CN107586766A - 一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用。本发明根据毕赤酵母密码子偏爱性，利用全基因合成方法获得了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中的壳聚糖酶编码基因序列，优化后的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。进一步利用毕赤酵母表达***对该所述优化的壳聚糖酶编码基因进行高效分泌表达，获得解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的壳聚糖酶对壳聚糖底物有较高的水解活性，摇瓶发酵产生的粗酶液即具有1mL(蛋白质含量约0.23mg)降解5g壳聚糖的水解能力，而降解相同量的壳聚糖约需要α‑淀粉酶150mg，理论上效率提高600倍以上；具有良好的工业应用前景。

Description

一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于壳聚糖酶技术领域，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)壳聚糖酶及其制备方法和应用。

背景技术

壳聚糖酶(Chitosanases，EC.3.2.1.132)广泛存在于古菌、细菌及真核生物中，在糖苷水解酶(Glycoside Hydrolases，GH)家族3、5、7、8、46、75及80中均有分布，其中，家族46、75及80中仅包含壳聚糖酶。在工业上，由于缺乏经济高效的特异性壳聚糖酶，往往使用蛋白酶及纤维素酶等非特异性商品酶类水解壳聚糖以制备壳寡糖。由于具有壳聚糖酶水解活性的酶类在这些商品酶中所占比例极低，用酶量较大，壳寡糖的生产成本也相应增加。因此，迫切需要研发出一系列经济高效的壳聚糖酶以满足工业壳寡糖生产的需求。

发明内容

本发明的目的是，提供一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用；旨在提供一种经济高效的特异性壳聚糖酶。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下：

本发明通过对解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶(GH46家族)编码基因的密码子进行优化，以利于其在毕赤酵母中实现分泌表达，从而高效快速的获得水解活性高的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶。

本发明提供的一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：

SEQ ID NO.1：

LEKREAEAAGLNKDQKRRAEQLTSIFENGKTEIQYGYVEALDDGRGYTCGRAGFTTATGDALEVVEVYTKAVPNNKLKKY

LPELRRLAKDESDDISNLKGFASAWRSLGNDKAFRAAQDKVNDSLYYQPAMERSENAGLKTALAKAVMYDTVIQHGDGDD

PDSFYALIKRTNKKMGGSPKDGTDEKKWLNKFLDVRYDDLMNPSDEDTQDEWRESVARVDVFRDIVKEKNYNLNGPIHVR

SSEYGNFTIQ。

本发明还提供了一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因，编码上述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶。优选地，所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示：

SEQ ID NO.2：

ctcgagaagagagaggctgaggctgctggtttgaacaaggaccaaaagagaagagctgagcaattgacttccatcttcgagaacggtaagactgagatccaatacggttacgttgaggctttggacgacggtagaggttacacttgtggtagagctggtttcactactgctactggtgacgctttggaggttgttgaggtttacactaaggctgttccaaacaacaagttgaagaagtacttgccagagttgagaagattggctaaggacgagtccgacgacatctccaacttgaagggtttcgcttccgcttggagatccttgggtaacgacaaggctttcagagctgctcaagacaaggttaacgactccttgtactaccaaccagctatggagagatccgagaacgctggtttgaagactgctttggctaaggctgttatgtacgacactgttatccaacacggtgacggtgacgacccagactccttctacgctttgatcaagagaactaacaagaagatgggtggttccccaaaggacggtactgacgagaagaagtggttgaacaagttcttggacgttagatacgacgacttgatgaacccatccgacgaggacactcaagacgagtggagagagtccgttgctagagttgacgttttcagagacatcgttaaggagaagaactacaacttgaacggtccaatccacgttagatcctccgagtacggtaacttcactatccaataagcggccgcg。

本发明还提供了包含上述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因的重组表达载体。

优选地，所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：

通过对表达载体pPIC9中的信号肽序列(详见SEQ ID NO.4所示)进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的新的信号肽序列(详见SEQ ID NO.5所示)，并利用Nsi I/XhoI双酶切将SEQ ID NO.5所示的信号肽序列替代原先的SEQ ID NO.4所示信号肽，得到表达载体pGBG1。该表达载体pGBG1能够使目的蛋白在毕赤酵母中更高效的分泌表达。

其中，表达载体pPIC9和毕赤酵母细胞GS115均为商业化产品。

本发明所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法为：将上述的重组表达载体(例如，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的壳聚糖酶基因构建至表达载体中)导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的壳聚糖酶。优选地，所述毕赤酵母细胞为GS115。

