CN1077989A - 微生物方法制备丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物 - Google Patents
微生物方法制备丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1077989A CN1077989A CN93105288A CN93105288A CN1077989A CN 1077989 A CN1077989 A CN 1077989A CN 93105288 A CN93105288 A CN 93105288A CN 93105288 A CN93105288 A CN 93105288A CN 1077989 A CN1077989 A CN 1077989A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- malonyl
- aminocephalosporansa
- structural formula
- derivative
- soluble salt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D505/00—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
- C07D505/10—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2
- C07D505/12—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 substituted in position 7
- C07D505/14—Heterocyclic compounds containing 5-oxa-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. oxacephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring with a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. an ester or nitrile radical, directly attached in position 2 substituted in position 7 with hetero atoms directly attached in position 7
- C07D505/16—Nitrogen atoms
- C07D505/18—Nitrogen atoms further acylated by radicals derived from carboxylic acids or by nitrogen or sulfur analogues thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
- C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
叙述一种新的微生物,其筛选方法是用内酯或其
可溶性盐,结构式为(I)。
作为唯一的碳源、氮源和能源,通过丙二酰-内
酯或其可溶性盐,结构式为(II)而被利用,后者不会
被分解代谢。其次叙述一种微生物方法制备丙二酰
-7-氨基头孢烷酸衍生物或其可溶性盐,结构通式为
(III)。
此方法是由头孢菌素C衍生物或其可溶性盐,
结构通式为(IV)用微生物制得的。此外还叙述了由
丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物制备7-氨基头孢烷
酸衍生物的新方法,其结构通式为(V)。
Description
本发明涉及一种新的丙二酰-7-氨基头孢烷酸(cephalosporansaure)衍生物及其可溶性盐,其结构通式为:
(其中R是氢原子、羟基或乙酸基)。论述一种新的从相应的头孢菌素C衍生物出发的制备方法,以及一种适用于此方法的新的微生物。
其次,本发明还涉及一种新的微生物方法,从丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物制备7-氨基头孢烷酸衍生物,并叙述一种假单孢菌属(Pesudomonas SP,DSM 7509)微生物的新的应用方法。
下面将说明丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物(结构式Ⅲ),头孢菌素C-衍生物(结构式Ⅳ),根据结构式Ⅱ的丙二酰-内酯,以及结构式Ⅰ的内酯及其可溶性盐,例如铵盐或碱金属盐。
丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物可作为制备7-氨基头孢烷酸衍生物的初始原料,它也是制备头孢菌属抗生素的重要初始化合物(J.Bacteriol.,1987,169:12,5815-5820)。
至今不知道由丙二酰-7-头孢烷酸衍生物来的化学的和微生物制备方法。
许多微生物方法是以头孢菌素C为原料制备7-氨基头孢烷酸,例如在JP-A 62 48380中所描述的。但是这种方法有许多缺点,以至大型工业生产技术变得不可行。
本发明的任务是提供一种利用新的微生物来制备新的丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物的方法,这是一种简单而又经济的微生物方法。接着在任务是用这种新的衍生物采用新的微生物方法制备7-氨基头孢烷酸衍生物。
按照本发明,这一任务可以通过按照权利要求1的新的微生物,通过按照权利要求3的新的方法,通过按照权利要求8的新的丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物,以及通过按照权利要求10的新方法来解决。
按照本发明,筛选一种微生物,它能把内酯,其结构式为
作为唯一的碳源、氮源和能源,通过丙二酰内酯其结构式为
而被利用,后者不会被分解代谢。这些微生物可以用按照结构式Ⅰ的内酯藉助传统的微生物技术,例如从各种各样的土样中进行筛选,也就是说从土样中接种进行微生物培养,可以得到微生物用按照结构式Ⅰ的内酯作为唯一的碳源、氮源和能源生长。然后按照专业的普通方法筛选这些微生物,筛选出能把按照结构式Ⅰ的内酯转化为结构式Ⅱ的丙二酰内酯,而不分解代谢的微生物。
筛选所需的内酯(结构式Ⅰ)可以从市场上购得的去乙酰头孢菌素C取得,为此,首先用已知的方法(Jefferay et al.,Biochem.J.,1961,81,591)把去乙酰头孢菌素C进行内酯化成相应的内酯,为生成希望得到的、具有内酰胺开环(结构式Ⅰ)的内酯,可以用专业的方法,例如借助青霉素酶将内酰胺环打开。
原则上在此筛选压力下取得的所有微生物都适用。这类微生物在文献中未曾描述,是本发明的组成部分。
据此目的,通过筛选可获得标记为FBI(DSM7007)的微生物及其突变体和子系体。这些均在1992年3月25日存入德国微生物和细胞培养公司(Mascheroderweg 1b,D-3300 Braunschweig)。
在提出关于16s RNA分析报告的优先日后这些微生物鉴定归入Sphingomonas SP。
Sphingomonas Sp:FB1(DSM7007)的描述
细胞形态 微小杆菌
宽度,μm 0.4~0.6
长度,μm 0.8~1.5
活动性 +
鞭毛 极生1
革兰氏反应 -
3%KOH溶菌作用 +
氨肽酶(Cerny) +
孢子 -
氧化酶 +
过氧化氢酶 +
主要苯醌组分: 辅酶Q10
HPLC-快速法的DNA-碱基组成:63mol%G+C
一般是在无机盐介质中进行微生物的筛选和培养,这种无机盐介质的组成列于表1(a和b)。成功的筛选出微生物后,最理想的是在另一种介质中进行培养,例如商业上通用的完全培养基。
据此目的,培养和筛选时,将0.2~1重量%,最好是0.3~0.6重量%的结构Ⅰ内酯加入列机盐培养基中。
筛选和培养温度为0~60℃,最好是20~40℃。pH值5~9,最好是6~8。
在650nm(OD650)时光密度达到0.1~1,可以按照专业通用的方法采集微生物,并使用本发明的方法。
按本发明,用这一方法筛选出的微生物使用本发明的方法将头孢菌素C衍生物,其结构通式为
其中R是氢原子、羟基或乙酸基(作为底物),转化为丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物,其结构通式为
其中R如前述。
适宜的是,这一方法用筛选出的如前所述保存的微生物Sphingomonas SP.FB1(DSM7007)或其子系体和突变体来实施。
一般,这一方法以专业通用的方法用未生长的细胞进行。
将头孢菌素C衍生物(结构通式Ⅳ)作为底物,其中R为前述。用头孢菌素C(R在结构式Ⅲ中=乙酸基)作底物也是适宜的。
按照本方法,可将底物一次性或持续性地加入。理想的做法是,添加底物使其在培养基中的浓度不超过20重量%,最好是4重量%。
本方法可使用专业通用的介质,最好是在低分子的HEPES(4-(2-羟乙基)-哌嗪-1-乙烷-磺酸)缓冲液中进行。
一般,此方法可以用微生物悬浮液进行,此悬浮液OD650为1~100,最好是2~50。
