CN107898678A - 一种植物护发素的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种植物护发素的制备方法，它由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比5～89:2～89:0～30:0～50:0.5～15:0～30:0～5:0～5:0～70组成本植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精和水组成。本发明具有滋养秀发的功效。

Description

一种植物护发素的制备方法
技术领域
本发明涉及一种植物护发素的制备方法。
背景技术
长期缺少滋补的头皮会让头发生长的环境变得很差，容易引起脱发头痒、头发枯黄开叉甚至滋生白发等头发问题。
市场上很多洗发水采用化学激素类勾兑而成，不能起到很好的润发护发效果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种植物护发素的制备方法，具有养发护发的功效。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种植物护发素的制备方法，其特征在于：
它由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比5～89:2～89:0～30:0～50:0.5～15:0～30:0～5:0～5:0～70组成；
所述表面活性剂包括聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、硬脂酰乳酸钠、双乙酰酒石酸单甘油酯、椰油酰胺丙基甜菜碱、壬基酚聚氧乙烯醚、油酸聚氧乙烯酯、硬脂酸聚氧乙烯酯、失水山梨醇脂肪酸酯、二聚甘油、十六烷基三甲基季铵溴化铵、十八烷基二甲基苄基季铵氯化铵、苄基三乙基氯化铵、二异辛基丁二酸酯磺酸钠和脂肪酸聚氧乙烯脂中的一种或者任意比例的两种以上；
所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇、聚谷氨酸、烟酰胺、聚乙二醇和木糖醇中的一种或者任意比例的两种以上；
所述滋补剂包括蜂蜜、水杨酸钠、超氧化物歧化酶、维他命A、β葡聚糖、维他命E、赖氨酸钠和维生素E中的一种或者任意比例的两种以上；
所述增稠剂包括氯化钠、羧甲基纤维素钠、明胶、海藻酸钠和干酪素中的一种或者任意比例的两种以上；
所述珠光剂包括珍珠粉、硬脂酸乙二醇双酯、乙二醇双硬脂酸和云母粉中的一种或者任意比例的两种以上；
所述杀菌剂包括甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲酸钠和山梨酸钾中的一种或者任意比例的两种以上；
所述海藻提取液，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70％，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21％，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤a)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
步骤3)所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
步骤4)所述混合培养基至含水量为60％，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
步骤5)混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
发明具有以下有益技术效果：
1、本发明采用新鲜海藻，海藻生长于高盐，寒冷的海水中，其本身具有很好的自我保护功能，且海藻中含有大量氨基酸，对秀发具有滋补效果。
2、本发明采用溶菌酶和果胶酶对海藻进行预处理，溶菌酶使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出，方便后续提取。
3、本发明采用好氧兼厌氧的产氨棒杆菌在缺氧条件下发酵，生产ATP，ATP是一种高能磷酸化合物，在细胞中，它能与ADP的相互转化实现贮能和放能，从而保证了细胞各项生命活动的能量供应，对秀发形成滋补并修复受损头皮。
4、通过融冻法提高产氨棒杆菌细胞的通透性，可以使产氨棒杆菌产生的ATP更容易从细胞膜中渗透到细胞外，产物效果明显好于未经处理的产氨棒杆菌的产物。
具体实施方式
下面结合具体实例进一步说明本发明。
实施例1
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比35:5:8:10:0.5:3:0.5:0.5:37.5组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比3:2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇和聚谷氨酸按照质量比1:1:2:1:1的组合物；所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命A、维他命E和维生素E按照质量比1:3:2:1:1的组合物；所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
海藻提取液的制备工艺，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例2
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比35:5:8:10:0.5:3:0.5:0.5:37.5组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比3:2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇和聚谷氨酸按照质量比1:1:2:1:1的组合物；所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命A、维他命E和维生素E按照质量比1:3:2:1:1的组合物；所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
