CN107189948A - 一种促进平菇液体菌丝快速生长的培养基及培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于食用菌栽培技术领域，公开了一种促进平菇液体菌丝快速生长的培养基及培养方法，培养方法包括：菌种活化培养、培养基制作、菌丝培养、菌丝生物量测定；菌丝培养将平板上生长的平菇菌丝用打孔器打孔，然后接入到含有0.1％～1.0％的花生油的不含琼脂的马铃薯‑葡萄糖‑琼脂(PDA)液体培养基中，进行摇瓶培养。本发明加入0.1％～1.0％的花生油后，可以使菌丝颜色浓白，菌丝分枝增多，细小菌丝球增加，菌丝干重比未加花生油处理的高109.02％～331.96％。

Description

一种促进平菇液体菌丝快速生长的培养基及培养方法
技术领域
本发明属于食用菌栽培技术领域，尤其涉及一种促进平菇液体菌丝快速生长的培养基及培养方法。
背景技术
液体菌种技术是食用菌生产，尤其是食用菌工厂化生产中常用的技术，它具有许多优点：一是生产工艺简化，没有母种、原种和栽培种之分，工艺简单，节约时间成本；二是菌种纯度更高，受杂菌污染小，萌发点分散，发菌快；三是接种速度快、成本低；四是生产周期短，且出菇整齐，适合规模化生产，无季节性限制；五是方便更换菌种，更换周期短。
目前工厂化生产液体菌种已应用于金针菇、杏鲍菇、香菇等主要食用菌工厂化生产中，并取得了显著的经济效益。相比较其他食用菌品种，平菇液体菌种的应用较少，一方面与目前平菇生产大多是季节性栽培生产有关，另一方面，随着人民群众生活水平的不断提高，对于平菇产品的周年供应需求不断加大，平菇工厂化生产的趋势不可逆转，因此平菇液体菌种的生产显得尤为重要。在较短时间内和使用简单的方法使菌种快速生长，关乎工厂化运行成本的降低。液体菌种培养影响因素很多，比如氧气含量、空气的纯净度等，培养基的配方也是最为重要的影响因素之一。
综上所述，现有技术存在的问题是：在生产中，平菇液体菌种应用较少，尤其是工厂化生产模式下几乎没有应用。同时现有培养基的配方比较复杂，配方所含物质种类较多，制作工艺也比较复杂。现有技术不能使平菇液体菌种在较短时间内快速生长，不能有效降低工厂化运行成本的降低。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种促进平菇液体菌丝快速生长的培养基及培养方法。
本发明是这样实现的，一种促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，所述促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法包括以下步骤：
步骤一，菌种活化培养:将低温或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂(PDA)平板培养基上进行活化培养；然后用打孔器在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央培养；再用相同的打孔器打取菌块；
步骤二，培养基制作:去皮马铃薯切成小块，放入煮沸的去离子水的锅中煮沸；然后过滤，在滤液中加入葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容，搅拌混匀备用；然后在三角瓶中加入含有葡萄糖的培养基；在三角瓶中加入花生油，透气膜封口；灭菌；冷却至室温后，置于超净工作台中；用打孔器在培养的菌丝平板上打取多个菌种块，然后接入不含琼脂的马铃薯-葡萄糖-琼脂(PDA)液体培养基中，恒温摇床，振荡培养；
步骤三，菌丝生物量测定:将培养好的菌丝过滤，然后用去离子水洗涤，然后烘至恒重。
进一步，所述步骤一菌种活化培养，具体包括：
将4℃低温或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂(PDA)平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；
然后用直径5mm的打孔器在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块。
进一步，所述步骤二培养基制作，具体包括：
去皮马铃薯200g，切成0.5cm～1cm的小块，放入盛有800mL煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；
然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；
然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入质量体积比(w/v)0.1％～1.0％的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；
冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d。
进一步，所述步骤三菌丝生物量测定，具体包括：
将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。
本发明的另一目的在于提供一种促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养基由马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL以及按w/v比例花生油0.1％～1.0％组成组成。
本发明的优点及积极效果为：
与现有技术相比，本发明加入花生油后，可以使菌丝颜色浓白，菌丝分枝增多，可促进菌丝快速生长，菌丝干重比未加花生油处理的高109.02％～331.96％。
附图说明
图1是本发明实施例提供的促进平菇液体菌丝快速生长的培养方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
目前，在生产中，平菇液体菌种应用较少，尤其是工厂化生产模式下几乎没有应用。同时现有培养基的配方比较复杂，配方所含物质种类较多，制作工艺也比较复杂。现有技术不能使平菇液体菌种在较短时间内快速生长，不能有效降低工厂化运行成本的降低。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细描述。
如图1所示，本发明实施例提供的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，包括以下步骤：
S101：菌种活化培养:将低温(4℃)或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂(PDA)平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；然后用打孔器(直径5mm)在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块；
S102：培养基制作:去皮马铃薯200g，切成0.5cm～1cm左右的小块，放入盛有800mL煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入0.1％～1.0％(w/v)的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d；
S103：菌丝生物量测定:将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。可以得出，花生油可以显著促进平菇菌丝的生长，菌丝干重比未加花生油处理的高109.02％～331.96％。