进一步地，本发明所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶的具体制备步骤包括：(1)根据毕赤酵母密码子使用的偏好性，对来源于解淀粉芽孢杆菌的壳聚糖酶基因原始序列进行密码子优化；(2)将优化后的基因进行全合成并构建至表达载体pGBG1中；(3)对构建的表达载体进行酶切线性化后，舍弃含有抗性基因的片段，回收含有壳聚糖酶基因的片段并导入毕赤酵母细胞GS115中，诱导并获得分泌表达的壳聚糖酶。

利用诱导表达的壳聚糖酶粗酶上清对壳聚糖底物进行水解并使用MALDI-TOF质谱方法对产物的聚合度及组成进行分析。结果表明，本发明所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶可单独用于壳聚糖的降解制备壳寡糖；或者所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶与除解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶外的其他壳聚糖酶或几丁质酶混合使用，协同降解壳聚糖或几丁质。

本发明还提供了上述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶在壳聚糖或几丁质降解中的应用。优选地，解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶单独用于壳聚糖降解制备获得壳寡糖；或者所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶与其他几丁质酶或壳聚糖酶混合使用，协同降解壳聚糖或几丁质。

本申请的发明人前期在多种食品级商品酶中筛选具有壳聚糖水解酶活性的酶制剂时发现，α-淀粉酶具有较好的壳聚糖水解活性(1g粗酶干粉约可彻底水解30g壳聚糖)。我们推测，可能是α-淀粉酶的生产菌种，如解淀粉芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌等，在发酵过程中产生了壳聚糖酶。因此，为获得更安全高效的壳聚糖酶用于降解壳聚糖或几丁质，我们选取一个来源于解淀粉芽孢杆菌属于糖苷水解酶46家族的壳聚糖酶，根据毕赤酵母密码子的偏好性，通过全基因合成方法获得其编码基因并在毕赤酵母中进行分泌表达。表达的壳聚糖酶能够替代现有的商品α-淀粉酶用于壳寡糖或几丁寡糖等的规模生产。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1.本发明的壳聚糖酶基因来源于解淀粉芽孢杆菌，使用巴斯德毕赤酵母表达***分泌表达。解淀粉芽孢杆菌已被用于食品用酶制剂α-淀粉酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶等的制备，其来源的酶类安全性有保障，而巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达***也已被用于乳糖酶及磷脂酶C等食品级酶制剂的表达，其自身也被用于木聚糖酶的生产(GB2760-2014)。因此，使用解淀粉芽孢杆菌来源的壳聚糖酶基因在毕赤酵母中分泌表达，其产物壳聚糖酶可成为食品级壳寡糖或几丁寡糖的生产用酶制剂。

2.本发明根据毕赤酵母密码子偏爱性，利用全基因合成方法获得了解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中的壳聚糖酶编码基因序列，优化后的核酸序列如SEQID NO.2所示。进一步利用毕赤酵母表达***对该所述优化的壳聚糖酶编码基因进行高效分泌表达，获得解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明获得的壳聚糖酶对壳聚糖底物有较高的水解活性，经活性测定及换算，摇瓶发酵产生的粗酶液即具有1mL粗酶液(蛋白质含量约0.23mg)降解5g壳聚糖的水解能力，而降解相同量的壳聚糖约需要α-淀粉酶150mg，理论上效率提高600倍以上。因此，与商品α-淀粉酶相比，本发明分泌表达的壳聚糖酶效率提高超过600倍，具有替代现有商品酶用于规模制备壳寡糖的巨大应用潜力，具有良好的工业应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例中的重组表达载体bacsn-pGBG1及其酶切产物凝胶电泳图谱；

图2为本发明实施例中含解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因的毕赤酵母工程菌发酵液上清的SDS-PAGE图谱，其中，箭头所指为目标产物；

图3为本发明实施例中壳寡糖COS-94-BACSN的高效液相色谱图；

图4为本发明实施例中壳寡糖COS-62-BACSN的MALDI-TOF质谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细说明。以下采用的试剂和生物材料如未特别说明，均为商业化产品。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。

实施例1壳聚糖酶基因的密码子优化及全基因合成

在不改变氨基酸序列的前提下，使用毕赤酵母的偏爱密码子，人工优化了解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶(GH46家族)(如序列SEQ ID NO.1所示，GenBank accession number:ABS75305.1)的编码基因，具体核苷酸序列见SEQ ID NO.2。优化后的核苷酸序列与原始潜在壳聚糖酶编码基因序列，如序列SEQ ID NO.3所示，GenBank accession number:CP000560.1(3093420-3094256)，同源性最高，为74％。优化后的基因序列委托生工进行全合成，合成获得的基因序列命名为壳聚糖酶基因bacsn。

