CN108066172A - Tia酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用 - Google Patents

Tia酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：S1、精选稻米，使用去离子水清洗1‑2次，室温浸泡6‑12小时，S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2‑12小时，冷却至25‑30℃，S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到0.5OD‑2.5OD，待发酵添加使用，S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中。本发明采用食材稻米和植物食用油脂进行酵母菌发酵，所得破壁滤液十分安全，无任何外用刺激，细胞毒性测试显示为零，运用本发明所得原料可用于制备美白祛斑药品或化妆品，细胞毒性为零，安全有效无刺激，稳定性良好，避免使用化学美白剂和植物提取剂用于肌肤美白对人体伤害和刺激，稳定性差的缺点。

Description

TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功 能应用
技术领域
本发明涉及TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用技术领域，具体为一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用。
背景技术
TIA酵母肽利用独创微生物发酵工艺制备出活性多肽，通过直接利用被水解蛋白培养产蛋白酶的菌体，利用菌体分泌到胞外的蛋白酶直接溶解酵母。通过高科技生物剪切破碎细胞后分离纯化而成，是一种天然有机高效、健康安全的仿生型美白淡斑护肤活性成分，以保护肌肤不受外界应激的损伤，肌肤衍生出自然健康的白。
酪氨酸酶是一种含铜的酶，来源于胚胎神经鞘细胞，是黑色素代谢反应中的主要限速酶，当其活性受到抑制时能很好阻碍黑色素在黑色素细胞内的合成。化学合成的酪氨酸酶抑制剂，这类原料大多因具有细胞毒性，外用刺激性或自身不稳定等问题而使其应用受到限制。
因此，寻找安全、有效、无毒的新型酪氨酸酶抑制剂具有及其重要的意义，我们有理由相信具有酪氨酸酶抑制作用的TIA酵母肽作为生物发酵来源的新型酪氨酸酶抑制原料，在日化护理领域必将受到极大关注与信任。TIA酵母肽采用生物发酵与纯化分离分离技术从发酵产物中制备生物活性物，并将其运用到化妆品中，具有低剂量、高活性及使用安全等优势。TIA酵母肽无疑是迄今为止最为优越的、最高效、最安全的生物酪氨酸酶抑制剂。TIA酵母肽以纯有机原料为底物，发酵得到的不仅包含有优化表达的活性物TIA酵母肽，更包含了酵母发酵过程中合成分泌的多种活性成分，是一种具有优越细胞赋活作用的护肤原料，在对抗皮肤黑色素、暗哑、老化方面均有好的表现。
目前常规酵母提取液的生产，通常是采用酶解和酸碱处理等方法。其工序繁琐、引入化学杂质多，易对活性成分造成损害、产品安全性也存在问题，不利于应用于人体护理使用。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，解决了上述背景技术提到的问题。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗1-2次，室温浸泡6-12小时。
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2-12 小时，冷却至25-30℃。
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到0.5OD-2.5OD，待发酵添加使用。
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富1.0-10％植物油脂，蒸汽灭菌30-45分钟，冷却至25-30℃接种。
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵48-120小时。
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理。
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0％以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液。
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液。
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
优选的，在步骤S1中，室温控制在20-25℃。
优选的，在步骤S5中，恒温室的温度控制在30-40℃。
优选的，在步骤S8中，得到TIA酵母肽发酵产物滤液后，避光保存。
(三)有益效果
本发明提供了一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，具备以下有益效果：
本发明采用食材稻米和植物食用油脂后进行酵母菌发酵，其包含由TIA 酵母肽发酵产物滤液的固含量在1-10％，所得破壁滤液十分安全，无任何外用刺激，细胞毒性测试显示为零，具有显著抑制酪氨酸酶之功效，发酵液可单独或者复配制成美白淡斑或者抗肌肤老化剂，其稳定性表现良好，其对B16V 黑色素细胞的IC50为10.9μM/ml，对酪氨酸酶活性的抑制能力是β-熊果苷的50倍，效果强于3倍氢醌，且使用本发明制备出来的TIA酵母肽发酵产物滤液制备肌肤抗老化产品，同样添加量下，其对细胞损伤修复能力对比硫辛酸更强，且运用本发明所得原料可用于制备美白祛斑药品或化妆品，细胞毒性为零，安全有效无刺激，稳定性良好，避免使用化学美白剂和植物提取剂用于肌肤美白对人体伤害和刺激，稳定性差的缺点。
说明书附图
图1为TIA酵母肽对小鼠细胞黑素印制效应图。
具体实施方式
基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本保护的范围。
本发明提供一种技术方案：一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗1-2次，室温浸泡6-12小时，室温控制在20-25℃。
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2-12 小时，冷却至25-30℃。
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到0.5OD-2.5OD，待发酵添加使用。
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富1.0-10％植物油脂，蒸汽灭菌30-45分钟，冷却至25-30℃接种。
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵48-120小时，恒温室的温度控制在30-40℃。
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理。
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0％以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液。
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液，避光保存。
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
将得到的TIA酵母肽发酵产物滤液进行试验，得到的结果如下：
(1)、TIA酵母肽对B16细胞黑素生成的抑制能力测试，其效果如图1 所示：
分别选用0、1.25、2.5、5.0、10.0μm/l的TIA酵母肽作为效应物，作用48h，以此评定TIA酵母肽对B16细胞黑色素生成的影响，检测结果显示， TIA酵母肽对细胞中黑色素合成表现出明显抑制作用，且有剂量正相关性，实验结果如图所示，随着TIA酵母肽浓度增加，黑色素生成量下降，当效应物达到10.0μm/l时，最大下降量约90％。
