KR20110105243A - 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 녹두를 효모(Saccharomyces cerevisiae) 또는 유산균( Lactobacillus sp ) 또는 바실러스 균( Bacillus sp )의 미생물로 발효시켜 발효액을 제조하고, 상기 발효액을 단백질 분해 효소를 처리하여 얻은 녹두 발효-효소 추출액을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 화장 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 녹두 발효-효소 추출액은 멜라닌 생성의 주효소인 티로시나아제 활성을 억제하고, 멜라닌 생합성을 억제하는 등의 미백 효과를 보여 줌으로써 노화, 자외선 노출 등에 의해 발생하는 피부 색소 침착을 억제해주는 효능을 가지고 있다.

Description

녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for the Skin Whitening Comprising Phaseolus radiatus seed extracts by fermentation and enzyme treatment}

본 발명은 녹두 발효-효소 추출액을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 녹두를 효모 또는 유산균 또는 바실러스균 등의 미생물을 이용하여 배양하여 얻은 발효 추출액을 단백질 분해효소를 이용하여 2차적으로 처리하여 얻은 발효-효소 추출액을 유효성분으로 하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포상태와 혈액순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다. 피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 이 멜라닌의 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대흡수파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성 산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.

멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라닌형성세포의 멜라노좀에서 티로시나아제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheoelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 각질세포의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 각질세포의 핵 주변에 축적된다.

멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 각질세포로의 이동은 부분적으로 호르몬과 자외선 등에 영향을 받고 일차적으로 는 유전적인 영향을 크게 받는다. 그 밖에 티로시나아제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포내 조절인자인 싸이토카인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다.

이미 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 일부의 추출물 등이 티로시나아제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 낮으므로 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 그리고 티로시나아제의 억제 효과는 입증되었으나 실제 생체 레벨과 유사한 실험에서는 그 효과가 낮게 나타난다. 따라서 생체 레벨과 유사한 흑색종 세포 배양에 의한 저해효과 평가가 요구되고 있는 실정이다. 또한 하이드로퀴논은 발암성 물질로 규정되어 화장품에서는 그 사용이 금지 또는 제한되고 있다. 코직산과 아스크르빈산은 매우 불안정한 물질이다. 상기 성분들을 소량 함유한 화장료는 실온에서 수 주일동안 보관하면 갈변 현상이 발생하는 등의 문제점이 있다.

한편, 최근에는 많은 화장품 회사들이 피부 미백 성분을 개발하기 위해 많은 노력을 하고 있으며, 녹두 추출물도 종래에 미백효과가 있다고 알려져 있다. 녹두의 미백활성성분을 얻기 위해 종래에 사용되어온 용매 추출법에 의해 유효성분을 추출할 경우, 소재 자체에 포함되어있는 독성 또는 부작용 유발 물질을 제거하기 힘들고 추출물과의 반응성이 있을 수도 있다는 단점이 있다.

또한, 유기용매 추출의 경우 추출 후 유기용매의 처리와 환경오염의 문제가 있으며, 잔류 용매에 의한 독성 문제가 발생할 수 있다. 또한 추출 시간이 오래 걸리고 고온을 필요로 하기 때문에 과량의 에너지 소비와 추출물의 변성이 일어날 수 있는 단점을 갖고 있다.

최근에는 이런 문제점을 해결할 수 있는 환경 친화적인 대체기술에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 이에 따라, 피부 안전성이 향상된 미백 성분을 개발하기 위하여, 발효를 통해 얻은 유효성분을 제품에 적용하기도 한다. 예를 들면, 청국장 및 낫도(natto)라는 대표적인 발효 식품에 이용되는 고초균에 의한 발효 산물을 이용하여 생산한 발효액을 이용하여 화장료 조성물을 제공하는 경우가 있다.

이러한 발효액은 미생물에 의해 자극성분들이 분해되거나 다른 물질로 전환됨으로써 피부 자극이 저하되고, 흡수율이 높아져 효능이 증대되는 장점들이 있으며, 효소를 포함하는 미생물에 의한 발효 산물들이 또한 피부에 좋은 영향을 줌으로써 많이 이용되고 있다.

발효법은 기존의 추출법에 비해 미생물에 의한 숙성 시간을 필요로 하기 때문에 짧게는 수시간 내에 추출물을 얻을 수 있는 기존의 추출법과는 달리 짧게는 수일에서 수주가 걸리기도 한다. 따라서 기존의 추출법 보다는 상대적으로 많은 시간, 인력, 장비를 필요로 하는 단점이 있다. 이러한 단점을 개선하기 위해 발효하고자하는 소재들에 선택적으로 작용하여 미생물에 의해 기존의 성분이 예측 가능한 변화 및 효과를 나타낼 수 있도록 하는 연구들이 시도되어왔다.

