CN107602446A - 1,4‑双取代‑1,2,3,6‑四氢吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种通式I所示的1,4‑双取代‑1,2,3,6‑四氢吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物及其应用。特别地，本发明所述化合物为一种全新结构的靶向menin‑MLL相互作用界面的小分子抑制剂，所述抑制剂用于多种肿瘤的干扰和治疗，更优选地，所述肿瘤为白血病、肝癌、脑瘤、骨髓瘤、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、***癌、膀胱癌或多发性内分泌腺癌。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，总体上涉及一类1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物、其制备方法、药物组合物及其应用。特别地，本发明所述化合物为一种全新结构的靶向menin-MLL相互作用界面的小分子抑制剂，menin与MLL蛋白的相互作用可以认为是一种潜在的分子治疗有效靶标，因此选择性靶向该作用界面，有利于用于与之相关的新药研发。
背景技术
多发性内分泌癌蛋白(menin蛋白)由多发性内分泌腺癌1型(MEN1)基因编码，MEN1基因在内分泌器官中起肿瘤抑制基因的作用。Menin蛋白与多种蛋白有相互作用，形成了复杂的相互作用网络。如menin与野生型MLL1及融合型MLL1蛋白的N端直接相互作用，并同时结合染色质相关蛋白LEDGF(晶状体来源的上皮生长因子)。LEDGF最终将该复合物带至相应的靶基因处，激活基因表达。
MLL基因家族包括MLL1-5五个成员，与多种肿瘤的发生发展及恶化、转移密切相关(Grembecka等，Future Medicinal Chemistry，2014，6(4)，447-462)。MLL1蛋白作为该家族最早报道的表观遗传学调控酶，介导组蛋白H3K4的甲基化修饰，调控HOX等基因的转录，不仅在正常造血***的发育过程中具有重要功能，且其基因异位产生的融合蛋白被认为是造成MLL白血病发病及恶化的根源。Grembecka等基于对menin基因以及menin-MLL相互作用界面的深入研究，首次报道了menin-MLL相互作用界面的小分子抑制剂MI-2，后续又推出了一系列结构优化的活性更强的抑制剂。该系列抑制剂在首先在MLL融合型白血病细胞及小鼠模型上显示出了很好的治疗效果(Grembecka等，Nature Chemical Biology，2012，8，227-284)。此外，MLL1被认为与肝癌和脑瘤关系密切。最新的研究表明，在肝癌细胞中，MLL1-menin通过转录上调Yap1基因表达，参与调控肝癌细胞的恶性增殖，消减menin表达有效抑制裸鼠成瘤模型上肝癌细胞的致瘤性及恶性增殖。MLL1蛋白通过激活HOXA10等基因的转录，对于维持脑瘤干细胞的自我更新、生长及致瘤性是至关重要的。MLL改变引起GATA4和EST1的H3K4me3水平升高进而蛋白高表达，被认为与膀胱癌有关(Song等，Oncotarget,2016,7(3),2629-2645)。此外，MLL2被报道在胰腺癌、乳腺癌、结肠癌中表达上调，消减MLL2基因表达，抑制肿瘤细胞周期进程、诱导细胞凋亡，可见MLL2蛋白与肿瘤的发生发展及恶化密切相关。
研究表明menin与MLL1、MLL2蛋白直接相互作用对于复合物组蛋白甲基化修饰(H3K4)的酶活、对靶基因转录调控及其相应的功能是不可或缺的(Yali等，NatureStructure&Molecular Biology，2006，13，713-719)。鉴于MLL1、MLL2蛋白对多种肿瘤恶性增殖是必须的，而MLL蛋白单独存在时基本没有酶活，我们推测其促进肿瘤恶性增殖的功能很可能也是在一个大的表观遗传调控复合物中完成。事实上，目前在***癌和乳腺癌中，野生型MLL的功能也被证明是依赖其与menin蛋白的相互作用的。在Castration耐药性的***癌中，MLL表观遗传调控复合物被鉴定为雄激素受体AR的副因子，menin-MLL抑制剂通过瓦解MLL复合物破坏其功能，能够有效抑制AR下游的信号通路，抑制裸鼠模型上***癌的生长(Malik等，Nature Medicine，2015，21(4)，344-352)。在乳腺癌中，TP53的功能获得型突变体通过转录上调表观遗传调控的甲基转移酶MLL1、MLL2、乙酰转移酶MOZ的表达，造成全基因组范围内的组蛋白甲基化及乙酰化修饰异常(Zhu等，Nature，2015，525，206-211)。在该种肿瘤中，靶向menin-MLL的抑制剂MI2-2破坏MLL1甲基转移酶复合物而抑制其酶活，显著抑制肿瘤细胞在裸鼠成瘤模型上的瘤体生长。
此外，menin作为一种组织广谱表达的核蛋白，参与了多种重要转录调控复合物的形成，在机体中表现为多种重要的生物学功能。除了参与形成MLL1、MLL2表观遗传调控复合物，menin蛋白被报道与多种转录因子，包括JunD、NFKB、SMAD3相互作用，调控靶基因的转录激活或抑制(Agarwal等，Cell，1999，96(1)，143-152；Christina等，Oncogene，2001，20(36)，4917-4925；Kaji，2001，98(7)，3837-3842)。Menin通过与ASK(activator of S-phasekinase)相互作用，参与细胞***增殖和细胞周期调控(Schnepp等，Cancer Research，2004，64(18)，6791-6796)；menin通过DNA损伤修复蛋白FANCD2蛋白相互作用，影响基因组的稳定性(Jin等，Cancer Research，2003，63(14)，4204-4210)。Menin与BMP-2信号通路蛋白及Runx2相互作用，被认为与骨骼发育有关(Katalin等，TRENDS in Endocrinology andMetabolism,2006,17(9),357-364)，调控menin或许能影响骨骼形成或者控制骨髓瘤患者的病情发展。有趣的是，结构学的研究结果表明，menin蛋白所具备的较大的中央口袋是介导与其他蛋白相互作用的主要界面。对menin蛋白单独结晶、menin-MLL复合物共结晶、menin-JunD共结晶的晶体结构解析结果表明，menin与MLL及JunD蛋白结合，结合界面上menin的口袋结构是一致的，且与单独存在的menin蛋白的口袋结构一样。由此，我们推出，该口袋，不仅介导了menin与MLL1、MLL2蛋白的相互作用，还介导了其与JunD等其他蛋白的相互作用。因而，靶向Menin-MLL的小分子抑制或其不同类型的结构衍生物通过竞争性的占据menin的口袋，将有可能选择性的破坏menin与其他不同类型转录因子的相互作用，调控相应的转录事件和相关的生物学功能，从而进一步拓展menin-MLL抑制剂的应用范围。
