CN108008023A - 一种健脑补肾中药组合物的检测方法 - Google Patents

一种健脑补肾中药组合物的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种健脑补肾中药组合物的检测方法，属于中药制剂质量检测的技术领域。本发明采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下，以芍药苷为参照，对样品中所含绿原酸、斯皮诺素、连翘苷、牛蒡苷进行特征定性分析。本检测方法简便、快捷、灵敏度好、稳定性高，形成组合物特征图谱，达到全面检测组合物所含物质目的。

Description

一种健脑补肾中药组合物的检测方法
技术领域
本发明涉及中药领域，健脑补肾中药组合物的质量检测方法，具体属于中药制剂质量检测的技术领域。
背景技术
健脑补肾丸是一个从上世纪50年代就公开销售的中成药老品种，现收载于《中国药典》2015年版一部第1370-1371页，全方由红参、鹿茸、狗鞭等25味中药组成，具有：健脑补肾，益气健脾，安神定志的功能。用于脾肾两虚所致的健忘失眠，头晕目眩，耳鸣、心悸，腰膝酸软、遗精；神经衰弱和性功能障碍见上述症状者。
由于本品是25味药的大处方，成份复杂。目前《中国药典》的质量控制项目也仅涉及几味药材的薄层鉴别及单一芍药苷的含量测定，实验操作繁琐且不能达到全面控制，容易出现添加单一芍药苷成分造假问题。中药色谱特征图谱是一种综合的、可量化的中药材及中药制剂的质量检测技术，主要用于鉴别真伪和评价原药材、半成品及制剂质量的均一性和稳定性。随着仪器自动化程度的提高和计算机的快速发展，大量的中药色谱特征图谱相继涌现，用特征图谱进行有关物质检测是目前检测技术发展趋势。
由于中药组合物成分复杂，任何单一活性成分均不能反映中医用药的所体现的整体疗效，尤其是复方制剂，是通过多成分之间的相互协同作用发挥疗效，单一的测定一个或几个指标性成分不能全面反映中药材或中药复方的内在质量，而中药特征图谱是一种全面的反映中药材或中药复方所包含的化学信息的分析方法。
发明内容
针对目前健脑补肾中药组合物质量检测技术简单、不能全面反映中药复方所含组分成分的问题，本发明的目的在于建立健脑补肾中药组合物HPLC特征图谱检测技术，对其药物组份进行有效的检测。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下，以芍药苷为参照，对样品中所含绿原酸、斯皮诺素、连翘苷、牛蒡苷进行定性分析。
其中，建立特征图谱检测技术方法按下述步骤进行：
(1)色谱条件：色谱柱为C18柱；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B；检测波长为230nm；流速为1ml/min，柱温为室温。
（2）对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、芍药苷对照品、斯皮诺素对照品、牛蒡苷对照品、连翘苷对照品适量，加乙腈：0.1%磷酸（10：90）混合溶液制成每1ml各含50μg的混合溶液，摇匀，即得。
（3）供试品溶液的制备：精密称取健脑补肾中药组合物粉末2g，置具塞三角瓶中，精密加入乙腈：0.1%磷酸（10：90）混合溶液25ml，超声处理（功率250W，频率100Hz）30min，滤过，取续滤液，即得。
（4）分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
其中，所述的步骤（1）色谱条件及***适用性实验：美国戴安高效液相色谱仪（U3000泵，UVD170U紫外检测器，CHROMELEON数据处理软件，手动进样器，柱温箱）；色谱柱：Kromasil-C18色谱柱（250×4.6mm）；startorius BP211D电子分析天平（d=0.01mg）真空脱气***。
18个批次的健脑补肾中药组合物样品；绿原酸、芍药苷、斯皮诺素、牛蒡苷、连翘苷对照品，乙腈均为色谱级，磷酸为分析级，水为纯化水。
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于10000。
表1
时间(分钟) 流动相A(%） 流动相B(%)
0—80 5→30 95→70
80—110 30→100 70→0
110—115 100 0
115—120 100→5 0→95
分别取数批次健脑补肾中药组合物样品，按上述制备供试品溶液，测定并记录120min色谱图，结果所有色谱峰集中在90min内，所得到的5个特征峰因分别与相应的参照物保留时间相对应，以芍药苷参照物峰相应的峰为S峰，计算特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为峰1（绿原酸 65.36%）、峰2（芍药苷 100.00%）、峰3（斯皮诺素 122.15%）、峰4（连翘苷 187.05%）、峰5（牛蒡苷 193.65%）。
本发明与现有技术相比，具有以下优点：
1.检测技术先进，能有效的检测健脑补肾中药组合物的特征成分，并能有效确定相关峰对应的物质结构，能有效监控本品质量。
2.本发明技术操作简单，检测特征全面，重复性好，稳定性好。
附图说明
图1为混合对照品溶液在0～120min内的色谱图。
图2为健脑补肾中药组合物样品在0～120min内的色谱图。
具体实施方式
下面列举实施例进一步详细说明本发明，该实施例仅用于说明本发明而对本发明并没有限制。
一、色谱条件与***适用性试验
仪器：美国戴安高效液相色谱仪（U3000泵，UVD170U紫外检测器，CHROMELEON数据处理软件，手动进样器，柱温箱）；
色谱柱：Kromasil-C18色谱柱（250×4.6mm）；
天平：startorius BP211D电子分析天平（d=0.01mg）；
真空脱气***；
国家药典委员会中药色谱特征图谱相似度评价***；
流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；
检测波长：230nm；
表1流动相梯度洗脱表
时间(分钟) 流动相A(%） 流动相B(%)
0—80 5→30 95→70
80—110 30→100 70→0
110—115 100 0
115—120 100→5 0→95
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品、芍药苷对照品、斯皮诺素对照品、牛蒡苷对照品、连翘苷对照品适量，加乙腈：0.1%磷酸（10：90）混合溶液制成每1ml各含50μg的混合溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：精密称取健脑补肾中药组合物粉末2g，置具塞三角瓶中，精密加入乙腈：0.1%磷酸（10：90）混合溶液25ml，超声处理（功率250W，频率100Hz）30min，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
供试品特征色谱中应有5个特征峰（见图-1、图-2），应分别与相应的参照物峰保留时间相对应，以峰2（芍药苷）为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，应在规定值的±5%以内。分别为峰1（绿原酸 65.36%）、峰2（芍药苷 100.00%）、峰3（斯皮诺素 122.15%）、峰4（连翘苷 187.05%）、峰5（牛蒡苷 193.65%）。
二、方法学考察
1、精密度试验：取141203批供试品溶液在上述试验条件下，连续进样5次，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD％。结果表明，各色谱峰的相对保留时间RSD％均小于0.25％。
2、稳定性试验：取141203批供试品溶液在上述试验条件下，在0h、2h、4h、8h、12h、24h测定，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD％。结果表明，各色谱峰的相对保留时间均小于0.39％。
3、重复性试验：取141203批样品5份，按照供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，在上述试验条件下进行测定，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD%。结果表明，各色谱峰的相对保留时间均小于0.28％。
三、样品测定：
取18批健脑补肾中药组合物，按照上述方法分别制备18份供试品溶液，各精密吸取20μL，在上述试验条件下进行测定，记录0～120min色谱图，以芍药苷为参照峰计算相对保留时间，健脑中药组合物的特征图谱见图2。
四、特征图谱的建立：分别取18批健脑补肾中药组合物样品，制备供试品溶液，在上述试验条件下进行测定并记录120min色谱图，结果所有色谱峰集中在90min内，比较了18样品的色谱图，确认了5个特征峰，经过与对照图谱对比，确认峰1（绿原酸 65.36%）、峰2（芍药苷 100.00%）、峰3（斯皮诺素 122.15%）、峰4（连翘苷 187.05%）、峰5（牛蒡苷 193.65%），因芍药苷是原标准中检测的指标，故选择芍药苷为内参比峰。
五、多批次样品的验证试验：
色谱条件及方法按照上述试验方法，制备各批次样品，分别测定，。计算相对保留时间，结果如表2所示：
表2多批次样品验证实验
通过以上数据可知：18批样品中各样品所得到的5个特征峰因分别与相应的参照物保留时间相对应，以芍药苷参照物峰相应的峰为S峰，计算特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为峰1（绿原酸 65.36%）、峰2（芍药苷 100.00%）、峰3（斯皮诺素 122.15%）、峰4（连翘苷 187.05%）、峰5（牛蒡苷 193.65%）。