이에 본 발명의 연구자들은 녹두로부터 피부 유용 성분을 보다 효과적으로 얻을 수 있는 방법을 연구하던 중, 미생물을 접종하여 얻은 발효액에 추가로 녹두에 다량으로 함유되어있는 단백질 성분만을 선택적으로 분해할 수 있는 효소를 처리하여 얻은 추출액이 피부에 유익한 효과를 나타냄을 발견하였으며, 이를 화장료에 적용하여 본 발명을 완성하게 되었다.

이에, 본 발명자들은 노화로 인해 발생하는 다양한 피부 현상을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 녹두를 효모, 유산균 또는 바실러스균의 미생물을 이용하여 발효시킨 녹두 발효 추출액을, 단백질 분해효소로 2차 처리할 경우 피부 노화, 자외선 노출로 인해 발생하는 피부의 문제점, 특히 피부 색소 침착 등을 보다 효과적으로 개선(피부 미백효과)할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기와 같은 본 발명의 목적은 녹두를 발효균을 이용하여 발효시켜 발효액을 제조하고, 상기 발효액을 단백질 분해 효소로 효소 분해시켜 얻은 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는, 상기 발효균은 효모로서, 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 발효균은 유산균으로서, 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 발효균은 바실러스균(Bacillus sp.)으로서, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 단백질 분해 효소는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제, 아미노펩티다아제, 디펩티다아제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 녹두 발효-효소 추출액은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 ∼ 30.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기한 화장료 조성물을 피부에 도포하여 티로시나아제 활성 저해효과, 멜라닌 생합성 억제효과 및 피부 미백효과를 얻는 것을 특징으로 하는 화장 방법에 의해 달성된다.

본 발명은 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 유효성분인 녹두 발효-효소 추출액은 녹두를 효모, 유산균 또는 바실러스균을 이용하여 발효시켜 발효액을 제조하고, 상기 발효액을 단백질 분해 효소로 효소 분해시킴으로써 얻어질 수 있다.

본 발명에 따른 녹두 발효-효소 추출액은 티로시나아제 활성을 억제(실험예 1)해주며, 멜라닌 생합성을 억제(실험예 2)해주는 효과가 탁월하다. 따라서, 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 함유하는 화장료의 경우, 우수한 미백효과를 가지고 있어, 이를 화장료 소재로 개발할 경우 탁월한 색소침착 개선 효과(피부 미백 효과)를 기대할 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다. 보다 상세하게는, 녹두 발효-효소 추출액은 녹두를 발효균을 이용하여 발효시켜 발효액을 제조하고, 상기 발효액을 단백질 분해 효소로 효소 분해시킴으로써 제조된다.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 이용되는 녹두(Phaseolus radiatus , Mung bean)는 안두 또는 길두라고도 하며, 콩과의 한해살이풀 녹두의 종자로서, 따뜻한 기후의 양토(壤土:모래와 점토가 알맞게 섞인 검은빛의 흙)에서 잘 자라며, 높이는 30∼80cm이다. 줄기는 가늘고 세로로 난 맥이 있고 10여 개의 마디가 있으며 가지를 친다. 잎은 1쌍의 떡잎과 갓 생겨난 잎이 나온 뒤, 3개의 작은 겹잎이 나온다.

이러한 녹두는 콩과의 다른 콩류와는 달리, 한방에서 피부병 치료, 해열 및 해독제로 쓰여 왔을 뿐만 아니라, 동의보감에서는 녹두분으로 만들어 얼굴에 발랐을 때 미용효과를 얻을 수 있다고 알려져 왔다. 최근까지도 녹두는 건조 분말의 형태로 또는 이를 물이나 꿀에 개어 얼굴 마사지에 사용되거나, 또는 녹두가루를 물에 섞어 만드는 녹두전과 녹두로부터 전분을 뽑아 만드는 청포묵, 빈대떡, 녹두죽, 숙주나물 등의 식품으로서 예부터 사용되어 왔을 뿐이다.

본 명세서에서 “녹두”는, 녹두의 다양한 기관(예: 씨앗(열매)잎, 꽃, 줄기 및 뿌리 등)을 의미하며, 바람직하게는 녹두의 씨앗(열매)을 의미한다.

한편, 본 명세서에서 용어, 녹두 발효-효소 추출액은 녹두 추출물을 발효균으로 발효시켜 1차적으로 녹두 발효 추출액을 얻은 후 이를 다시 단백질 분해효소를 처리하여 얻어지는 추출액을 의미하는 것으로, 발효시 사용하는 발효균의 종류에 따라 “녹두 효모 발효-효소 추출액”, “녹두 유산균 발효-효소 추출액” 또는 “녹두 바실러스균 발효-효소 추출액”으로 나뉜다.

