CN108139380A

CN108139380A - 血液检查试剂盒及血液分析方法

Info

Publication number: CN108139380A
Application number: CN201680039609.7A
Authority: CN
Inventors: 山下清司; 中津川晴康; 大泽进; 杉本晋哉
Original assignee: Fujifilm Corp
Current assignee: Fujifilm Corp
Priority date: 2015-07-06
Filing date: 2016-07-06
Publication date: 2018-06-08
Also published as: US20180128806A1; JP6518630B2; JP2017015713A; EP3321675A1; EP3321675A4; US10746723B2

Abstract

本发明的课题在于提供一种通过控制邮寄中的外部温度的影响而能够以稳定的状态邮寄微量血液中的成分的血液检查试剂盒及使用了上述血液检查试剂盒的降低了测定值的变动系数的高精度的血液分析方法。根据本发明，可提供一种血液检查试剂盒，其包括：稀释液，用于稀释血液检体；分离构件，用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分；容器，用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分；及保冷构件，用于将上述容器进行保冷。

Description

血液检查试剂盒及血液分析方法

技术领域

本发明涉及一种用于将受检者自行采血的微量血液的成分以稳定的状态邮寄而进行血液检查的血液检查试剂盒及血液分析方法。

背景技术

通常，采血中有：普通采血，医生等某些有资格人员使用注射器从静脉采集血液；及自行采血，检查对象将采血针刺入到自身的手指等来采集血液。

通过普通采血而采集的血液，以被密封在采集容器中的状态搬送到医疗机构或检查机构，在那里进行检查。在不分离出血球和血浆而搬送血液的情况下，在医疗机构或检查机构，通过离心分离机将血液分离成血球和血浆之后进行检查。并且，在检查对象进行的自行采血中，采血后的血液通过分离膜而分离成血球和血浆，以该分离的状态被输送到检查场所，在那里进行检查。

专利文献1中记载有如下定量分析方法：测定检体中的分析对象成分量，而且，测定除此以外的始终原本存在于检体中的标准成分的量，由该标准成分的量和检体中的标准成分的已知浓度来确定检体的量，并由该检体量和分析对象成分量来确定检体中的分析对象成分的浓度。

专利文献2中记载有通过自行采血而采集的血液检体的检查方法。具体而言，记载有包括如下工序的活体试样中的应定量成分的定量方法：1)制备包括含有未定量容量而采集的应定量成分的未知容量的活体试样和含有一定量的指示物的一定量的水性溶液的定量用试样的工序；2)由含有一定量的指示物的一定量的水性溶液中的指示物浓度(C₁)和定量用试样中的指示物的浓度(C₂)来求出活体试样的稀释倍率(a)的工序；3)求出定量用试样中的应定量成分的浓度(Y)的工序；及4)根据由上述2)求出的活体试样稀释倍率(a)和由上述3)求出的定量用试样中的应定量物质的浓度(Y)来确定活体试样中的应定量成分的工序。

并且，在专利文献3中记载有如下方法：使用血液稀释定量器具，从人和动物采集微量血液，将其原样或者在稀释之后将一定量供给到其他机器和容器，或者直接供给到试剂。而且，在专利文献4中记载有如下方法：利用稀释用水溶液中的指示物的吸光度来对生物学的试样中的应定量成分的浓度进行定量。

另一方面，在检查对象者采集血液检体时，通过具备小型刀的柳叶刀来进行采集，在血液中的任意成分浓度的定量中而被使用，但是通常需要采集100μL的血液检体。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-330603号公报

专利文献2：日本特开2003-161729号公报

专利文献3：日本特开2009-122082号公报

专利文献4：日本特开2009-109196号公报

发明内容

发明要解决的技术课题

用缓冲液稀释血液而进行分析的方法中，活体成分被保存在pH7.4的生理条件下的缓冲液中，输送中的稳定性也优异，但是由于无法控制邮寄中的外部温度影响，尤其在夏季的邮寄中，一些检体成分受到该影响而会引起测定值的减少和增加，难以进行高精度的检查。尤其，自行采集的微量血液通过邮寄等方式被分发到血液分析中心等，因此存在该期间因血液成分的变化影响精度而无法获得准确的检查结果的问题。若仅采用在专利文献1及2中所记载的稀释倍率的确定方法，则在进行如上述输送的情况下，难以进行高精度的检查。

本发明的课题在于提供一种血液检查试剂盒，其用稀释液来稀释微量血液，并确定稀释倍率，用于分析血液中的测定对象成分，所述血液检查试剂盒通过控制邮寄中的外部温度的影响，能够以稳定的状态邮寄微量血液中的成分。而且，本发明的课题在于提供一种血液分析方法，其使用了上述血液检查试剂盒，并防止了因测定值的温度而产生的影响且精度高。

用于解决技术课题的手段

本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究的结果，发现了能够提供一种血液检查试剂盒，其包括：稀释液，用于稀释血液检体；分离构件，用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分；及容器，用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分，所述血液检查试剂盒通过包括用于将容器进行保冷的保冷构件而解决了上述课题。而且，本发明人等使用上述血液检查试剂盒，并通过血液分析方法而分析测定对象成分的结果，发现了可以进行防止了因测定值的温度而产生的影响的高精度的血液分析，所述血液分析方法包括使用始终存在于血液中的标准成分及/或稀释液中的标准成分(内部标准物质)来确定稀释倍率的内容。本发明是根据上述见解而完成的。即，根据本发明，可以提供以下发明。

(1)一种血液检查试剂盒，其包括：

稀释液，用于稀释血液检体；

分离构件，用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分；

容器，用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分；及

保冷构件，用于将容器进行保冷。

(2)根据(1)所述的血液检查试剂盒，其中，保冷构件包括保冷剂及保冷袋。

(3)根据(1)或(2)所述的血液检查试剂盒，其中，保冷构件还包括容纳部件，其能够收纳用于容纳被回收的血浆成分的容器，且厚度为35mm以下。

(4)根据(1)至(3)中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，血液检查试剂盒包括记录温度履历的部件。

(5)根据(1)至(4)中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，血液检查试剂盒包含记载有保冷构件的使用方法的说明书。

(6)根据(1)至(5)中任一项所述的血液检查试剂盒，其用于使用始终存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分浓度，其中，稀释液不含有标准成分。

(7)根据(6)所述的血液检查试剂盒，其中，标准成分是钠离子或氯离子。

(8)根据(6)或(7)所述的血液检查试剂盒，其中，标准成分是钠离子或氯离子和至少另一种标准成分。

(9)根据(8)所述的血液检查试剂盒，其中，上述至少另一种标准成分是选自总蛋白质或白蛋白的标准成分。

(10)根据(8)或(9)所述的血液检查试剂盒，其用于使用始终存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度，且验证该分析，其中，稀释液不含有标准成分。

(11)根据(1)至(10)中任一项所述的血液检查试剂盒，其中，稀释液包含不存在于血液中的标准成分，血液检查试剂盒用于使用不存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度。

(12)一种血液分析方法，其使用(6)至(9)中任一项所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

(13)一种血液分析方法，其使用(10)所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度，且使用与始终存在于血液中的上述标准成分不同的标准成分来确定血浆的稀释倍率，验证对象成分浓度的分析。

