CN108018228B - 一株大肠杆菌o157:h7弱毒株及其应用 - Google Patents

一株大肠杆菌o157:h7弱毒株及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其在应用，属于生物技术领域。该大肠杆菌O157:H7的弱毒株JSC2株的保藏号为CCTCC M 2017356。通过制备该弱毒株菌液，对BALB/c小鼠和乳兔进行攻毒试验发现，该菌株不引起小鼠和乳兔的死亡，不导致明显的组织病理变化。且该弱毒株皮下接种小鼠1次后，可诱导高水平IgG抗体，抗体持续期长，能够提供受免动物良好的免疫效力，可用于大肠杆菌O157:H7疫苗和诊断试剂的研制。

Description

一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及到一株大肠杆菌O157:H7弱毒株及其应用。
背景技术
大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）O157:H7，是一种常见的又称为肠出血性大肠杆菌，是重要的食源性***共患病原。近20余年来，由大肠杆菌O157:H7引发的食物中毒在世界各地以不同规模暴发流行，它的动物宿主范围非常广泛，其中反刍动物带菌率较高。相对来讲，动物作为传染源要比人类更为危险，它往往是动物源食品污染的根源。大肠杆菌O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗会加剧病情等特点，已经成为全球性的公共卫生问题。目前对其感染缺乏理想的防治策略。
大肠杆菌O157:H7对不同动物的致病性有着明显不同。反刍动物是主要带菌者，但一般不引起明显临床症状，幼畜偶尔会出现腹泻症状。小鼠和乳兔是代表型实验动物，用来评估菌株致病力和免疫效力。3日龄乳兔，口服1×1010 CFU，3天可以导致腹泻，第7天腹泻加重，部分死亡。4-6周龄小鼠，口服1×1010 CFU，可以导致50-60%小鼠轻微腹泻并死亡，腹腔注射，可以导致85%以上小鼠死亡。
虽然市场上有商品化疫苗上市，但制备方法复杂，成本较高。例如加拿大Bioniche公司研制的Econiche，主要抗原成分为大肠杆菌 O157:H7提取物—Ⅲ型分泌蛋白（TTSP），目前在加拿大和美国部分区域上市销售，需在肉牛宰杀前至少3个月免疫，一定程度上降低大肠杆菌O157:H7在牛群中的传播，但抗原制备方法复杂、成本高，研制更加低廉而高效的疫苗，是研究的热点，也是全世界学者关注的领域。
发明内容
本发明的目的是提供一株大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株，保藏号为CCTCC M 2017356，该菌株对BALB/c小鼠和乳兔无明显致病力，具有较好的免疫原性。
本发明的另一目的在于提供一种制备所述大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株菌液的方法，该制备方法简单、安全、成本低。
本发明的再一目的在于提供所述大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株在制备大肠杆菌O157:H7疫苗中的应用，该疫苗制备方法简单，成本低廉，保护效果好。
本发明的目的采用下述技术方案实现。
一株大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7弱毒株，是大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株，保藏号为CCTCC M 2017356。
本发明通过大肠杆菌显色平板筛选、聚合酶链式反应扩增、血清凝集试验，筛选得到大肠杆菌O157:H7 JSC2株。
通过BALB/c小鼠和乳兔口服实验，表明JSC2株不引起小鼠和乳兔的死亡，不导致明显的组织病理变化，而以标准菌株大肠杆菌O157:H7 EDL933株为对照，等量接种实验动物后，能引发动物发病、死亡，说明本发明筛选到的大肠杆菌为O157:H7 JSC2株为弱毒株。