实施例2壳聚糖酶基因bacsn的表达载体构建

首先使用限制性内切酶Xho I及Not I对含有壳聚糖酶基因bacsn的克隆载体进行双酶切，获得目的基因片段，同时使用相同的内切酶对表达载体pGBG1进行双酶切，回收大片段。两个回收产物进行连接，获得重组载体，命名为bacsn-pGBG1。为确定目标壳聚糖酶基因已经构建至载体中，我们分别使用Xho I/Not I及Bgl II对该重组载体进行双酶切及单酶切，并对产物进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图1所示：经双酶切后，在750bp和1000bp之间出现了目的基因片段，与bacsn的片段762bp相符；经Bgl II酶切后，出现了预期的两个片段，依次为含有目的基因的大片段和含有抗性基因的小片段。

实施例3壳聚糖酶毕赤酵母工程菌的筛选及壳聚糖酶制备

将获得的重组质粒bacsn-pGBG1经限制性内切酶BglII线性化后，凝胶电泳分离并切取含有目的基因的核苷酸片段(如图1所示的较大的片段)，电击导入毕赤酵母GS115中，将通过组氨酸营养缺陷MD平板上筛选得到的重组子平铺在含有胶体壳聚糖(0.5％)的BMMY琼脂平板上进行培养，从中筛选出水解圈最大的单克隆菌株。将筛选的单克隆菌株的单菌落接种于200mL BMGY培养基中，30℃及250rpm下培养48小时，离心弃上清，加入等量的BMMY进行诱导表达。24h后补加甲醇至其终浓度为1％，以后每隔24h补加一次，共计诱导120h后离心，上清液即为含有壳聚糖酶(记为壳聚糖酶BACSN)的粗酶液。使用SDS-PAGE检测蛋白表达情况，其结果如图2所示。Bradford法测定粗酶液中的蛋白质浓度为0.23mg/mL；DNS法测定其比酶活为52.2U/mL。上述的MD琼脂平板、BMMY琼脂平板、BMGY培养基、BMMY培养基为酵母表达***常用的培养基，可直接购买或者按照现有文献技术配制均可。

实施例4壳聚糖酶BACSN水解高脱乙酰度壳聚糖制备壳寡糖

称取50g壳聚糖(脱乙酰度：94％)，加至1000mL 1.5％乙酸水溶液中，pH 5-6。充分溶解后，加入10mL发酵的壳聚糖酶BACSN粗酶液，40℃下搅拌反应48小时。反应结束后，离心去除不容物，上清经旋转蒸发仪在40℃下浓缩至约300mL，后经冷冻干燥得成品壳寡糖，命名为COS-94-BACSN。称取一定量制备的壳寡糖COS-94-BACSN，配置成浓度为20mg/mL的水溶液，过滤后用于高效液相色谱分析。高效液相色谱仪连接蒸发光散射检测器用于壳寡糖的信号检测，使用XAmide色谱柱(华谱新创科技有限公司)对壳寡糖进行分离，乙腈浓度递减(70％-50％)方式洗脱，柱温为30℃，检测器气压23psi，流速：1mL/min。流动相为0.1M甲酸胺(pH3.2)、乙腈及水溶液。洗脱时间：40min。结果如图3所示，从图3可以看出，得到的壳寡糖产物为聚合度2-7的壳寡糖。

实施例5壳聚糖酶BACSN水解低脱乙酰度壳聚糖制备壳寡糖

称取50g壳聚糖(脱乙酰度：62％)，加至1000mL 1.5％乙酸水溶液中，(pH 5-6)。充分溶解后，加入10mL发酵的壳聚糖酶BACSN粗酶液，40℃下搅拌反应48小时。反应结束后，离心去除不容物，上清经旋转蒸发仪在40℃下浓缩至约300mL，后经冷冻干燥得成品壳寡糖命名为COS-62-BACSN。由于该产物组分较为复杂，难以通过液相对组分进行有效分离，因此采用MALDI-TOF质谱方法对其组分进行分析。具体方法为：称取一定量制备的COS-62-BACSN，配制成浓度为2mg/mL的水溶液，过滤后吸取1μL点样至样品板上，待其自然干燥后，加入1μL基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB)溶液，待其干燥后使用autoflexⅢsmartbeam型MALDI-TOF质谱仪(Bruker公司)进行检测(正离子反射模式)。质谱检测结果如图4所示：为便于区分，以A代表N-乙酰氨基葡萄糖，D代表氨基葡萄糖，随后的数字代表含有该单糖的个数，二者加和为寡糖的聚合度。从图4的结果来看，低脱乙酰度壳寡糖COS-62-BACSN组分较复杂：质谱方法可检测到聚合度2-15的寡糖，且同一个聚合度下存在不同乙酰度的壳寡糖。