또한 이의 반대되는 용어로서, “녹두 효소-발효 추출액”은 상기 녹두 발효-효소 추출액의 제조과정에서 발효 단계와 효소처리 단계의 처리 순서를 역으로 실시하여 얻어지는 추출액을 의미하는 것으로, 녹두 추출물을 우선 단백질 분해효소로 처리한 후, 발효균으로 발효시켜 얻은 추출액을 이른다.

또한 다른 용어로서, “녹두 효소-발효 동시 추출액”은 상기 녹두 발효-효소 추출액의 제조과정에서 발효 단계와 효소처리 단계의 처리를 동시에 실시하여 얻어지는 추출액을 의미한다.

본 발명의 녹두를 발효시키는데 사용되는 효모는, 진핵미생물(핵과 세포질이 핵막에 의하여 나누어져 있는 생물)에 속하며, 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있다. 성의 구별이 없는 이들은 주로 budding(출아법)으로 번식하는데, 분리된 많은 효모들 중에는 발효능이 없는 것, budding 대신 fission(분열) 혹은 bud-fission 방법으로 증식하는 것, 자낭포자(ascospore)가 아닌 사출포자(ballistospore)를 형성하거나 포자(spore)형성이 관찰되지 않는 것 등 다양한 그룹의 효모도 존재한다. 크기는 보통5× 5^-12 ~10× 5^-12㎛로 세균의 5-10배 크기이며, 적정 pH는 4.5-5.5이나 1-10에서도 생존한다. pH 1에서 12시간 생존하는 효모는 박테리아보다 산에 강하므로 배지의 pH를 3.5~3.8 정도로 맞추면 박테리아의 오염을 어느 정도 억제할 수 있다.

효모는 균종에 따라서 조금씩 차이가 있으나, 대부분 20~25℃에서 잘 자란다. 보통은 50℃이상에서는 사멸한다고 하지만 그 온도 이상에서 합성이 되지 않는 성장요소를 배지에 직접 첨가해 줌으로써 어느 정도는 극복이 가능하다. 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 경우 40℃이상에서 사멸하지만 배지에 올레산(oleic acid)와 에르고스테롤(ergosterol)을 첨가해 줌으로써 이를 방지할 수 있다. 효모 균체 자체는 단세포 식물로서 단백질과 미량광물질을 다량 함유하고 있다. 본 발명의 녹두를 발효시키는데 사용하기에 바람직한 효모는 사카로마이세스 세레비시애이다.

또한 본 발명에서 녹두를 발효시키는데 사용된 발효균으로 유산균은, 포도당 또는 유당과 같은 탄수화물을 분해하여 유산(젖산)이나 초산과 같은 유기산을 생성하는 인체에 매우 유익한 미생물의 일종이다. 일반적으로, 유산균이 당으로부터 유산을 만드는 것을 발효라 하며, 이러한 발효과정을 거쳐서 발효식품이 만들어 진다. 본 발명에서 사용될 수 있는 유산균은 바람직하게는 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도 박테리움, 류코노스톡, 페디오 코커스, 락토 코커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 락토바실러스(Lactobacillus)이다. 락토바실러스 중에서도 본 발명의 녹두를 발효시키는데 사용하기에 가장 바람직한 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)이다.

또한 본 발명에서 녹두를 발효시키는데 사용된 발효균으로 바실러스(Bacillus)균을 사용할 수 있으며, 바실러스는 포자 형성균으로, 토양이나 물속에 서식하며 대부분 유기물 분해와 관련되어 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 바실러스는 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로서 이 균은 고초균으로도 알려져 있는데, 포도당과 같은 다양한 당류, 전분 등을 혐기적으로 대사하여, 메주나 청국장과 같은 발효 식품 제조에 이용되기도 하는 유기물 분해 미생물이다.

본 발명에서 녹두 발효액을 처리하는데 사용되는 단백질 분해 효소는 상기한 효모 또는 유산균에 의한 발효로도 분해 또는 전환되지 않은 성분들을 2차적으로 분해 또는 전환시키기 위하여 사용되는 것으로서, 이의 구체적인 예로는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제, 아미노펩티타아제, 디펩티다아제 등이 있으며, 바람직하게는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제, 가장 바람직하게는 펩신이 사용될 수 있다.

본 발명의 녹두 발효-효소 추출액은 다음의 단계로 제조될 수 있다:

a) 녹두를 분말로 만드는 단계;

b) 상기 단계 a)에서 제조된 녹두 분말을 정제수에 희석한 후 효모, 유산균 또는 바실러스균을 이용하여 발효시키는 단계;

c) 상기 단계 b)의 발효에 의해 얻은 발효액을 여과하여 단백질 분해효소로 분해하는 단계; 및

d) 상기 단계 c)의 효소 분해액을 저온 숙성 및 여과하여 녹두 발효-효소 추출액을 제조하는 단계.

상기 녹두 발효-효소 추출액의 제조 단계에서, 상기 단계 a)의 녹두의 분말화는 100 내지 500 메쉬 크기 이하로 제조될 수 있으며, 이에 한정될 필요는 없다.