本方法适宜在温度为0~60℃之间,最好是20-40℃,pH值为5-9,最好是6-8时进行。
通常经1~24小时转化后,可以用专业通用的方法分离出至今尚未叙述过的丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物,作为分离的丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物的最好代表物是丙二酰-7-氨基头孢烷酸(R在结构式Ⅲ中=乙酸基)。
本发明方法制备7-氨基头孢烷酸衍生物的结构通式为
其中R如前述,按下述方式进行:将丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物或其可溶性盐(结构通式Ⅲ)作为底物,借助假单孢菌属(DSM7509)微生物,或其子系体和突变体,或者用此微生物无细胞的酶转化为产物(结构式Ⅴ)。
这种假单孢菌属微生物Pseudomonas SP(DSM 7509)于1993年3月5日存入德国微生物与细胞培养公司(Mascheroderweg 1b,D-3300 Bravnschweig)。
这类微生物为已知的,在JP-A 62 483 80中叙述为假单孢菌微生物Pseudomonas SP.SE-495(FERM BP-818),按照JPA 62 48380所述,这类微生物的筛选方法是,将戊二酰-7-氨基头孢烷酸水解为7-氨基头孢酸。但未述及利用此微生物水解丙二酰-7-氨基头孢烷酸。
然后本发明再论述利用这类微生物水解丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物(结构式Ⅴ),特别是丙二酰-7-氨基头孢烷酸(R=乙酸基)。
本发明也适宜用具有通透性的微生物细胞,或用无细胞的酶提取物来进行,最好是用无细胞的酶提取物。
可以用专业通用的方法制备无细胞酶提取物,例如用超声技术或应用“French-Press”方法。
可以用丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物作为底物(结构通式Ⅴ,其中R如前述)。用丙二酰-7-氨基头孢烷酸(R=乙酸基)作底物更适宜。
可以将底物一次性或持续性地加入,适当的方式是底物在培养基中的浓度不超过10重量%,最好为2重量%。
在本方法中可使用专业通用的营养培养基。
要是本方法使用无细胞的酶提取物,则此提取物的蛋白质浓度应为0.1-20克/升,最好是1~5克/升。
本方法适合在温度4~50℃,最好为20-35℃,pH值为4-9,最好是7-8的条件下进行。
一般经过3-24小时的转化反应,就可分离出7-氨基头孢酸衍生物(结构式Ⅴ)。
实施例1
微生物分离
把从Visp(瑞士)郊区土壤中取得的各种土样作为接种物加入100毫升无机盐介质中(表1),pH7.0,含5毫克分子浓度(0.5mmol/100毫升)具有酰胺开环(结构式Ⅰ)的内酯,于25℃在摇床上培养,摇床为140UPm(每分钟转数)。把这些培养物在新鲜的无机盐培养基中移种4次,然后借助分析型HPLC对内酯转化反应进行测试。
然后将此培养物在含5毫克分子浓度内酯(结构Ⅰ)的无机盐培养基-琼脂-平板上于25℃时进行培养。接着分离Sphingomonas SP.FB1(DSM7007)菌株,它在内酯中生长时生成丙二酰-丙酯(结构式Ⅱ),后者不会完全分解。
实施例2:
丙二酰-7-氨基头孢烷酸(结构式Ⅲ)的生成
把微生物Sphingomonas SP.FB1(DSM7007)在含5毫克分子浓度内酯(结构式Ⅰ)无机盐培养基中培养,pH为7.0(表1b),4天内达到OD650=0.44。(在头2天后再加入此内酯,使总浓度达到1毫克分子/100毫升培养基)。接着离心分离细胞,并将细胞沉淀物在20毫升10毫克分子浓度HEPES缓冲液中(pH为7.0)再悬浮,此时将OD650调节到2.2。在细胞悬浮液中加入0.4毫克分子头孢菌素C(结构式Ⅳ),在摇床上(140转/分钟)于25℃时进行培养。
在30分钟、60分钟、2.25小时、5小时和24小时后,用HPLC分析法测试样品。
丙二酰-7-氨基头孢烷酸的生成率在2.25小时时为410毫克/升/小时/OD650。
5小时后分析可检出142mg丙二酰-7-氨基头孢烷酸,相当于转化99%头孢菌素C。丙二酰-7-氨基头孢烷酸可用制备型HPLC分离,得率为40%。
实施例3
丙二酰-7-氨基头孢烷酸(结构式Ⅲ)的鉴定
