CN108159121A - 一种抑制h9n2禽流感病毒的中草药复方组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其药用有效成分包括绵马贯众、金银花、连翘、黄芩、甘草和板蓝根。本发明通过对中草药的特殊复配，使该复方组合物在针对H9N2禽流感病毒的应用上表现出优异的抑制效果，同时特别适用于畜禽饲养的日常使用。

Description

一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物

技术领域

本发明涉及畜禽饲养领域，特别涉及一种畜禽饲料添加剂。

背景技术

近年来相关学者对中药抗流感病毒的相关研究较多，也有抗流感病毒相似的方剂，如连花清瘟颗粒，其方剂组成为连翘、炙麻黄、金银花、杏仁、薄荷、绵马贯众、红景天、石膏、广藿香等药物。连花清瘟颗粒是吴以岭教授研制的治疗流感的现代中药复方制剂，目前广泛用于流感的治疗。

绵马贯众，徐程等采用鸡胚体外抗病毒实验，探究绵马贯众的3种提取物对抗鼠肺病毒FM1株的作用，结果发现绵马贯众3种提取物对甲型流感病毒FM1株有直接抑制作用，且作用效果从强到弱依次是乙醇提取物强于***提取物，水提取液效果最弱。孙科峰等通过体外实验研究了绵马贯众的水提取物和乙醇提取物对副流感病毒(I型、II型)的作用，发现提取物能减轻病毒引起的肺损伤。黄海英、杨关林等通过实验发现绵马贯众提取物对嘉兴流感病毒FM1株的预防和治疗作用比黄芩、苦参、金银花、连翘好。陈建新等通过鸡胚抗禽流感病毒实验得出，绵马贯众的正丁醇部位对禽流感H1N2亚型病毒抑制作用显著，并推测间苯三酚类及其衍生物是活性成分的主要成分所在。陈建新等还对绵马贯众提取液进行研究，发现其具有抗流感和禽流感病毒的作用，通过指纹图谱和HPLC-MS等方法分析，发现绵马酸ABA为其有效成分之一，并已针对该成分，建立了质量标准研究和专利申请。

金银花具有增强免疫的功能。周秀萍等灌胃大白鼠的实验结果表明服用金银花用量达到25mg体重时能增强机体的淋巴细胞转化率，以及增强TH1细胞分泌IL-2、IFN、TNF的能力显著增强机体的免疫功能。

杨溢以水煎法提取连翘的有效成分，对连翘抗猪流感病毒的效果进行评价。实验得出其具有抗病毒作用，主要是通过抵抗病毒吸附、干扰病毒复制和直接杀灭作用来对病毒产生抗性。刘晓静等在对3种中草药抑制甲3型流感病毒诱导细胞凋亡的研究中得出，连翘能抑制甲3型流感病毒诱导狗肾传代细胞凋亡。连翘抗流感病毒的主要有效部位为酚类成分。

板蓝根的水提液、醇提液、总生物碱液和表告依春液均有明显抗流感病毒作用，喹唑二酮抗病毒作用较弱，而靛玉红无抗流感病毒作用。

谢志平等提取分离获得甘草抗病毒有效部位(GC3-1-4)，并采用病毒唑作为阳性对照药，采用细胞病变抑制实验观察GC3-1-4在HeLa细胞中对副流感病毒III型的抑制作用，结果显示有效。

然而如何将上述中草药应用于抑制H9N2禽流感病毒的药剂中，对行业发展具有重要意义，现市面上仍未有理想的产品。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物。

本发明所采取的技术方案是：一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其药用有效成分包括绵马贯众、金银花、连翘、黄芩、甘草和板蓝根。作为上述方案的进一步改进，其按原料重量份计包括20～30份绵马贯众、15～25份金银花、10～20份连翘、5～25份黄芩、20～50份甘草和15～30份板蓝根。进一步优选地，本发明中草药复方组合物按原料重量份计包括20份绵马贯众、20份金银花、20份连翘、20份黄芩、20份甘草和20份板蓝根。