(2)、TIA酵母肽对酪氨酸酶抑制测试
TIA酵母肽对酪氨酸酶显示出很强的抑制的能力，2.0μm/ml即显示有抑制效应，随效应物浓度增加，酶活力呈线性浓度下降趋势，有明显剂量相关性，测定10.9μm/ml为TIA酵母肽的酪氨酸酶活力半效抑制浓度(IC50)，其质量百分比浓度0.3％即可抑制酪氨酸酶活性。
常用部分活性成分对酪氨酸酶活性抑制强度实测数据对比
(3)、动物体外实验功效测试
因成年豚鼠其皮肤中黑色素细胞和黑色素小体都与人体相近，实验的重现性好。
实验采用了紫外光照射10只成年豚鼠(褐色)的背部，然后用2.0％TIA 酵母肽供试品涂抹，用棉棒将样品依次涂抹去毛区，每天早晚各一次，并设定对照组，35d后，发现TIA酵母肽能显著减少由紫外照射引起的色素沉着，经过表面组织研究可发现使用TIA酵母肽后的黑色素细胞减少了，并且还能增加皮肤的光泽。
L*值：表征的是皮肤的黑白度，其变化表示产品使用前后皮肤黑白度的变化，L*越大，皮肤越白；反之，皮肤颜色越深。
(4)、人体外用美白测试实验
本实验采用目前国际上通用CM－2600D分光测色仪通过三刺激法(蓝、红、绿)来检测皮肤表层结构上中各种载色体的反射光，该评价方法对于用于测试皮肤的美白效果。
测试方法：采用双盲测试，受试志愿者人数为19人(22～39岁，亚洲人群)，其中男性6人，女性13人，测试部位为前臂(肘部和手腕之间)外侧，且测试期间不在测试部位涂抹测试样品以外的其他美白产品，每天早晚分别涂抹一次，剂量为4mg/cm2，持续6周，分别用CM－2600D对测试部位进行测试。
L*值：表征的是皮肤的黑白度，其变化表示产品使用前后皮肤黑白度的变化。
L*越大，皮肤越白；反之，皮肤颜色越深。
L0为涂抹前测试值。
L*值为随时间变化对照数值变化。
人体实验结果表明，添加TIA酵母肽的美白霜的L*值在整个测试期间均表现出显著高于对照组的功效，其中测试前14d的功效即有明显改变，添加3.0％酵母提取物(NB)的美白霜在14，28和42d测试时均有显著高于对照组的美白功效。
实施例一
一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗1次，室温浸泡6小时，室温控制在 20℃。
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2 小时，冷却至25℃。
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到0.50D，待发酵添加使用。
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富1.0％植物油脂，蒸汽灭菌30分钟，冷却至25℃接种。
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵48小时，恒温室的温度控制在30℃。
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理。
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0％以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液。
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液，避光保存。
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
实施例二
一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗2次，室温浸泡9小时，室温控制在23℃。
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2-12 小时，冷却至28℃。
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到1.0OD，待发酵添加使用。
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富5％植物油脂，蒸汽灭菌40分钟，冷却至28℃接种。
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵72小时，恒温室的温度控制在35℃。
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理。
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0％以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液。
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液，避光保存。
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
实施例三
一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗2次，室温浸泡12小时，室温控制在 25℃。
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化12 小时，冷却至30℃。
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到2.5OD，待发酵添加使用。
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富10％植物油脂，蒸汽灭菌45分钟，冷却至30℃接种。
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵120小时，恒温室的温度控制在40℃。
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理。
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0％以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液。
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液，避光保存。
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
需要说明的是，在本文中，诸如术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，其特征在于：包括以下步骤：
S1、精选稻米，使用去离子水清洗1-2次，室温浸泡6-12小时；
S2、将浸泡过的稻米使用碾碎机碾碎，加入蒸馏水搅拌匀浆后，糖化2-12小时，冷却至25-30℃；
S3、使用扩增筛选出的假单胞酵母菌，使菌密度达到0.5OD-2.5OD，待发酵添加使用；
S4、将糖化后的稻米匀浆添加到培养基中，再向培养基中添加含油酸丰富1.0-10%植物油脂，蒸汽灭菌30-45分钟，冷却至25-30℃接种；
S5、将接种后的培养基放入恒温室中，控温通氧补料发酵48-120小时；
S6、发酵完毕后，使用高压匀浆器高压匀浆破壁处理；
S7、将破壁处理后的匀浆冷冻浓缩，保持固形物在5.0%以上，使用细致滤网过滤处理，得到发酵粗滤液；
S8、使用生物膜膜滤除菌分装，得到TIA酵母肽发酵产物滤液；
S9、在制备美白祛斑药品或化妆品，加入TIA酵母肽发酵产物滤液。
2.根据权利要求1所述的TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，其特征在于：在步骤S1中，室温控制在20-25℃。
3.根据权利要求1所述的TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，其特征在于：在步骤S5中，恒温室的温度控制在30-40℃。
4.根据权利要求1所述的TIA酵母肽发酵产物滤液制备方法及其在皮肤美白祛斑中功能应用，其特征在于：在步骤S8中，得到TIA酵母肽发酵产物滤液后，避光保存。
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