CN107778355B - 一种合成西曲瑞克的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医药合成领域，公开了一种合成西曲瑞克的方法。本发明采用全新的氨基树脂作为载体，以及采用保护的D‑Orn为D‑Cit的前体，而后脱除侧链保护基与叔丁基异氰酸酯反应生成D‑Cit(tBu)，通过特有的含有溴化氢的三氟醋酸溶液来酸解西曲瑞克肽树脂，同时可最大化地去除生成的D‑Cit(tBu)的侧链保护基tBu，最终所获得西曲瑞克具有较高的纯度和总收率，避免了毒性杂质[D‑Cit(Ac)]‑西曲瑞克的产生，整个方法简便易操作，条件温和，产品品质较高。

Description

一种合成西曲瑞克的方法
技术领域
本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成西曲瑞克的方法。
背景技术
西曲瑞克是一种***释放激素(GnRH)拮抗剂。GnRH与垂体细胞膜上的受体结合，刺激***(LH)及促卵泡成熟激素(FSH)释放。西曲瑞克与内源性GnRH竞争垂体细胞上的受体，从而抑制内源性LH及FSH的释放。西曲瑞克的抑制作用在注射后即时产生，没有刺激作用。在女性，西曲瑞克的作用是推迟LH峰的出现，从而控制***。西曲瑞克的作用是剂量依赖性的，西曲瑞克3mg可维持4天的药效，第4天的抑制作用约为70％。每24小时注射一次西曲瑞克0.25mg可以使抑制作用持续。动物试验及人体试验均显示，停止注射西曲瑞克后，内源性的LH及FSH的分泌可迅速恢复。临床适应症为对进行控制性卵巢刺激的患者，防止提前***，进而进行采卵和辅助生殖技术治疗。
国内外关于西曲瑞克制备报道的报道很多，但是这些合成工艺的总收率最高只有40％左右，如专利CN104277093A、CN104086632A、CN104610433A、CN104892732A、CN101284863A、CN101863960A等。在这些现有工艺中，专利CN104086632A总收率最高，达到了45％，其主要采用D-Orn(Dde)为D-Cit的前体，而后脱除保护基Dde与异氰酸叔丁酯反应生成D-Cit(tBu)，用传统的三氟醋酸裂解液裂解获得西曲瑞克。但是，一方面其采用有毒的水合肼来去除D-Orn(Dde)侧链保护基Dde；另一方面采用传统的三氟醋酸裂解液无法完全去除全保护的西曲瑞克肽树脂，致使总收率无法提高；第三方面是依然无法完全避免毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的出现。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成西曲瑞克的方法，使得本发明所述方法具有较高的纯度和总收率，避免毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
步骤1、按照西曲瑞克主链氨基酸序列，在缩合试剂和活化试剂的作用下，保护氨基酸与氨基树脂合成得到肽树脂1，其中西曲瑞克主链氨基酸序列中D-Cit在肽树脂1对应位置由保护的D-Orn替代；
步骤2、将肽树脂1的N端乙酰化后，用去保护剂去除保护的D-Orn侧链保护基，D-Orn侧链氨基在有机碱的催化下与叔丁基异氰酸酯反应生成D-Cit(tBu)，获得西曲瑞克肽树脂；
步骤3、西曲瑞克肽树脂经含溴化氢的三氟醋酸溶液酸解后得西曲瑞克粗品；
步骤4、西曲瑞克粗品经纯化和冻干得到西曲瑞克纯品；
Figure BDA0001092035860000021
其中，式1左侧圆球表示聚苯乙烯树脂。在传统合成过程中，一般都是采用常规的Rink Amide系列树脂，本发明在原有的MBHA树脂上进行改进，提供出一种全新的载体树脂MOBHA树脂，即式1所示树脂，所述式1氨基树脂可购自西安蓝晓科技新材料股份有限公司。本发明经过合成本品发现，该树脂不仅在成本上低于Rink Amide系列树脂，而且合成后的产品总收率可达到60％以上。MBHA树脂的结构式如下，左侧的圆球表示聚苯乙烯树脂：
Figure BDA0001092035860000022
西曲瑞克主链氨基酸有10个，组成如下：
Ac-D-Nal1-D-Cpa2-D-Pal3-Ser4-Tyr5-D-Cit6-Leu7-Arg8-Pro9-D-Ala10-NH2
其中，西曲瑞克C端的氨基为采用酸解剂从氨基树脂上裂解下来的氨基，其并不属于氨基酸上的氨基。
本发明通过特有的含有溴化氢的三氟醋酸溶液来酸解西曲瑞克肽树脂，同时可最大化地去除生成的D-Cit(tBu)的侧链保护基tBu，最终所获得西曲瑞克具有较高的纯度和总收率，并且无毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生。
作为优选，步骤1为：
按照西曲瑞克主链氨基酸C端到N端的顺序，在缩合试剂和活化试剂的作用下，将如下保护氨基酸与氨基树脂按照逐一偶联方式固相合成肽树脂1：
保护的D-Ala、保护的Pro、保护的Arg、保护的Leu、保护的D-Orn、保护的Ser、保护的Tyr、保护的D-Pal、保护的D-Cpa、保护的D-Nal；
其中西曲瑞克主链氨基酸序列中D-Cit在肽树脂1对应位置由保护的D-Orn替代。