(14)一种血液分析方法，其使用(11)所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的不存在于血液中的标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

(15)一种血液分析方法，使用包含不含有始终存在于血液中的标准成分的稀释液的(11)所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的标准成分及不存在于血液中的标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

(16)根据(12)至(15)中任一项所述的血液分析方法，其中，所稀释的血浆的液体量为100μL以上且1000μL以下。

发明效果

根据本发明的血液检查试剂盒，能够以稳定的状态邮寄微量血液中的成分，并能够进行防止了因测定值的温度而产生的影响的高精度的血液分析。根据本发明的血液分析方法，能够进行防止了因测定值的温度而产生的影响的高精度的血液分析。

附图说明

图1表示用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分的容器的结构的一例。

图2表示防潮箱的示意图。

图3表示钠酶的测定方法的线性。

具体实施方式

以下，关于本发明进行详细的说明。

将始终存在于血液中的标准成分称作外部标准物质或外部标准。

不存在于血液中的标准成分称作内部标准物质或内部标准。

患者和就诊者为了疾病的治疗和诊断或健康管理，通常，到医疗机构和就诊场所，有时会进行从静脉采集血液进行检查。然而，为了得知检查结果需要等待长时间，对小孩来讲，从静脉采集血液会成为负担。并且，若包括为了检查而移动的时间，则需要半天以上的时间，因此存在因自身工作等情况而错过接受检查的机会的问题、以及对自身工作造成不利的问题。上述问题可以通过患者和就诊者在自己的家和检查室等自行采集微量的血液，并将其稳定地保管并保存及搬送而得到解决。例如在专利文献1及2中记载有通过自行采血而被分离的血液检体的检查方法。

将始终存在于血液中的成分作为标准成分，可以举出钠离子(Na+)、氯离子(Cl-)、钾离子(K+)、镁离子(Mg2+)、钙离子(Ca2+)、总蛋白质(TP)等。在以较高的稀释倍率稀释了微量的血液成分的情况下，为了能够以充分高的精度检测上述标准成分，优选测定以高浓度存在于微量的血液中的标准成分。作为这种标准成分，优选为钠离子(Na+)或氯离子(Cl-)，而且，在始终存在于血液中的成分中，最优选存在于血液中的量最高的钠离子(Na+)。然而，使滤纸和多孔质材料吸收血液之后进行干燥而邮寄并提取血液成分的方法，在干燥的过程和邮寄时成分会进行改性。并且，根据专利文献1，从已干燥的试样中提取活体成分的缓冲液，为了调整pH和活体成分稳定化而需要利用添加了NaOH和NaCl、HCl的缓冲液。因此，在将试样的成分中最具恒定性且个体间差异少的钠离子和氯离子的浓度作为外部标准来补正被稀释的原先其它活体成分浓度时无法利用。

并且，在专利文献2中公开有，在使用缓冲液进行稀释的情况下，使缓冲液含有内部标准物质，并准确地求出血液的稀释倍率的方法。

另一方面，用缓冲液进行稀释的方法中，活体成分被保存在pH7.4的生理条件下缓冲液中，且在输送中例如通过邮寄的输送中稳定性也优异，然而，无法控制邮寄中的外部温度的影响，因此尤其在夏季的邮寄中，一些检体成分受到外部温度的影响会引起减少和增加，难以进行高精度的检查。并且，由于被采集的微量血液通过邮寄等方式分发到血液分析中心等，因此存在这期间因血液成分的变化的影响而无法得到准确的检查结果的问题。在上述情况下，若仅通过专利文献1所示的外部标准物质来确定稀释倍率、或者通过专利文献2所述的内部标准物质来确定稀释倍率，则难以进行1周以上的长时间的输送。

在本发明中发现了使用包括用于将容器进行保冷的保冷构件的血液检查试剂盒，并通过根据血液分析方法而分析测定对象成分而能够降低测定值的变动，并可以进行高精度的血液分析，所述血液分析方法包括使用始终存在于血液中的标准成分(外部标准物质)及/或稀释液中的标准成分(内部标准物质)来确定稀释倍率的情况。关于将保冷构件和使用始终存在于血液中的标准成分及/或稀释液中的标准成分来确定稀释倍率进行组合以往完全未公知，通过上述组合而可以进行高精度的血液分析完全是意料之外的事情。

根据本发明的血液检查试剂盒及血液分析方法，在患者亲自采集血液的情况下，例如即使在夏季或高温潮湿的地区因测定对象成分受到邮寄中的外部温度的影响而容易引起测定值的减少和增加的情况下，也能够简单地控制邮寄中外部温度的影响，并可以抑制测定对象成分的变动，可以进行高精度的检查。使用了本发明的血液检查试剂盒的微量血液采集在时间和场所上没有限制，因此能够应用到没有前往医疗机构的时间的事例、灾难时、远程医疗及健康管理等，因能够早期发现没病的人而也有助于节省医疗费。并且根据本发明，使用微量的血液(例如65μL)能够进行生物化学检查13项、肿瘤标志、肝炎检查等多种检查，并能够使用市售的生物化学自动分析装置有效地测定大量的试样。使用本发明的血液检查试剂盒而测定的检查数据通过发送到智能手机而能够利用于日常的健康管理和疾病的早期发现的***中。

[1]血液检查试剂盒

本发明的血液检查试剂盒包括：稀释液，用于稀释血液检体；分离构件，用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分；容器，用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分；及保冷构件，用于将上述容器进行保冷。

(1)用于稀释血液检体的稀释液

本发明的血液检查试剂盒用于稀释患者所采集的血液，并输送到医疗机构或检查机构进行测定对象成分的分析，从采血到分析，有可能被长时间放置。该期间，优选在血液的稀释液中防止对象成分的分解和改性。至于血液的pH，健全者通常以pH7.30～7.40的程度保持为恒定。从而，为了防止对象成分的分解和改性，稀释液优选为pH6.5～pH8.0，更优选为pH7.0～pH7.5，进一步优选为pH7.3～pH7.4，优选为含有抑制pH变动的缓冲成分的缓冲液。

作为缓冲液的种类，已知有乙酸缓冲液(Na)、磷酸缓冲液(Na)、柠檬酸缓冲液(Na)、硼酸缓冲液(Na)、酒石酸缓冲液(Na)、Tris(三(羟甲基)氨基乙烷)缓冲液(Cl)、HEPES([2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸])缓冲液、磷酸缓冲生理盐水(Na)等。其中，作为pH7.0～pH8.0附近的缓冲液，具代表性的有磷酸缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液。然而，磷酸缓冲液含有磷酸的钠盐。Tris缓冲液的解离pKa(Ka为酸解离常数)为8.08，因此为了使其在pH7.0～pH8.0附近具有缓冲能力，通常，与盐酸组合而进行使用。HEPES的磺酸的解离的pKa为7.55，为了调整离子强度恒定的缓冲溶液，通常，使用氢氧化钠、氯化钠及HEPES的混合物。它们作为具有将pH保持为恒定的作用的缓冲液是有用的，但在本发明中含有优选作为外部标准物质而使用的物质即钠离子或氯离子，因此不优选适用于本发明。于是，本发明人等经过深入研究，发现了不含有钠离子和氯离子的新型的缓冲液。