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。
实施例1：
本发明实施例提供的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，包括以下步骤：
菌种活化培养:将低温(4℃)或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂(PDA)平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；然后用打孔器(直径5mm)在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块；
培养基制作:去皮马铃薯200g，切成0.75cm左右的小块，放入盛有800mL煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入0.1％(w/v)的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d；
菌丝生物量测定:将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。可以得出，花生油可以显著促进平菇菌丝的生长，菌丝干重比未加花生油处理的高109.02％。
实施例2：
本发明实施例提供的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，包括以下步骤：
菌种活化培养:将低温(4℃)或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂PDA平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；然后用打孔器(直径5mm)在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块；
培养基制作:去皮马铃薯200g，切成0.5cm左右的小块，放入盛有800ml煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入0.4％(w/v)的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d；
菌丝生物量测定:将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。可以得出，花生油可以显著促进平菇菌丝的生长，菌丝干重比未加花生油处理的高161.54％。
实施例3：
本发明实施例提供的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，包括以下步骤：
菌种活化培养:将低温(4℃)或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂PDA平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；然后用打孔器(直径5mm)在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块；
培养基制作:去皮马铃薯200g，切成1cm左右的小块，放入盛有800mL煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入1.0％(w/v)的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d；
菌丝生物量测定:将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。可以得出，花生油可以显著促进平菇菌丝的生长，菌丝干重比未加花生油处理的高331.96％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，其特征在于，所述促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法包括以下步骤：
步骤一，菌种活化培养:将低温或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂平板培养基上进行活化培养；然后用打孔器在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央培养；再用相同的打孔器打取菌块；
步骤二，培养基制作:去皮马铃薯切成小块，放入煮沸的去离子水的锅中煮沸；然后过滤，在滤液中加入葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容，搅拌混匀备用；然后在三角瓶中加入含有葡萄糖的培养基；在三角瓶中加入花生油，透气膜封口；灭菌；冷却至室温后，置于超净工作台中；用打孔器在培养的菌丝平板上打取多个菌种块，然后接入不含琼脂的马铃薯-葡萄糖-琼脂)液体培养基中，恒温摇床，振荡培养；
步骤三，菌丝生物量测定:将培养好的菌丝过滤，然后用去离子水洗涤，然后烘至恒重。
2.如权利要求1所述的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，其特征在于，所述步骤一菌种活化培养，具体包括：
将4℃低温或液氮保藏的平菇菌种取出，接种在马铃薯-葡萄糖-琼脂平板培养基上进行25℃活化培养8d～10d，重复活化2次；
然后用直径5mm的打孔器在平板上打取菌块并将菌块接种在含有PDA培养基的平板中央，25℃培养10d；再用相同的打孔器打取菌块。
3.如权利要求1所述的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，其特征在于，所述步骤二培养基制作，具体包括：
去皮马铃薯200g，切成0.5cm～1cm的小块，放入盛有800mL煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；
然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g的葡萄糖，使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀备用；
然后在250mL容量的三角瓶中加入100mL的上述培养基；在上述三角瓶中加入质量体积比w/v为0.1％～1.0％的花生油，以不加花生油作为对照，透气膜封口；121℃灭菌30min；
冷却至室温后，置于超净工作台中；用直径5mm的打孔器在培养8d～12d的菌丝平板上打取10个菌种块，然后接入液体培养基中，置于25℃恒温摇床150rpm振荡培养5d。
4.如权利要求1所述的促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法，其特征在于，所述步骤三菌丝生物量测定，具体包括：
将培养好的菌丝用4层纱布过滤，然后用100mL～200mL的去离子水洗涤3～5次，然后在50℃烘至恒重。
5.一种如权利要求1所述促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养方法培养的培养基，其特征在于，所述促进平菇液体培养菌丝快速生长的培养基由马铃薯200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL以及按w/v比例的花生油0.1％～1.0％组成。
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