또한 상기 단계 b)의 발효는 녹두 분말과 정제수를 1:10으로 혼합한 후 121℃에서 멸균시킨 후 유산균(Lactobacillus sp), 효모균(Sacharomyces sp) 또는 바실러스균(Bacillus sp)을 접종하여 배양함으로써 달성된다. 발효 단계에서 사용된 녹두 분말은 총 배양액 1L를 기준으로, 1 내지 50g의 양으로 사용하는 것이 바람직하다.

또한, 발효단계에 사용된 효모 또는 유산균 및 바실러스 균은 총 배양액 1L 기준으로, 1 × 10⁴ 내지 1 × 10⁵ 세포수의 양으로 접종되는 것이 바람직하며, 각 균주의 성상에 따라 통상적인 조건 및 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건에서 배양될 수 있다. 또한, 발효균의 배양을 더욱 활성화시키기 위하여 추가적인 탄소원 및/또는 pH 조절제가 첨가될 수도 있다. 이때 적합한 배양조건은 30 ∼ 37℃, pH 5-7의 호기 또는 통상혐기적인 조건에서 약 1 내지 15일간 배양되며, 바람직하게는 1 내지 7일이며, 더욱 바람직하게는 1 내지 5일이며, 가장 바람직하게는 2 내지 4일간 배양된다.

상기 단계 c)는 단계 b)에서 얻은 발효액을 1차 여과한 후 그 여과액을 단백질 분해효소로 분해하는 단계로서, 이때 여과는 0.25 내지 0.45μm 크기의 여과막으로 여과하여, 여분의 녹두분말알갱이 및 발효균을 제거할 수 있다. 1차 여과막으로 분리된 여과액은 단백질 분해효소로 분해하여 효모 또는 유산균에 의한 발효로도 분해 또는 전환되지 않은 성분들을 2차적으로 분해 또는 전환시키기 위해 실시된다. 이때, 사용되는 단백질 분해효소로는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제, 아미노펩티다아제, 지펩티다아제 등이 있으며, 바람직하게는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제이며, 가장 바람직하게는 펩신이다. 이때 사용한 단백질 분해효소는 1g/L을 적용하였다. 상기에서 단계 d)는 단백질 분해효소에 의한 생물전환 방법에 의해 얻어진 추출액을 저온 숙성하여 안정화 시킬 수 있으며, 1차 여과막에 비해 더 세밀한 여과막으로 2차 여과한 후 농축하여 보관할 수 있으며, 이 농축물을 적절히 희석하여 사용한다. 이때 상기 분해-여과-농축의 과정은 보다 유효한 효과가 있는 녹두 발효-효소 추출액을 얻기 위한 공정단계로서, 저온 숙성과정은 0-4 ℃의 온도 범위에서 5 내지 10일 동안 이루어지는 것이 바람직하며, 여과막의 크기는 0.25μm 이하인 것이 바람직하다.

보다 바람직한 구현예에 따르면, 녹두 분말을 300 메쉬 크기 이하로 분말화한 뒤 배양액에 10 g/L 첨가하고, 효모 균주, 유산균 또는 바실러스균 등을 50,000 cfu/L로 첨가하여 각각 효모는 30℃, 유산균은 37℃, 바실러스균은 37℃에서 pH 5-7, 바람직하게는 약 pH 5.5로 호기적 또는 통성 혐기적인 조건으로 발효조에서 약 1일 내지 7일간 배양하여 발효시킨다. 배양 후 상기 발효액은 0.45μm의 여과막을 이용하여 1차 여과한 다음 이 여과액에 다시 단백질 분해효소인 펩신을 1g/L 처리한다. 이 처리액은 다시 10일간 저온 숙성시킨 후 0.25μm 막으로 2차 여과하여 농축한 뒤 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 제조한다. 사용하기 전에 최종 고형분의 농도를 10g/L가 되게 유지한다.

이렇게 제조된 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액은 티로시나아제 활성 저해 효과 및 멜라닌 생합성을 억제하여 피부 미백 효과를 가지고 있다. 따라서 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 화장료 소재로 개발하여 화장품에 적용함으로써 피부 미백 효과를 기대할 수 있다.

본 발명에서, 녹두 발효-효소 추출액의 함량은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.0001∼30.0 %(w/w)이고, 보다 바람직하게는 0.001∼20%(w/w)이다. 이때, 녹두 발효-효소 추출액의 함량이 0.0001 %(w/w) 미만일 경우에는 뚜렷한 피부 미백 효과 를 기대할 수 없고, 녹두 발효-효소 추출액의 함량이 30.0%(w/w)를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않으며, 피부자극을 유발하거나 제형의 안정성에 있어서 문제가 생긴다.

