CN107686473B - 一种紫背菜多糖多酚联合制备方法 - Google Patents
一种紫背菜多糖多酚联合制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种紫背菜多糖多酚联合制备方法,通过乙醇水提法及吸附分离提取法,将多糖多酚的制备联合起来,减少了操作工艺,提高了资源的利用率,增加了效率,同时有效地提高了提取的多糖多酚的纯度。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种紫背菜多糖多酚联合制备方法。
背景技术
紫背菜(Gynura bicolor DC)别名血皮菜、观音菜、红风菜、紫背天葵等,系菊科三七草属中以嫩茎叶作菜用的半栽培种,多年生宿根常绿草本植物。紫背菜原产于中国,四川、浙江、广东、广西、海南、福建、台湾等地,或野生或栽培种植,尤以四川、重庆一带广为栽培食用。
紫背菜是一种食用兼药用的保健蔬菜,嫰叶茎可凉拌或炒食,同时富含粗蛋白、可食性纤维、脂肪、氨基酸、生物碱、黄酮类物质、挥发油和矿物质。紫背菜的矿质营养较为丰富,特别是铁、铜,锌等微量元素含量较高,还含有黄酮甙成分,这种成分无毒,具有延长抗坏血酸和减少血管紫瘢的作用。除了供直接食用或制作净菜,紫背菜在中国还被用于生产药酒和保健茶,并在日本被用作制备天然食品色素。紫背菜营养全面且兼具保健功能,集“鲜、绿、野”和“营养”、“药用”、“味美”于一身,是重要的绿色保健食品资源。
紫背菜含有三七多糖,其具有多种与生物机能的维持密切相关的生物活性功能。三七多糖是由许多相同或不同的单糖以α或β-糖苷键所组成的化合物,拥有复杂的四级结构,具有免疫调节、抗病毒、延缓衰老、抗肿瘤、抗辐射等作用,除此之外,多糖还具有抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等其他生物活性。近年来,人们对多糖的结构和活性的研究不断深入,进一步阐明了多糖作用机制与结构的关系,其多样性的生理活性更加受到重视。
目前植物多糖的提取方法主要有溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声波强化法、微波法等。本发明所用的多糖提取方法为乙醇水提法,相对于其他几种方法,其反应条件温和,提取速度快,提取的多糖纯度高。
紫背菜中的多酚物质包括黄酮类物质和花青素类等。植物多酚又称单宁或鞣质,包括单宁及与单宁有生源关系的化合物,具有多元酚羟基和羧基结构,主要骨架类型为C6-Cl型和C6-C3型。植物多酚的独特结构使其具有多种功效,花青素类物质是多酚的一种,是具有特殊分子结构的生物类黄酮,能有效的清除自由基,具有抗氧化性、抑菌、抗癌、抗炎、抗病毒等活性,可保护人体组织免受自由基的氧化损伤,并能有效改善人体微循环。
目前对植物多酚提取研究较多,主要提取方法有溶剂萃取法、超声波浸取法、微波浸提法、吸附分离提取法、金属离子分离法、生物酶解提取法等。本发明所用的多酚提取方法为吸附分离提取法,其优势在于树脂对植物多酚的吸附作用强且可循环利用,操作条件温和,提取率较高,分离产物品质较好,无毒等。
CN201511008885.0涉及一种辣木籽中多糖提取方法,将粉碎后的粉末状辣木籽放入水中,在一定温度下浸泡一定时间,提取,得辣木籽多糖提取液,所述的辣木籽多糖提取液中多糖的产率达到14%以上,此方法多糖的提取率虽高,但纯度较低。CN201611054253.2提供了一种翻白草多糖提取方法,利用生物酶解技术从翻白草中提取多糖,再加上超声波处理、超滤、醇沉、季铵盐沉淀、盐洗、醇沉精制或大孔树脂柱精制,获得纯度较高的翻白草多糖,该法获得的多糖纯度虽高,但操作过程繁琐,成本较高。CN201210229217.0提供一种梨多酚的提取方法,将梨幼果去皮去核,切成小于1cm3的小块,用液氮研磨成粉末,用30-90%的乙醇溶液对梨果进行浸提2-6h,离心,所得上清液即为梨多酚提取液,该法提取的多酚活性虽高,同时成本也高,不适合工业化生产,资源浪费现象严重。CN201310300937.6 是将剥开紫茉莉种子,弃掉内瓤,留下外皮,烘干至恒重,粉碎后过80-100目筛,按料液比1:5-25加入浓度为30-95%的乙醇溶液,于60℃的恒温水浴锅中加热提取30-150min,浸提液经抽滤、浓缩、干燥得多酚提取物,此方法生产成本低,但提取的多酚纯度不高,提取率也偏低。
发明内容
本发明提供了一种紫背菜多糖多酚联合制备的方法。该法将多糖多酚的制备联合起来,减少了操作工艺,提高了资源的利用率,增加了效率,同时有效地提高了提取的多糖多酚的纯度。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
所述制备方法包括以下步骤:
(1)将新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
(2)准确称取剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
(3)取浓缩液,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
(4)将沉淀配制浓度为2-3mg/mL的粗多糖溶液100mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶条件下,酶解2h。将经脱蛋白处理后的溶液,6000r/min离心10min,收集沉淀,为紫背天葵多糖。
(5)将步骤(3)醇沉离心后的上清液一半在45℃下进行旋蒸,浓缩到50ml过滤后,将滤液经Sephadex LH 20柱层析连续纯化,先经1000ml 50%的乙醇洗脱,后用500ml 70%丙酮水溶液洗脱,丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,再在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素。
(6)将醇沉离心后的剩余上清液也在45℃下进行旋蒸,浓缩到50ml过滤后,将滤液经SepPakC18柱层析连续纯化,先经1000ml 10%乙醇水溶液洗脱,后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,再在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素。