通过在SMAC平板上的菌落观察，发现该菌落，具有典型大肠杆菌O157:H7的特征。
通过JSC2株1次皮下接种小鼠，再口腔灌服强毒株大肠杆菌O157:H7 EDL933株（1.0×1010CFU/只）攻毒后存活状况的观察和血清抗体的检测，说明JSC2株能够为动物提供良好的免疫保护效力，攻毒后120天抗体仍维持较高水平，因此JSC2株可用于大肠杆菌O157:H7疫苗的研制。
本发明提供所述大肠杆菌O157:H7弱毒株的菌液。
本发明提供制备所述大肠杆菌O157:H7弱毒株菌液的方法，包括采用肉汤培养基培养大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株的步骤。
在本发明中，大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株培养温度为35-40℃，培养时间为5-10h。
本发明还提供所述大肠杆菌O157:H7 弱毒株在制备大肠杆菌O157:H7疫苗中的应用。
本发明还提供以所述大肠杆菌O157:H7弱毒株为活性成分的疫苗。
有益效果
本发明申请人通过大量富有创造性的劳动，首次分离到了一株大肠杆菌O157:H7弱毒株JSC2株，其菌落形态具有典型大肠杆菌O157:H7的特征，但对BALB/c小鼠和乳兔无明显致病力，具有较好的免疫原性。小鼠注射JSC2株菌液后能抵抗强毒株的攻击，为动物提供良好的免疫保护效力，可应用于制备大肠杆菌O157:H7疫苗。在攻毒120天后，免疫动物体内的抗体仍能维持较高水平，说明该疫苗免疫后抗体持效期较长。采用本发明JSC2株制备疫苗，方法简单，成本较低。另外，JSC2株还可以应用于制备大肠杆菌O157:H7诊断试剂。
附图说明
图1显示rfbE/fliC二重PCR鉴定JSC2株的电泳图，其中泳道M为DL2000；泳道1和2为JSC2株二重PCR扩增产物；泳道3为大肠杆菌O157:H7阳性对照；泳道4为阴性对照。
图2显示JSC2株在SMAC平板上培养的菌落形态。
图3显示JSC2株革兰氏染色后的显微镜照片。
图4显示小鼠注射JSC2株菌液再经过攻毒后存活率随时间的变化。
图5显示小鼠注射JSC2株菌液免疫后血清IgG抗体随时间的变化。
具体实施方式
材料：
PCR Mix购自广州东盛生物科技有限公司。
DNA胶回收试剂盒购自Axygen公司。
大肠杆菌O157:H7强毒株EDL933：国际标准菌株，由南京农业大学预防兽医微生物组惠赠。
mEC肉汤：EC肉汤培养基（青岛海博生物），121℃高压灭菌20min，而后加入新生霉素至终浓度为100 ug/mL。
肠出血性大肠杆菌O157诊断血清和大肠杆菌H7诊断血清：购自宁波天润生物科技股份有限公司。
PBS缓冲液：0.01mM，pH7.0。氯化钾0.2g/L，磷酸二氢钾0.2g/L，氯化钠8.0g/L，二水合磷酸氢二钠1.56g/L。
实施例1 大肠杆菌O157:H7 JSC2株的分离和鉴定
（1）粪便采集：
从南京市朱家山奶牛场内采集多份新鲜牛粪，放置密封袋中，低温保存。
（2）增菌培养：
每份粪便样品称取25g至无菌锥形瓶中，加入225mL无菌的生理盐水，放入37℃培养箱中震荡2h；每个样品处理后，取10mL加入90mL的mEC肉汤中，37℃震摇培养6h，得到增菌液。
（3）免疫磁珠富集：
取出步骤（2）获得的增菌液1mL于无菌的离心管中，加入20uL Dynabeads®anti-E.coli O157（大肠杆菌免疫磁珠，购自Invitrogen公司），充分混匀后，放于磁力架富集；静置，吸走管中上清液，用0.01mM、pH7.0的PBS缓冲液洗涤磁珠3次，收集菌液。洗涤方法如下：用PBS缓冲液重悬磁珠，再置于磁力架中，静置，吸走管中上清液。在菌液中加入100uL PBS缓冲液混匀，涂布于科马嘉显色培养基（南京助研生物科技有限公司）中，37℃培养24h。观察后发现，科马嘉显色培养基上出现淡***的菌落，边缘不整齐，较扁平。
（4）煮沸裂解法制备模板：