海藻提取液的制备工艺，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为35℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例3
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比60:6:5:5:1:5:0.5:0.5:17组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比3:2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇和聚谷氨酸按照质量比1:1:2:1:1的组合物；所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命A、维他命E和维生素E按照质量比1:3:2:1:1的组合物；所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
海藻提取液的制备工艺，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为45℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例4
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比40:20:15:8:1:10:0.5:0.5:5组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比3:2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇和聚谷氨酸按照质量比1:1:2:1:1的组合物；所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命A、维他命E和维生素E按照质量比1:3:2:1:1的组合物；所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
海藻提取液的制备工艺，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质1次，匀质温度均为40℃，匀质时间为30min，匀质压力为25MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例5
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂和增稠剂按照质量比80:19.5:0.5组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油；所述滋补剂是蜂蜜和超氧化物歧化酶按照质量比1:1的组合物；所述增稠剂是氯化钠；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
海藻提取液的制备工艺，按照以下步骤进行：
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带破碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质3次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，第三次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
实施例六
植物护发素由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比35:5:8:10:0.5:3:0.5:0.5:37.5组成。所述表面活性剂是聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯和十六烷基三甲基季铵溴化铵按照质量比3:2:1的组合物；所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇和聚谷氨酸按照质量比1:1:2:1:1的组合物；所述滋补剂是蜂蜜、超氧化物歧化酶、维他命A、维他命E和维生素E按照质量比1:3:2:1:1的组合物；所述增稠剂是海藻酸钠和氯化钠按照质量比1:2的组合物；所述珠光剂是乙二醇双硬脂酸和硬脂酸乙二醇双酯按照质量比1:2的组合物；所述杀菌剂是甲基异噻唑啉酮和山梨酸钾按照质量比1:1的组合物。
1)、制备海藻破碎物：将洗净后的新鲜海带晾干，采用粉碎机将干海带粉碎，得到海藻破碎物；
2)、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在100℃条件下灭菌15min，冷却至30℃接入酶，酶解40min，海藻破碎物、水和酶的质量比20:79.94:0.06,得酶解海藻，所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物；
3)、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻压滤分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4)、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为60％，在120℃条件下灭菌20min，冷却至30℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，发酵罐中氧气浓度为12％，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min，冷却至35℃,得海藻发酵物；