能够使用于本发明中的不含有钠离子及氯离子的稀释液，优选包含：选自包括2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺及三乙醇胺的组中的至少1种氨基醇化合物；及选自包括Good's缓冲液(Good's buffer)中pKa为7.4附近的缓冲剂即也称作HEPES的2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙烷磺酸(pKa＝7.55)、也称作TES的N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.50)、也称作MOPS的3-吗啉代丙磺酸(pKa＝7.20)及也称作BES的N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙烷磺酸(pKa＝7.15)的组中的至少1种缓冲剂。上述中优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES、TES、MOPS或BES的组合，而且，最优选2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)与HEPES的组合。

为了制作上述缓冲液，将氨基醇和Good's缓冲液以1:2～2:1、优选以1:1.5～1.5:1、进一步优选以1:1的浓度比进行混合即可。缓冲液的浓度不受限定，但氨基醇或Good's缓冲液的浓度为0.1～1000mmol/L，优选为1～500mmol/L，进一步优选为10～100mmol/L。

在缓冲液中，以稳定地保持分析对象成分为目的可以含有螯合剂、表面活性剂、抗菌剂、防腐剂、辅酶、糖类等。作为螯合剂，可以举出乙二胺四乙酸盐(EDTA)、柠檬酸盐、草酸盐等。作为表面活性剂，可以举出例如阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性表面活性剂或非离子表面活性剂。作为防腐剂，例如，可以举出叠氮化钠和抗生物质等。作为辅酶，可以举出磷酸吡哆醛、镁及锌等。作为红血球稳定剂的糖类，甘露糖醇、葡萄糖、低聚糖等。尤其，通过添加抗生物质，能够抑制手指采血时从手指表面混入的一部分细菌的増殖，并能够抑制因细菌而产生的活体成分的分解，从而实现活体成分的稳定化。

通过这些缓冲液而被稀释的成分，优选在生物化学/免疫自动分析装置中的各种测定方法中也不会干涉测定，进而血球不会溶血，以及活体成分在37℃下尽量也能够稳定地保存。

在活体试样中使用全血的情况下，需要用过滤器对所稀释的血液中的血球成分进行过滤，因此通过将缓冲液的渗透压设为与血液相等(285mOsm/kg(mOsm/kg：在溶液的水1kg所具有的渗透压下，离子的毫摩尔数))或血液以上而能够防止血球的溶血。渗透压能够通过不影响对象成分的测定、及始终存在于血液中的标准成分的测定的盐类、糖类及缓冲剂等而调整为等渗。

作为用于稀释血液检体的稀释液的第一例，是求出稀释倍率时使用的不含有始终存在于血液中的物质(以下，也称作恒定性物质)的稀释液。在本说明书中，“不含有”是指“实质上不含有”。在此，“实质上不含有”是指完全不含有求出稀释倍率时使用的恒定性物质，或者即使含有，也以对稀释了血液检体之后的稀释液的恒定性物质的测定不带来影响的程度的极微量的浓度含有的情况。作为恒定性物质而使用钠离子或氯离子的情况下，作为稀释液，使用实质上不含有钠离子或氯离子的稀释液。

本发明的血液检查试剂盒为用于使用始终存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度的血液检查试剂盒的情况下，稀释液是不含有上述标准成分的稀释液。

作为用于稀释血液检体成分的稀释液的第二例，是含有内部标准物质的稀释液。内部标准物质能够以成为规定的浓度的方式添加并使用于在活体试样的稀释中使用的稀释液中。作为内部标准物质，能够使用完全不包含于血液检体中，或者即使包含也是极微量的物质。作为内部标准物质，优选使用不干涉血液检体中的对象成分的测定的物质、不会受到血液检体中的活体酶的作用而分解的物质、在稀释液中稳定的物质、不透过血球膜并不包含于血球中的物质、不会吸附于稀释液的保存容器上的物质、能够利用能够以高精度测定的检测***的物质。

作为内部标准物质，优选即使在添加到作为缓冲液的稀释液中的状态下长时间保管也稳定的物质。作为内部标准物质的例子，可以举出甘油三磷酸，作为碱金属，可以举出Li、Rb、Cs或Fr，而且，作为碱土金属，可以举出Sr、Ba或Ra，其中，优选甘油三磷酸或Li。这些内部标准试样在血液稀释后测定浓度时，通过添加第二试剂而显色，能够由该显色浓度求出稀释血液中的浓度。例如，在添加到缓冲液中的锂内部标准物质的测定中，利用螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)，并使用生物化学自动分析装置，可以容易测定多种微量的试样。

本发明的血液检查试剂盒是用于使用不存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度的血液检查试剂盒的情况下，稀释液是包含上述不存在于血液中的标准成分的稀释液。

作为用于稀释血液检体的稀释液的第三例，是不含有求出稀释倍率时使用的始终存在于血液中的标准成分，且含有内部标准物质的稀释液。

(2)用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分的分离构件及用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分的容器

作为用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分的分离构件，优选为分离膜的方式，更优选具有可分离血球成分的细孔的过滤器。

用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分的容器的形状及大小并无特别的限定。

从不易破损、卫生方面及价格等观点考虑，容器的材料优选为合成树脂。可以举出例如聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙酸乙烯酯、聚氨酯、聚乙烯对苯二甲酸酯、聚乳酸、丙烯腈丁二烯苯乙烯树脂(ABS树脂)、丙烯腈-苯乙烯树脂(AS树脂)、丙烯酸树脂(PMMA)、聚碳酸酯、硅酮树脂及硅酮橡胶等。

作为本发明的血液检查试剂盒的一例，能够具备：用于稀释血液检体的稀释液；容纳有稀释液的第一容纳器具；用于从用稀释液来稀释的血液检体中分离并回收血浆的分离器具；用于保持分离器具的保持器具；用于容纳已回收血浆的第二容纳器具；及用于使已容纳血浆维持在第二容纳器具内的密封器具；在皮肤上制造伤口以使血液渗出到皮肤外部的针或柳叶刀、贴在伤口上的创可贴或消毒部件(例如浸渍异丙醇(70质量％异丙醇等)或乙醇等的无纺布)、操作说明书等。

第一容纳器具及第二容纳器具可以将1个器具兼用作第一容纳器具及第二容纳器具，也可以是具备不同的器具的方式。为了使患者或进行稀释倍率的测定和分析对象成分的分析的测定者，可以确认稀释了容纳器具内的血液的稀释液，第一容纳器具及第二容纳器具优选由透明的原材料来制成。另外，本发明中所说的透明是指只要观测者能够确认内部的液体量的程度透明即可，是包括半透明等的概念。

保持分离器具的保持器具，优选为垫圈的方式。并且，作为密封器具，在容纳器具为筒形状的器具等的情况下，能够使用可以盖住开口的顶盖，具有螺旋状槽的盖或者橡胶塞子等。

关于容纳有稀释液的第一容纳器具、用于从通过稀释液而被稀释的血液检体中分离并回收血浆的分离器具、用于保持分离器具的保持器具、用于容纳已回收血浆的第二容纳器具及用于使所容纳的血浆维持在第二容纳器具内的密封器具，作为其具体的结构例，能够使用例如日本专利第3597827号公报的图1至图13中所记载的器具。将日本专利第3597827号公报的图1作为本申请的图1而引用。

