超过3分，总分不超过12分。
(二)细胞因子测定
切取部分病变关节组织并称重，每100mg关节组织加入1mL的生理盐水，组织匀浆，4℃，8000rpm，离心10min，收集上清。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测关节组织中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
表17 75#化合物给药治疗类风湿关节炎疗效
Figure GDA0002755788260000251
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
表18 75#化合物给药治疗关节炎小鼠关节组织细胞因子水平检测
Figure GDA0002755788260000252
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
如表17所示，75#化合物能够明显抑制大鼠关节局部水肿，组织肿胀，关节变形等关节损害。而通过组织学评分我们可以发现75#化合物治疗组中仅见滑膜轻度增生，偶见关节局部少量炎症细胞浸润。如表18所示，可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。75#化合物可以通过抑制关节炎症反应，从而抑制关节组织损伤进而有效控制关节炎的发展，减轻疾病损害。
实施例9 75#化合物注射制剂在红斑狼疮治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。选用MRL/lpr自发狼疮小鼠作为疾病模型，即取MRL/lpr小鼠40只，体重16-18g，将小鼠随机分为两组，即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液。MRL/lpr小鼠6周龄时开始给药，每2周给药一次，第22周时处死小鼠。治疗结束时测量小鼠尿液中蛋白含量以及血清中尿素氮含量，通过上述指标来评价治疗效果。
(1)测定小鼠尿液中蛋白含量
使用商品化的蛋白定量试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定小鼠尿液中蛋白含量。
(2)测定小鼠血清中尿素氮和含量
眼眶取血，使用商品化的试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定小鼠血清中尿素氮含量。使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测血液中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
如表19所示，75#化合物可以有效降低小鼠尿液中蛋白含量和血清中尿素氮含量，此结果表明75#化合物可以有效缓解狼疮引起的肾小球肾炎的发作。如表20所示，可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。75#化合物可以通过抑制全身炎症反应，从而有效控制狼疮的发展，减轻疾病损害。
表19 75#化合物***疗效
Figure GDA0002755788260000261
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
表20 75#化合物给药***血清细胞因子水平检测
Figure GDA0002755788260000262
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
实施例10 75#化合物在多发性硬化治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道建立小鼠EAE模型，即取C57BL/6小鼠40只，尾静脉注射200ng的白喉毒素，同时小鼠皮下注射含有500ng的结核分枝杆菌，100μl不完全弗氏佐剂，300μg MOG的乳液。48小时后再次尾静脉注射200ng的白喉毒素。将小鼠随机分为两组，即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每3天给药一次。治疗25天后观测小鼠行为，进行打分评价治疗效果。评分标准如下：0分，无任何症状；1分，尾巴无力；2分，后肢轻瘫；3分，半身不遂；4分，前肢瘫痪；5分，全瘫或死亡。取小鼠血液，使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测血液中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
如表21所示，EAE模型小鼠经75#化合物治疗以后，其行为评分结果明显高于模型组。如表22所示，可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。75#化合物可以通过抑制全身炎症反应，从而有效控制EAE的发展，减轻疾病损害。
表21 75#化合物给药在EAE模型疗效
Figure GDA0002755788260000271
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
表22 75#化合物给药治疗EAE细胞因子水平检测
Figure GDA0002755788260000272
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
实施例11 75#化合物在强直性脊椎炎(AS)治疗中的应用
将75#化合物用DMSO溶解，配成200mg/mL母液备用，腹腔注射前用水进一步稀释75#化合物母液至注射所需要浓度。按照文献报道方法建立小鼠强直性脊椎炎，每只小鼠皮下注射含有100μg人软骨蛋白的完全弗氏佐剂，分别在第3周和第5周重复一次，其中第5周注射时将完全弗氏佐剂换成不完全弗氏佐剂。在模型建立后6周，将小鼠随机分为两组，即75#化合物治疗组和对照组，分别给予处理。75#化合物治疗组按50mg/kg腹腔注射给75#化合物，对照组给相应量的DMSO水溶液，每周给药一次。36周时处死小鼠，取小鼠脊柱进行组织学染色，通过评分来评价治疗效果。评分标准如下：1分，附着点炎症，炎症细胞在脊椎盘聚集；2分，脊椎盘50％融合；3分，脊椎盘全部融合；4分，软骨/骨胶着。取小鼠血液，使用商品化的ELISA试剂盒(购自于美国R&D公司)检测血液中的IL-10和TNF-α细胞因子水平。
表23 75#化合物在AS模型疗效
Figure GDA0002755788260000273
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
表24 75#化合物给药治疗AS模型血清细胞因子水平检测
Figure GDA0002755788260000281
数据均以平均值±标准差的形式加以显示，显著性差异通过ANOVA检验加以确定。
*代表P≤0.05
如表23所示，AS模型小鼠经75#化合物治疗以后，其行为评分结果明显高于模型组。如表24所示，可以看出治疗组的促炎因子TNF-α的水平要明显要低于对照组，治疗组的抑炎因子IL-10的水平要明显高于对照组。75#化合物可以通过抑制全身炎症反应，从而有效控制AS的发展，减轻疾病损害。

Claims (8)

1.小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备抑制免疫细胞活化药物中的应用；
所述的一类小分子化合物及其药学上可接受的盐，该类化合物的通式如下：
Figure FDA0002755788250000011
其特征为所述化合物的具体取代基团如下面1-102#任意一项所述：
1#:n＝0；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
2#:n＝1；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
3#:n＝2；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
4#:n＝3；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
5#:n＝4；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
6#:n＝5；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
7#:n＝6；X1＝O；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
8#:n＝0；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
9#:n＝0；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
10#:n＝1；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
11#:n＝1；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
12#:n＝2；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
13#:n＝2；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
14#:n＝3；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
15#:n＝3；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
16#:n＝4；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
17#:n＝4；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
18#:n＝5；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
19#:n＝5；X1＝S；X2＝H；X33＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
20#:n＝6；X1＝N；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
21#:n＝6；X1＝S；X2＝H；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
22#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
23#:n＝0；X1＝N；X2＝Cl；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
24#:n＝0；X1＝N；X2＝Br；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
25#:n＝0；X1＝N；X2＝I；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
26#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
27#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
28#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Br；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
29#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝I；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
30#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
31#:n＝0；X1＝S；X2＝Cl；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
32#:n＝0；X1＝S；X2＝Br；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
