CN108008042A - 一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法。它以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照品,以乙腈(A)‑水(B)/梯度洗脱0~15min30%~40%A;15~40min40%A;40~70min40%~60%A流动相的高效液相色谱法。与现有技术相比,本发明为同时测定四种有效成分含量,质量概述全面,专属性强,稳定性高,测量结果准确,达到了有效控制该制剂质量的目的,确保了该制剂及其相关产品质量的稳定及临床用药的安全。
Description
技术领域
本发明涉及了一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法,属于中药质量检测技术领域。
背景技术
重楼解毒酊制剂处方由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味中药材组成,具有清热解毒,散淤止痛。用于肝经火毒所致的带状疱疹,皮肤瘙痒,虫咬皮炎,流行性腮腺炎。经临床应用并证明,本品治疗效果明显,具有抑菌、抗病毒感染,清热解毒,消肿散瘀,疏经止痛之功效。目前已有的剂型为酊剂。
本制剂由重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材组成,在现行质量标准中鉴别项和含量测定项仅控制重楼、石菖蒲药材的鉴别及艾片的含量测定,质量控制体系单一,重楼为方中君药,处方中含量高。现代药理学表明,重楼中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ具有抗肿瘤、抗感染、止血、抗血管生成、抗骨质疏松、抗氧化等药理作用。因此在现有质量标准的基础上,增加多指标有效成分的含量测定,有利于该制剂的质量及临床应用的稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法,以期能够对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量进行快速、准确、高重现率、高回收率的测定。
本发明完成前未发现对该制剂进行重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种成分同时测定的报道。本发明所述的重楼解毒酊制剂:重楼、生草乌、艾叶、石菖蒲、大蒜、艾片六味药材,大蒜去皮,捣碎成泥,重楼、生草乌、石菖蒲、艾叶粉碎成最粗粉(过10目筛),加二倍量稀乙醇,浸渍10天,去上清液,药渣滤过,滤液和上清液合并,加入艾片,搅拌使溶解,加水和乙醇调整至1000ml,并使含醇量达45%~55%,搅匀,静置3天,滤过,即得。已获得专利2013101172316《重楼解毒酊及其制备方法》。
本发明采用如下的技术方案:
一种重楼解毒酊制剂中四种有效成分的含量测定方法,以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照,以乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~30min30%~60%A;30~40min40%A;40~80min40%~80%A为流动相的高效液相色谱法。对制剂中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量测定按照如下步骤进行:
(1)色谱条件与***适应性试验:以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂;以乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~30min30%~60%A;30~40min40%A;40~80min40%~80%A为流动相;柱温20~30℃;检测波长为200~275nm;流速为0.8~1.2mL/min;理论塔板数以重楼皂苷I计不得少于4000。
(2)对照品溶液的制备:取重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品适量,加甲醇制成浓度分别含重楼皂苷I0.64mg/mL、重楼皂苷Ⅱ0.46mg/mL、重楼皂苷Ⅲ0.26mg/mL、重楼皂苷Ⅳ0.23mg/mL的溶液,按1:1:1:1混合,摇匀,临用前用0.22μm微孔滤膜过滤,即得。
(3)供试品溶液的制备:取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml,蒸至无醇味,精密加入甲醇5mL,称定重量,超声或加热回流30~60min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,滤过,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣,定容于5ml量瓶中,滤过,取续滤液,即得。
(4)测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
本发明所述的重楼解毒酊制剂中重楼皂苷I含量不得少于0.15%,重楼皂苷Ⅱ含量不得少于0.45%,重楼皂苷Ⅲ含量不得少于0.2%,重楼皂苷Ⅳ含量不得少于0.2%。
具体实施方式
实施例
1仪器与试药
1.1仪器:Agilent1200高效液相色谱仪
1.2 试药:重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品,均由中国药品生物制品检定研究院提供,乙腈为色谱纯,重楼解毒酊由贵州圣济堂制药有限公司提供。
2 方法与结果
2.1色谱条件 Phenomenex C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~15min30%A;15~40min40%A;40~70min50%A为流动相,检测波长为203nm;流速为1.0mL.min-1;柱温为25℃。在选定的条件下,各色谱峰与样品中其他色谱峰达基线分离,其理论板数(N)均大于4000。
2.2对照品溶液的制备 取重楼皂苷I、重楼皂苷II、重楼皂苷VI及重楼皂苷VII对照品适量,精密称定,加甲醇制成每毫升含重楼皂苷I、II、VI、VII分别为0.4127,0.4370,0.4288,0.4497mg的混合溶液,及得。
2.3供试品溶液的制备 取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml,蒸至无醇味,精密加入甲醇5mL,称定重量,超声或加热回流30~60min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,滤过,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣,定容于5ml量瓶中,滤过,取续滤液,即得。