鉴定结构式Ⅲ的产物采用500ml无机盐培养基(表Ⅰ),pH7.0,加入结构式Ⅰ的内酯溶液,使最终浓度达到5毫克分子。然后将此预培养溶液,OD650=0.5,在25℃和140转/分条件下进行接种,一天后每500毫升培养基再加入5mmol内酰(结构式Ⅰ)。当OD650达到0.5时收集细胞,然后将细胞沉淀物放入30ml10毫克分子浓度的HEPES缓冲液中再悬浮,pH为7.0,含0.6mmol头孢菌素C(结构式Ⅳ)。在25℃,140转/分培养5小时后将细胞离心分离,并用制备型HPLC将丙二酰-7-氨基头孢烷酸从上清液中净化。将净化的样品经冷冻干燥过夜,用NMR(1H和13C)分析冻干物。
对照化学方法制备的参比物(从7-氨基头孢烷酸制得,按照Bull.Soc.Chem.Belg.,1977,86,991~1002),证实生成丙二酰-7-氨基头孢烷酸。
丙二酰-7-氨基头孢烷酸钠盐(化学标准)
13C-NMR(DMSO,100.5MHz,δ以ppm计):
20,s;25,s;40,m;58,d;64,s;112,s;134,s;164,d;170,t。
丙二酰-7-氨基头孢烷酸(按照本发明的方法):
13C-NMR(DMSO,100.5MHzδ以ppm计):
20,s;25,s;40,m;58,d;64,s;112,s;134,s;164,d;170,t。
1H-NMR(化学标准,DMSO,400MHz,δppm计);
20,s;2.5,s;3.0,t;3.5,m;4.8,d;5.0,d;5.6,d。
1H-NMR(按本发明的方法):
2.0,s;2.5,s;3.0,t;3.5,m;4.8,d;5.0,d;5.6,d。
实施例4
去乙酰头孢菌素的内酯化
用下述方法从去乙酰头孢菌素C(Ciba-Geigy公司,Basel)制备去乙酰头孢菌素C-内酯:
将100g去乙酰头孢菌素C溶于1升20毫克分子浓度磷酸钠pH7.0缓冲液中,再将离子交换剂DOWEX50×8(H+型)(Fluka)加入此溶液中,使pH达到2.5。搅拌10分钟后(250转/分,室温下),滤出离子交换树脂,用浓盐酸将溶液的pH值调节到0.8;搅拌1小时后(室温,250转/分)在反应液中加DOWEX1×8(乙酸盐型)(Fluka)使pH达到3.0~3.2。
然后在室温,250转/分继续搅拌1.5小时,接着滤出离子交换树脂,重又加入DOWEX1×8(乙酸盐型)至pH达到3.3~3.5,搅拌1小时(室温,250转/分),接着再滤出离子交换树脂,然后将反应液在旋转蒸发器内蒸发(30毫巴,30℃)干燥。为去除尚存的乙酸,将蒸发后产物溶于水成35%溶液,然后用浓盐酸将pH调到1.5。将得到的溶液用等体积乙酸乙酯提取2次,液相净化并用3克分子浓度KOH溶液将pH调到3.5,再在旋转蒸发器内蒸发(30毫巴,30℃)。然后再将此产品置干燥器内于真空下(30毫巴,20℃)完全干燥。
总得率为60克,相当于100g去乙酰头孢菌素C中得率60%。
实施例5:
制备内酰胺开环的内酯(结构式Ⅰ)
为制备内酯,将去乙酰头孢菌素C-内酯置于含有β-内酰胺酶(青霉素酶〔E.C.3.5.2.6〕(Sigma))的储备溶液6(表1a)中进行处理。加入青霉素酶后反应立即开始,在反应过程中加入1当量NaoH溶液使pH保持在7.0,一俟不再加NaoH而pH值稳定在7.0时反应即结束。在反应结束后(约2小时)将此溶液灭菌过滤(0.2Mm滤器),保藏在-80℃。
实施例6
7-氨基头孢烷酸(结构式Ⅴ)的生成
将假单孢菌属微生物Pseudomonas Sp SE-495(DSM 7509;FERM BP-818)置于营养培养基中于30℃培养过夜,该营养培养基pH为7.0,含0.2%W/V肉汁,0.2%W/V酵母提取物,0.5%W/V胨,0.5%W/V谷氨酸钠和0.005%W/V硫酸镁。再将此培养物置于相同组成的新鲜培养基中进行移种(接种量为10%),再培养2-4天。
接着,通过离心分离(20分钟,600转/分)收集细胞,置于0.1克分子浓度磷酸钾缓冲液中悬浮,并再离心分离(总共各3次,为培养物的10%容量),然后在尽可能少容量的磷酸钾缓冲液中将细胞沉淀物再悬浮,在冰冷下用超声波处理(10次;每次30秒间隔20秒),然后离心分离(20分钟,至少10000转/分)将粗提取物从细胞碎片中分离出来。
为生成7-氨基头孢酸将此粗提取物(蛋白质浓度为2毫克/毫升)加热至室温,然后添加在磷酸钾缓冲液中的丙二酰-7-氨基头孢烷酸,使其浓度为5毫克分子/升。全部于25℃静置培养,并在24小时内分析生成的7-氨基头孢烷酸。
分析用薄层色谱法,(平板:硅胶60F245,溶剂:丁醇-甲醇-冰醋酸-水,比例50∶30∶3∶17)。从丙二酰-7-氨基头孢烷酸(Rf-值:0.43)生成7-氨基头孢烷酸(Rf-值:0.51)可用UV-波长254nm检测,或者喷洒Fluram试剂(3mg Fluram;Fluka CH-9470 Buchs在10毫升丙酮中)后在UV-波长366nm检测。
用此粗提取物(含丙二酰-7-氨基头孢烷酸-酰基转移酶)在约14小时后可检测出50~100μmol7-氨基头孢烷酸。