33#:n＝0；X1＝S；X2＝I；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
34#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
35#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝Cl；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
36#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝Br；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
37#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
38#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
39#:n＝0；X1＝O；X2＝Cl；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
40#:n＝0；X1＝O；X2＝Br；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
41#:n＝0；X1＝O；X2＝I；X3＝H；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
42#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
43#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Cl；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
44#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
45#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝I；R2＝H；R3＝H；R4＝H；
46#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
47#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
48#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
49#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
50#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
51#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
52#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
53#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
54#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
55#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
56#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
57#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝Ph；R3＝H；R4＝H；
58#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
59#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
60#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝H；
61#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
62#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
63#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝Ph；R3＝Ph；R4＝Ph；
64#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
65#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
66#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
67#:n＝0；X1＝N；X2＝Cl；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
68#:n＝0；X1＝O；X2＝Br；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
69#:n＝0；X1＝S；X2＝I；X3＝F；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
70#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
71#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
72#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝H；R3＝Ph；R4＝H；
73#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
74#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
75#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
76#:n＝0；X1＝N；X2＝Cl；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
77#:n＝0；X1＝O；X2＝Br；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
78#:n＝0；X1＝S；X2＝I；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
79#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝Cl；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
80#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝Br；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
81#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝I；R2＝H；R3＝H；R4＝Ph；
82#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝t-Bu；R3＝H；R4＝H；
83#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝t-Bu；R3＝H；R4＝H；
84#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝t-Bu；R3＝H；R4＝H；
85#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝H；R4＝H；
86#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝H；R4＝H；
87#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝H；R4＝H；
88#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝H；
89#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝H；
90#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝H；
91#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝Me；
92#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝Me；
93#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝Me；
94#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Me；
95#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Me；
96#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝Me；
97#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝t-Bu；
98#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝t-Bu；
99#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝H；R3＝H；R4＝t-Bu；
100#:n＝0；X1＝N；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝t-Bu；
101#:n＝0；X1＝O；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝t-Bu；
102#:n＝0；X1＝S；X2＝F；X3＝F；R2＝Me；R3＝Me；R4＝t-Bu。
2.如权利要求1所述的小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备抑制免疫细胞活化药物中的应用，其特征为所述免疫细胞为巨噬细胞。
3.如权利要求1所述的小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备抑制免疫细胞表达TNF-α药物中的应用。
4.如权利要求1所述的小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备促进免疫细胞表达IL-10药物中的应用。
5.如权利要求1所述的小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎药物中的应用。
6.如权利要求1所述的小分子化合物及其药学上可接受的盐在制备抑制肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎疾病中TNF-α表达，或者促进肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎疾病中IL-10表达药物中的应用。
7.如权利要求1所述的75#化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎药物中的应用。
8.如权利要求1所述的75#化合物及其药用盐或其药学上可接受的盐在制备抑制肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎疾病中TNF-α表达，或者促进肠炎、肺炎、肾炎、胃炎、肝炎、关节炎、红斑狼疮、多发性硬化或者强直性脊柱炎疾病中IL-10表达药物中的应用。
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