本发明的优点在于:将制备紫背菜多糖的工艺与多酚的工艺联合起来,精简了制备工艺,提高了工作效率;避免了资源浪费,提高了资源的利用率;同时能很好的保证所提取的多糖多酚的纯度,提高回收率。
具体实施方式
实施例1
将漳州产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL 50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL 50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
将得到的粗多糖沉淀配制成2mg/mL的粗多糖溶液100mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,漳州产地的紫背菜的多糖回收率为80.21%,纯度为75.56%。
将醇沉离心后的上清液取一半经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用500ml 70%丙酮水溶液洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素。结果表明,漳州产地的紫背菜的原花青素回收率为70.25%,纯度为80.30%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经1000ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,漳州产地的紫背菜的花青素回收率为75.77%,纯度为75.46%。
实施例2
将广西产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
将得到的粗多糖沉淀配制成3mg/mL的粗多糖溶液100mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,广西产地的紫背菜的多糖回收率为75.57%,纯度为70.99%。
将醇沉离心后的上清液取一半经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用750ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素,结果表明,广西产地的紫背菜的原花青素回收率为60.11%,纯度为70.32%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经750ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,广西产地的紫背菜的花青素回收率为70.89%,纯度为75.33%。
实施例3
将浙江产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
将得到的粗多糖沉淀配制成2.5mg/mL的粗多糖溶液100mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,浙江产地的紫背菜的多糖回收率为70.33%,纯度为65.49%。
将醇沉离心后的上清液取一半经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用800ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素,结果表明,浙江产地的紫背菜的原花青素回收率为60.15%,纯度为65.37%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经800ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,浙江产地的紫背菜的花青素回收率为65.02%,纯度为60.99%。
实施例4
将海南产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
将得到的粗多糖沉淀配制成2mg/mL的粗多糖溶液150mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,海南产地的紫背菜的多糖回收率为75.09%,纯度为80.55%。
将醇沉离心后的上清液取一半,经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用500ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素,结果表明,海南产地的紫背菜的原花青素回收率为70.46%,纯度为75.91%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经1000ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,海南产地的紫背菜的花青素回收率为70.33%,纯度为75.67%。
实施例5
将台湾产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
将得到的粗多糖沉淀配制成3mg/mL的粗多糖溶液150mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,台湾产地的紫背菜的多糖回收率为75.06%,纯度为70.47%。
将醇沉离心后的上清液取一半经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用750ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素,结果表明,台湾产地的紫背菜的原花青素回收率为55.15%,纯度为60.84%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经750ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,台湾产地的紫背菜的花青素回收率为65.66%,纯度为60.35%。