본 발명의 녹두 발효-효소 추출액은 피부에 국소적으로 바르는 거나 뿌리는 것에 의해 그 효과를 달성할 수 있다. 따라서 본 발명의 바람직한 일 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 크림, 로션 및 화장수 등의 화장료 조성물 또는 스프레이 및 연고 등의 약제학적 조성물 형태로 제조될 수 있다.

본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 녹두 발효-효소 추출액 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 이들의 혼합물 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수(스킨), 영양 화장수(밀크로션), 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하여 피부 색소 침착을 개선(티로시나아제 활성 억제, 멜라닌 생합성 억제)하는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하여 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하여 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 보호 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비 함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 화장방법을 수행하면, 피부 미백 효과를 개선할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1. 녹두 효모 발효-효소 추출액의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 효모(Sacharomyces cerevisiae)를 접종하였다. 이때, 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 제거 한 후 0.45μm 여과막을 1차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액에 다시 단백질 분해효소(펩신, 시그마, 미합중국)를 1g/L되게 처리하였다. 이 효소를 2시간동안 처리한 후 이 액을 0.25μm 여과막을 이용하여 2차 여과하였다. 이 여과액을 다시 농축한 후 적정 용매를 이용하여 희석해서 사용하였다. 이렇게 제조한 발효-효소 추출액을 이하 ‘녹두 효모 발효-효소 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효모 발효-효소 추출액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

제조예 2. 녹두 유산균 발효-효소 추출액의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 유산균을 접종하였다. 이때, 유산균으로는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 제거 한 후 0.45μm 여과막을 1차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액에 다시 단백질 분해효소(펩신, 시그마, 미합중국)를 1g/L되게 처리하였다. 이 효소를 2시간동안 처리한 후 이 액을 0.25μm 여과막을 이용하여 2차 여과하였다. 이 여과액을 다시 농축한 후 적정 용매를 이용하여 희석해서 사용하였다. 이렇게 제조한 발효-효소 추출액을 이하 ‘녹두 유산균 발효-효소 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 유산균 발효-효소 추출액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

제조예 3. 녹두 바실러스 발효-효소 추출액의 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 고압멸균 시킨 후 바실러스균을 접종하였다. 이때, 바실러스는 바실러스 서브틸리스(고초균; Bacillus subtilis )를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 제거 한 후 0.45μm 여과막을 1차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액에 다시 단백질 분해효소(펩신, 시그마, 미합중국)를 1g/L되게 처리하였다. 이효소를 2시간 동안 처리한 후 이 액을 0.25μm 여과막을 이용하여 2차 여과하였다. 이 여과액을 다시 농축한 후 적정 용매를 이용하여 희석해서 사용하였다. 이렇게 제조한 발효-효소 추출액을 이하 ‘녹두 바실러스 발효-효소 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 바실러스 발효-효소추출액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 1. 녹두 추출물 제조

녹두를 정제수로 세척하고 건조시켜서, 분말화 한 후 100g을 70% 에탄올 수용액 0.6L에 첨가하고, 냉각콘덴서가 장착된 환류 추출기에서 4시간 동안 가열 추출하였다. 그런 다음, 수득한 추출액을 300 메쉬 여과포로 여과하고, 와트만 5번 여과지로 여과한 후 감압농축기를 이용하여 용매를 제거하고 동결 건조하여 건조 중량 5.5g을 얻었다. 이렇게 얻은 추출물을 이하 ‘녹두 추출물’이라 통칭하며, 녹두 추출물은 최종 농도가 1g/100mL되게 사용하였다.

비교 제조예 2. 효모를 이용한 녹두 효모 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 효모를 접종하였다. 이때 사용한 효모는 사카로마이세스 새리비시애(Sacharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃도, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μm 여과막을 이용하여 최종 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 희석한 후 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효모 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효모 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 3. 락토바실러스 ( Lactobacillus ) 속 균주를 이용한 녹두 유산균 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 유산균을 접종하였다. 이때 사용한 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다.

배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃도, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μm 여과막을 이용하여 최종 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 유산균 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 유산균 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 4. 바실러스(Bacillus)속 균주를 이용한 녹두 바실러스 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 바실러스균을 접종하였다. 이때 사용한 바실러스균은 바실러스 서브틸리스(고초균; Bacillus subtilis)을 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃도, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25 μm 여과막을 이용하여 최종 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 바실러스 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 바실러스 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 5. 효소 처리 후 효모를 이용한 녹두 효소-효모 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 2시간동안 처리하였다. 처리 후 이 시료에 효모를 접종하였다. 이때 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였으며, 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소 -효모 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-효모 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 6. 효소 처리 후 락토바실러스 ( Lactobacillus ) 속 균주를 이용한 녹두 효소-유산균 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 2시간동안 처리하였다. 이 시료에 유산균을 접종하여 발효시킨 후 녹두 발효액으로 사용한다. 이때 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소-유산균 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-유산균 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 7. 효소 처리 후 바실러스 ( Bacillus ) 속 균주를 이용한 녹두 효소- 바실러스 발효액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 2시간동안 처리하였다. 이 시료에 유산균을 접종하여 발효시킨 후 녹두 발효액으로 사용한다. 이때 바실러스균은 고초균(Bacillus subtilis)을 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃도, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소- 바실러스 발효액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-바실러스 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 8. 효소 처리와 효모 발효를 동시에 실시한 녹두 효소-효모 발효 동시 추출액 제조