血液分离器具1具备采血容器2(容纳有稀释液的第一容纳器具)、可嵌插于采血容器2中的筒体3(用于容纳已回收血浆的第二容纳器具)、可以盖装于筒体3上的顶盖活塞4、设置于顶盖活塞4的下端的密封盖5(密封器具)，使用之前，如图1所示，采血容器2的上端开口部通过顶盖6隔着密封件7而被封闭。本发明中的用于容纳被稀释的血液检体的容器在图1的结构中对应于采血容器2和筒体3的组合。即，用于容纳被稀释的血液检体的容器可以是1个，也可以是2个以上的组合。

采血容器2以透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部在外表面形成有螺纹部8，内表面上突出设置有卡止部9。并且，在采血容器2的下端部形成有倒圆锥状底部10，在底部10的周围形成有圆筒状腿部11。腿部11具有与分析和检查血液时使用的样品杯相同的外径，优选在其下端的对置的位置分别沿铅垂方向形成有狭缝槽12。而且，如图1所示，在采血容器2内也可以预先放入有所需要量例如500mm³的稀释液13。

筒体3由透明的材质制成且呈圆筒状，其上端部上形成有扩径部14。扩径部14经由薄壁部15而与主体部16连接。筒体3的下端部形成有缩径部18，在缩径部18的内表面形成有卡止突起部19。而且，在缩径部18的下端部形成有外锷部20(保持器具)，外锷部20的下端开口部通过过滤膜21(分离器具)而被覆盖，过滤膜21容许血液中的血浆的通过，并阻止血球的通过。

缩径部18的外周装配有硅橡胶制罩22(图1)。

顶盖活塞4由大致呈圆筒状的握持部26、与握持部26为同心且向下方延伸的芯棒部27构成。在握持部26的内侧上端部形成有筒体3的扩径部14可以嵌合的圆筒状的空间28，并且，其下方被螺刻，可以与螺纹螺合。芯棒部27其下端部29形成为销状，在下端部29可装卸地设置有密封盖5(参考图1)。密封盖5为硅橡胶制密封盖。

基于上述器具的血液分离方法的详细内容记载于日本专利第3597827号公报的0023～0026段落以及图12及图13中，该内容被引用于本说明书中。

(3)用于将容器进行保冷的保冷构件

邮寄血液检体时优选的温度为-10℃以上且20℃以下，尤其优选的温度为0℃以上且10℃以下。在本发明中，因在血液检查试剂盒中包括保冷构件而可以实现上述保冷。

作为保冷构件，能够使用保冷剂。在放入保冷剂的袋的表面或说明书中，可以记载有预先在冷冻库等中将保冷剂进行冷却、以及直到保冷剂可以保冷的状态的冷却时间等。并且，可以记载有容纳被回收的血浆成分及保冷剂的保冷部件的使用方法等。由此，采血者考虑冷却时间而实施采血，能够将血液检体容纳于规定的保冷部件中。

作为保冷剂并无特别的限定，例如作为无机盐的水溶液，有氯化钠、氯化铵、氯化镁等，作为多元醇，有乙二醇、丙二醇等，作为凝胶化剂，有羧甲基纤维素、聚乙烯醇、聚丙烯酸钠、聚丙烯酰胺等亲水性聚合物，作为用于使保冷剂冻结的成核剂，能够使用添加了碘化银、硫化铜、黄原胶、α-吩嗪及焦磷酸钠的成核剂等。尤其，通常，装袋而使用并市售的保冷剂(例如商标名称：冰袋，注册商标)中包含有约99百分比的水和高吸水性树脂(聚丙烯酸钠)、防腐剂、形状稳定剂，在常温下处于解冻的状态而没有保冷效果，因此首先在冷冻库中充分进行冷冻之后而使用。保冷剂即使在因使用而被加热之后，也通过再次冷冻便能够重复使用任意次数。

基于缓冲液的稀释和紧随其后的血浆的分离及回收，在降低血球的溶血和来自血球细胞的物质的溶出影响方面是至关重要的。该情况下，保冷也能将缓冲液中的物质对血液成分的影响抑制为最小限度，因此在维持成为对象的血液成分的稳定性的方面，以实现血浆分离后的状态的稳定化作为目的，通过适当的缓冲液(稀释液)的设计而产生有关稳定化的协同效果。

容纳用稀释液来稀释使用于血液检查中的微量血液的溶液状态的检体的容器、或者容纳刚采集血液并稀释之后分离出血浆/血球的状态的检体的容器，优选由可以具有上述保冷状态的保冷剂来包覆或包围。而且，从延长保冷剂的保冷时间的方面考虑，优选上述容器放入具有隔热性的铝膜等金属箔的保冷袋中，并且在防止因基于外部光的阻断的光吸收而引起的温度上升的方面是优选的。即，优选保冷构件由保冷剂及保冷袋构成。并且，在由保冷剂包覆之后或者包围之后，由隔热片材来包覆，并放入具有铝膜等金属箔的隔热性保冷袋中，这在防止保冷剂的冷气泄漏方面尤其优选。并且，该结构优选不仅具有保冷的效果，而且还具有因输送而产生的冲击的缓和效果。

对采血者来讲，即使如此由保冷剂来包覆，进而在放入保冷袋中的状态下，若为不去邮局的窗口等办理手续就无法邮寄的大小，则离最近的邮局较远的情况和年老者的情况下，本发明的微量血液采集试剂盒很可能会成为导致对使用敬而远之的1个要因。

因此，优选为可***到邮筒的投递口的尺寸。例如，若为邮政包裹(尺寸340mm×250mm×厚度35mm，重量1kg以下)，则无需到邮局的窗口，而能够直接投递到邮筒中。而且，可实现低成本的输送，也有邮件的跟踪服务，在价格和安心感方面是优选的。

作为使厚度在35mm以内的研究，例如将具有厚度为35mm以下的检体的容器进行收纳的容纳部件，作为保冷构件之一而包括在血液检查试剂盒中，当预先冷却保冷剂时，用保冷剂来夹持该容器，由此即使保冷剂成为凝固并***的状态以便可以进行保冷，也由于在容纳部件中能够确保收纳具有检体的容器的空间，因此即使用***的保冷剂来夹持具有检体的容器，整体的厚度也能够达到35mm以下的厚度。

并且，作为本发明的优选的另一实施方式，通过使用具有保冷剂因冷却而凝固的部分和未凝固的部分这2层结构的保冷剂来包覆容纳血球/血浆分离后的血浆成分的容器，由此能够实现35mm以下的厚度，可以以简单且低价进行邮寄。

(4)其它要素

本发明的血液检查试剂盒的优选方式是具有记录使用保冷构件后的温度履历的部件的方式。作为记录温度履历的部件，优选使用热标签或RFID(radio frequencyidentifier：射频识别)标签等。通过在具有检体的容器上贴附可以检测适当的温度的热标签等而可以检查到达分析中心前后的最高达到温度，因此之后能够掌握邮寄中的保冷效果的情况。或者，通过将搭载有温度传感器的RFID标签配置在容纳血液检体的容器的附近，在分析中心能够详细地管理邮寄时的温度变化。