最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制。尽管参照实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

序列表

<110> 中国科学院过程工程研究所

<120> 一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 250

<212> PRT

<213> artificial

<400> 1

Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala Ala Gly Leu Asn Lys Asp Gln Lys

1 5 10 15

Arg Arg Ala Glu Gln Leu Thr Ser Ile Phe Glu Asn Gly Lys Thr Glu

20 25 30

Ile Gln Tyr Gly Tyr Val Glu Ala Leu Asp Asp Gly Arg Gly Tyr Thr

35 40 45

Cys Gly Arg Ala Gly Phe Thr Thr Ala Thr Gly Asp Ala Leu Glu Val

50 55 60

Val Glu Val Tyr Thr Lys Ala Val Pro Asn Asn Lys Leu Lys Lys Tyr

65 70 75 80

Leu Pro Glu Leu Arg Arg Leu Ala Lys Asp Glu Ser Asp Asp Ile Ser

85 90 95

Asn Leu Lys Gly Phe Ala Ser Ala Trp Arg Ser Leu Gly Asn Asp Lys

100 105 110

Ala Phe Arg Ala Ala Gln Asp Lys Val Asn Asp Ser Leu Tyr Tyr Gln

115 120 125

Pro Ala Met Glu Arg Ser Glu Asn Ala Gly Leu Lys Thr Ala Leu Ala

130 135 140

Lys Ala Val Met Tyr Asp Thr Val Ile Gln His Gly Asp Gly Asp Asp

145 150 155 160

Pro Asp Ser Phe Tyr Ala Leu Ile Lys Arg Thr Asn Lys Lys Met Gly

165 170 175

Gly Ser Pro Lys Asp Gly Thr Asp Glu Lys Lys Trp Leu Asn Lys Phe

180 185 190

Leu Asp Val Arg Tyr Asp Asp Leu Met Asn Pro Ser Asp Glu Asp Thr

195 200 205

Gln Asp Glu Trp Arg Glu Ser Val Ala Arg Val Asp Val Phe Arg Asp

210 215 220

Ile Val Lys Glu Lys Asn Tyr Asn Leu Asn Gly Pro Ile His Val Arg

225 230 235 240

Ser Ser Glu Tyr Gly Asn Phe Thr Ile Gln

245 250

<210> 2

<211> 762

<212> DNA

<213> artificial

<400> 2

ctcgagaaga gagaggctga ggctgctggt ttgaacaagg accaaaagag aagagctgag 60

caattgactt ccatcttcga gaacggtaag actgagatcc aatacggtta cgttgaggct 120

ttggacgacg gtagaggtta cacttgtggt agagctggtt tcactactgc tactggtgac 180

gctttggagg ttgttgaggt ttacactaag gctgttccaa acaacaagtt gaagaagtac 240

ttgccagagt tgagaagatt ggctaaggac gagtccgacg acatctccaa cttgaagggt 300

ttcgcttccg cttggagatc cttgggtaac gacaaggctt tcagagctgc tcaagacaag 360

gttaacgact ccttgtacta ccaaccagct atggagagat ccgagaacgc tggtttgaag 420

actgctttgg ctaaggctgt tatgtacgac actgttatcc aacacggtga cggtgacgac 480

ccagactcct tctacgcttt gatcaagaga actaacaaga agatgggtgg ttccccaaag 540

gacggtactg acgagaagaa gtggttgaac aagttcttgg acgttagata cgacgacttg 600

atgaacccat ccgacgagga cactcaagac gagtggagag agtccgttgc tagagttgac 660

gttttcagag acatcgttaa ggagaagaac tacaacttga acggtccaat ccacgttaga 720

tcctccgagt acggtaactt cactatccaa taagcggccg cg 762

<210> 3

<211> 837

<212> DNA

<213> artificial

<400> 3

atgaaaatca gcttgaagaa aaaagcaggt ttttggaaga agacggcggt ttcgtcactt 60

attttcacca tgttttttac cctgatgatg agcggtacgg tttttgcggc cgggctgaat 120

aaggatcaga agcgccgggc ggaacagctg accagcatct ttgaaaacgg aaagacggaa 180

atccaatacg gatatgttga agcgttggat gatggaagag gttacacttg cgggcgggcc 240

ggctttacga cggctaccgg agatgcgctg gaagtagtcg aagtatacac gaaagcggtg 300