Claims (4)

1.一种健脑补肾中药组合物的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B；检测波长为230nm的色谱条件下，按下表的洗脱程序进行梯度洗脱，以芍药苷为参照，对组合物中绿原酸、斯皮诺素、连翘苷、牛蒡苷等进行特征定性分析。
2.根据权利要求1所述的一种健脑补肾中药组合物的检测方法，其特征在于：所述成分含量测定方法按下述步骤进行：
(1) 对照品溶液的制备：取绿原酸、芍药苷、斯皮诺素、牛蒡苷、连翘苷对照品适量，精密称定，加乙腈：0.1%磷酸的混合液制成对照品溶液；
(2) 供试品溶液的制备：取健脑补肾中药组合物粉末2g，精密称定，置具塞三角瓶中，加乙腈：0.1%磷酸的混合液25ml，超声处理，滤过，取续滤液，即得；
(3) 测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.根据权利要求2所述的一种健脑补肾中药组合物的检测方法，其特征在于：所述的步骤（1）对照品溶液的制备：
精密称取绿原酸对照品、芍药苷对照品、斯皮诺素对照品、牛蒡苷对照品、连翘苷对照品适量，加10%乙腈和90%0.1%磷酸混合溶液制成每1ml各含50μg的混合溶液，摇匀，即得。
4.根据权利要求2所述的一种健脑补肾中药组合物的检测方法，其特征在于：所述的步骤（2）供试品溶液的制备：
精密称取健脑补肾中药组合物粉末2g，置具塞三角瓶中，精密加入10%乙腈和90%0.1%磷酸混合溶液25ml，在功率250W，频率100Hz超声处理30min，滤过，取续滤液，即得。
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