由此可见，menin与MLL融合蛋白的相互作用可以认为是一种潜在的分子治疗有效靶标，menin-MLL抑制剂具有广泛的应用前景，选择性靶向该作用界面，有利于用于与之相关的新药研发。
发明内容
本发明的涉及一种全新结构的如通式I所示1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物及其制备方法，并且结合活性评价和相关生物学实验，证实该类化合物可以有效靶向menin-MLL相互作用界面，可以用于与menin-MLL蛋白相互作用相关疾病的治疗及新药开发。
本发明的一个目的是提供通式I所示的一类1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供通式I所示的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的制备方法。
本发明的又一个目的是提供通式I所示的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备作为靶向menin-MLL蛋白相互作用界面的小分子抑制剂的药物中的用途，可用于与menin-MLL相互作用界面相关的多种肿瘤的干扰和治疗。所述肿瘤为白血病、肝癌、脑瘤、骨髓瘤、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、***癌、膀胱癌或多发性内分泌腺癌。
根据本发明的一个方面，提供了通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，n＝1-4的整数，优选为1、2、3或4；
R1、R2相同或不同，且分别独立地为：氢原子、羟基、卤素、C1-C10直链或支链的烷基、C1-C10直链或支链的烷氧基、C2-C10直链或支链的链烯基、C3-C10环烷基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氨基羰基C1-C6烷基、C1-C6烷基酰胺基或C5-C20的芳基；进一步优选为：氢原子、羟基、卤素、C1-C6直链或支链的烷基、C1-C6直链或支链的烷氧基、C2-C6直链或支链的链烯基、C3-C8环烷基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氨基羰基C1-C3烷基、C1-C3烷基酰胺基或C5-C10的芳基；更优选为H、Br、Cl、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、甲基羰基、乙基羰基、丙基羰基、异丙基羰基、丁基羰基、叔丁基羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、异丙氧基羰基、丁氧基羰基、叔丁氧基羰基或甲基酰胺、乙基酰胺基、氨基羰基甲基、氨基羰基乙基、苯基或萘基；
R3和R4相同或不同，且分别独立地为：氢原子、C1-C10直链或支链的烷基、C2-C10直链或支链的链烯基、C3-C10环烷基、取代或未取代的C5-C20芳基、或者取代或未取代的五元或六元杂芳基，其中取代的C5-C20芳基或取代的五元或六元杂芳基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；优选为氢原子、C1-C6直链或支链的烷基、C2-C6直链或支链的链烯基、C3-C8环烷基、取代或未取代的C5-C12芳基、或者取代或未取代的五元或六元杂芳基，其中取代的C5-C12芳基或取代的五元或六元杂芳基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；进一步优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、环丙烷基、环丁烷基、环戊烷基、环己烷基、环庚烷基、取代或未取代的苯基、或者取代或未取代的吡啶基，其中，所述取代的苯基或取代的吡啶基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、三氟甲基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；
R5为取代或未取代的C5-C12芳基、取代或未取代的五元或六元杂芳基、取代或未取代的苯并五元或六元杂芳基、或者取代或未取代的二苯并噻吩基，其中，所述取代的C5-C12芳基、取代的五元或六元杂芳基、取代的苯并五元或六元杂芳基、或者取代的二苯并噻吩基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰胺基、氨基C1-C6直链或支链的烷基、卤素取代的苯基磺酰胺基、卤素取代的苯基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；优选地，R5为取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的咪唑基或取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的吲唑基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的苯并呋喃基、取代或未取代的苯并噻吩基、取代或未取代的苯并噻唑基，或者取代或未取代的二苯并噻吩基，其中，取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰胺基、氨基C1-C6直链或支链的烷基、卤素取代的苯基磺酰胺基、卤素取代的苯基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；最优选地，R5为未取代或被选自卤素、三氟甲基、C1-C6烷氧基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基C1-C6烷基、卤代苯基、卤代苯基磺酰胺基、氨基磺酰基或C1-C6烷基磺酰胺基中的至少一个取代基取代的苯基；未取代或被选自卤素、三氟甲基、C1-C6烷氧基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基C1-C6烷基、卤代苯基、卤代苯基磺酰胺基或C1-C6烷基磺酰胺基中的至少一个取代基取代的吡啶基；未取代或被选自卤素、三氟甲基、C1-C6烷氧基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基C1-C6烷基、卤代苯基、卤代苯基磺酰胺基或C1-C6烷基磺酰胺基中的至少一个取代基取代的吲哚基；未取代或被选自卤素、三氟甲基、C1-C6烷氧基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基C1-C6烷基、卤代苯基、卤代苯基磺酰胺基或C1-C6烷基磺酰胺基中的至少一个取代基取代的喹啉基；未取代或被选自卤素、三氟甲基、C1-C6烷氧基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基C1-C6烷基、卤代苯基、卤代苯基磺酰胺基或C1-C6烷基磺酰胺基中的至少一个取代基取代的硫茚基。
优选地，R3和R4中的至少一个为取代或未取代的苯基，所述取代的苯基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个。
进一步优选地，本发明所述的化合物具有通式II所示的结构：
其中，R1、R4和R5定义如上所述，
R6为氢原子、卤素、C1-C6烷基、三氟甲基、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基。
除非另外指出，在本发明中，术语定义如下：
卤素表示氟、氯、溴或碘；
五元或六元杂芳基表示在环中具有选自N、O或S中的至少一个杂原子的五元或六元芳基，其实例包括，但不限于，噻吩基、呋喃基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、咪唑基或噁唑基；
苯并五元或六元杂芳环基团表示苯与在环中具有选自N、O或S中的至少一个杂原子的五元或六元芳基稠合形成的环，其实例包括，但不限于，吲唑基、吲哚基、喹啉基、萘基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基或苯并噻唑基。
更具体而言，所述由通式I表示的化合物可以为如下化合物中的任意一种：
表1
本发明所述的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的药学上可接受的盐包括：与无机酸形成的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等；以及与有机酸形成的盐，例如马来酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐、醋酸盐、酒石酸盐、丙二酸盐等。
根据本发明的另一方面，提供了本发明所述的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的制备方法，其包括如下步骤：
其中，n，R1、R2、R3、R4和R5的定义与上述相同，
a)化合物1与化合物2发生取代反应得到化合物3；
b)化合物3发生还原反应得到化合物4；
c)化合物4发生氨基N原子上的取代反应得到化合物5，包括N上甲基化、乙酰基化、甲酸甲酯化、烷基化以及芳基化。
优选地，步骤a)的反应条件为在碱的作用下，溴代物1和4-芳基-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物2，发生取代反应；所述碱为碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾等，优选碳酸钠，所用溶剂为乙腈、1，4-二氧六环、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、甲苯等，优选乙腈，反应温度为所用溶剂的回流温度，优选乙腈回流温度为80℃，反应时间3-8小时，优选4小时；
步骤b)的反应条件为在还原试剂的作用下，将氰基还原为氨基，所述还原试剂为四氢铝锂，二异丁基氢化铝(DIBAL-H)，硼烷及硼烷/二甲硫醚复合物，添加剂为无水三氯化铝，优选四氢铝锂-无水三氯化铝组合(摩尔比1:1)，所述溶剂包括***、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、1,4-二氧六环等，优选四氢呋喃；
步骤c)的反应条件由具体的反应来确定，通常为本领域公知的条件。根据本发明的再一方面，其提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种本发明所述的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料。
根据本发明的又一方面，其提供了通式I所示的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物或其药学上可接受的盐在制备作为靶向menin-MLL蛋白相互作用界面的小分子抑制剂的药物中的用途。所述抑制剂可用于多种肿瘤的干扰和治疗，所述肿瘤为白血病、肝癌、脑瘤、骨髓瘤、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、***癌、膀胱癌或多发性内分泌腺癌。