本发明所述保护基是在氨基酸合成领域需要保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基等在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，如本发明通过Pbf保护基保护Arg的侧链，通过tBu或Bzl保护基保护Tyr、Ser的侧链；通过Boc或Fmoc保护基保护D-Orn的侧链。此外，在本发明所述方法涉及的保护的氨基酸中，N端优选通过Fmoc或Boc保护基进行保护。被保护基保护的氨基酸统称为保护的氨基酸(如保护的D-Ala等)。作为优选，所述保护氨基酸如下：
Fmoc-D-Ala、Fmoc-Pro、Fmoc-Arg(Pbf)、Fmoc-Leu、保护的D-Orn、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-Tyr(tBu)、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa、Fmoc-D-Nal；或
Boc-D-Ala、Boc-Pro、Boc-Arg、Boc-Leu、保护的D-Orn、Boc-Ser(Bzl)、Boc-Tyr(Bzl)、Boc-D-Pal、Boc-D-Cpa、Boc-D-Nal。
作为优选，本发明中所述保护的D-Orn为Fmoc-D-Orn(Boc)或Boc-D-Orn(Fmoc)，相对于现有技术中使用的D-Orn(Dde)，本发明所用保护氨基酸成本更低，而且在脱除其侧链保护基时可使用常规脱除Boc和Fmoc保护基的方法，避免使用有毒试剂。
作为优选，上述各保护氨基酸在各自偶联到氨基树脂或已合成的肽树脂上时，分别与氨基树脂中氨基的摩尔比为1-6:1，更优选为2.5-3.5:1，即所述保护氨基酸的投料量与氨基树脂氨基的摩尔比例关系。
作为优选，所述氨基树脂的取代值为0.2-1.8mmol/g氨基树脂，更优选为0.5-1.0mmol/g氨基树脂。
作为优选，所述缩合试剂优选为N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)，六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱(PyBOP/有机碱)、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱(HATU/有机碱)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱(HBTU/有机碱)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱(TBTU/有机碱)中的一种。所述缩合试剂的摩尔用量优选为氨基树脂或已合成的肽树脂中氨基树脂的氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为2.5～3.5倍。
需要说明的是，所述PyBOP/有机碱、HATU/有机碱、HBTU/有机碱、TBTU/有机碱，在本发明中属于四种双体系的缩合试剂，即PyBOP、HATU、HBTU在使用时需要分别和有机碱组合在一起成为一种缩合试剂使用，其中所述有机碱和PyBOP、HATU、HBTU、TBTU的摩尔比优选为为1.3-3.0:1，更优选为1.3-2:1。
作为优选，所述缩合试剂中的有机碱以及步骤2中有机碱均优选为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)或N-甲基***啉(NMM),更优选为DIPEA。
作为优选，所述活化试剂为1-羟基苯并***(HOBt)或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)。所述活化试剂的用量优选为氨基树脂或已合成的肽树脂中氨基树脂的中氨基总摩尔数的1～6倍，更优选为2.5～3.5倍。
作为优选，合成过程中所述各反应的反应溶剂均采用DMF。
本发明所述逐一偶联是指在第一个氨基酸与氨基树脂偶联后，剩余氨基酸按照西曲瑞克氨基酸的C端到N端的顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应(主链氨基和羧基的缩合反应)进行偶联。本发明偶联时，每次偶联时所述保护氨基酸和对应肽树脂的摩尔比优选为1-6:1，更优选为2.5-3.5:1；所述偶联反应时间优选为60～300分钟，更优选为120～180分钟。需要说明的是，本发明所述肽树脂指任意个数氨基酸按照西曲瑞克氨基酸顺序和氨基树脂相连接形成的肽树脂，这其中不仅包括肽树脂1还包括在合成肽树脂1过程中得到的多个肽树脂。所述对应的肽树脂是指保护的D-Ala和氨基树脂偶联形成的肽树脂2、肽树脂2就是保护的Pro进行偶联的对应肽树脂，偶联了保护的Pro的肽树脂是保护的Arg进行延伸偶联时对应的肽树脂，以此类推、保护的Leu、保护的D-Orn、保护的Ser、保护的Tyr、保护的D-Pal、保护的D-Cpa、保护的D-Nal等分别和其上一个保护氨基酸偶联后的肽树脂形成偶联时的对应关系。
在延伸偶联中，由于每个氨基酸N端都有保护基，因此需要先脱除N端保护基再偶联，这对本领域技术人员来说是公知常识。本发明优选用PIP/DMF(哌啶/N,N-二甲基甲酰胺)混合溶液脱除N端Fomc保护基，混合溶液中含哌啶为10～30％(V)，其余为DMF。去N端保护基时间优选为10～60分钟，优选的为15～25分钟。去N端保护基试剂的用量优选为每10mL/g肽树脂；本发明优选用TFA/DCM(三氟醋酸/二氯甲烷)混合溶液脱除N端Boc保护基，混合溶液中含三氟醋酸为20～60％(V/V)，优选为25～35％(V/V)，去N端保护基时间优选为10～50分钟，优选的为25～35分钟，去N端保护基试剂的用量优选为10mL/克肽树脂。
