CN107502678A - 一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置,该方法包括:取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本;以获得的DNA样本为模板进行PCR扩增;对PCR扩增产物进行纯化;将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落;选取饱满的单菌落接种于培养液中振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析;将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准样品浓度与临界循环数对应的标准曲线;取步骤一中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR测定获得待测样本,根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置,特别是涉及一种利用藻毒素产毒基因检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置。
背景技术
湖泊水体富营养化会引发蓝藻水华的爆发,蓝藻水华已成为我国乃至世界所面临的重大环境污染问题之一。蓝藻水华中有部分蓝藻能产生藻毒素,例如铜绿微囊藻,铜绿微囊藻是水体中最为常见的蓝藻,它是水体中的初级生产者,在水环境中发挥着重要的作用。铜绿微囊藻可以产生微囊藻毒素(microcystin,MC),它是一种环状的寡肽肝毒素,在全世界很多国家的天然水体中都能检测到微囊藻毒素。微囊藻毒素(microcystin,MC)影响浮游植物、无脊椎动物和脊椎动物的生长。MC可以导致水体内细菌、原生动物和其他浮游植物(包括硅藻和绿藻)中毒,抑制它们生长繁殖,改变食物链结构,使得铜绿微囊藻成为优势藻种。MC不仅对水体中其他生物具有危害作用,而且还对湖泊、河流生态、牲畜和人类水源供给带来负面影响,研究表明,生活在蓝藻水华高发地区的人群,肝癌发病率要明显高于其他地区,因此,针对产微囊藻毒素蓝藻的检测的研究已成为环保领域的研究热点。
通过形态学观察等传统微生物方法来区分产毒和不产毒蓝藻是极其困难的。现有研究结果表明,MC由微囊藻毒素基因簇(microcystin synthetase gene clusters,mcy)编码生成,基因簇位于染色体上,包含由10个基因组成的两个方向相反的操纵子,除了基因mcyA和mcyB,基因mcyD也参与了MC的编码合成,其中基因mcyD参与编码合成MC的Adda(Adda是微囊藻毒素毒性表达所必需的基团),而Adda与MC的毒性密切相关,每个产MC的蓝藻中只有一个mcyD的基因拷贝,因此可以通过检测mcyD基因的拷贝数来检测产微囊藻毒素蓝藻。
现有技术一般采用PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)技术扩增mcyD片段来实现产毒蓝藻的检测,但是采用一般的PCR技术扩增mcyD片段只能定性区分蓝藻是否产微囊藻毒素,不能定量检测水体中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
发明内容
为克服上述现有技术存在的不足,本发明之目的在于提供一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置,以提供一种操作简便、易于掌握并可快速准确的测定地表水中产微囊藻毒素蓝藻的浓度的产微囊藻毒素蓝藻的定量检测技术。
为达上述及其它目的,本发明提出一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,包括如下步骤:
步骤一,取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本;
步骤二,以步骤一获得的DNA样本为模板进行PCR扩增;
步骤三,对PCR扩增产物进行纯化;
步骤四,将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落;
步骤五,选取饱满的单菌落接种于培养液中,并振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析;
步骤六,将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线;
步骤七,取步骤一中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR测定获得待测样本,根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。
进一步地,于步骤二中,采用PCR反应体系为50μL,引物信息为:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’,下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’;反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟;最后通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物。
进一步地,于步骤三中,利用DNA胶回收试剂盒进行胶回收,对PCR扩增产物进行纯化,并通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功。
进一步地,于步骤四中,将经步骤三纯化后的DNA***质粒载体中,并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液,然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上,通过蓝白斑筛选,挑选转化了质粒的白色菌落。
进一步地,于步骤五中,选取饱满的单菌落接种于含有Amp的液体LB培养液中,于37℃、200转/分钟振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析。
进一步地,步骤七进一步包括:
加入实时定量PCR所需试剂,反应体系为20μL,2μLDNA样品;
设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照;
进行实时定量PCR反应,进行PCR扩增;
反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,并分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
进一步地,于步骤七中,采用两步法进行PCR扩增,反应条件为:预变性,1个循环,95℃30秒;PCR反应,40个循环,95℃5秒,60℃30秒。
为达到上述目的,本发明还提供一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置,包括:
DNA样本提取单元,用于通过取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本;