根据本发明的又一方面，其提供了一种用于***的方法，其包括向患者施用有效量的本发明所述的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的有益效果在于：本发明提供了一系列结构全新的1,4-双取代-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物及其制备方法，该类化合物有效作用于menin-MLL相互界面，可以作为靶向menin-MLL蛋白相互作用界面的小分子抑制剂的新药开发。其常规方法即可合成，经分子水平和细胞水平测试评价，该系列化合物活性明显。
附图说明
图1为显示蛋白热迁移实验证实化合物D28与menin蛋白结合的图表；
图2为显示表面等离子共振实验证实化合物D28与menin蛋白结合的图表；
图3为显示竞争性核磁共振饱和转移差谱实验证实化合物D28与menin蛋白结合的图表；
图4为免疫共沉淀实验证实化合物D28在细胞水平破坏menin蛋白与MLL蛋白的相互作用的图；
图5为化合物D28及D37与menin蛋白结合模式分析的示意图；
图6为化合物D28选择性抑制MLL融合型白血病细胞增殖的图表；
图7为化合物D28将白血病细胞MV4；11阻滞在G0/G1期的图；
图8为化合物D28诱导白血病细胞MV4；11分化的图；
图9为化合物D28诱导白血病细胞KOPN-8分化的图；
图10为化合物D28下调白血病细胞中HOXA9、HOXA10、MEIS1及DLX2基因的表达的图。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
实施例1：本发明中4-芳基-2’,2’-二芳(烷)基-1-四氢吡啶基胺类衍生物中具有代表性的化合物制备如下：化合物D1的合成
1)反应瓶中加入原料A1-20(257mg,0.86mmol，市售商品，购于百灵威科技有限公司)，化合物B1(174mg,0.9mmol，市售商品，购于安耐吉化学(Energy Chemical))，碳酸钠(339mg,3.2mmol)，乙腈(15mL)，80℃条件下反应4小时，反应完成后用乙酸乙酯萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物C1(283mg，80％)。
2)无水反应瓶中加入四氢锂铝的THF溶液(2.4M,2.76mL),0℃条件下缓慢滴加三氯化铝(153mg)的THF溶液(10mL)，随后滴加化合物C1(95mg,0.23mmol)的THF溶液(10mL)，移至室温反应1小时后，回流加热7小时，冷至室温后加水淬灭，用***和饱和酒石酸钾钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析得到化合物D1(43mg,45％)。
波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.32-7.18(m,14H),6.00(s,1H),3.35(s,2H),3.11-3.03(m,2H),2.61(t,J＝5.4Hz,2H),2.53-2.38(m,4H),2.23-2.14(m,2H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ146.3,139.2,133.9,132.6,128.4,128.2,128.2,126.2,122.3,53.9,53.4,50.9,50.6,49.1,33.5,28.1；HRMS(EI)计算值C27H29ClN2[M]+,416.2019.测量值,416.2025.
实施例2：化合物D2-D20的合成，制备通式如下
制备方法类似于实施例1，但所用原料为B2-B20(由取代苯硼酸与3,6-二氢-4-[[(三氟甲基)磺酰]氧基]-1(2H)-吡啶甲酸叔丁酯通过Suzuki偶联反应制备，市售商品，购于百灵威科技有限公司)，得到目标化合物D2-D20，具体如下表所示，表2：
实施例3：化合物D21-D27的合成，制备通式如下
制备方法类似于实施例2，但所用原料为A21-A27，得到目标化合物D21-D27，具体如下表所示，表3：
实施例4：化合物D28的合成
反应瓶中加入化合物A28(397mg)，化合物B1(229mg)，碳酸钠(318mg)乙腈(5mL)，80℃条件下反应4小时，反应完成后用乙酸乙酯萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物C28(301mg，72％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.43-7.33(m,9H),6.00(s,1H),3.45(t,J＝6.3Hz,2H),3.00(s,2H),2.59-2.50(m,2H),2.41-2.29(m,4H),2.06-1.93(m,4H),1.83-1.71(m,3H),1.51-1.35(m,4H).
无水反应瓶中加入四氢锂铝的THF溶液(2.4M,0.15mL),0℃条件下缓慢滴加三氯化铝(49mg)的THF溶液(5mL)，随后滴加化合物C28(52mg)的THF溶液(5mL)，移至室温反应1小时后，回流加热7小时，冷至室温后加水淬灭，用***和饱和酒石酸钾钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析得到化合物D28(22mg,42％)。
波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40-7.20(m,9H),6.02(s,1H),3.60-3.44(m,2H),3.20-3.00(m,2H),2.90-2.60(m,8H),2.56-2.28(m,4H),1.93-1.75(m,2H),1.68-1.40(m,4H),1.16-0.90(m,3H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ141.9,138.8,133.5,132.2,127.9,127.7,127.4,125.7,125.2,121.9,61.9,58.7,53.6,49.9,46.5,46.2,42.9,32.3,31.2,27.6,26.6,25.9,23.9,22.5,21.3；HRMS(EI)calcd.for C27H35ClN2[M]+,422.2489.Found,422.2487.