绵马贯众味苦，性微寒，有小毒，归肝、胃经，具有清热解毒，止血，杀虫的功能；金银花味甘，性寒，归肺、心、胃、大肠经，具有清热解毒，疏散风热的功能；连翘味苦，性微寒，归心、肺、胆经，具有清热解毒，散结消肿的功能；黄芩味苦，性寒，归肺、心、肝、大肠经，具有清热燥湿，泻火解毒，止血安胎的功能；甘草味甘，性平，归心、肺、脾、胃经，具有清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功能；板蓝根味苦，性寒，归心、肝、胃经，具有清热解毒，凉血利咽的功能。本发明创造性地将上述各药用有效成分作为复方用于畜禽饲养过程抑制H9N2禽流感病毒，使其各药用有效成分相辅相成并且对畜禽H9N2禽流感病毒的抑制表现出优异的效果。同时本发明对上述中草药复方中各原料组分的配比进行限定，使其药效与畜禽生长发育具有良好的适配性，且进一步提高其对H9N2禽流感病毒的抑制效果。

作为上述方案的进一步改进，本发明中草药复方组合物的药用有效成分还包括倒扣草、鸦胆草、水冬哥、虎杖、山豆根和大青叶。进一步地，其按原料重量份计还包括10～15份倒扣草、5～15份鸦胆草、10～20份水冬哥、10～20份虎杖、15～25份山豆根和15～30份大青叶。进一步优选地，本发明中草药复方组合物的药用有效成分按原料重量份计还包括15份倒扣草、15份鸦胆草、15份水冬哥、15份虎杖、15份山豆根和15份大青叶。具体地，考虑到中草药复方对禽畜生长发育的影响，本发明将倒扣草、鸦胆草、水冬哥、虎杖、山豆根和大青叶作为辅助药用有效成分，其与主要药用有效成分的复配大大降低了该中草药复方组合物的毒性提高其保健性能，从而更适用于畜禽生长发育过程中对H9N2禽流感病毒的抑制效果。

本发明的有益效果是：本发明通过对中草药的特殊复配，使该复方组合物在针对H9N2禽流感病毒的应用上表现出优异的抑制效果，同时特别适用于畜禽饲养的日常使用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行具体描述，以便于所属技术领域的人员对本发明的理解。有必要在此特别指出的是，实施例只是用于对本发明做进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术熟练人员，根据上述发明内容对本发明作出的非本质性的改进和调整，应仍属于本发明的保护范围。同时下述所提及的原料未详细说明的，均为市售产品；未详细提及的工艺步骤或制备方法为均为本领域技术人员所知晓的工艺步骤或制备方法。

实施例1

一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其药用有效成分按原料重量份计包括20份绵马贯众、20份金银花、20份连翘、20份黄芩、20份甘草和20份板蓝根，将原料各组分混匀，得实施例1中草药复方组合物。

实施例2

一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其药用有效成分按原料重量份计包括20份绵马贯众、20份金银花、20份连翘、20份黄芩、20份甘草、20份板蓝根、15份倒扣草、15份鸦胆草、15份水冬哥、15份虎杖、15份山豆根和15份大青叶，将原料各组分混匀，得实施例2中草药复方组合物。

实施例3：试验

1、制备试验药液

取实施例1和实施例2所得中草药复方组合物分别制成试验药液1和试验药液2，具体操作方法如下：

1)取中草药复方组合物，加入10倍蒸馏水，浸泡10min后加热至沸腾，在80～90℃温度下文火水煮2h，静置至常温，纱布过滤，得滤液；

2)用螺旋蒸发仪浓缩所得滤液至原生药浓度为1g/ml，于8000r/min条件下高速离心15min，取上清液并置于-20℃冰柜冷冻12h，得冻液；

3)解冻冻液，置于离心管中于10000r/min条件下超速离心15min，取上清液分装至10ml EP管中，然后在超净台中将分装在10ml EP管中的试验药液在完全培养基中划线，进行菌检，试验药液检验无菌后放-20℃冰箱储存备用。