作为优选，所述含溴化氢的三氟醋酸溶液中，溴化氢的质量百分比浓度优选为5～10％wt，更优选浓度为6～7％wt；所述酸解剂的用量为5～15mL酸解剂/克肽树脂，优选酸解剂的用量为7～12mL酸解剂/克肽树脂；所述酸解的时间为1～6小时，优选的为3～4小时。
作为优选，本发明所述乙酰化操作通过Ac2O与与肽树脂1脱保护的N端氨基反应完成乙酰化。
作为优选，所述纯化转盐具体为：
西曲瑞克粗品，0.1％TFA/水溶液溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相***为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度***洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得西曲瑞克纯化中间体浓缩液；
取西曲瑞克纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相***为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到西曲瑞克醋酸水溶液，冷冻干燥，得西曲瑞克纯品。
由本发明所述方法合成的西曲瑞克经HPLC检测，粗品纯度大于85％，产品纯度大于99.5％，最大单一杂质小于0.15％，总收率大于60％，并且避免了毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生，整个方法简便易操作，条件温和，产品品质较高。
由以上技术方案可知，本发明采用全新的氨基树脂作为载体，以及采用保护的D-Orn为D-Cit的前体，而后脱除侧链保护基与叔丁基异氰酸酯反应生成D-Cit(tBu)，通过特有的含有溴化氢的三氟醋酸溶液来酸解西曲瑞克肽树脂，同时可最大化地去除生成的D-Cit(tBu)的侧链保护基tBu，最终所获得西曲瑞克具有较高的纯度和总收率，避免了毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克的产生，整个方法简便易操作，条件温和，产品品质较高。
具体实施方式
本发明公开了一种合成西曲瑞克的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
在本发明具体实施方式中，本发明中的保护氨基酸购自于成都晖蓉生物科技有限公司，所用树脂购自于上虞普尔树脂有限公司，申请文件中所用英文缩写对应的中文含义见表1。
表1英文缩写释义
Figure BDA0001092035860000061
Figure BDA0001092035860000071
下面结合实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：D-Ala-MOBHA树脂的合成
取0.15mol Fmoc-D-Ala和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。
取0.05mol的MOBHA树脂(取代值约0.6mmol/g)，DMF溶胀25分钟，洗涤过滤，加入活化后的Fmoc-D-Ala溶液，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，得到Fmoc-D-Ala-MOBHA树脂，用20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，洗涤过滤得到D-Ala-MOBHA树脂。
实施例2：D-Ala-MOBHA树脂的合成
取0.15mol Boc-D-Ala和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。
取0.05mol的MOBHA树脂(取代值约0.6mmol/g)，DMF溶胀25分钟，洗涤过滤，加入活化后的Fmoc-D-Ala溶液，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，得到Boc-D-Ala-MOBHA树脂，用30％TFA/DCM溶液去保护30分钟，经DIEA/DCM溶液中和，用DMF、DCM洗涤过滤得到D-Ala-MOBHA树脂。
实施例3：Pro-D-Ala-MOBHA树脂的合成
取0.15mol Fmoc-Pro和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例1制得的D-Ala-MOBHA树脂，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，洗涤过滤，得到Pro-D-Ala-MOBHA树脂。
实施例4：Pro-D-Ala-MOBHA树脂的合成
取0.15molBoc-Pro和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例2制得的D-Ala-MOBHA树脂，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用30％TFA/DCM溶液去保护30分钟，经DIEA/DCM溶液中和，用DMF、DCM洗涤过滤，得到Pro-D-Ala-MOBHA树脂。
实施例5：肽树脂1的合成
取0.15mol Fmoc-Arg(Pbf)和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例3制得的Pro-D-Ala-MOBHA树脂，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，洗涤过滤，完成Fmoc-Arg(Pbf)的接入。