实施例5：化合物D29-D41的合成，制备通式如下
制备方法类似于实施例2，但所用原料为A29-A35，或者B3，B7，B15-B17，以及B36，得到目标化合物D29-D39，具体如下表所示，表4：
实施例6：化合物D42的合成
反应瓶中加入化合物D28(70mg)，用乙腈(5mL)溶解后，加入甲醛溶液(37％,26mg)，氰基硼氢化钠(32mg)，1滴醋酸，室温搅拌40分钟后，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D42(75mg,86％)。波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.43-7.15(m,9H),6.06(s,1H),3.26(s,2H),2.88-2.72(m,4H),2.65-2.47(m,4H),2.32-2.12(m,8H),1.74-1.56(m,2H),1.49-1.31(m,5H),1.17-1.03(m,2H)；13C NMR(125MHz,CDCl3)δ138.9,134.2,132.8,128.5,128.0,127.6,126.2,125.8,65.3,53.7,53.3,50.4,48.1,46.4,31.5,27.8,27.4,27.0,24.7,24.5；HRMS(EI)calcd.for C28H37ClN2[M]+,436.2645.Found,436.2649.
实施例7：化合物D43的合成
反应瓶中加入钠氢(20mg)用DMF(2mL)溶解后，室温搅拌30分钟，加入化合物D28(70mg)，加入一当量碘甲烷，室温搅拌1h后，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D43(75mg,41％)。波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.26-7.13(m,9H),6.02(s,1H),3.31(m,2H),2.88(m,4H),2.45(m,4H),2.26-2.12(m,7H),1.67-1.58(m,2H),1.31(m,3H),1.17-1.02(m,2H)；HRMS(EI)calcd.for C27H35ClN2[M]+,422.2489.Found,422.2482.
实施例8：化合物D44的合成
反应瓶中加入化合物D28(82mg)，用二氧六环(5mL)溶解后，加入醋酐(106mg)，4-二甲氨基吡啶DMAP(3.2mg)，室温搅拌4小时后，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D43(116mg,77％)。
波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.48-7.20(m,9H),6.11(s,1H),3.32(s,2H),2.77-2.65(m,4H),2.56-2.41(m,4H),2.34(s,3H),2.29-2.12(m,8H),1.78-1.62(m,2H),1.51-1.35(m,5H),1.21-1.08(m,2H)；HRMS(EI)calcd.for C28H35ClN2O[M]+,436.2645.Found,436.2649.
实施例9：化合物D45的合成
反应瓶中加入化合物D28(81mg)，用二氯甲烷(5mL)溶解后，加入三乙胺和氯甲酸甲酯(38mg)，温搅拌2小时后，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D45(52mg,34％)。波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.81-7.22(m,9H),6.06(s,1H),3.78(s,3H),3.61(s,2H),3.21(s,2H),2.88-2.59(m,4H),2.57(m,4H),2.43(m,7H),1.99-1.62(m,2H),1.23(m,5H),1.18-1.06(m,2H)；HRMS(EI)calcd.For C28H35ClN2O2[M]+,466.2387.Found,466.2388.
实施例10：化合物D46的合成
反应瓶中加入化合物D28(81mg)，用二氯甲烷(5mL)溶解后，加入氯乙酰胺(38mg)，然后加入1M KOH(2mL)溶液室温搅拌2-3小时后，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D44(52mg,56％)。波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.93-7.18(m,9H),6.08(s,1H),3.61(s,2H),3.21(s,2H),2.97-2.68(m,4H),2.56-2.45(m,4H),2.41-2.33(m,8H),1.99-1.62(m,2H),1.59-1.23(m,5H),1.18-1.06(m,2H)；HRMS(EI)calcd.For C28H36ClN3O[M]+,465.2547.Found,465.2542.
实施例11：化合物D47的合成
反应瓶中加入化合物D28(1mmol)，用DMSO(5mL)溶解后，加入碘化亚铜10％，L-脯氨酸20％，碳酸钾1.5当量，碘苯1.2当量，80℃下反应过夜，用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物D47(37％)。波谱数据：1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.44(s,5H),7.38(m,6H),7.31–7.07(m,8H),7.07–7.02(m,1H),6.69(s,1H),6.58(s,4H),6.45(s,2H),6.08(s,1H),3.61(s,2H),3.21(s,2H),2.97-2.68(m,4H),2.56-2.45(m,4H),2.41-2.33(m,8H),1.99-1.62(m,2H),1.59-1.23(m,5H),1.18-1.06(m,2H)；HRMS(EI)calcd.For C32H37ClN2[M]+,484.2645.Found,484.2641.