5)、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3)得到的海藻滤液加入到步骤4)得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天，压滤，所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
其中融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a)菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10％的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b)融冻法提高细胞的通透性：融冻法重复三次，其步骤为：将步骤1)得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解，再次放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g；
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，匀质2次，匀质温度均为40℃，匀质时间均为15min，其中第一次匀质压力为25MPa，第二次匀质压力为4MPa，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为28000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:5，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.003mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为8000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶。
下面结合实验数据进一步说明本发明的有益效果：
一检测：
1、实验供试材料
1材料与方法：
1.1试验地点和实验对象：烟台某大学化学分析检测中心。
1.2实验检测：测溶菌酶的活性和回收率。
1.3供试材料：针对普通处理(溶菌酶的制备方法除搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5中制备的溶菌酶做效果比较。
1.4试验设计：采用高效液相色谱法对样品处理。
本实验除实验用处理不同外其他操作均一致。
2结果与分析
普通处理(搅拌均匀后，未经过匀质机匀质，其它制作方法与实施例1一致)、实施例1、实施例2、实施例3、实施例4和实施例5制备的溶菌酶处理相比，数据见表1
表1
回收率(％) 酶活性(U/mg)
普通处理 72.7 14567
实施例1 91.7 21101
实施例2 84.7 19831
实施例3 88.3 20790
实施例4 91.7 20903
实施例5 89.3 20737
由表1实施例1和普通处理制备的溶菌酶相比，本发明无论是在溶菌酶回收率，还是酶活性方面都明显好于普通处理；由实施例1至实施例3制备的溶菌酶比较可以看出匀质温度对溶菌酶的回收率和活性还是有一定影响，其中实施例1采用40℃总体效果最好；由实施例1、实施例4和实施例5制备的溶菌酶比较可以看出匀质压力和次数对溶菌酶的回收率和活性也有一定影响，并非压力越大，时间越长就越好，综合比较实施例1制备的效果最佳。
二应用试验
1、一般资料
发明人于2015年6月～2017年8月间，选择600名志愿者使用本发明产品，其中男性、女性各300名，年龄范围为35～55岁。普遍症状是头发无光泽不顺滑，发质损坏严重。将这600名实验者随即分为6组，每组100人，分别实验普通洗发水(除未加入海藻提取液外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌)、对比2(除未经酶处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、对比3(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例1和实施例6。
2、试验方法
洗发时使用实验提供的普通护发水(除未加入海藻提取液外，其它制作方法与实施例1一致)、对比1(除制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外，其它制作方法与实施例1一致)、对比2(除未经酶处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、对比3(除溶菌酶制作过程中搅拌均匀后未经匀质处理外，其它制作方法均与实施例1一致)、实施例1和
实施例6，使用6个月。
3、评判标准和评判结果
3.1评判标准
3.2评判结果统计如表1。
表1 3组护发水疗效对比
组别 Ⅰ(例) Ⅱ(例) Ⅲ(例) Ⅳ(例) 不良反应
普通洗发水 4 14 24 58 无
实施例1 35 28 26 11 无
实施例6 27 29 29 15 无
对比1 24 27 26 23 无
对比2 15 17 22 46 有
对比3 25 28 28 19 无
由表1数据可以看出本发明在滋养秀发和护发方面明显好于普通洗发水；海藻提取液采用新鲜海带制备，对滋养秀发和护发效果明显好于采用其晾干物的效果；由实施例1和对比1数据可以看出，实施例1对滋养秀发和护发效果明显好于对比1(除制备海藻提取液时，使用未经融冻法处理的产氨棒杆菌外，其它制作方法与实施例1一致)；实施例1、对比2和对比3数据比较得出经酶处理的比不经酶处理的效果好，溶菌酶采用匀质机匀质后的效果好于普通搅拌的。

Claims (7)

1.一种植物护发素的制备方法，其特征在于：
它由海藻提取液、表面活性剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、香精、杀菌剂和水按照质量比5～89:2～89:0～30:0～50:0.5～15:0～30:0～5:0～5:0～70组成；
