CN107898999A - 一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法，尤其涉及一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法，将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比8:1‑15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1‑2：1‑2：1‑2：1‑2：1‑2：1‑2：1‑2双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为5ⅹ109‑1ⅹ1010的活菌数/g；所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括：本发明的上述微生态制剂能够显著改善胃肠功能，与单纯的使用复合益生菌例如本发明所述的复合益生菌相比，具有显著的协同辅助作用。

Description

一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法，尤其涉及一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法和用途。
背景技术
猴头菌(Hericium erinaceus)是一种极具营养保健和药用价值的食用菌，性平，味甘。研究报道，猴头菌活性物质主要有多糖、甾醇(麦角甾醇类)、萜类(二萜类、杂萜类)、脂肪酸(饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸等)、酚类、蛋白质等化合物，具有利五脏，助消化，滋补，抗癌，抗神经衰弱等功效。
目前，国内外对猴头菌的研究主要集中在猴头菌多糖的提取、化学成分测定等方面，但对猴头菌蛋白的研究较少。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂及其制备方法。
本发明通过以下方案达到上述目的：
一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g；所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括：
(1)将猴头菌子实体搅碎后加入10％-30％质量的水，混匀后置于-80℃冷冻4-8h，待猴头菌子实体完全冰冻后，于37℃水浴锅内完全解冻，反复冻融2-4次；
(2)向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液，调整pH到9-10，保持料液比为40-60ml/g，封口，在35-40℃条件下磁力搅拌提取4-8h，反复提取两次，过滤，合并滤液；
(3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5，使沉淀完全，离心，收集沉淀，即为猴头菌蛋白提取物。
在一个优选的实施例中，所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括：
(1)将猴头菌子实体用碎冰机搅碎后加入10％-30％质量的蒸馏水，混匀后置于-80℃冰箱中冷冻4-8h，待猴头菌子实体完全冰冻后，迅速于37℃水浴锅内完全解冻，反复冻融2-4次；
(2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中，加入NaOH溶液，调整pH到9-10，保持料液比为40-60ml/g，用保鲜膜封口，在35-40℃条件下磁力搅拌提取4-8h，反复提取两次，过滤，合并滤液；
(3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5，使沉淀完全，离心，收集沉淀，即为猴头菌蛋白提取物。
其中，所述水为蒸馏水。
优选的，上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(2)为：向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液，调整pH到9.47，保持料液比为50ml/g，封口，在37.9℃条件下磁力搅拌提取6h，反复提取两次，过滤，合并滤液。
优选的，上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(3)中，所述离心的条件为：在4℃的条件下，采用8000r/min的转数，离心时间为20min。
优选的，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物。
优选的，所述复合益生菌中的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为1ⅹ1010的活菌数/g。
优选的，一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为1ⅹ1010的活菌数/g；所述猴头菌蛋白提取物的制备方法如上所述。
在本发明的第二方面，提供一种上述制备方法制备得到的含有猴头菌蛋白的微生态制剂。
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖***内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称，主要分为三大类，乳杆菌类、双歧杆菌类、革兰氏阳性球菌。
在本发明的第三方面，提供一种上述含有猴头菌蛋白的微生物制剂在改善胃肠功能、促红细胞凝集、抗炎、提高机体免疫、抗肿瘤方面的用途。
在本发明的第四方面，提供一种上述含有猴头菌蛋白的微生物制剂在制备改善胃肠功能、促红细胞凝集、抗炎、提高机体免疫、抗肿瘤药物或保健品方面的用途。
本发明中含有猴头菌蛋白的提取物具有促红细胞凝集、抗炎、提高机体免疫和抗肿瘤的作用，并且在复合益生菌的促进肠道菌群的构建及丰富方面具有促进作用。
本发明的上述微生态制剂能够能够显著改善胃肠功能，与单纯的使用复合益生菌例如本发明所述的复合益生菌相比，具有显著的协同辅助作用。
附图说明
图1为实施例1的猴头菇蛋白鉴定图；
图2为试验例1的血清中LPS含量的变化；
图3为试验例1的结肠病理切片图；
图4为试验例1的各实验组小鼠肠道菌群在门分类水平上的比例图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：
猴头菌蛋白提取物的制备
具体步骤如下：