同法接入Fmoc-Leu、Fmoc-D-Orn(Boc)、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-Tyr(tBu)、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa、Fmoc-D-Nal和Ac2O(用于乙酰化)后，用DMF、DCM洗涤过滤，得肽树脂1[Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Orn(tBoc)-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-A la-MOBHA树脂]。
实施例6：肽树脂1的合成
取0.15mol Boc-Arg和0.15mol HOBt，用适量DMF溶解；另取0.15mol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于室温环境中搅拌反应30分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液。
将上述活化后的保护氨基酸溶液加入到实施例4制得的Pro-D-Ala-MOBHA树脂，室温搅拌反应3小时，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用30％TFA/DCM溶液去保护30分钟，经DIEA/DCM溶液中和，用DMF、DCM洗涤过滤，完成Boc-Arg的接入。
同法接入Boc-Leu、Boc-D-Orn(Fmoc)、Boc-Ser(Bzl)、Boc-Tyr(Bzl)、Boc-D-Pal、Boc-D-Cpa、Boc-D-Nal和Ac2O(用于乙酰化)后，用DMF、DCM洗涤过滤，得肽树脂1[Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(Bzl)-Tyr(Bzl)-D-Orn(Fmoc)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-MOBHA树脂]。
实施例7：西曲瑞克肽树脂的合成
取实施例5制得的肽树脂1，用30％TFA/DCM溶液去保护30分钟，经DIEA/DCM溶液中和，用DMF、DCM洗涤过滤，备用(D-Orn(Boc)侧链保护基的脱除)。
取0.2mol叔丁基异氰酸酯和0.2mol DIEA，用适量DMF溶解，加入到上述肽树脂中，室温搅拌反应过夜，抽掉反应液，DMF洗涤6次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，得西曲瑞克肽树脂[Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser-Tyr-D-Cit(tBu)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-MOBHA树脂]
实施例8：西曲瑞克肽树脂的合成
取实施例6制得的肽树脂1，再用20％PIP/DMF溶液去保护25分钟，用DMF、DCM洗涤过滤，备用(D-Orn(Fmoc)侧链保护基的脱除)。
取0.2mol叔丁基异氰酸酯和0.2molDIEA，用适量DMF溶解，加入到上述肽树脂中，室温搅拌反应过夜，抽掉反应液，DMF洗涤3次后，DCM洗涤3次，每次洗涤时间为3min，再用30％TFA/DCM溶液去保护30分钟，经DIEA/DCM溶液中和，用DMF、DCM洗涤过滤，得西曲瑞克肽树脂[Ac-D-Nal-D-Cpa-D-Pal-Ser(Bzl)-Tyr(Bzl)-D-Cit(tBu)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-MOBHA树脂]
实施例9：西曲瑞克粗品的制备
取实施例7制得的西曲瑞克肽树脂，加入8％的HBr/TFA溶液(酸解液10mL/克西曲瑞克树脂)，搅拌反应6小时，过滤收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水***沉淀，再用无水***洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为西曲瑞克粗品，粗品纯度为88.5％。
实施例10：西曲瑞克粗品的制备
取实施例8制得的西曲瑞克肽树脂，加入8％的HBr/TFA溶液(酸解液10mL/克西曲瑞克树脂)，搅拌反应6小时，过滤收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩，加入无水***沉淀，再用无水***洗沉淀3次，抽干、得类白色粉末即为西曲瑞克粗品，粗品纯度为85.6％。
实施例11：西曲瑞克粗品纯化转盐
取实施例9所得西曲瑞克粗品，用20％醋酸溶液溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相***为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度***洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得西曲瑞克纯化中间体浓缩液；