实施例12：化合物D48的合成
反应瓶中加入化合物A48(380mg)，化合物B1(229mg)，碳酸钠(320mg)乙腈(5mL)，80℃条件下反应4小时，反应完成后用乙酸乙酯萃取，有机层干燥浓缩柱层析后得到化合物C48。
无水反应瓶中加入四氢锂铝的THF溶液(2.4M,0.15mL),0℃条件下缓慢滴加三氯化铝(49mg)的THF溶液(5mL)，随后滴加化合物C48(52mg)的THF溶液(5mL)，移至室温反应1小时后，回流加热7小时，冷至室温后加水淬灭，用***和饱和酒石酸钾钠溶液萃取，有机层干燥浓缩柱层析得到化合物D48(22mg,27％)。
产物波谱数据：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(m,4H),7.44(m,5H),7.17(d,J＝20.0Hz,5H),6.17(s,1H),3.53(s,2H),3.24–2.60(m,7H),2.58(s,1H),2.55(s,1H),2.44(d,J＝10.5Hz,6H),2.16–1.81(m,11H),1.69(dd,J＝34.9,20.0Hz,12H)；HRMS(EI)calcd.for C25H32ClN3[M]+,409.2285.Found,409.2282.
实施例13：荧光偏振实验(Fluorescence Polarization,FP)测定1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的活性
在荧光偏振实验中，我们使用600nM menin蛋白和30nM异硫氰酸荧光素标记的MBM1多肽(FITC-MBM1，苏州强耀生物科技有限公司)在FP缓冲液中混合，同时加入指定终浓度的化合物，在4℃暗处孵育2h。分别以相同体积的DMSO、未标记的MBM1多肽作为阴性和阳性对照。使用PerkinElmer公司的Envision多标记微孔板检测仪测定孵育后各个样品孔的荧光强度、荧光偏振值，求得化合物的抑制率，IC50值及Ki值经GraphPad Prism5.0软件拟合荧光偏振值求得。
通过FP实验测定1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的活性。NA-无活性，IC50<10μM加粗表示，
表5
实施例14：蛋白热迁移实验证实1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物与menin蛋白直接结合
蛋白热迁移实验在20μl的反应体系中进行，2.5μM menin蛋白与化合物、5×SYPROOrange染料(Invitrogen)在缓冲液中混匀，然后在Quant Studio6Flex实时-PCR仪(ABI)上，以1℃/min的斜率，从25℃加热到95℃。为了减少蒸发，用热封膜(Thermo sciencific))将孔密封。所有样品都含有三个重复。记录荧光强度，并用蛋白热迁移软件ProteinThermal Shift Software Version 1.1(ABI)版拟合menin蛋白的Tm值。以DMSO组作为对照，计算化合物组menin蛋白Tm值的变化。测定结果见表6，其中化合物浓度为20μM。
表6蛋白热迁移实验证实多个化合物与menin蛋白的结合
结果表明，多个1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物在20μM浓度时均能使menin蛋白的融解温度升高，表明其能直接结合menin蛋白，使蛋白更稳定。图1显示了化合物D28浓度依赖性的提高menin蛋白的融解温度。
实施例15：表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)实验证实化合物D28与menin蛋白结合
SPR实验在Biacore T200仪器上，于25℃进行(GE Healthcare)。Menin蛋白用醋酸钠共价偶联至CM5芯片上。化合物用HBS-EP+缓冲液稀释一系列浓度，进行动力学实验。化合物与menin蛋白的平衡解离常数KD值经Biacore T200数据分析软件计算求得。如图2，显示了化合物D28与menin蛋白能直接结合，其平衡解离常数KD＝3.07μM。
实施例16：竞争性饱和转移差谱(STD)核磁共振实验证实化合物D28与menin蛋白结合的区域为MBM1肽段结合口袋
为了说明1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物与menin蛋白的结合区域确实为MBM1肽段在menin中的结合口袋，我们使用了饱和转移差谱(STD)核磁共振实验方法测定代表性化合物D28与MBM1的竞争性关系。在含有menin蛋白的浓度为5μM，D28为200μM(5％DMSO-D6)的体系中分别加入不同浓度的MBM1，竞争化合物与menin蛋白的结合。实验在Bruker Avance III-600MHz核磁共振仪上进行，温度为25℃。如图3，将menin蛋白与化合物D28混合，采集STD谱图，可获得较高信号值的化合物谱峰。随着竞争性多肽MBM1的加入，化合物峰值逐渐降低，且呈现浓度依赖性关系。表明1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物与MBM1多肽竞争性结合在menin蛋白的同一口袋。
实施例17：免疫共沉淀实验证明化合物D28在细胞内水平破坏menin蛋白和MLL蛋白之间的相互作用
将构建成功表达Flag-MLLN的质粒用PEI试剂(sigma)转染至293T细胞中，转染48h后用一定浓度的化合物或者等体积的DMSO处理细胞。给药12h后裂解细胞(Cell SignalingTechnology)，用ANTI-FLAG M-2(磁珠)于4℃、2h与裂解液孵育，富集Flag-MLLN蛋白。富集后的样品用磷酸盐缓冲液洗除杂蛋白后，经SDS-PAGE凝胶电泳分离，免疫印迹检测menin蛋白和Flag-MLLN蛋白。比较DMSO处理组样品与化合物处理组样品中免疫共沉淀获得的menin蛋白量。若化合物能破坏menin蛋白和MLL蛋白之间的相互作用，则其menin蛋白量将少于DMSO组。如图4，化合物D28处理细胞，在40μM、20μM时免疫共沉淀的menin蛋白量明显少于DMSO处理组，10μM时也有微弱的减少。说明化合物D28确实能在细胞水平破坏menin蛋白和MLL蛋白之间的相互作用。