ccgaataaca aattgaaaaa gtatttgcct gaattgcggc gtcttgcgaa ggacgaaagc 360

gatgacatca gcaatttgaa aggattcgct tctgcctggc gctcacttgg caatgataaa 420

gccttccgcg ctgcccagga taaggtaaat gacagcttgt attatcagcc ggcgatggaa 480

cgttcagaaa atgccggact gaaaacggcc ttggcaaaag cagtgatgta cgatacggtg 540

attcagcatg gcgacggcga tgatccagac tccttttatg ccctgattaa acgcacgaac 600

aaaaaaatgg gcgggtcacc gaaagacgga actgacgaga agaaatggct caataaattc 660

ttggatgtgc gctatgacga tctgatgaat ccgtcagatg aggacaccca ggatgaatgg 720

agagaatcgg ttgcccgtgt cgacgttttc cgcgatattg tcaaagagaa gaactacaat 780

ttaaacgggc cgattcatgt ccggtcaagc gaatacggta atttcactat tcaataa 837

<210> 4

<211> 525

<212> DNA

<213> artificial

<400> 4

atgcattgtc tccacattgt atgcttccaa gattctggtg ggaatactgc tgatagccta 60

acgttcatga tcaaaattta actgttctaa cccctacttg acagcaatat ataaacagaa 120

ggaagctgcc ctgtcttaaa cctttttttt tatcatcatt attagcttac tttcataatt 180

gcgactggtt ccaattgaca agcttttgat tttaacgact tttaacgaca acttgagaag 240

atcaaaaaac aactaattat tcgaaggatc caaacgatga gatttccttc aatttttact 300

gcagttttat tcgcagcatc ctccgcatta gctgctccag tcaacactac aacagaagat 360

gaaacggcac aaattccggc tgaagctgtc atcggttact cagatttaga aggggatttc 420

gatgttgctg ttttgccatt ttccaacagc acaaataacg ggttattgtt tataaatact 480

actattgcca gcattgctgc taaagaagaa ggggtatctc tcgag 525

<210> 5

<211> 526

<212> DNA

<213> artificial

<400> 5

atgcattgtc tccacattgt atgcttccaa gattctggtg ggaatactgc tgatagccta 60

acgttcatga tcaaaattta actgttctaa cccctacttg acagcaatat ataaacagaa 120

ggaagctgcc ctgtcttaaa cctttttttt tatcatcatt attagcttac tttcataatt 180

gcgactggtt ccaattgaca agcttttgat tttaacgact tttaacgaca acttgagaag 240

atcaaaaaac aactaattat tcgaaacgat ggctatccca agattcccat ccatcttcac 300

tgctgttttg ttcgctgctt cctccgcttt ggctgctcca gttaacacta ctactgagga 360

cgagactgct caaatcccag ctgaggctgt tatcggttac tccgacttgg agggtgactt 420

cgacgttgct gttttgccat tctccaactc cactaacaac ggtttgttgt tcatcaacac 480

tactatcgct tccatcgctg ctaaggagga gggtgtttcc ctcgag 526

Claims (9)

1.一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶。

3.根据权利要求2所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.包含权利要求2或3所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶基因的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于：所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：

将表达载体pPIC9中的如SEQ ID NO.4所示信号肽序列进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的如SEQ ID NO.5所示信号肽序列；

利用Nsi I/Xho I双酶切，将表达载体pPIC9中的如SEQ ID NO.4所示的信号肽序列替换为如SEQ ID NO.5所示的信号肽序列，得到表达载体pGBG1。

6.一种权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将权利要求4或5所述的重组表达载体导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于：所述毕赤酵母细胞为GS115。

8.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶在壳聚糖或几丁质降解中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶单独用于壳聚糖降解制备获得壳寡糖；或者所述解淀粉芽孢杆菌壳聚糖酶与其他几丁质酶或壳聚糖酶混合使用，协同降解壳聚糖或几丁质。