정제수로 세척하고 건조시킨 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 24시간동안 처리함과 동시에 시료에 효모를 접종하였다. 이때 효모는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였으며, 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소-효모 발효 동시 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-효모 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 9. 효소 처리와 락토바실러스 ( Lactobacillus ) 속 균주에 의한 발효를 동시에 실시한 녹두 효소-유산균 발효 동시 추출액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 24시간동안 처리함과 동시에 시료에 유산균을 접종하였다. 이때 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소 - 유산균 발효 동시 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-유산균 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

비교 제조예 10. 효소 처리와 바실러스 ( Bacillus ) 속 균주에 의한 발효를 동시에 실시한 녹두 효소- 바실러스균 발효 동시 추출액 제조

정제수로 세척하고 건조한 녹두를 분말화 한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 녹두 분말 100g을 정제수를 1:10으로 혼합하여 121℃에서 멸균시킨 후 단백질 분해 효소(펩신, 시그마, 미합중국)을 1g/L의 용량으로 24시간동안 처리함과 동시에 시료에 바실러스균을 접종하였다. 이때 바실러스균은 바실러스 서브틸리스(고초균; Bacillus subtilis)을 사용하였다(50,000 cfu/L로 첨가). 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 37℃도, pH 5.5로 유지하며 배양하였다. 배양 후 배양액을 원심 분리 및 1차 여과하여 배양균 및 찌꺼기를 제거 한 후, 0.25 μm 여과막을 이용하여 2차 여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 농축하여 얻은 액을 적정 용매를 이용하여 본 발명에 사용하였다. 이렇게 제조한 발효액을 이하 ‘녹두 효소-바실러스균 발효 동시 추출액’이라 통칭한다. 이하 실험예에 사용된 녹두 효소-바실러스 발효액은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.

실험예 1: 녹두 발효-효소 추출액의 티로시나아제 활성 저해 효과

녹두 발효-효소 추출액의 티로시나아제 활성 저해 효과를 측정하기 위해, 기질로는 인산나트륨 완충액(pH 6.8)에 용해한 1.5 mmol/ℓ의 티로신 (시그마사, 미합중국) 40 ㎕를 사용하였다.

즉, 티로신 40 ㎕에 상기 제조예 및 비교제조예의 시료액 240 ㎕을 각각 첨가하고, 이 혼합 용액에 티로시나아제(시그마사, 1500 U/㎖) 20 ㎕을 첨가한 후 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.

녹두 효모 발효-효소 추출액(제조예 1), 녹두 유산균 발효-효소 추출액(제조예 2) 및 녹두 바실러스 발효-효소 추출액(제조예 3)을 각각 0.05M 인산나트륨 완충용액(pH 6.8)으로 희석하여 1.0%농도로 시료액을 제조하였다.

이때 효과의 비교를 위해, 녹두 발효-효소 추출액 대신에 비교 제조예 1∼10의 추출물을 사용하였고, 각각 1.0% 농도로 시료액을 제조하였다. 양성대조군으로는 미백 효과가 있는 것으로 알려진 알부틴 0.5%을 사용하였으며, 하기 수학식 1에 의하여 티로시나아제의 활성 저해도(%)를 계산하였다. 실험 결과는 하기 표 1에 기재하였다.

각 시료의 티로시나아제 활성 저해 효과

구분	티로시나아제 활성 저해도(%)
제조예 1(녹두 효모 발효-효소 추출액)	86.8
제조예 2(녹두 유산균 발효-효소 추출액)	88.8
제조예 3(녹두 바실러스 발효-효소 추출액)	84.6
비교 제조예 1(녹두 추출물)	56.8
비교 제조예 2(녹두 효모 발효액)	55.4
비교 제조예 3(녹두 유산균 발효액)	56.8
비교 제조예 4(녹두 바실러스 발효액)	53.4
비교 제조예 5(녹두 효소-효모 발효액)	68.8
비교 제조예 6(녹두 효소-유산균 발효액)	68.4
비교 제조예 7(녹두 효소- 바실러스 발효액)	66.8
비교 제조예 8(녹두 효소-효모 발효 동시 추출액)	56.6
비교 제조예 9(녹두 효소-유산균 발효 동시 추출액)	54.8
비교 제조예 10(녹두 효소- 바실러스균 발효 동시 추출액)	56.2
양성 대조군(Albutin 1.0%)	69.8