所述表面活性剂包括聚甘油脂肪酸酯、月桂酸单甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨醇酐单棕榈酸酯、硬脂酰乳酸钠、双乙酰酒石酸单甘油酯、椰油酰胺丙基甜菜碱、壬基酚聚氧乙烯醚、油酸聚氧乙烯酯、硬脂酸聚氧乙烯酯、失水山梨醇脂肪酸酯、二聚甘油、十六烷基三甲基季铵溴化铵、十八烷基二甲基苄基季铵氯化铵、苄基三乙基氯化铵、二异辛基丁二酸酯磺酸钠和脂肪酸聚氧乙烯脂中的一种或者任意比例的两种以上；
所述保湿剂是是甘油、果糖、丙二醇、山梨醇、聚谷氨酸、烟酰胺、聚乙二醇和木糖醇中的一种或者任意比例的两种以上；
所述滋补剂包括蜂蜜、水杨酸钠、超氧化物歧化酶、维他命A、β葡聚糖、维他命E、赖氨酸钠和维生素E中的一种或者任意比例的两种以上；
所述增稠剂包括氯化钠、羧甲基纤维素钠、明胶、海藻酸钠和干酪素中的一种或者任意比例的两种以上；
所述珠光剂包括珍珠粉、硬脂酸乙二醇双酯、乙二醇双硬脂酸和云母粉中的一种或者任意比例的两种以上；
所述杀菌剂包括甲基异噻唑啉酮、甲基氯异噻唑啉酮、苯甲酸钠和山梨酸钾中的一种或者任意比例的两种以上；
所述海藻提取液，按照以下步骤进行：
1）、制备海藻破碎物：将洗净后的海藻破碎，得到海藻破碎物；
2）、制备酶解海藻：将海藻破碎物和水装入搅拌罐中，在60～120℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～45℃接入酶，酶解30～60min，海藻破碎物、水和酶的质量比5～30:70～95:0.02～1,得酶解海藻；
3）、制备海藻滤液和海藻渣：将酶解海藻分离，所得滤液为海藻滤液，所得残渣为海藻渣；
4）、制备海藻发酵物：将海藻渣、尿素、硫酸镁、氯化钠、磷酸二氢钾和葡萄糖按照质量比95.5:1:0.5:1:1:1加入到发酵罐中混匀，用水调至含水量为50～70%，在70～150℃条件下灭菌5～40min，冷却至27～36℃，得混合培养基，接入胶红酵母，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.1～2:98～99.9,在温度为27～36℃，发酵罐中氧气浓度为8～21%，发酵6～144h，在温度为70～150℃条件下灭菌20～40min，冷却至20～40℃,得海藻发酵物；
5）、制备海藻提取液和海藻残渣：将步骤3）得到的海藻滤液加入到步骤4）得到的海藻发酵物中搅拌混匀，得混合物，接入融冻法制备的产氨棒杆菌，混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为95～99.8:0.2～5，在温度为25～35℃，含氧量为1～8mg/L条件下，发酵1～6天，压滤后所得滤液即为海藻提取液；滤渣即为海藻残渣；
所述海藻是浒苔、海带、马尾藻、裙带和昆布中的一种或任意比例两种以上。
2.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：融冻法产氨棒杆菌的制备按照以下步骤进行：
a）菌种的扩大再培养：将处于对数生长期的菌体作为种子，以10%的接种量接种于液体培养基中，于30℃摇床160r/min培养48h，8000r/min离心10min后，得到扩大再培养菌种；
b）融冻法提高细胞的通透性：融冻法至少重复一次，其步骤为：将步骤a）得到的扩大再培养菌种放入-20℃的冰箱中，冷冻4h，取出，在室温下溶解；
所述液体培养基的pH7.2～7.4，并按照以下质量比配成：牛肉浸液 1.0L，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂25.0g;
其中牛肉浸液的制备方法按照以下步骤进行：瘦牛肉洗净，切碎，称取550克浸泡于1375ml水中，浸泡一夜，过滤，滤液分装后0.6kg/cm2灭菌40min。
3.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：所述酶是溶菌酶和果胶酶按照质量比5:1的组合物，其中溶菌酶按照以下步骤进行：
(A)向鸡蛋清或全鸡蛋液加5倍重量的水，搅匀后加入匀质机中，至少匀质一次，匀质温度为30～60℃，匀质压力为2～40MPa，匀质时间为10～40min，匀质后过滤，所得滤液为稀释液；
(B)将步骤(A)得到的稀释液用截留分子量为15000～30000Da的超滤膜超滤，得到稀液和浓液；
(C)在步骤(B)得到的稀液中加入树脂进行吸附，所述稀液和树脂的重量比例为1:3～8，得到吸附后的树脂；
(D)将步骤(C)得到的吸附后的树脂用0.001～0.5mol/L的NaCl水溶液进行洗脱，得到洗
脱液；
(E)将步骤(D)得到的洗脱液用超滤膜超滤脱盐，得到超滤液，所述超滤膜的截留分子量为2000～10000Da；
(F)将步骤(E)得到的超滤液干燥后，即得到溶菌酶；
所述树脂是所述树脂为阳离子交换树脂或大孔吸附树脂；阳离子交换树脂的型号为001*7、732、AmberliteIR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1、AllassionCS、Duolite C-20、SDB-3中的一种或多种，大孔吸附树脂为AB-8、D101、D3520、X-5、NKA-II、NKA-9、S-8、XDA-1、H-20、H-30、H-40中的一种或多种。
4.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：步骤3）所述分离包括压滤、过滤和离心分离中的一种或两种以上。
5.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：步骤4）所述混合培养基至含水量为60%，胶红酵母和混合培养基的质量比为0.5:99.5,在温度为30℃，氧气浓度为12%，发酵120h，在温度为120℃条件下灭菌20min。
6.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：步骤5）混合物和融冻法制备的产氨棒杆菌的质量比为98:2，在温度为28℃，含氧量为3mg/L条件下，发酵5天。
7.如权利要求1所述的植物护发素的制备方法，其特征在于：所述胶红酵母和产氨棒杆菌均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号分别为CICC 31192和CICC 10168。
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