至此，以化合物D28为代表，我们通过荧光偏振实验、蛋白热迁移实验、表面等离子共振实验、竞争性饱和差谱核磁共振实验以及免疫共沉淀实验，证明了1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物既能在体外实验中也能在胞内水平破坏menin与MLL蛋白的相互作用，可以作为menin-MLL相互作用界面的小分子抑制剂。
实施例18：1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物与menin蛋白的结合模式分析
为了更好理解1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物与menin蛋白口袋相互作用的细节信息，本发明者使用GLIDE软件，选择其中代表性化合物D28及D37对其与menin蛋白进行分子对接，分析其结合模式。分析结果(图5)显示，化合物D28及D37均占据menin与MBM1结合口袋的F9(MLL蛋白第9位氨基酸苯丙氨酸)和P10(MLL蛋白第10位氨基酸脯氨酸)区域，很好的模拟了MBM1与menin蛋白的结合方式。另外，化合物D37尾部的磺胺基团可能与menin蛋白M322,E326,W341,E363形成的口袋具有氢键和疏水性相互作用，因此相比于D28，化合物D37在荧光偏振实验中表现出了更优的抑制活性。
实施例19：细胞存活实验测定1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物对MLL融合型白血病细胞的增值抑制作用
本发明人选择已研究较为成熟的MLL融合型白血病细胞模型，对1,4-双取代的-1,2,3,6-四氢吡啶类化合物的细胞水平功能进行测试。
我们选择有MLL融合型蛋白的白血病细胞株MV4；11(MLL-AF4),KOPN-8(MLL-ENL),以及非MLL融合型的HL60和Jurkat细胞，选择多个重点化合物处理细胞，进行细胞增殖抑制的检测。细胞均以1×105mL-1的密度培养于96孔透明板中，用化合物或相同体积的DMSO处理细胞，处理7天后，加入AlamarBlue孵育，用PHERAstar BMG多空微型板检测仪测定各个孔的荧光强度，指示细胞活力。半增殖抑制浓度GI50值经GraphPad Prism 5.0软件拟合求得。结果表明，化合物D28能选择性的抑制MLL融合型白血病细胞MV4；11及KOPN-8的增殖，具体抑制率及GI50值，参见图6及表7。另外，多个化合物也在MV4；11细胞上表现出了较好的增殖抑制效果，见表7。
表7细胞存活率实验证实多个化合物抑制MLL融合型白血病细胞MV4；11的增殖
| Compound | GI50(μM) |
| D28 | 1.89 |
| D31 | 3.34 |
| D32 | 3.14 |
| D37 | 2.96 |
| D42 | 6.39 |
实施例20：细胞周期检测证实化合物D28将MLL融合型白血病细胞周期阻滞在G0/G1期
对于细胞周期实验，2×105/孔细胞种板于12孔板中，用相应浓度的化合物或0.2％DMSO处理48h。4℃，800g离心收集5×104个细胞并重悬于300μl预冷的PBS中，振荡滴加700μl预冷的无水乙醇，4℃固定过夜。然后离心去除乙醇，并用PBS清洗，最后加入300μlPI/RNase溶液(BD，货号：550825)重悬，室温避光孵育15min，然后在流式细胞仪上进行检测。结果见图7，与DMSO处理组的细胞样品相比，合物D28在15μM时，处于G0/G1期的细胞群所占的百分比增多，而处于S期和G2期的细胞群所占的百分比则减少。因此，化合物D28通过将MLL融合型白血病细胞阻滞在G0/G1期，从而抑制细胞的增殖。
实施例21：流式检测CD11b及瑞氏吉姆萨染色实验证实化合物D28诱导MLL融合型白血病细胞分化
3×105/孔MV4；11或KOPN-8细胞种板于12孔板中，用相应浓度的化合物或0.2％DMSO处理7或10天。为检测细胞表面分化标志物CD11b，药物处理7天后，将细胞收集，用含1％BSA的PBS洗除培养基并重悬细胞。加入PE mouse anti-human CD11b Ab(BDPhamingen)，4℃避光孵育30min，进行流式检测。对于瑞氏吉姆萨染色实验，药物处理10天后，用细胞离心涂片机Shandon cytospin3(Thermo Scientific Cytospin)将细胞离心至载玻片上。凉干后用瑞氏吉姆萨染液(Baso)对细胞涂片进行染色。
图8显示，化合物D28处理MV4；11细胞后，细胞表面分化标志物CD11b阳性的细胞比例上升，瑞氏吉姆萨染色图片显示药物处理能使细胞的核质比减小，且变化效果均呈现药物的浓度依赖性。图9显示了化合物D28对KOPN-8细胞也具有诱导分化的效果。因此，该实施例说明化合物D28能通过诱导MLL融合型白血病细胞分化，从而抑制细胞的增殖。
实施例22：实时定量PCR实验证实化合物D28能下调在MLL融合型白血病细胞中高表达的HOX基因群及基因MEIS1、DLX2
选择MV4；11细胞，用相应浓度的化合物或0.2％DMSO处理，在指定的时间点收集细胞，用Trizol试剂盒(Invitrogen)提取总RNA，并使用RevertAid First Strand cDNASynthesis Kit(Thermo Scientific)反转录合成cDNA。在样品中加入SYBR GreenRealtime PCR Master Mix(TOYOBO)，并于Quant Studio 6Flex实时定量PCR仪(ABI)上进行实时定量PCR反应，对相应靶基因进行扩增定量。图10显示了与DMSO组相比，化合物D28处理MV4；11细胞能下调在MLL融合型白血病细胞中高表达的HOX基因如HOXA9，HOXA10及基因MEIS1、DLX2。
Claims (10)
1.一种通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐：
其中，n＝1-4的整数；
R1、R2相同或不同，且分别独立地为：氢原子、羟基、卤素、C1-C10直链或支链的烷基、C1-C10直链或支链的烷氧基、C2-C10直链或支链的链烯基、C3-C10环烷基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氨基羰基C1-C6烷基、C1-C6烷基酰胺基或C5-C20的芳基；