并且，保冷剂为了再利用，优选放入保冷剂的袋子是可以清洗的，表面被实施抗菌涂层等。

作为本发明的血液检查试剂盒的优选方式，是包括记载有保冷构件的使用方法的说明书的方式。例如包含邮寄时需要使用保冷剂与否的判定物的试剂盒也是优选方式。例如，热标签放入试剂盒中，邮寄前的可逆性热标签的达到温度为25℃以上时(夏季，高温潮湿的地方)，优选在说明书中记载有使用保冷剂的试剂盒。并且，试剂盒中也包括通过剥离脱模纸而可以使用的不逆性热标签，邮寄时将稀释后的血液和开始使用的不可逆性热标签一起进行包装，由此可以掌握血液采集后邮寄时的最高达到温度。从而，在夏季购买试剂盒、冬季气温低的时期进行采血并邮寄的情况下，或者阳光直接照射到的场所保管了试剂盒的情况下等，因适宜地掌握采血后邮寄时的最高达到温度而优选。

(5)血液检查试剂盒的提供方式

本发明的血液检查试剂盒中所包含的各要件的个数并无特别的限定，可以为1个，也可以是2个以上的多个。

本发明的血液检查试剂盒能够以如下方式提供：将用于稀释血液检体的稀释液、用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分的分离构件、用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分的容器、用于将上述容器进行保冷的保冷构件，收纳于将它们进行收纳的收纳容器中。

[2]血液分析方法

使用本发明的血液检查试剂盒来采集血液检体，从而能够测定血液检体中的分析对象成分。本发明的血液分析方法可以通过受检者自身采集血液的采集的自行采血而实施，也可以在医生等有资格人员使用注射器采集血液的普通采血中进行实施。

在本发明中，成为分析对象的活体试样为血液，血液是包括血清或血浆的概念。优选能够使用由受检者采集微量的血液，在用缓冲液进行稀释之后，通过过滤器和离心分离来分离出血球而得到血浆或血清。

血液检体的来源并不限定于人，也可以是除了人以外的动物(哺乳类、鸟类及鱼类等)等。作为除了人以外的动物，可以举出例如马、牛、猪、羊、山羊、狗、猫、老鼠、熊、熊猫等。优选血液检体的来源是人。

作为优选方式，患者本人使用柳叶刀等带刀具的器具对指尖等制造伤口，在皮肤外部采集血液。为了减轻患者的负担，优选降低侵袭性而采集血液，期待在采集血液时能够以无疼痛感或疼痛感非常少的状态进行采血，该情况下，优选伤口的深度和大小小。从而，若考虑对患者的负荷，使用于本发明的分析方法中的来自患者的采血量优选为100μL以下。并且，通过稀释液而稀释后的稀释血浆液的液体量优选为100μL以上且1000μL以下。若为100μL以上，则血浆分离时溶血的频率减小，且邮寄时费时间的情况下，也没有需要气密性高的容器的制约。若为1000μL以下，则能够实现对测定有效的稀释率，因此可以以高精度进行测定。

作为本发明的血液分析方法的第一方式，将在血液检体中始终含有的成分作为标准成分而使用。具体而言，可以举出钠离子(Na+)、氯离子(Cl-)、钾离子(K+)、镁离子(Mg2+)、钙离子(Ca2+)、总蛋白质(“TP”)、白蛋白等。血液检体中所包含的这些标准成分的浓度为如下：Na浓度为134～146mmol/升(平均值：142mmol/升)、Cl浓度为97～107mmol/升(平均值：102mmol/升)、K浓度为3.2～4.8mmol/升(平均值：4.0mmol/升)、Mg浓度为0.75～1.0mmol/升(平均值：0.9mmol/升)、Ca浓度为4.2～5.1mmol/升(平均值：4.65mmol/升)、总蛋白质浓度为6.7～8.3g/100mL(平均值：7.5g/100mL)、白蛋白浓度为4.1～5.1g/100mL(平均值：4.6g/100mL)。其中，在以较高的稀释倍率来稀释微量的血液成分时，为了能够以充分高的精度来检测这些具有恒定性的标准成分，优选测定以高浓度存在于血液中的标准物质，并且，即使在来自除了血液以外的未意料到的成分暂且混入到稀释液中的情况下，也认为以高浓度存在于血液中的标准物质对混入影响的耐性高，能够抑制检查精度的降低。作为这种标准成分，优选钠离子或氯离子，而且，在始终存在于血液中的标准成分中，最优选存在于血液中的量最高的钠离子。Na离子以标准值(正常值)为142mmol/升，且占血浆中的总体阳离子的90％以上。

上述第一方式的血液分析方法中，使用不含有始终存在于血液中的标准成分的稀释液的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，使用所稀释的血浆中的、始终存在于血液中的上述标准成分来确定血浆的稀释倍率，能够分析血液检体中的对象成分的浓度。

钠离子浓度及氯离子浓度能够通过例如火焰光度法、原子吸光法、玻璃电极法、滴定法、离子选择电极法、酶活性法等而测定。

在本发明中，从手指采集微量的血液，用稀释液来稀释的试样仅仅是150μL左右，并测定10项以上的生物化学成分和免疫检查项目，因此优选能够以几μL的微量来进行外部标准物质的测定。并且，由于需要分析大量的试样，因此优选能够适用于市售的生物化学/免疫自动分析装置。

在本发明中，优选的标准物质是钠离子，由血液稀释后的稀释液中的钠离子的测定值(浓度X)和作为血液检体中的标准成分的钠离子的已知浓度值(浓度Y；142mmol/升)算出血液检体的稀释倍率(Y/X)。通过将该稀释倍率乘以已稀释的血液检体中的分析对象成分的测定值(浓度Z)，可以求出实质上包含于血液检体的血浆中的分析对象成分的浓度[Z×(Y/X)]。

并且，为了验证是否正常地进行血液的稀释和血浆的分离回收，优选将始终包含于2种以上的血浆检体中的不同的成分作为标准成分而分别独立地求出稀释倍率，并确认其值是否一致。一致是指在2个测定值(a,b)中，其差值相对于其平均值的比例，即|a-b|/{(a+b)/2}×100为20％以下，优选为10％以下，更优选为5％以下。作为优选的一种方式，在由血液检体的血浆稀释液中的钠离子浓度的测定值和始终包含于血浆中的钠离子的已知浓度值(142mmol/升)求出稀释倍率，在使用了该稀释倍率的血液检体中的对象成分浓度的分析中，确认由除了钠离子以外的始终包含于血浆中的标准成分求出的稀释倍率是否与由钠离子浓度求出的稀释倍率一致，由此可以验证正常地进行包含于血液检体的血浆中的成分的分析。在此，作为除了钠离子或氯离子以外的始终存在于血浆中的标准成分的例子，优选选自总蛋白质或白蛋白，更优选选自总蛋白质。总蛋白质的测定方法，有双缩脲法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法(Bradford法)、雷利法、二辛可宁酸法(Bicinchoninic Acid：BCA)法、荧光法等公知的方法，根据测定试样的特性和灵敏度、试样量等，能够适当地选择使用方法。