表1
a)无机盐培养基储备液
储备液1:
NaH2PO4·2H2O 156.0g
NH4Cl 10.0g
K2SO41.2g
蒸镏水 500.00ml
储备液2:
对氨基苯甲酸 8.0mg
D-生物素 2.0mg
烟酸 20.0mg
D-泛酸钙 10.0mg
吡哆醛盐酸盐 30.0mg
二氯化硫胺 20.0mg
氰钴胺素 10.0mg
蒸镏水 100.0ml灭菌
储备液3:
HCl(37%) 7.0ml
FeCl2·4H2O 1.5g
ZnCl20.07g
MnCl2·4H2O 0.1g
H3BO30.006g
CoCl2·6H2O 0.19g
CuCl2·6H2O 0.002g
NiCl2·6H2O 0.024g
Na2MoO4·2H2O 0.036g
蒸镏水 1000.00ml,
高压灭菌
121℃,20分钟
储备液4
NaoH 0.5g
Na2SeO3;·5H2O 0.003g
Na2WO4·2H2O 0.004g
蒸镏水 1000.0ml,
高压灭菌
121℃,20分钟
储备液5:
MgCl2·6H2O 40.0g
CaCl2·2H2O 5.0g
蒸馏水 200.0ml,
高压灭菌,
121℃,20分钟
储备液6:
去乙酰头孢菌素C-内酯 3.55g
蒸镏水 60.0ml
青霉素酶(EC3.5.2.6) 1.0mg(25000单位)
(Sigma pO389)
用NaOH调pH至 7.0
加蒸镏水至 100ml
b)制备无机盐培养基
储备液1: 25.0ml
用KOH调pH至 7.0然后蒸镏
水加至950.0ml,
高压灭菌,
121℃,20分钟
消毒灭菌后加入下列物质:
储备液2 0.5ml
储备液3 1.0ml
储备液4 1.0ml
储备液5 0.5ml
从实施例5得到的溶液 50.0ml
Claims (15)
2、按照权利要求1的微生物,标号为Sphingomonas SP.FB1(DSM7007)及其子系体和突变体。
4、如权利要求3所述的方法,其特征在于,转化反应可以用微生物Sphingomonas SP.FB1(DSM7007)或其子系体和突变体来进行。
5、至少按照权利要求3和4之一的方法,其特征在于,用头孢菌素C作底物。
6、至少用权利要求3-5之一的方法,其特征在于,转化反应在一次性或连续性加入底物的情况下进行,培养基中的底物浓度不超过20重量%。
7、至少按照权利要求3-6之一的方法,其特征在于,转化反应在温度0-60℃,pH5-9条件下进行。
9、丙二酰-7-氨基头孢烷酸。
11、按照权利要求10的方法,其特征在于,可以用丙二酰-7-氨基头孢烷酸作底物。
12、至少按照权利要求10和11之一的方法,其特征在于,转化反应可以在一次性或连续性加入底物的情况下进行,培养基中底物浓度不得超过10重量%。
13、至少按照权利要求10-12之一的方法,其特征在于,转化反应在温度为4-50℃,pH为4-9条件下进行。
14、利用假单孢菌属Pseudomonas SP.(DSM7509)微生物,将丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物及其可溶性盐(结构式Ⅲ)水解生成7-氨基头孢烷酸衍生物(结构通式Ⅴ)。
15、用按照权利要求14的方法,其特征在于,将丙二酰-7-氨基头孢烷酸水解反应生成7-氨基头孢酸。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CH1381/92 | 1992-04-29 | ||
CH138192 | 1992-04-29 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1077989A true CN1077989A (zh) | 1993-11-03 |
Family
ID=4209103
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN93105288A Pending CN1077989A (zh) | 1992-04-29 | 1993-04-29 | 微生物方法制备丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5338667A (zh) |
EP (1) | EP0568004A2 (zh) |
JP (1) | JPH0646835A (zh) |
KR (1) | KR930021796A (zh) |
CN (1) | CN1077989A (zh) |
CA (1) | CA2095166A1 (zh) |
CZ (2) | CZ279523B6 (zh) |