R3和R4相同或不同，且分别独立地为：氢原子、C1-C10直链或支链的烷基、C2-C10直链或支链的链烯基、C3-C10环烷基、取代或未取代的C5-C20芳基、或者取代或未取代的五元或六元杂芳基，其中取代的C5-C20芳基或取代的五元或六元杂芳基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个；
R5为取代或未取代的C5-C12芳基、取代或未取代的五元或六元杂芳基、取代或未取代的苯并五元或六元杂芳基、或者取代或未取代的二苯并噻吩基，其中，所述取代的C5-C12芳基、取代的五元或六元杂芳基、取代的苯并五元或六元杂芳基、或者取代的二苯并噻吩基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C5-C12芳基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰胺基、氨基C1-C6直链或支链的烷基、卤素取代的苯基磺酰胺基、卤素取代的苯基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个。
2.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，其中，R1、R2相同或不同，且分别独立地为：氢原子、羟基、卤素、C1-C6直链或支链的烷基、C1-C6直链或支链的烷氧基、C2-C6直链或支链的链烯基、C3-C8环烷基、C1-C6烷基羰基、C1-C6烷氧基羰基、氨基羰基C1-C3烷基、C1-C3烷基酰胺基或C5-C10的芳基。
3.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，其中，R3和R4相同或不同，且分别独立地为：氢原子、C1-C6直链或支链的烷基、C2-C6直链或支链的链烯基、C3-C8环烷基、取代或未取代的C5-C12芳基、或者取代或未取代的五元或六元杂芳基，其中取代的C5-C12芳基或取代的五元或六元杂芳基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个。
4.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，其中，R5为取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吡啶基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的咪唑基或取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的吲唑基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的苯并呋喃基、取代或未取代的苯并噻吩基、取代或未取代的苯并噻唑基，或者取代或未取代的二苯并噻吩基，其中，上述基团中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C5-C12芳基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、氨基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰胺基、氨基C1-C6直链或支链的烷基、卤素取代的苯基磺酰胺基、卤素取代的苯基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个。
5.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，其中，R3和R4中的至少一个为取代或未取代的苯基，所述取代的苯基中的取代基选自卤素、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、三氟甲基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、C1-C6直链或支链的烷基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基中的一个或多个。
6.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，所述通式I所示的化合物具有通式II所示的结构：
其中，R1、R4和R5定义如上权利要求1中相同，
R6为氢原子、卤素、C1-C6烷基、三氟甲基、羟基、氨基、被一个或两个C1-C6直链或支链的烷基取代的氨基、C1-C6酰基取代的氨基、磺酰基氨基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基氨基、C5-C12芳基羰基、磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基磺酰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基、C1-C6直链或支链的烷基羰基氧、C1-C6直链或支链的烷氧基羰基、或者C1-C6直链或支链的烷氧基。
7.根据权利要求1所述的通式I所示的化合物或其在药学上可接受的盐，其具有如下结构：
8.一种制备权利要求1所述通式I所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
其中，n，R1、R2、R3、R4和R5的定义与权利要求1中的定义相同，
a)化合物1与化合物2发生取代反应得到化合物3；
b)化合物3发生还原反应得到化合物4；
c)化合物4发生氨基N原子上的取代反应得到通式I所示的化合物。
9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的辅料。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备作为靶向menin-MLL蛋白相互作用界面的小分子抑制剂的药物中的用途，优选地，所述抑制剂用作多种肿瘤的干扰和治疗的药物，更优选地，所述肿瘤为白血病、肝癌、脑瘤、骨髓瘤、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、***癌、膀胱癌或多发性内分泌腺癌。
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