作为本发明的血液分析方法的第二方式，使用不存在于血液中的标准成分来确定稀释浓度。该情况下，使用包含含有不存在于血液中的标准成分的稀释液的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，使用所稀释的血浆中的、不存在于血液中的上述标准成分来确定血浆的稀释倍率，能够分析血液检体中的对象成分的浓度。

已知血液中的钠具有非常高的恒定性，且个体之间的变动也小。并且，其中间值浓度也为142mmol/L，作为活体浓度较浓，因此即用稀释液进行稀释，也能够以高精度测定该浓度。并且，稀释用稀释液中的内部标准能够设定为高浓度，因此能够以高精度测定浓度。

作为本发明的血液分析方法的第三方式，使用包含含有不存在于血液中的标准成分的稀释液的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，使用所稀释的血浆中的、始终存在于血液中的上述标准成分及不存在于血液中的标准成分来确定血浆的稀释倍率，能够分析血液检体中的对象成分的浓度。如上所述，通过将内部标准液的测定吸光度和试样的恒定性高的成分的外部标准的测定吸光度进行组合，作为测定精度高的定量法，能够弥补前述2种定量法的缺点而设为可靠性高的稀释成分定量法。

优选由下述式1至4中的任一个式来算出血液检体成分的稀释率，在稀释液中的分析对象成分的浓度上乘以上述稀释率，并分析血液检体成分中的对象成分的浓度。

[数学式1]

式1：(A+C)/(B+D)

式2：{(A²+C²)^1/2}/{(B²+D²)^1/2}

式3：X＝a×(B+D)±b

(在此，a及b是系数，预先得到(B+D)和稀释倍率的数据，制作出式3中表示的标准曲线。)

式4：X＝A/B’

(在此，B’＝(A×D)/C。)

上述式中，如下定义A、B、C、D、B’及X。

A：包含内部标准物质的稀释液的测定吸光度

B：从A将稀释了血液检体成分的稀释液的吸光度减去的吸光度

C：作为恒定性物质钠离子浓度为142mmol/L的被测定的吸光度

D：稀释了血液检体成分的稀释液的钠离子的吸光度

B’：基于由血浆钠的吸光度算出的稀释倍率的、稀释血浆中的不存在于血液中的标准成分的吸光度的补正值

X：血浆稀释液倍数

作为求出稀释率时的另一种计算方法也优选如下方式：由使用了均方根法的式5进行计算，在稀释液中的分析对象成分的浓度上乘以由式5算出的稀释率，并分析血液检体成分中的对象成分的浓度。

[数学式2]

式5：[{(A/B)²+(C/D)²}/2]^1/2

本发明涉及一种用于患者进行采血并将采集的血液搬送到医疗机构或检查机构进行检查的血液检查试剂盒及使用了上述血液检查试剂盒的血液分析方法。从而，采血后直至进行检查，血液有可能以被稀释的状态被放置长时间，在这期间，例如若引起红血球的溶血，则血球内的浓度高的物质和酶等在血浆或血清中溶出，有可能对检查结果造成影响，或者通过色调而测定分析对象成分的情况下，有可能血红蛋白对检查造成影响。从而，搬送中需要防止溶血、血液的凝固等，在本发明中优选包括以下工序：用稀释液来稀释患者采集的血液之后，从血液分离出血球。

从血液分离出血球而回收血浆的方法并无特别的限制。其中，优选在由稀释液稀释了血液之后立即进行采血后的血浆分离。可以使用以下方法等：用放入抗凝血剂的采血管进行采血之后进行离心分离，从而将血液分离成血球和血浆成分，以分离的状态进行搬送，或者对血液成分施加压力使其通过过滤膜等分离膜，从而使分离膜捕捉到血球成分，从血液分离出血球成分。该情况下，优选使用抗凝血剂。并且，为了确保测定精度，优选与除去血球成分的血液的溶液部分进行物理隔离，该情况下，具体而言，能够使用在日本特开2003-270239号公报中记载的具有防反流构件的活体试样分离器具等。

在本发明中，对血液检体中的对象成分的浓度进行分析是指，包含：确定对象成分的浓度(即，对于对象成分进行定量)；或者确定对象成分的浓度为规定的基准值以上，还是规定的基准值以下；及进行检测是否包含一定程度的浓度的定性等，分析方式并无特别的限定。

分析的对象成分并无限定，活体试样中所包含的所有物质成为对象。例如可以举出临床诊断中使用的血液中的生物化学检查项目、肿瘤标志和肝炎的标志等各种疾病的标志等，可以举出蛋白质、糖、脂质、低分子化合物等。并且，测定时不仅物质浓度成为对象，而且酶等具有活性的物质的活性也成为对象。各对象成分的测定能够通过公知的方法而进行。

以下关于本发明的血液分析方法的一例进行说明。

将微量血液试样65μL添加到内部标准添加稀释液280μL中进行混合，用过滤器过滤血球，将稀释血浆作为试样，并通过生物化学自动分析装置而测定内部标准和外部标准及活体成分的各浓度。

根据本发明的一种实施方式为如下方法：关于所采集的血液中的未知浓度的稀释血浆活体试样成分的定量及酶活性，通过市售的生物化学/免疫自动分析装置而有效地对大量的试样进行分析。准备在活体试样中使用维持一定的浓度的血浆钠等的外部标准物质、血浆中完全不包含或几乎不包含的成分即作为不通过血球膜的内部标准物质，将这些物质添加到缓冲液中。优选该内部标准物质在稀释液中长时间保持稳定，并能够容易进行定量。作为具体例，可以举出锂和甘油三磷酸。并且，测定试样的外部标准的钠也因为是元素而保持稳定。

在钠离子的测定中，利用酶半乳糖酶的酶活性因钠离子而被活性化的情况，能够使用以几μL来测定通过缓冲液而被稀释的非常低浓度的钠离子(24mmol/L以下)试样的酶的测定方法。该测定方法中，通过缓冲液而被稀释的试样的钠浓度和半乳糖酶活性成比例关系，并能够适用于生物化学/免疫自动分析装置中，在以测定钠为目的的不需要另一机器的方面，效率高且经济，因此是尤其优选的测定方法。

以下，通过实施例对本发明进行说明，但本发明并不限定于实施例。

实施例

(实施例1)

由作为志愿者的患者进行知情同意之后，采血管中获取了用注射器从静脉采集的10mL的血液。准备能够吸收65μL左右的血液的海绵，使用放入稀释液300μL的DEMECAL(注册商标)血液检查试剂盒(Leisure,Inc.)如下进行了GPT(谷氨酰转肽酶)和HbA1c(血红蛋白A1c)的分析。首先，使用安装有上述试剂盒如上所述那样准备的海绵的采血器具，使海绵抽吸认为65μL左右的血液，使其在稀释液中溶出之后，进行血浆/血球分离并容纳于容器中。之后，假定夏季进行瓶/样品的保管、输送，准备了不进行冷却而在25℃至40℃的环境下保管3天时间的样品。容器的表面上贴附有可以检测40℃的环境的热标签。