实施例6
将广东产地的新鲜紫背菜摘除掉坏叶和老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用。
准确称取200g剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4g/ml加入800mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1),在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣。将滤渣再以1:2g/ml的固液比添加400mL50%乙醇水溶液(乙醇:水(V/V)=1:1)在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并。混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用。
取150mL浓缩液,加入3倍体积的450mL95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜。将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质。
广东产地的紫背菜经水提、醇沉后,将得到的粗多糖沉淀配制成2.5mg/mL的粗多糖溶液150mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min,收集沉淀。结果显示,广东产地的紫背菜的多糖回收率为70.80%,纯度为65.79%。
将醇沉离心后的上清液取一半经旋蒸、浓缩后,分别经过Sephadex LH 20和SepPakC18柱层析连续纯化。Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用800ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素,结果表明,广东产地的紫背菜的原花青素回收率为60.21%,纯度为60.75%。
同时,取醇沉离心后的剩余上清液过SepPakC18柱,经800ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素,结果显示,广东产地的紫背菜的花青素回收率为60.45%,纯度为65.89%。
通过实施例1~6,比较从不同产地紫背菜中提取的多糖、原花青素以及花青素的回收率及纯度,可知本发明的多糖和多酚的提取率相对较高。实施例1和4为第一组,实施例2和5是第二组,实施例3和6是第三组,三个组相比较,实施例1和4中多糖、原花青素以及花青素的回收率及纯度较其他两组明显提高,因此,本发明所设计的紫背菜中多糖、原花青素以及花青素的提取方法具有很高的效率。其中,多糖的最佳提取工艺为:2mg/mL粗多糖浓度100mL,中性蛋白酶的添加量为1000U/g,pH=7,在50℃酶最适条件下,酶解2h。将处理后的溶液置于离心管中,6000r/min离心10min;原花青素的最佳提取工艺为:Sephadex LH 20柱经1000ml 50%的乙醇洗脱后用500ml 70%水丙酮洗脱,将丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥;花青素的最佳提取工艺为:乙醇洗脱液过SepPakC18柱,经1000ml 10%乙醇水溶液洗脱后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,将80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥。
Claims (1)
1.一种紫背菜多糖多酚联合制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)将新鲜紫背菜摘除掉坏叶、老梗以及虫洞的叶片后,洗净之后剁碎,装于密封袋,4℃冰箱中保存备用;
(2)准确称取剁碎后的紫背菜新鲜叶,按固液比1:4 g/mL加入50%乙醇水溶液,在45℃的条件下于摇床中提取3h,粗过滤后,收集滤液及滤渣;将滤渣再以1:2 g/mL的固液比添加50%乙醇水溶液在相同的条件下重复提取一次,经粗过滤后进行抽滤,并将两次的提取液合并;混匀后,用真空旋转蒸发器进行浓缩直至体积为原来体积的1/6,将浓缩粗提液用棕色试剂瓶装好后,置于冰箱保鲜层保藏备用;
(3)取浓缩液,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,混匀后,150r/min磁力搅拌30min,保鲜膜封盖烧杯口,常温静置过夜;将其混合液6000r/min离心10min,分别收集沉淀和上清液,沉淀是粗多糖物质,上清液需进一步处理得到多酚物质;
(4)将沉淀配制浓度为2-3mg/mL的粗多糖溶液100mL,添加酶量为1000U/g的中性蛋白酶,调节pH=7,在50℃酶条件下,酶解2h;将经脱蛋白处理后的溶液,6000r/min离心10min,收集沉淀,为紫背天葵多糖;
(5)将步骤(3)醇沉离心后的上清液一半在45℃下进行旋蒸,浓缩到50ml过滤后,将滤液经Sephadex LH 20柱层析连续纯化,先经1000ml 50%的乙醇溶液洗脱,后用500ml 70%丙酮水溶液洗脱,丙酮洗脱液经45℃旋转蒸发,并放入-20℃冰箱保存2h,再在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜原花青素;
(6)将醇沉离心后的剩余上清液也在45℃下进行旋蒸,浓缩到50ml过滤后,将滤液经SepPakC18柱层析连续纯化,先经1000ml 10%乙醇水溶液洗脱,后用500ml 80%乙醇水溶液洗脱,80%乙醇水洗脱液经45℃旋转蒸发,放入-20℃冰箱保存2h,再在-80℃冰箱保存4h后进行冷冻干燥,得到紫背菜花青素。
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紫背菜提取物降血糖作用的实验研究;余小平;《中华中医药学刊》;20110731;第29卷(第7期);1652-1654 * |
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