상기 표 1의 결과로부터, 본 발명의 녹두 효모 발효 후 효소 추출액(제조예 1), 녹두 유산균 발효-효소 추출액(제조예 2) 및 녹두 바실러스 발효-효소 추출액(제조예 3)을 처리한 경우는 양성대조군(Albutin 1.0%) 및 비교 제조예 1 내지 비교 제조예 10의 녹두 추출물에 비하여, 동일한 농도(1.0%)에서 티로시나아제 활성 억제효과가 현저히 우수하였으며 특히, 효소를 처리한 후 발효하는 경우(비교제조예 5 내지 7)와 발효와 효소를 동시에 하는 경우(비교제조예 8 내지 비교제조예 10)에 비해서도 효과가 뛰어난 것을 알 수 있다. 이러한 결과는, 녹두에 들어있는 단백질 성분들이 발효 과정을 거치면서 일차적으로 분해되고, 그 다음으로 효소를 처리해줌으로써 단백질 성분들이 분해되어 유효성분들이 더욱더 많이 생성됨으로써 뛰어난 효과를 나타내게 되는 것으로 판단된다.

이러한 결과로부터 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액이 티로시나아제 활성을 억제하여 피부 색소 문제를 해결할 수 있음을 알 수 있었다.

실험예 2: 녹두 발효-효소 추출액의 멜라닌 생합성 억제

B-16 세포 (쥐 멜라노마 세포, 한국세포주은행)를 6-웰 플레이트 (well plate)에 1× 10⁵ cell/well이 되도록 접종한 후에 24시간 배양하였다. 각 웰에 녹두 발효-효소 추출액을 1% 처리하고 3-4일 동안 배양한 후 각 웰의 배양액을 원심분리하였다. 분리된 세포는 디메틸설폭사이드 (DMSO)에 용해한 1N NaOH 용액 500 ㎕로 용해하여 10분간 90℃ 수욕 (water bath)에서 가열하였다. 이 상등액을 490 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 비교예로는 비교제조예 1∼10의 시료를 1.0% 농도로 사용하였으며, 양성대조군으로 알부틴(1.0%)을 사용하였다. 멜라닌 생합성 억제율(%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 2에 나타나 있다.

녹두 발효-효소 추출액의 멜라닌 생합성 억제 효과

구분	멜라닌 생합성 억제율(%)
제조예 1(녹두 효모 발효-효소 추출액)	76.8
제조예 2(녹두 유산균 발효-효소 추출액)	78.8
제조예 3(녹두 바실러스 발효-효소 추출액)	74.6
비교 제조예 1(녹두 추출물)	46.8
비교 제조예 2(녹두 효모 발효액)	46.4
비교 제조예 3(녹두 유산균 발효액)	44.8
비교 제조예 4(녹두 바실러스 발효액)	48.4
비교 제조예 5(녹두 효소-효모 발효액)	48.7
비교 제조예 6(녹두 효소-유산균 발효액)	48.4
비교 제조예 7(녹두 효소-바실러스 발효액)	46.8
비교 제조예 8(녹두 효소-효모 발효 동시 추출액)	46.6
비교 제조예 9(녹두 효소-유산균 발효 동시 추출액)	44.8
비교 제조예 10(녹두 효소-바실러스균 발효 동시 추출액)	46.2
양성 대조군(Albutin 1.0%)	66.4

상기 표 2의 결과로부터, 본 발명의 녹두 효모 발효-효소 추출액(제조예 1), 녹두 유산균 발효-효소 추출액(제조예 2) 및 녹두 바실러스 발효-효소 추출액(제조예 3)을 처리한 경우는 미백효과가 있는 것으로 알려진 Albutin 및 비교 제조예 1 내지 비교 제조예 10에 비하여, 동일한 농도(1.0%)로 처리하였음에도 멜라닌 생합성 억제효과가 우수하였으며, 또한 이로부터 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액이 멜라닌 생성을 억제하여 피부 색소 문제를 해결할 수 있음을 알 수 있었다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 처방예들로 한정하고자 하는 것은 아니다. 하기 처방예에 사용한 녹두 발효-효소 추출액은 녹두 효모 발효-효소 추출액이나 녹두 유산균 발효-효소 추출액, 녹두 바실러스 발효-효소 추출액 중 어느 것을 사용하여도 무방하다.

처방예 1: 유연화장수

녹두 발효-효소 추출액을 함유한 화장료 중 유연화장수의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(%)
녹두 발효-효소 추출액	0.5
글리세린	5.0
1.3-부틸렌글리콜	3.0
알란토인	0.1
DL-판테놀	0.3
이.디.티.에이-2NA	0.02
벤조페논-9	0.04
소듐 히아루로네이트	5.0
니콜 HCO 60	0.4
메틸 파라벤	0.2
향,	0.01
증류수	잔량
합 계	100

처방예 2: 영양화장수

녹두 발효-효소 추출액을 함유한 화장료 중 영양화장수의 처방예는 다음과 같다.