另外，准备厚度为30mm的横长的容纳部件即盒，该盒具有放入血浆/血球分离后的血浆稀释液的容器的空间、及在与该容器的两边相邻的状态下可以收纳保冷剂的空间，盒中收纳有放入血浆/血球分离后的血浆稀释液的容器，以从其两边用冷却的保冷剂(冰袋：注册商标)的形式进行了收纳。在放入有血浆稀释液的容器的表面贴附有热标签。将该盒放入具有铝膜的可以遮光的隔热性保冷袋中进行密封，进而，对该保冷袋进行可以邮寄的包装的基础上，在相同的环境条件下保管了3天。

不使用保冷构件的容器的热标签表示了40℃履历。另一方面，使用了保冷构件的容器的热标签不表示40℃履历，而经过测定使用了保冷构件的情况下的样品的实质温度的结果为3℃至9℃。

使用如上所述准备的2种样品，求出了进行了以下(方法1)至(方法3)的稀释倍率的补正时血液分析结果的最大值和最小值及变动系数。各补正方法中的数据同样重复8次实验，并求出了统计值。

(方法1)测定稀释后混合液中的钠离子浓度，由该值和相对于通常作为始终存在于血液中的成分而被评价的钠离子浓度142mmol/L的浓度值来确定稀释倍率。

(方法2)使用添加于稀释液中的甘油三磷酸，根据“临床病理第56卷第7号(2008年7月)附刊577-583”中记载的方法求出了血浆的稀释倍率。

(方法3)使用利用上述方法1及方法2而得到的稀释倍率的值，根据以下方法求出了稀释倍率。

(方法3：基于外部标准法和内部标准法的并用的稀释倍率的测定)

以下记载使用了钠离子的外部标准法的实施例。表1中示出用于不含有钠离子的钠离子检测的测定试剂。

[表1]

表1钠离子测定试剂的组成

若在稀释液280μL中添加全血65μL，则全血中的血浆(约30μL)被稀释成约10倍。将该稀释血浆用纯净水稀释成5倍之后的3μL中添加作为钠离子测定试剂的第1试剂52μL，经5分钟在37℃下进行保温，添加作为钠离子测定试剂的第2试剂26μL之后，在主波长410nm、副波长658nm下，用JEOL Ltd.JCA-BM 6050型生物化学自动分析装置测定了1分钟的吸光度的变化。制作出表示钠离子浓度和吸光度变化量的校准曲线的结果，如图3所示，直至24mmol/L可得到通过原点的线性，并确认了钠的定量性。

表2中示出不含有钠离子的内部标准添加稀释液的结构。渗透压表示使用OSMOATAT OM-6040(ARKRAY,Inc.制造)而测定的值。

[表2]

表2

物质名称	浓度
		HEPES	50mmol/L
2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)	50mmol/L
		D-甘露糖醇	284mmol/L
甘油三磷酸	5mmol/L
		EDTA-2K	0.8mmol/L
PALP(磷酸吡哆醛)	0.05mmol/L
		噻苯达唑	0.0001质量％
哌拉西林钠	0.0003质量％
		阿米卡星硫酸盐	0.0003质量％
硫酸卡那霉素	0.0005质量％
		美罗培南三水合物	0.0005质量％
渗透压	355mOsm/Kg
		pH 7.4

利用作为内部标准物质的甘油三磷酸的浓度和作为恒定性物质的钠离子浓度，并通过式(1)而求出稀释倍率(X)。测定中使用JEOL Ltd.JCA-BM6050型自动分析装置，求出了血浆和稀释血浆稀释倍率。

[数学式3]

X＝[{(A/B)²+(C/D)²}/2]^1/2 (1)

A：包含甘油三磷酸的稀释液的测定吸光度

B：从由A求出的吸光度减去混合了血液的血浆成分和稀释液的混合液的吸光度的吸光度

C：作为恒定性物质，钠离子浓度为142mmol/L的溶液的吸光度

D：稀释了血浆成分的稀释液的钠离子浓度的吸光度

X：血浆稀释倍率

关于稀释血浆中的生物化学成分的浓度，在利用公知的酶活性的反应生成物浓度的测定值上乘以由上述式(1)求出的稀释倍率，对原来的血浆中的生物化学成分进行了定量。

表3中示出使用通过上述方法1至方法3而求出的稀释倍率而得到的GPT及HbA1C的定量值的最大值、最小值、变动系数CV(coefficient of variation：％)。

[表3]

如表3所示，根据本发明的结构，可确认测定的最大值与最小值之差及变动系数(CV％)的减小，能够确认各种测定的精度高的效果。

(实施例2)

采血之后，用缓冲液进行稀释时，使用DEMECAL血液检查试剂盒(Leisure,Inc.)的血浆/血球分离器具进行稀释之后，立即进行了血浆/血球分离。接着，以与实施例1相同的方式，准备可以进行保冷的厚度30mm的盒，在以与实施例1相同的方式可进行保冷之后可以邮寄的方式进行包装的状态下，赋予相当于国内2500km陆上运输的输送振动，在25℃下经过3天之后进行了血液分析。稀释倍率使用实施例1中所记载的方法1或方法3而求出。作为检查项目，测定了GOT(谷氨酸草酰乙酸转氨酶)、HbA1C及CRE(肌酸)。

作为比较，在进行血液稀释之后不立即进行血浆/血球分离，同样收纳于可以冷却的盒中进行同样的包装，赋予相当于国内2500Km陆上运输的输送振动，在25℃下经过3天之后，通过离心分离法对血液试样进行血浆/血球分离，进行了血液分析。

表4中示出定量结果的平均值和变动系数％。

[表4]

进行了保冷的情况的结果中血浆/血球分离的有无中的偏差的差异小，但是通过在稀释了血液试样之后立即进行血浆/血球分离，虽然存在一些输送振动的影响却减小，判定可得到偏差少的分析结果。

(实施例3)

示出求出血液血浆的稀释倍率的方法的一例。表2的组成中，准备了将甘油三磷酸变更为氯化锂1mmol/L的不含有钠离子的内部标准添加稀释液。添加到缓冲液中的锂内部标准物质的测定，利用螯合比色法(卤化卟啉螯合法：全氟-5,10,15,20-四苯基-21H,23H-卟啉)来测定吸光度而能够求出。

如上所述，血浆的基于缓冲液的稀释倍率能够通过下述式(2)而求出。

X＝(A+C)/(B+D) (2)

A：包含锂的稀释液的测定吸光度

B：从A减去稀释了血浆成分的稀释液的吸光度的吸光度

C：作为恒定性物质，钠离子浓度为142mmol/L的溶液的被测定的吸光度

D：稀释了血浆成分的稀释液的钠离子浓度的吸光度

X：血浆的稀释倍率

将添加EDTA而阻止了血液凝固的从多名患者采集的血液作为试样而使用，以与实施例1相同的方式，将放入血浆/血球分离后的血浆稀释液的容器以由保冷剂来夹持形式进行收纳，准备表面上贴附有热标签的放入血浆稀释液的容器，并放入到具有铝膜的可以遮光的隔热性保冷袋中进行密封，进而，在对该保冷袋以可邮寄的方式进行包装的基础上，在25℃至40℃的环境下，在相同的环境条件下保管了3天。之后，测定稀释血浆中的生物化学成分，利用(2)式来算出血浆的稀释倍数，并算出包含在血浆中的生物化学成分的值(A)。另外，通过离心分离而将添加EDTA进行采集的相同的血液试样分离出血球而得到血浆，得到未稀释该血浆进行使用而测定的生物化学成分的值(B)。利用下式(3)计算了分别获得的值的关联系数。