2.4 线性关系考察 精密吸取上述混合对照品溶液,分别进样2,4,6,8,10,12µL,测定各色谱峰峰面积。以对照品进样量(µg)为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。结果表明重楼皂苷I、II、VI、VII分别在0.8254~4.9164,0.8740~4.9440,0.8576~4.9296,0.8994~5.4720µg范围内线性关系良好。
2.5精密度实验 取同一份供试品溶液,连续进样6次,测定并记录重楼皂苷I、II、VI、VII的峰面积。结果各成分峰面积RSD分别为0.45%,0.28%,0.31%,0.22%,表明仪器的精密度良好。
2.6重复性实验
取同一批重楼解毒酊样品6份,分别按“2.4” 项方法制备,进样10µL,测定峰面积,计算含量。结果重楼皂苷I、II、VI、VII含量RSD分别为1.12%,1.32%,1.17%,1.32%,表明该方法重复性良好。
2.7稳定性实验
取同一重楼解毒酊供试品溶液,分别于0,1,2,4,8,16,24h进样10µL,测定峰面积,计算含量。结果重楼皂苷I、II、VI、VII的RSD分别为1.32%,1.54%,1.65%,1.96%,表明在24小时内,供试品溶液稳定。
2.8加样回收率实验
取6份同一批号已知含量的重楼解毒酊供试品约3ml,精密称定,分别加入混合对照品溶液1mL(重楼皂苷I2.317 mg.ml-1、重楼皂苷II 1.231mg.ml-1、重楼皂苷VI0.435mg.ml-1、重楼皂苷VII 1.334mg.ml-1)。按“2.4”项方法制备,进样10µL,测定峰面积,计算回收率,结果表明4种重楼皂苷类成分平均加样回收率分别为99.32%,99.95%,98.12%,99.04%;RSD分别为2.15%,1.32%,1.76%,1.15%,说明该方法准确度良好。
2.9相对校正因子测定及耐用性考察
2.10相对校正因子及相对保留时间测定 取“2.3”项的混合对照品溶液,分别进样2,4,6,8,10,12µL,测定峰面积。以重楼皂苷VII为参照物,计算各待测成分重楼皂苷I,II,VI 相对校正因子FI/VII,FII/VII,FVI/VII,相对保留时间tI/VII,tII/VII,tVI/VII。
2.10.1 仪器对相对校正因子的影响 取“2.3”项的混合对照品溶液,分别进样10µL,比较三种不同型号高效液相色谱仪(Agilent1200、Waters2695、Shimadzu LC-20A)相对校正因子的影响。FI/VII,FII/VII,FVI/VII的RSD分别为1.19%,1.25%,1.73%, 表明仪器对相对校正因子影响不大。
2.10.2色谱柱对相对校正因子影响 取“2.3”项的混合对照品溶液,分别进样10µL,在同一台高效液相色谱仪上(Shimadzu LC-20A),比较Phenomenex Luna、AgilentEclipse、Diamonsil、Thermo、Kromasil 5种型号C18色谱柱(4.6mmX250mm,5µm)。FI/VII,FII/VII,FVI/VII的RSD分别为0.46%,和0.73%,0.78%,说明色谱柱对相对校正因子无显著影响。
2.10.3样品测定 取不同批号的重楼解毒酊,用本实验所确定的方法进行样品处理和定量测定,并分别采用标准曲线法计算含量,结果如下:重楼解毒酊中重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ的含量分别为0.12%,0.264%,0.109%,0.485%,说明该方法测定结果具有较高可信度。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (4)
1.一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法,即重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ四种有效成分的含量测定方法,其特征在于:以重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ为对照品,以乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~15min30%~40%A;15~40min40%A;40~70min40%~60%A为流动相的高效液相色谱法,按照下属步骤进行测定:
(1)色谱条件与***适应性试验:以十八烷基硅烷合硅胶为填充剂;以乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~15min30%~40%A;15~40min40%A;40~70min40%~60%A为流动相;柱温20~30℃;检测波长为200~275nm;流速为0.8~1.2mL/min;理论塔板数以重楼皂苷I计不得少于4000;
(2)对照品溶液的制备:取重楼皂苷I、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ及重楼皂苷Ⅳ对照品适量,加甲醇制成浓度分别含重楼皂苷I0.64mg/mL、重楼皂苷Ⅱ0.46mg/mL、重楼皂苷Ⅲ0.26mg/mL、重楼皂苷Ⅳ0.23mg/mL的对照品溶液,按1:1:1:1混合,摇匀,临用前用0.22μm微孔滤膜过滤,即得;
(3)供试品溶液的制备:取装量差异下的重楼解毒酊制剂5ml,蒸至无醇味,精密加入甲醇5mL,称定重量,超声或加热回流30~60min,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,滤过,回收溶剂至干,用甲醇溶解残渣,定容于5ml量瓶中,滤过,取续滤液,即得;
(3)测定法:分别精密吸取对照品与供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得。
2.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法,其特征在于:所述的流动相体系为乙腈(A)-水(B)/梯度洗脱0~30min30%~60%A;30~40min40%A;40~80min40%~80%A。
3.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法,其特征在于:检测波长为220nm;流速为1.0mL/min;柱温30℃。
4.按照权利要求1所述的一种重楼解毒酊制剂四种皂苷类成分的含量测定方法,其特征在于:供试品制备方法中,超声或加热回流30~60min。
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