挑取步骤（3）所得淡***菌落，接种于装有mEC肉汤的试管中，37℃培养7-8h，收集菌液。将菌液离心后取沉淀，采用PBS缓冲液重悬，在100℃水浴10 min，12 000 r/min离心5 min，吸取上清作为PCR鉴定中的模板。
（5）rfbE/fliC二重PCR方法鉴定：
采用rfbE/fliC二重PCR方法鉴定挑选到的菌株是否为大肠杆菌O157:H7（李丽，张雪寒，何孔旺，等。EHEC O157:H7二重PCR方法的建立及初步应用，华北农学报，2011，26(6):1-8）。
将步骤（4）所获模板以rfbE和fliC为引物采用二重PCR方法进行检测。实验结果发现，rfbE/fliC二重PCR扩增目的片段，分别为812bp和625bp，与大肠杆菌O157:H7阳性对照片段大小相同（见图1），判定步骤（3）挑选到的菌落为大肠杆菌O157:H7，命名为JSC2株。
（6）血清凝集实验鉴定：
采用血清凝集实验对JSC2株进行鉴定（叶青，张雪寒，何孔旺，等。牛源大肠杆菌O157:H7的分离及毒力因子鉴定，中国兽医学报，2012，32(8):1148-1153）。
将JSC2株分别与大肠杆菌O157诊断血清、H7诊断血清，通过玻板凝集进行血清型鉴定，结果显示JSC2株可以与O157和H7诊断血清发生凝集反应，出现明显的凝集颗粒。血清凝集实验结果表明，分离到的JSC2株为大肠杆菌O157:H7，与rfbE/fliC二重PCR方法鉴定结果一致。
（7）细菌形态特征：
将JSC2株采用划线法接种至SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂，购于青岛海博生物技术有限公司）平板，37℃培养12-20 h，观察菌落形态。结果如图2所示：该菌株不发酵山梨醇，在SMAC平板上呈现圆形、光滑、湿润、稍凸起、半透明菌落，有或无淡褐色中心，具有典型大肠杆菌O157:H7的特征。
运用革兰氏染色法对菌落染色，显微镜下可观察到红色的杆菌（图3），无芽胞，有鞭毛，为革兰氏阴性杆菌。
实施例2 大肠杆菌O157:H7 JSC2株的致病力实验
（1）EDL933株和JSC2株菌液的制备
从低温冻存冰箱中取出大肠杆菌O157:H7 EDL933株和JSC2株的冻存管，接种环蘸取后，划线于SMAC平板，37℃培养12-20 h后，挑取单菌落接种于mEC肉汤，37℃培养7-8h后，12 000r/min离心5min，将菌泥重悬于PBS缓冲液（0.01mM、pH7.0）中，攻击动物备用。
（2）BALB/c小鼠致病力试验
选用6周龄清洁级BALB/c小鼠（扬州大学医学院提供）20只，随机分为A、B两组，10只/组。A组，口腔灌服大肠杆菌O157:H7 JSC2株菌液，1.0×1010CFU/只；B组，口腔灌服同等体积的大肠杆菌O157:H7 EDL933株菌液，1.0×1010CFU/只。攻击后连续观察7天。试验发现攻毒后72h，B组的部分小鼠表现行动迟缓、被毛蓬松、嗜睡、厌食、喜好扎堆，便稀，并陆续死亡，直到监测期结束，死亡率达到50%。而A组小鼠未发生死亡。
（3）乳兔致病力试验
选用3日龄乳兔（金陵种兔场提供）10只，随机分成A、B两组，5只/组。A组，口腔灌服JSC2株菌液，1.0×1010CFU/只；B组，口腔灌服同等体积的EDL933株菌液，1.0×1010CFU/只。攻毒后连续观察7天。结果：攻毒当天，B组家兔，部分出现腹泻，次日陆续出现死亡，直到监测期结束，死亡率达到50 %；而A组家兔，精神状态良好，没有发生死亡。
上述结果表明，分离的JSC2株为大肠杆菌O157:H7弱毒株。
因此于2017年6月22日将该大肠杆菌弱毒株送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO: M 2017356。具体保藏信息如下：
分类命名：大肠杆菌 O157:H7 JSC2
即Escherichia coli O157:H7 JSC2；
保藏单位：中国典型培养物保藏中心；
地址：中国.武汉.武汉大学； 保藏日期：2017年6月22日；