(1)将猴头菌子实体用碎冰机搅碎后加入20％质量的蒸馏水，混匀后置于-80℃冰箱中冷冻6h，待猴头菌子实体完全冰冻后，迅速于37℃水浴锅内完全解冻，反复冻融3次；
(2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中，加入NaOH溶液，调整pH到9.47，保持料液比为50ml/g，用保鲜膜封口，在37.9℃条件下磁力搅拌提取6h，反复提取两次，过滤，合并滤液；
(3)用稀盐酸溶液调整pH至4.5，使沉淀完全，在4℃的条件下，采用8000r/min的转数，离心时间为20min，收集沉淀，即为猴头菌蛋白提取物(HEP)。
对该猴头菌蛋白提取物进行鉴别，鉴别图谱见图1。
实施例2：含猴头菌蛋白以及复合益生菌的微生态制剂的制备
取猴头菌蛋白提取物30重量份，双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的益生菌干粉各3重量份，活性分别为1.5ⅹ109的活菌数/g，混合均匀，分装即得。
试验例1
取SPF级BALB/C小鼠50只，随机分为5组，每组10只。留取1组为正常对照组外，其余4组均直肠注入0.6％三硝基苯磺酸(TNBS)(溶于50％乙醇)0.1ml制备溃疡性结肠炎模型。
造模成功后，分成HEP组、复合益生菌组、HEP+复合益生菌的实施例2制备的微生物制剂组、模型组。除正常组外，其他组给以大量抗生素处理，按组别给相对应药物，模型组和正常组灌胃蒸馏水。持续十天后，处死小鼠，取血、小肠、粪便。相关检测结果见图2、图3、图4。
从图2的对血清中LPS水平测定结果显示，模型组含量是正常组的210％。给药HEP和复合益生菌制剂后，小鼠血清中LPS水平皆有明显下降，HEP与复合益生菌共同使用后，血清中LPS含量仅增长20％左右，具有协同增效作用。
从图3的结肠病理切片可以看出，与空白对照组相比，模型组呈现肠黏膜出现弥漫一致性炎症现象，肠黏膜结构改变并出现裂隙状溃疡病变。给药HEP和复合益生菌后，肠粘膜结构更为规则，裂隙状溃疡改变也较少。
从图4可以看出：与正常组相比，小鼠经TNBS处理后，肠道内放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和TM7门细菌增多，脱铁杆菌门(Deferribacteres)和变形菌门(Proteobacteria)减少；与TNBS组相比，给药HEP、复合益生菌和HEP+复合益生菌的微生物制剂后，小鼠肠道内拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门和变形菌门菌数明显增多；经过大量抗生素处理后，脱铁杆菌门、变形菌门和TM7门细菌几乎被完全杀灭，而给药HEP、复合益生菌和HEP+复合益生菌后各细菌门则得以保持结构完整。
综上可以看到，溃疡性结肠炎小鼠服用HEP、复合益生菌、HEP+复合益生菌后，与正常组相比所有溃疡性结肠炎的症状指标也得到了明显的改善，特别是HEP+复合益生菌组改善更为明显，具有协同增效作用。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2：1-2双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g；所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括：
(1)将猴头菌子实体搅碎后加入10％-30％质量的水，混匀后置于-80℃冷冻4-8h，待猴头菌子实体完全冰冻后，于37℃水浴锅内完全解冻，反复冻融2-4次；
(2)向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液，调整pH到9-10，保持料液比为40-60ml/g，封口，在35-40℃条件下磁力搅拌提取4-8h，反复提取两次，过滤，合并滤液；
(3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5，使沉淀完全，离心，收集沉淀，即为猴头菌蛋白提取物。
2.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述猴头菌蛋白提取物的制备方法包括：
(1)将猴头菌子实体用碎冰机搅碎后加入10％-30％质量的蒸馏水，混匀后置于-80℃冰箱中冷冻4-8h，待猴头菌子实体完全冰冻后，迅速于37℃水浴锅内完全解冻，反复冻融2-4次；
(2)将冻融好的猴头菌子实体放入大烧杯中，加入NaOH溶液，调整pH到9-10，保持料液比为40-60ml/g，用保鲜膜封口，在35-40℃条件下磁力搅拌提取4-8h，反复提取两次，过滤，合并滤液；
(3)用稀盐酸溶液调整pH至4-5，使沉淀完全，离心，收集沉淀，即为猴头菌蛋白提取物。
3.根据权利要求1或2所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(2)为：向冻融好的猴头菌子实体中加入NaOH溶液，调整pH到9.47，保持料液比为50ml/g，封口，在37.9℃条件下磁力搅拌提取6h，反复提取两次，过滤，合并滤液。
4.根据权利要求1或2所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，上述猴头菌蛋白提取物的制备方法的步骤(3)中，所述离心的条件为：在4℃的条件下，采用8000r/min的转数，离心时间为20min。
5.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物。
6.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，所述复合益生菌中的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为1ⅹ1010的活菌数/g。
7.根据权利要求1所述的一种含有猴头菌蛋白的微生物制剂的制备方法，其特征在于，将猴头菌蛋白提取物和复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1:1双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为1ⅹ1010的活菌数/g。
8.一种根据权利要求1至7中任一所述的制备方法制备得到的含有猴头菌蛋白的微生态制剂。
9.一种权利要求9所述的含有猴头菌蛋白的微生态制剂在制备改善胃肠功能、促红细胞凝集、抗炎、提高机体免疫、抗肿瘤药物或保健品方面的用途。
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