성분	함량(단위:중량%)
녹두 발효-효소 추출액	2.0
글리세릴 스테아레이트SE	1.5
스테아릴 알콜	1.5
라놀린	1.5
폴리솔베이트 60	1.3
솔비탄스테아레이트	0.5
경화식물유	1.0
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
트리옥타노인	2.0
디메치콘	0.8
초산토코페롤	0.5
카르복시비닐폴리머	0.12
글리세린	5.0
1.3-부틸렌글리콜	3.0
소듐히아루로네이트	5.0
트리 에탄올아민	0.12
메틸파라벤	0.2
향	0.02
증류수	잔량
합계	100

처방예 3: 영양크림

녹두 발효-효소 추출액을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

성 분	함량(단위:중량%)
녹두 발효-효소 추출액	3.0
친유형 모노스테아린산글리세린	2.0
세테아릴알콜	2.2
스테아린산	1.5
밀납	1.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄스테아레이트	0.6
경화식물유	1.0
스쿠알란	3.0
광물유	5.0
트리옥타노인	5.0
디메치콘	1.0
소듐마그네슘실리케이트	0.1
글리세린	5.0
베타인	3.0
트리에타올아민	1.0
소듐히아루로네이트	4.0
메틸파라벤	0.2
향	0.05
증류수	잔량
합계	100

실험예 3 : 녹두 발효-효소 추출물을 포함하는 화장료의 미백 효과

20∼40세의 특히 피부가 검은 한국 여성 20명을 대상으로, 본 발명의 화장료 조성물의 미백 효과 실험을 실시하였다. 먼저, 실시예로는 상기 처방예 3의 녹두 효모 발효-효소 추출액 3.0%를 함유한 영양 크림을 사용하였고, 대조예로는 녹두 효모 발효-효소 추출액 대신에 정제수를 사용한 영양 크림을 사용하였으며, 비교예로는 녹두 효모 발효-효소 추출액 대신에 녹두 추출물 3.0%(비교예 1), 녹두 효소-효모 발효 추출액 3.0%(비교예 2), 녹두 효소-효모 발효 동시 추출액 3.0%(비교예 3)을 함유한 영양 크림을 사용하였다. 실험은 먼저 인공 자외선 방출기(Solarsimulator Measuring System, 스펙트럴 에너지, 미합중국)를 이용하여 피험자의 등부위에 가로와 세로 각각 1㎝ 크기의 부위에 인위적으로 색소를 침착시킨다. 색소 침착 후 대조예와 녹두 효모 발효-효소 추출액이 함유된 실험예 및 비교예의 영양크림을 각각 20명의 피검자에게 8주 동안 사용하였으며 사용 후 피부 색 개선 정도를 Chromameter(Minolta CR300)를 통해 측정하고 그 결과는 하기 표 6에 △L 값(사용후 피부색(밝기) 값- 사용 전 피부색(밝기) 값)으로 나타내었다.

구분	△L 값
대조예 (정제수)	0.336
비교예 1 (녹두 추출물 3%)	0.928
비교예 2 (녹두 효소-효모 발효 추출액 3%)	0.936
비교예 3 (녹두 효소-효모 발효 동시 추출액 3%)	0.948
실시예 (녹두 효모 발효-효소 추출액 3%)	1.244

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 녹두 효모 발효-효소 추출액을 함유한 처방예 3의 영양 크림(실시예)이 대조예 및 비교예 1 내지 비교예 3의 영양 크림에 비하여 미백 효과(피부색 밝기 개선 효과)가 현저히 높게 나타났다.

따라서 본 발명의 녹두 발효-효소 추출액을 함유하는 화장료 조성물은 매우 우수한 미백 효과를 갖고 있음을 알 수 있다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

1. 녹두를 발효균을 이용하여 발효시켜 발효액을 제조하고, 상기 발효액을 단백질 분해 효소로 효소 분해시켜 얻은 녹두 발효-효소 추출액을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 발효균은 효모로서, 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)인 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제 1 항에 있어서, 상기 발효균은 유산균으로서, 락토바실러스, 비피도박테리움, 스트렙토코커스, 류코노스톡, 페디오코커스, 락토코커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 발효균은 바실러스균(Bacillus sp.)으로서, 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 단백질 분해 효소는 펩신, 트립신, 카르복시펩티다아제, 아미노펩티다아제, 디펩티다아제 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
6. 제 1 항에 있어서, 상기 녹두 발효-효소 추출액은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 ∼ 30.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
7. 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
8. 제 1 항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 피부에 도포하여 티로시나아제 활성 저해효과, 멜라닌 생합성 억제효과 및 피부 미백효과를 얻는 것을 특징으로 하는 화장 방법.