保藏编号：CCTCC NO:M 2017356。
实施例3 大肠杆菌O157:H7 JSC2株的免疫攻毒保护实验
选用6周龄清洁级BALB/c小鼠40只，随机分为A、B、C、D四组，10只/组。A和B组，背部皮下注射JSC2株菌液（制备方法同实施例2标题1），1.0×106CFU/只；C和D组，背部注射同等体积的PBS缓冲液（0.01mM、pH7.0）。28天后，A和C组同时口腔灌服EDL933株菌液，1.0×1010CFU/只，观察小鼠发病和死亡情况。攻毒后72h，C组部分小鼠表现精神不佳、被毛蓬松、嗜睡、厌食、喜好扎堆，***稀薄粪便附着，并陆续出现死亡，直到监测期结束，死亡率达到50%（见图4）；而A组小鼠，精神状态良好，没有发生死亡。
另B和D组分别于免疫注射开始时、免疫后28天、60天、90天和120天采血，无菌分离血清，采用间接ELISA方法监测抗体水平（张雪寒，张强，张碧成，等。检测产志贺毒素大肠杆菌抗体的间接ELISA试剂盒的研制，西南农业学报，2016，29(11):2738-2745）。血清中大肠杆菌O157:H7血清抗体水平如图5所示，在免疫后28天，B组血清OD450的检测结果远远大于阳性临界值0.244，而对照组D组血清OD450一直处于较低水平，远远低于临界值0.244，判定B组血清为抗体阳性。持续监测到免疫后120天，B组血清仍然维持较高的抗体水平，说明JSC2株菌液免疫后抗体水平较高，且抗体持续期较长。
综上所述，JSC2株1次皮下注射小鼠后，可诱导高水平血清IgG抗体，抗体持续期长，能够提供受免动物良好的免疫效力，可用于大肠杆菌O157:H7疫苗和诊断试剂的研制。

Claims (7)

1.一株大肠杆菌O157:H7弱毒株，是大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株，保藏号为CCTCC NO:M 2017356。
2.权利要求1所述大肠杆菌O157:H7弱毒株的菌液。
3.制备权利要求2所述大肠杆菌O157:H7弱毒株菌液的方法，包括采用肉汤培养基培养大肠杆菌（Escherichia coli）O157:H7 JSC2株的步骤。
4.根据权利要求3所述制备大肠杆菌O157:H7弱毒株菌液的方法，其特征在于培养温度为35-40℃，培养时间为5-10h。
5.权利要求1所述大肠杆菌O157:H7 弱毒株在制备大肠杆菌O157:H7疫苗中的应用。
6.一种以权利要求1所述大肠杆菌O157:H7弱毒株为活性成分的疫苗。
7.权利要求1所述大肠杆菌O157:H7弱毒株在制备大肠杆菌O157:H7诊断试剂方面的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109644940A (zh) * 2019-02-18 2019-04-19 扬州大学 一种绵羊大肠杆菌的攻毒方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1566325A (zh) * 2003-07-09 2005-01-19 李迅 0157：h7出血性大肠杆菌变异株的制取方法
CN1298840C (zh) * 2003-09-24 2007-02-07 冯书章 肠出血性大肠杆菌o157基因缺失疫苗
CN1748791B (zh) * 2005-08-08 2012-08-15 中国人民解放军第三军医大学 EspA人和牲畜预防用出血性大肠杆菌O157:H7疫苗及制备方法
CN101629158A (zh) * 2008-07-17 2010-01-20 冯书章 出血性大肠杆菌o157重组疫苗
CN102114241B (zh) * 2010-09-26 2012-07-04 中国人民解放军第三军医大学 一种减毒活疫苗及其应用
CN102206607B (zh) * 2011-04-08 2013-05-08 江苏省农业科学院 肠出血性大肠杆菌o157:h7三基因缺失菌株

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