LT (1) | LT3122B (zh) |
LV (1) | LV10315B (zh) |
MX (1) | MX9302238A (zh) |
TW (1) | TW241265B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1065278C (zh) * | 1994-08-27 | 2001-05-02 | 中国科学院上海植物生理研究所 | 一步两酶法制造7-氨基头孢烷酸 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004515355A (ja) | 2000-12-11 | 2004-05-27 | ユナイテッド・ステイツ・フィルター・コーポレイション | 臭気抑制用活性炭およびその製法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5170884A (en) * | 1974-12-12 | 1976-06-18 | Toyo Jozo Kk | 77 amino sefuemukagobutsuno seizohoho |
CA1041447A (en) * | 1974-01-23 | 1978-10-31 | Tadashiro Fujii | Production of 7-amino-cephem compounds by comamonas and pseudomonas |
FR2434169A2 (fr) * | 1978-06-22 | 1980-03-21 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Nouveaux derives reactifs de l'acide penicillanique et de l'acide cephalosporanique et procede pour leur preparation |
JPS6248380A (ja) * | 1985-08-28 | 1987-03-03 | Asahi Chem Ind Co Ltd | セフアロスポリンcアシラ−ゼの製造法 |
JPH06248380A (ja) | 1993-02-23 | 1994-09-06 | Mitsubishi Heavy Ind Ltd | 積層型熱交換器及びその製造方法 |
-
1993
- 1993-04-14 JP JP5087652A patent/JPH0646835A/ja not_active Withdrawn
- 1993-04-16 MX MX9302238A patent/MX9302238A/es unknown
- 1993-04-26 LV LVP-93-267A patent/LV10315B/lv unknown
- 1993-04-27 US US08/052,623 patent/US5338667A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-27 EP EP93106804A patent/EP0568004A2/de not_active Withdrawn
- 1993-04-28 KR KR1019930007199A patent/KR930021796A/ko not_active Application Discontinuation
- 1993-04-28 CZ CZ93763A patent/CZ279523B6/cs unknown
- 1993-04-28 CZ CZ942264A patent/CZ280145B6/cs unknown
- 1993-04-29 TW TW082103349A patent/TW241265B/zh active
- 1993-04-29 LT LTIP499A patent/LT3122B/lt not_active IP Right Cessation
- 1993-04-29 CN CN93105288A patent/CN1077989A/zh active Pending
- 1993-04-29 CA CA002095166A patent/CA2095166A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1065278C (zh) * | 1994-08-27 | 2001-05-02 | 中国科学院上海植物生理研究所 | 一步两酶法制造7-氨基头孢烷酸 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX9302238A (es) | 1993-10-01 |