关联系数＝(值(A)和值(B)的共方差)/{(值(A)的标准偏差)×(值(B)的标准偏差)}……(3)

关联系数表示越接近1.000，2个数据越一致，通常，0.800以上表示良好的关联性。并且，由2个数据制作分布图，作为该分布的统计数学式，使用最小二乘法求出回归式(y＝ax±b)。a为回归式的斜率，若在0.95～1.05的范围内，则表示两个数据的比例性良好。并且，b为回归式截距，若为接近于0的数值，则表示误差少。将结果示于表5中。根据表5的结果，可知是稀释血浆和血浆的关联性良好的结果。

[表5]

(实施例4)

在实施例1中，对使用了保冷构件的容器中所容纳的血浆稀释液实施钠离子浓度测定，并通过下述方法而测定了总蛋白质的浓度。

(血浆稀释液中的总蛋白质浓度的测定)

进行了将双缩脲法作为测定原理的测定。准备双缩脲试剂：3.0mmol/L硫酸铜400μL、酒石酸钾钠21.3mmol/L、NaOH0.75mol/L，与血浆稀释液进行了混合。混合之后，在37℃下放置10分钟，一直等到在碱性条件下因血浆稀释液中的蛋白质和铜离子而形成呈540～560nm的青紫色的络合物，在545nm下测定吸光度，使用由标准溶液的吸光度得到的校准曲线，对血浆稀释混合液中的总蛋白质浓度进行了定量。

得到了如下结果：由血浆稀释液中的钠离子浓度的测定值和始终包含于血液检体中的浓度的平均值142mmol/L求出的、相对于血液检体的稀释倍率的血液稀释后的稀释液中的总蛋白质的测定值、及由始终包含于血液检体中的标准成分即总蛋白质的浓度的平均值7.5g/100mL求出的稀释倍率为相同的值。由此，可知使用由钠离子浓度求出的稀释倍率的测定正常地进行，并可知可以进行测定的验证。

(实施例5)

作为DEMECAL血液检查试剂盒(Leisure,Inc.)的寄回用容器，从遮光性、隔热性及稀释血浆的防止泄漏的观点考虑，制作出内部粘贴了铝防潮膜的外形为21.0cm×17.0cm×3.4cm的防潮箱(外侧是可以印刷和印字的纸制)。将防潮箱的示意图在图2的下段示出。防潮箱101中容纳有DEMECAL试剂盒的包装102及放入寄回用保冷剂的盒103而寄回。

关于放入寄回用保冷剂的盒103(图1的上段)，以下进行说明。在铝膜104的内侧，将外形为10.0cm×16.5cm×2.8cm(图中的箭头表示约2.8cm)的长方体，且如图1的上段所示出的概略视图，将由水和高吸水性树脂(聚丙烯酸钠)、防腐剂、形状稳定剂构成的非固化性的保冷剂105放入防湿性的具有缓冲性的树脂袋106中进行加工，在其中心设置收纳直径为16mm、高度为7.7mm的柱状血浆分离后的瓶的空间107。空间107中以通过保冷剂来夹持瓶的方式进行收纳，而且，制作出能够收纳于寄回用防潮箱中的2个可折叠的保冷包。将搭载温度传感器的RF(radio frequency：射频)标签粘贴在瓶表面测定保冷时瓶内的温度的结果为6℃。

以该包装方式，将容纳有采血检体和使用后的DEMECAL血液检查试剂盒的防潮箱投递到邮筒中进行了邮寄。

符号说明

1-血液分离器具，2-采血容器，3-筒体，4-顶盖活塞，5-密封盖，6-顶盖，7-密封件，8-螺纹部，9-卡止部，10-底部，11-腿部，12-狭缝槽，13-稀释液，14-扩径部，15-薄壁部，16-主体部，18-缩径部，19-卡止突起部，20-外锷部，21-过滤膜，22-罩，26-握持部，27-芯棒部，28-空间，29-下端部，31-高低差部，33-上端部，34-顶部，101-防潮箱，102-包装，103-放入寄回用保冷剂的盒，104-铝膜，105-保冷剂，106-树脂袋，107-空间。

Claims

1.一种血液检查试剂盒，其包括：

稀释液，其用于稀释血液检体；

分离构件，其用于从被稀释的血液检体中回收血浆成分；

容器，其用于容纳从被稀释的血液检体中回收的血浆成分；及

保冷构件，其用于对所述容器进行保冷。

2.根据权利要求1所述的血液检查试剂盒，其中，

所述保冷构件包括保冷剂及保冷袋。

3.根据权利要求1或2所述的血液检查试剂盒，其中，

所述保冷构件还包括容纳部件，该容纳部件能够收纳用于容纳所述回收的血浆成分的容器，且厚度为35mm以下。

4.根据权利要求1至3中任意一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述血液检查试剂盒包括记录温度履历的部件。

5.根据权利要求1至4中任意一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述血液检查试剂盒包含记载有保冷构件的使用方法的说明书。

6.根据权利要求1至5中任意一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述血液检查试剂盒用于使用始终存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度，其中，所述稀释液不含有所述标准成分。

7.根据权利要求6所述的血液检查试剂盒，其中，

所述标准成分是钠离子或氯离子。

8.根据权利要求6或7所述的血液检查试剂盒，其中，

所述标准成分是钠离子或氯离子和至少另一种标准成分。

9.根据权利要求8所述的血液检查试剂盒，其中，

所述至少另一种标准成分是选自总蛋白或白蛋白的标准成分。

10.根据权利要求8或9所述的血液检查试剂盒，其中，

所述血液检查试剂盒用于使用始终存在于血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度，且验证该分析，其中，所述稀释液不含有所述标准成分。

11.根据权利要求1至10中任意一项所述的血液检查试剂盒，其中，

所述稀释液包含不存在于血液中的标准成分，所述血液检查试剂盒用于使用不存在于所述血液中的标准成分来分析血液检体中的对象成分的浓度。

12.一种血液分析方法，其使用权利要求6至9中任意一项所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的所述标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

13.一种血液分析方法，其使用权利要求10所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的所述标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度，且使用与始终存在于血液中的所述标准成分不同的标准成分来确定血浆的稀释倍率，验证所述对象成分的浓度的分析。

14.一种血液分析方法，其使用权利要求11所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的不存在于血液中的所述标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

15.一种血液分析方法，使用包含不含有始终存在于血液中的标准成分的稀释液的权利要求11所述的血液检查试剂盒，从血液检体中回收血浆，用稀释液来稀释所回收的血浆，并使用已稀释的血浆中的始终存在于血液中的所述标准成分及不存在于血液中的所述标准成分来确定血浆的稀释倍率，分析血液检体中的对象成分的浓度。

16.根据权利要求12至15中任意一项所述的血液分析方法，其中，

所稀释的血浆的液体量为100μL以上且1000μL以下。