取西曲瑞克纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相***为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到西曲瑞克醋酸水溶液，冷冻干燥，得西曲瑞克纯品45.3g。
经HPLC检测，总收率为63.3％，分子量：1432.2，纯度：99.6％，最大单一杂质0.12％，未检出毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克。
实施例12：西曲瑞克粗品纯化转盐
取实施例10所得西曲瑞克粗品，用纯化流动相A溶解，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，纯化备用；
采用高效液相色谱法进行纯化，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，流动相***为0.1％TFA/水溶液-0.1％TFA/乙腈溶液，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度***洗脱，循环进样纯化，取粗品溶液上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，收集主峰蒸去乙腈后，得西曲瑞克纯化中间体浓缩液；
取西曲瑞克纯化中间体浓缩液，用0.45μm滤膜滤过备用；
采用高效液相色谱法进行换盐，流动相***为1％醋酸/水溶液-乙腈，纯化用色谱填料为10μm的反相C18，77mm*250mm的色谱柱流速为90mL/min，采用梯度洗脱，循环上样方法，上样于色谱柱中，启动流动相洗脱，采集图谱，观测吸收度的变化，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到西曲瑞克醋酸水溶液，冷冻干燥，得西曲瑞克纯品46.7g。
经HPLC检测，总收率为65.2％，分子量：1432.4，纯度：99.7％，最大单一杂质0.08％，未检出毒性杂质[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种合成西曲瑞克的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、按照西曲瑞克主链氨基酸C端到N端的顺序，在缩合试剂和活化试剂的作用下，将如下保护氨基酸与式1的氨基树脂按照逐一偶联方式固相合成肽树脂1：
保护的D-Ala、保护的Pro、保护的Arg、保护的Leu、保护的D-Orn、保护的Ser、保护的Tyr、保护的D-Pal、保护的D-Cpa、保护的D-Nal；
其中西曲瑞克主链氨基酸序列中D-Cit在肽树脂1对应位置由保护的D-Orn替代；
步骤2、将肽树脂1的N端乙酰化后，用去保护剂去除保护的D-Orn侧链保护基，D-Orn侧链氨基在有机碱的催化下与叔丁基异氰酸酯反应生成D-Cit(tBu)，获得西曲瑞克肽树脂；
步骤3、西曲瑞克肽树脂经含溴化氢的三氟醋酸溶液酸解后得西曲瑞克粗品；所述含溴化氢的三氟醋酸溶液中溴化氢质量百分比浓度为5-10％；
步骤4、西曲瑞克粗品经纯化转盐和冻干得到西曲瑞克纯品；
Figure FDA0002909641330000011
其中，式1左侧圆球表示聚苯乙烯树脂。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述保护氨基酸如下：
Fmoc-D-Ala、Fmoc-Pro、Fmoc-Arg(Pbf)、Fmoc-Leu、保护的D-Orn、Fmoc-Ser(tBu)、Fmoc-Tyr(tBu)、Fmoc-D-Pal、Fmoc-D-Cpa、Fmoc-D-Nal；或
Boc-D-Ala、Boc-Pro、Boc-Arg、Boc-Leu、保护的D-Orn、Boc-Ser(Bzl)、Boc-Tyr(Bzl)、Boc-D-Pal、Boc-D-Cpa、Boc-D-Nal。
3.根据权利要求1-2任意一项所述方法，其特征在于，步骤1所述保护的D-Orn为Fmoc-D-Orn(Boc)或Boc-D-Orn(Fmoc)。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述缩合试剂为N,N-二异丙基碳二亚胺、N,N-二环己基碳二亚胺，六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有机碱、2-(7-氮杂-1H-苯并三氮唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯/有机碱、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐/有机碱、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有机碱中的一种。
5.根据权利要求1或4所述方法，其特征在于，所述有机碱为N,N-二异丙基乙胺、三乙胺或N-甲基***啉。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述活化试剂为1-羟基苯并***或N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑。
7.根据权利要求1-2任意一项所述方法，其特征在于，所述保护氨基酸的投料量与氨基树脂氨基的摩尔比为1-6:1。
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