PCR扩增单元,以所述DNA样本提取单元获得的DNA样本为模板进行PCR扩增;
纯化单元,用于对PCR扩增产物进行纯化;
质粒转化单元,用于将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落;
鉴定分析单元,用于选取饱满的单菌落接种于培养液中,并振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析;
标准曲线建立单元,用于将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线;
定量PCR检测单元,用于取所述DNA样本提取单元得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR测定获得待测样本,根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。
进一步地,所述PCR扩增单元采用PCR反应体系为50μL,引物信息为:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’,下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’;反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟;最后通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物。
进一步地,所述定量PCR检测单元通过如下步骤实现:
加入实时定量PCR所需试剂,反应体系为20μL,2μLDNA样品;
设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照;
进行实时定量PCR反应,进行PCR扩增;
反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,并分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
与现有技术相比,本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置通过设计微囊藻毒素合成酶基因mcyD的引物,提取待检测样本的DNA,进行定量PCR检测,根据标准曲线计算出待测样本的mcyD基因的拷贝数和产微囊藻毒素蓝藻的浓度,实现了一种操作简便、易于掌握且可以快速准确的测定地表水中产微囊藻毒素蓝藻的浓度的产微囊藻毒素蓝藻检测技术。
附图说明
图1为本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法的步骤流程图;
图2为本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置的***架构图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例并结合附图说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其它优点与功效。本发明亦可通过其它不同的具体实例加以施行或应用,本说明书中的各项细节亦可基于不同观点与应用,在不背离本发明的精神下进行各种修饰与变更。
图1为本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法的步骤流程图。如图1所示,本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,包括如下步骤:
步骤101,取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本。
步骤102,以步骤101获得的DNA样本为模板进行PCR扩增。具体地,PCR反应体系为50μL,引物信息如下:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’。反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟。通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认产物。
步骤103,对PCR扩增产物进行纯化:利用DNA胶回收试剂盒(例如Axygen的DNA柱式胶回收试剂盒)进行胶回收,对PCR扩增产物进行纯化,通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功;
步骤104,将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落。具体地,将步骤103中纯化后的DNA***质粒载体pMD18-T中,并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液,然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上,通过蓝白斑筛选,挑选转化了质粒的白色菌落;
步骤105,选取饱满的单菌落(即挑选步骤104中转化好的单个白色菌落)接种于含有Amp的液体LB培养液中,于37℃、200转/分钟振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析,在本发明具体实施例中,步骤105通过PCR方法和公司测序进行鉴定和测序分析,具体地,将挑取的单个白色菌落扩大培养,以此为模板进行PCR扩增,然后将PCR扩增产物进行电泳分析,观察目的片段大小,确认是否将目的片段成功转入到质粒中,同时将PCR产物胶回收纯化,送去测序,以进一步验证目的片段是否成功转入到质粒中;
步骤106,将经过鉴定分析的步骤104中的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,进行梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线;
步骤107,取步骤101中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR的测定获得待测样本,根据标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。具体地,加入实时定量PCR所需试剂(例如按照Premix Ex TaqTM试剂盒说明进行操作),反应体系为20μL,2μLDNA样品,同时设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照,进行实时定量PCR反应(例如应用ABI公司的Stepone plus Detection System),采用两步法进行PCR扩增,反应条件为:预变性,1个循环,95℃30秒;PCR反应,40个循环,95℃5秒,60℃30秒;反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,进而分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
以下将通过一具体实施例来进一步说明本发明的检测过程:
1)取7月、8月和9月地表水水样进行产微囊藻毒素蓝藻的定量分析。水样经过微孔过滤后,将滤膜保存至-20℃,用于后续实验分析。实验结束后进行总DNA提取纯化,得到DNA样本。
2)以步骤1)中的DNA样本为模板进行PCR扩增,反应体系为50μL。引物信息如下:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’、下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’。反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟。通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认产物;
3)对目标基因(即PCR扩增产物)进行纯化:利用Axygen的DNA柱式胶回收试剂盒进行胶回收,对目标基因进行纯化,通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功;
4)质粒转化过程:将步骤3)中纯化后的DNA***质粒载体pMD18-T中,并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液,然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上,通过蓝白斑筛选,挑选转化了质粒的白色菌落;
5)选取饱满的单菌落接种于含有Amp的液体LB培养液中,于37℃、200转/分钟振荡培养过夜,用于菌液PCR鉴定和测序分析;
6)将经过鉴定分析的步骤4)中的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线y=-0.3123x+14.002,R2=0.9961;
7)取步骤1)中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR的测定获得待测样本,根据标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。按照Premix Ex TaqTM试剂盒说明进行操作,加入实时定量PCR所需试剂,反应体系为20μL,2μLDNA样品。同时设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照。应用ABI公司的Stepone plus Detection System进行实时定量PCR反应,采用两步法进行PCR扩增,反应条件为:预变性,1个循环,95℃30秒;PCR反应,40个循环,95℃5秒,60℃30秒;反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数(见表1),从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,进而分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
表1水样中产微囊藻毒素基因mcyD的拷贝数
图2为本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置的***架构图。如图2所示,本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置,包括:DNA样本提取单元201、PCR扩增单元202、纯化单元203、质粒转化单元204、鉴定分析单元205、标准曲线建立单元206以及定量PCR检测单元207。
DNA样本提取单元201,用于通过取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本。
PCR扩增单元202,用于以DNA样本提取单元201获得的DNA样本为模板进行PCR扩增。具体地,PCR反应体系为50μL,引物信息如下:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’。反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟。通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认产物。
纯化单元203,用于对PCR扩增产物进行纯化。在本发明具体实施例中,纯化单元203利用DNA胶回收试剂盒(例如Axygen的DNA柱式胶回收试剂盒)进行胶回收,对PCR扩增产物进行纯化,并通过1.5%(wt/vol)的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功。
质粒转化单元204,用于将纯化后的DNA进行质粒转化,获得转化了质粒的白色菌落。具体地,将纯化单元203纯化后的DNA***质粒载体pMD18-T中,并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液,然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上,通过蓝白斑筛选,挑选转化了质粒的白色菌落。
鉴定分析单元205,用于选取饱满的单菌落(即挑选质粒转化单元204中转化好的单个白色菌落)接种于含有Amp的液体LB培养液中,于37℃、200转/分钟振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析,在本发明具体实施例中,鉴定分析单元205通过PCR方法和公司测序进行鉴定和测序分析,具体地,鉴定分析单元205将挑取的单个白色菌落扩大培养,以此为模板进行PCR扩增,然后将PCR扩增产物进行电泳分析,观察目的片段大小,确认是否将目的片段成功转入到质粒中,同时将PCR产物胶回收纯化,送去测序,以进一步验证目的片段是否成功转入到质粒中;
标准曲线建立单元206,用于将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,进行梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线。
定量PCR检测单元207,用于取DNA样本提取单元201中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR的测定获得待测样本,根据标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。具体地,定量PCR检测单元207加入实时定量PCR所需试剂(例如按照Premix Ex TaqTM试剂盒说明进行操作),反应体系为20μL,2μLDNA样品,同时设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照,进行实时定量PCR反应(例如应用ABI公司的Stepone plus Detection System),采用两步法进行PCR扩增,反应条件为:预变性,1个循环,95℃30秒;PCR反应,40个循环,95℃5秒,60℃30秒;反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,进而分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
综上所述,本发明一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法及装置通过设计微囊藻毒素合成酶基因mcyD的引物,提取待检测样本的DNA,进行定量PCR检测,根据标准曲线计算出待测样本的mcyD基因的拷贝数和产微囊藻毒素蓝藻的浓度,实现了一种操作简便、易于掌握且可以快速准确的测定地表水中产微囊藻毒素蓝藻的浓度的产微囊藻毒素蓝藻检测技术。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何本领域技术人员均可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰与改变。因此,本发明的权利保护范围,应如权利要求书所列。
Claims (10)
1.一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,包括如下步骤:
步骤一,取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本;
步骤二,以步骤一获得的DNA样本为模板进行PCR扩增;
步骤三,对PCR扩增产物进行纯化;
步骤四,将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落;
步骤五,选取饱满的单菌落接种于培养液中,并振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析;
步骤六,将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线;
步骤七,取步骤一中得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR测定获得待测样本,根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。
2.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于:于步骤二中,采用PCR反应体系为50μL,引物信息为:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’,下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’;反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟;最后通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物。
3.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于:于步骤三中,利用DNA胶回收试剂盒进行胶回收,对PCR扩增产物进行纯化,并通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认回收是否成功。
4.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于:于步骤四中,将经步骤三纯化后的DNA***质粒载体中,并进一步转化到DH5α感受态大肠杆菌溶液,然后涂布到加入Amp抗性的LB固体培养基上,通过蓝白斑筛选,挑选转化了质粒的白色菌落。
5.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于:于步骤五中,选取饱满的单菌落接种于含有Amp的液体LB培养液中,于37℃、200转/分钟振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析。
6.如权利要求1所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于,步骤七进一步包括:
加入实时定量PCR所需试剂,反应体系为20μL,2μLDNA样品;
设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照;
进行实时定量PCR反应,进行PCR扩增;
反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,并分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
7.如权利要求6所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的方法,其特征在于:于步骤七中,采用两步法进行PCR扩增,反应条件为:预变性,1个循环,95℃30秒;PCR反应,40个循环,95℃5秒,60℃30秒。
8.一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置,包括:
DNA样本提取单元,用于通过取地表水水样,经过微孔过滤后,将滤膜进行总DNA提取纯化,得到DNA样本;
PCR扩增单元,以所述DNA样本提取单元获得的DNA样本为模板进行PCR扩增;
纯化单元,用于对PCR扩增产物进行纯化;
质粒转化单元,用于将纯化后的DNA进行质粒转化过程,获得转化了质粒的白色菌落;
鉴定分析单元,用于选取饱满的单菌落接种于培养液中,并振荡培养过夜,以用于菌液PCR鉴定和测序分析;
标准曲线建立单元,用于将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒,测定质粒浓度后,梯度稀释,将稀释后的质粒作为标准样品,建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线,即得到标准曲线;
定量PCR检测单元,用于取所述DNA样本提取单元得到的DNA样本作为模板,进行定量PCR测定获得待测样本,根据所述标准曲线确定待测样本中的DNA浓度。
9.如权利要求8所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置,其特征在于:所述PCR扩增单元采用PCR反应体系为50μL,引物信息为:上游引物5’-GCCCACAAAACCCCAACTC-3’,下游引物5’-TTTCTGCCTAATCTTTTCCCCTCT-3’;反应程序为:95℃预变性5分钟,随后94℃30秒,退火温度60℃40秒和72℃延伸40秒,进行30个循环,最终72℃延伸10分钟;最后通过1.5%的琼脂糖凝胶电泳确认PCR扩增产物。
10.如权利要求8所述的一种检测产微囊藻毒素蓝藻的装置,其特征在于,所述定量PCR检测单元通过如下步骤实现:
加入实时定量PCR所需试剂,反应体系为20μL,2μLDNA样品;
设置进行阴性对照和阳性对照,以去离子水作为阴性对照,以产微囊藻毒素蓝藻的DNA作为阳性对照;
进行实时定量PCR反应,进行PCR扩增;
反应结束后,将DNA样本的循环阈值Ct与标准曲线对照,计算DNA样本的mcyD基因的拷贝数,从而得到原水中mcyD基因的拷贝数,并分析得到水样中产微囊藻毒素蓝藻的浓度。
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