LT3122B (en) | 1994-12-27 |
EP0568004A2 (de) | 1993-11-03 |
CZ76393A3 (en) | 1993-12-15 |
KR930021796A (ko) | 1993-11-23 |
CZ279523B6 (cs) | 1995-05-17 |
LTIP499A (en) | 1994-07-15 |
CZ280145B6 (cs) | 1995-11-15 |
CA2095166A1 (en) | 1993-10-30 |
CZ226494A3 (en) | 1995-02-15 |
LV10315B (en) | 1995-06-20 |
TW241265B (zh) | 1995-02-21 |
EP0568004A3 (zh) | 1994-03-23 |
LV10315A (lv) | 1994-10-20 |
US5338667A (en) | 1994-08-16 |
JPH0646835A (ja) | 1994-02-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1040054A (zh) | 具有生物活性的新化合物及其制备方法 | |
CN101035903A (zh) | 用于从肟基酸生产氨基酸衍生物的方法 | |
CN1010104B (zh) | 利用微生物制备酰胺的方法 | |
US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
CN101033454A (zh) | 赤红球菌zjb-064及其应用 | |
JPS60114191A (ja) | 水溶液中のs‐トリアジン誘導体の分解方法 | |
CN1134980A (zh) | 邻单胞属新菌株及由其产生的酶和该酶的制法与应用 | |
CN1497048A (zh) | 用于制备3-杂芳基-3-羟基丙酸衍生物的方法 | |
CN1077989A (zh) | 微生物方法制备丙二酰-7-氨基头孢烷酸衍生物 | |
JP2003210164A (ja) | カプサイシン分解合成酵素及びその生産方法 | |
CA2116003C (en) | Arylalkanoic acid resolution | |
CN1106018A (zh) | 生产维生素b12的方法 | |
EP0309310B1 (fr) | Nouveau système enzymatique, son procédé de préparation et son application notamment dans la préparation de la D-parahydroxyphénylglycine | |
CN100350052C (zh) | 制备鸟苷类化合物及其中间体的方法 | |
JPWO2006030909A1 (ja) | 2−ヒドロキシ−4置換ピリジンの製造方法 | |
CN1077748A (zh) | 用微生物方法对含氮杂环羧酸进行羟基化 | |
CN1084217A (zh) | 生物素的生产方法 | |
CA2245543A1 (en) | Process for producing n-protected d-proline derivatives 8 | |
JP2698627B2 (ja) | 光学活性アミン及びその誘導体の製造方法 | |
CN1131317C (zh) | 溶血鞘脂的生产方法 | |
JP3413294B2 (ja) | 2,5−ジヒドロキシピリジンの製造法および2,5−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
JPS60995B2 (ja) | 7−アミノ−セフアロスポラン酸およびその誘導体の新規製造法 | |
JP6201120B2 (ja) | 光学活性3,3,3−トリフルオロ−2−ヒドロキシ−2−メチルプロピオン酸の製造方法 | |
JP2813342B2 (ja) | 光学活性3−ヒドロキシピロリジン誘導体の製造法 | |
CN101517087B (zh) | 制备2-羟基-4-(烷硫基或芳硫基)-1-丁酸的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C01 | Deemed withdrawal of patent application (patent law 1993) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |