CN107236786A - 一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法 - Google Patents

一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，该肌酸激酶检测试剂盒包括有由试剂1和试剂2的液体双试剂组成，包括以下步骤：分别配制浓度为100mmol/L‑200mmol/L浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，在试剂1的溶剂中先加入1mmol/L‑10mmol/L的4‑氨基安替比林和色原，充分混合直至完全溶解，再加酶保护剂，之后加入20KU/L‑40KU/L的肌酸酶、8KU/L‑16KU/L的肌氨酸氧化酶、10KU/L‑20KU/L的过氧化物酶；在试剂2的溶剂中先加入260mmol/L‑410mmol/L的磷酸肌酸、1.5mmol/L‑3.2mmol/L的二磷酸腺苷，完全溶解后加入活剂，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L‑1.0g/L的防腐剂NaN3，2‑8℃密封分别保存。本发明的优点是所制备的试剂盒重复性好、准确度高、稳定性好。

Description

一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法
技术领域
本发明属于生物制剂领域，具体是指一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法。
背景技术
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。肌酸激酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常。肌酸激酶因其具有重要的生理功能和临床应用价值已引起人们广泛的重视和深入的研究，临床上主要用于心肌梗死、病毒性心肌炎的辅助诊断。
目前检测肌酸激酶(CK)总活性的方法有比色法、酶偶联法、荧光法和生物发光法，其中比色法及酶偶联法更常用。酶偶联法多采用辅酶指示***，如CN 101063111 B(2010.08.25)、CN 1904062 B(2010.11.24)、CN 1916623 B(2013.05.29)、CN 103173519 B(2014.07.02)、CN 104374905 B(2016.03.30)、CN 104357544 A(2015.02.18)。但是这些方案均存在不能有效消除内源性肌酸干扰，影响检测精度。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，通过该法可稳定地制备一种重复性好、准确度高、稳定性好的肌酸激酶检测试剂盒。
为实现上述目的，本发明的技术方案是该肌酸激酶检测试剂盒包括有由试剂1和试剂2的液体双试剂组成，包括以下步骤：
分别配制浓度为100mmol/L-200mmol/L浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应(如果Na2HPO4溶液的浓度是100mmol/L，则KH2PO4溶液也用100mmol/L；如果Na2HPO4溶液的浓度是200mmol/L，则KH2PO4溶液也用200mmol/L)调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将对应相同浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入1mmol/L-10mmol/L的4-氨基安替比林和色原，充分混合直至完全溶解，再加酶保护剂，之后加入20KU/L-40KU/L的肌酸酶、8KU/L-16KU/L的肌氨酸氧化酶、10KU/L-20KU/L的过氧化物酶(POD)；在试剂2中先加入260mmol/L-410mmol/L的磷酸肌酸(CrP)、1.5mmol/L-3.2mmol/L的二磷酸腺苷，完全溶解后加入活剂，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L-1.0g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封分别保存。
进一步设置是所述的色原1mmol/L-10mmol/L，该色原为3,5-二氯-2-羟基苯磺酸、N-乙基-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺、N-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺、2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸、4-氯酚、2,4二氯酚或苯酚中的任意一种。
进一步设置是色原为2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸，其浓度为6mmol/L。
进一步设置是所述的酶保护剂为液体酶保护剂，其添加量为1mL-3mL/100mL；或者所述的酶保护剂为固体酶保护剂，其含量为1g-3g/100mL。
进一步设置是液体酶保护剂为脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、烷基酚聚氧乙烯(10)醚，单位为1mL-3mL/100mL；所述的固体酶保护剂为果糖、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、月桂酸聚氧乙烯(9)酯，单位为1g-3g/100mL。
进一步设置是所述酶保护剂为果糖与表面活性剂的组合物，其中表面活性剂可选自脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、月桂酸聚氧乙烯(9)酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、烷基酚聚氧乙烯(10)醚中的一种或多种。
进一步设置是酶保护剂果糖和月桂酸聚氧乙烯(9)酯1:1质量比组合。
进一步设置是所述激活剂为醋酸镁与巯基试剂的组合物，其中巯基试剂选自N-乙酰半胱氨酸、巯基甘油、二硫苏糖醇、二硫赤癣糖醇、巯基乙酸、巯基乙醇、半胱氨酸中一种或几种组合。
进一步设置是所述激活剂为醋酸镁与N-乙酰半胱氨酸组合物，其中醋酸镁的浓度为10mmol/L-25mmol/L，N-乙酰半胱氨酸组合物浓度16mmol/L-30mmol/L。
本发明方法所制备的试剂盒的工作检测原理为：肌酸激酶(CK)催化磷酸肌酸(CrP)转变成肌酸(Cr)，同时二磷酸腺苷(ADP)磷酸化成三磷酸腺苷(ATP)；在肌酸酶的催化下肌酸水解产生肌氨酸和尿素；肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下释放出H2O2；H2O2和4-氨基安替比林(4-AAP)在过氧化物酶(POD)参与下发生Trinder反应(偶联终点比色法)，反应式如下：
本发明方法所制备的肌酸激酶检测试剂盒，采用液体双试剂，可以有效消除内源性肌酸干扰，无需样本前处理，可直接利用全自动生化分析仪进行大批量样本检测，操作简单、重复性好、准确度高、稳定性好，适合临床应用推广。
本发明方法所制备的试剂盒，采用上述具体组分配置的双试剂，从而在实际检测肌酸激酶时，可采用两步法检测，血清样本与试剂1(R1)混合，37℃保温5min，使样品中所含内源性肌酸引起的副反应进行完毕，然后加入试剂2(R2)启动CK的催化反应，在主波长546nm/辅助波长660nm下读取吸光度值，最后于37℃反应计算出CK总活力，从而解决内源性肌酸对肌酸激酶(CK)测定的干扰，本试剂盒的成分分配和对应成分比例可先将血清样本中原有肌酸反应完全，从而可提高检测结果的准确性、重复性和稳定性。
下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步介绍。
附图说明
图1是采用本发明实施例1制得的试剂于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果；
图2是采用本发明实施例2制得的试剂于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果；
图3是采用本发明实施例3制得的试剂于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
分别配制浓度为100mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将其调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入1mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和6mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入5g/L的果糖和0.5％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后加入20KU/L的肌酸酶、8KU/L的肌氨酸氧化酶、10KU/L的过氧化物酶(POD)；在试剂2中先加入260mmol/的磷酸肌酸(CrP)、1.5mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入17mmol/L的醋酸镁和23mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例2
分别配制浓度为150mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将其调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入5mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和6mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入10g/L的果糖和1％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后加入30KU/L的肌酸酶、12KU/L的肌氨酸氧化酶、15KU/L的过氧化物酶(POD)；在试剂2中先加入330mmol/的磷酸肌酸(CrP)、2.3mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入17mmol/L的醋酸镁和23mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入0.8g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例3
分别配制浓度为200mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将其调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入10mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和6mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入15g/L的果糖和1.5％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后加入40KU/L的肌酸酶、16KU/L的肌氨酸氧化酶、20KU/L的过氧化物酶(POD)；在试剂2中先加入410mmol/的磷酸肌酸(CrP)、3.2mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入17mmol/L的醋酸镁和23mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入1g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例4
将采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂进行性能评价
1.准确度验证：
选用朗道低、高值质控品(1530，批号：1093UN；1532，批号：849UE)，采用BS-420全自动生化分析仪进行检测，具体操作方法如表一所述，采用单点定标法定标后，CK测定值及空白吸光度值可从仪器上直接读取，为了减少偶然误差，重复测定三次取均值，计算测定值与靶值的相对偏差。
表2采用实施例1-3配制的试剂测定低值质控(1530)准确度比较
表3采用实施例1-3配制的试剂测定高值质控(1532)准确度比较
由以上结果可知，采用本发明的方法配制的液体双试剂测定质控品的均值位于靶值范围内，相对偏差明显<10％，说明采用本发明的方法配制的液体双试剂准确度较高。
2.精密度实验：
选用临床常规样本，用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂重复测定20次，计算变异系数，结果见表4。
表4采用实施例1-3配制的试剂重复性测定
测定次数 实施例1 实施例2 实施例3
1 46.3 45.6 46.2
2 45.3 46.1 45.4
3 46.3 45.5 45.3
4 46.3 46.8 46.4
5 46.3 46.3 46.1
6 45.6 45.6 46.2
7 46.3 46.3 46.6
8 45.4 46.4 45.4
9 46.3 46.8 46.7
10 45.2 45.2 46.6
11 46.2 46.7 46.1
12 46.2 46.2 46.1
13 45.0 45.5 45.6
14 46.3 46.5 45.8
15 46.3 46.1 46.4
16 46.1 46.1 45.7
17 46.2 46.2 46.1
18 46.2 45.6 46.5
19 46.2 46.4 46.5
20 46.2 45.9 46.2
均值 46.01 46.09 46.10
标准差(SD) 0.4253 0.4527 0.4189
变异系数(CV/％) 0.92％ 0.98％ 0.91％
由以上结果可知，采用本发明的方法配制的液体双试剂测定的变异系数(CV)分别为0.92％、0.98％、0.91％，均明显<6％，说明采用本发明的方法配制的液体双试剂具有良好的精密度。
3.稳定性试验：
将采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂进行稳定性验证试验。将以上三种试剂每种平均分成两份，一份至于2-8℃保存，另一份至于37℃水浴中保存，每隔一天测定一次，连续监测一周，观察血清样本测定值(血清定值110.60U/L，允许误差范围(±10％)：99.54U/L-121.66U/L)，通过准确度的测定比较试剂稳定性。
表5采用实施例1的方法配制的试剂稳定性数据
表6采用实施例2的方法配制的试剂稳定性数据
表7采用实施例3的方法配制的试剂稳定性数据
由图1、图2及图3可以看出，采用实施例1-3的方法制得的试剂稳定性良好。采用实施例1-3的方法制得的试剂于37℃水浴一周，虽然测定CK浓度有一定程度的下降，但是下降的幅度不大，在允许范围内，说明加入合适的酶保护剂和CK激活剂可以保护相应酶的活性，进而提高试剂的稳定性，可延长用此法制得的试剂盒的保存期。
综上性能评价可知，采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂具有准确度高、重复性好、稳定性好的优点，可以满足临床需求，在临床诊断心肌梗死、病毒性心肌炎病情方面有很好的应用价值。
应用实施例
本发明肌酸激酶(CK)检测试剂盒适用于各类全自动生化分析仪，现于全自动生化分析仪BS-420上的应用，其具体使用方法如下：
表1样本检测操作程序
样品中的CK含量(U/L)＝ΔAT/ΔAS×校准液浓度
式中：ΔAT：以空白管吸光度为对照的样品管吸光度；
ΔAS：以空白管吸光度为对照的校准管吸光度；
本发明所使用的质控品为朗道高、低值质控品；所测样品为不溶血血清。
有益效果：本发明所制备的试剂盒采用Trinder指示***制备的肌酸激酶(CK)检测试剂盒为液体双试剂，采用两步法，有效消除内源性肌酸干扰，同时添加CK激活剂和相应酶保护剂，可以提高CK测定的准确度和试剂的稳定性。

Claims (9)

1.一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于，该肌酸激酶检测试剂盒包括有试剂1和试剂2的液体双试剂，包括以下步骤：
分别配制浓度为100mmol/L-200mmol/L浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将相同浓度对应的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1的溶剂中先加入1mmol/L-10mmol/L的4-氨基安替比林和色原，充分混合直至完全溶解，再加酶保护剂，之后加入20KU/L-40KU/L的肌酸酶、8KU/L-16KU/L的肌氨酸氧化酶、10KU/L-20KU/L的过氧化物酶；在试剂2的溶剂中先加入260mmol/L-410mmol/L的磷酸肌酸、1.5mmol/L-3.2mmol/L的二磷酸腺苷，完全溶解后加入活剂，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L-1.0g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封分别保存。
2.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的色原1mmol/L-10mmol/L，该色原为3,5-二氯-2-羟基苯磺酸、N-乙基-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺、N-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺、2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸、4-氯酚、2,4二氯酚或苯酚中的任意一种。
3.根据权利要求2所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：色原为2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸，其浓度为6mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的酶保护剂为液体酶保护剂，其添加量为1mL-3mL/100mL；或者所述的酶保护剂为固体酶保护剂，其含量为1g-3g/100mL。
5.根据权利要求4所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：液体酶保护剂为脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、烷基酚聚氧乙烯(10)醚，单位为1mL-3mL/100mL；所述的固体酶保护剂为果糖、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、月桂酸聚氧乙烯(9)酯，单位为1g-3g/100mL。
6.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述酶保护剂为果糖与表面活性剂的组合物，其中表面活性剂可选自脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、月桂酸聚氧乙烯(9)酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、烷基酚聚氧乙烯(10)醚中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：酶保护剂为果糖和月桂酸聚氧乙烯(9)酯1:1质量比组合。
8.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述激活剂为醋酸镁与巯基试剂的组合物，其中巯基试剂选自N-乙酰半胱氨酸、巯基甘油、二硫苏糖醇、二硫赤癣糖醇、巯基乙酸、巯基乙醇、半胱氨酸中一种或几种组合。
9.根据权利要求8所述的一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述激活剂为醋酸镁与N-乙酰半胱氨酸组合物，其中醋酸镁的浓度为10mmol/L-25mmol/L，N-乙酰半胱氨酸组合物浓度16mmol/L-30mmol/L。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63164900A (ja) * 1986-12-26 1988-07-08 Oriental Yeast Co Ltd クレアチンキナ−ゼの定量方法
CN102023158A (zh) * 2010-10-19 2011-04-20 李立和 血清中肌酐的两步酶测定方法
WO2012027137A1 (en) * 2010-08-24 2012-03-01 Microchips, Inc. Implantable biosensor device and methods of use thereof
CN106932353A (zh) * 2017-04-12 2017-07-07 济南隆广生物技术有限公司 一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63164900A (ja) * 1986-12-26 1988-07-08 Oriental Yeast Co Ltd クレアチンキナ−ゼの定量方法
WO2012027137A1 (en) * 2010-08-24 2012-03-01 Microchips, Inc. Implantable biosensor device and methods of use thereof
CN102023158A (zh) * 2010-10-19 2011-04-20 李立和 血清中肌酐的两步酶测定方法
CN106932353A (zh) * 2017-04-12 2017-07-07 济南隆广生物技术有限公司 一种稳定的酶法肌酸激酶检测诊断试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
仲其军: "《生物化学检验》", 31 May 2017, 华中科技大学出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
CN107641642B (zh) * 2017-10-25 2021-02-12 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

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