2、试验药液的稀释与接种

分别对试验药液1和试验药液2进行5：4稀释(5份药液+4份PBS)，分装于各管(1a～18a和1b～18b管)，2.25ml/管；向第一管加入病毒原液0.25ml(AI H9N2亚型，222株，EID50-17/0.2ml/只SPF鸡胚)，充分混匀，吸取0.25ml至第2管，充分混匀，吸取0.25ml至第3管，如此类推，直到第18管；上述操作获得各管溶液药物浓度为1:2；1a～18a和1b～18b管病毒稀释度分别依次为10～1到10～18；各管溶液在37℃恒温箱中作用2h，为试验药液1和试验药液2对本病毒体外作用液，备后分别接种9日龄鸡胚。

3、PBS缓冲液接种

将1c～18c管分装PBS，2.25ml/管，向第一管加入病毒原液0.25ml，充分混匀，吸取0.25ml至第2管，充分混匀，吸取0.25ml至第3管，如此类推，直到第18管；上述操作获得1c～18c管病毒稀释度依次为10～1到10～18；各管溶液在37℃恒温箱中作用2h，为PBS对本病毒体外作用液，备后接种9日龄鸡胚。

4、接种SPF鸡胚

在无菌室中对鸡胚作消毒、定位、分别接种0.2ml稀释好的试验药液1、试验药液2和PBS缓冲液，即1a～18a、1b～18b和1c～18c共54管。用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔，然后放置37℃恒温箱培养3d。

5、照坯

早晚各照胚1次，挑出死胚，记录并放4℃冰箱过夜保存；若有发现接种后24h后死亡的鸡胚，应及时挑出、记录并放4℃冰箱保存。

6、收集胚液及HA血凝效价测定

1)对3d后未死亡的鸡胚放至-20℃冰柜冷藏2h，取出放4℃冰箱保存；

2)次日取出冷却鸡胚，在无菌室中按常规抽取尿囊液，每个鸡胚抽取胚液1～1.5ml至2ml EP管中，做好标记并放-20℃冰柜保存备用；

3)采取每个鸡胚的胚液，按常规作HA检测，记录感染情况。

7、试验结果

对试验药液1、试验药液2进行体外抑制H9N2亚型流感病毒试验，同时设PBS缓冲液作为对照组，试验重复一次，其检测得出的抑制效果如下表1和表2所示。

表1对H9N2亚型禽流感病毒的体外抑制试验结果1

表2对H9N2亚型禽流感病毒的体外抑制试验结果2

上述实施例为本发明的优选实施例，凡与本发明类似的工艺及所作的等效变化，均应属于本发明的保护范畴。

Claims (6)

1.一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分包括绵马贯众、金银花、连翘、黄芩、甘草和板蓝根。

2.根据权利要求1所述的一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分按原料重量份计包括20～30份绵马贯众、15～25份金银花、10～20份连翘、5～25份黄芩、20～50份甘草和15～30份板蓝根。

3.根据权利要求2所述的一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分按原料重量份计包括20份绵马贯众、20份金银花、20份连翘、20份黄芩、20份甘草和20份板蓝根。

4.根据权利要求1所述的一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分还包括倒扣草、鸦胆草、水冬哥、虎杖、山豆根和大青叶。

5.根据权利要求4所述的一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分按原料重量份计还包括10～15份倒扣草、5～15份鸦胆草、10～20份水冬哥、10～20份虎杖、15～25份山豆根和15～30份大青叶。

6.根据权利要求5所述的一种抑制H9N2禽流感病毒的中草药复方组合物，其特征在于：药用有效成分按原料重量份计还包括15份倒扣草、15份鸦胆草、15份水冬哥、15份虎杖、15份山豆根和15份大青叶。