CN107185273A - 一种连续色谱的方法及其设备 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种连续色谱的方法及其装备，其特征在于：所述装备为多柱连续色谱***，该***分为两大区：粗分离区和精分离区；粗分离区由五个亚区组成：上样区、去前杂区、去后杂1区、样品洗脱区、去后杂2区，依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ区；精分离区由两个亚区组成：精分离区和样品洗脱区，依次定义为Ⅵ和Ⅶ区；所述亚区由1至多支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道或/和阀门接口连接；在该***上色谱方法为：多组份样品在Ⅰ区脉冲进样；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区末柱进位为Ⅱ区首柱，在Ⅱ区除去前杂（将目标化合物洗脱至刚好穿透Ⅱ区）；经阀门切换，Ⅱ区末柱进位为Ⅳ区首柱，在Ⅳ区将目标化合物洗脱至刚完全进入Ⅳ区末柱；在Ⅲ和Ⅴ区除去后杂；经阀门切换，Ⅳ区末柱进位为Ⅵ区首柱，样品在Ⅵ区进行精细分离（将目标化合物洗脱至刚穿透Ⅵ区）；经阀门切换，Ⅵ区末柱进位为Ⅶ区首柱，在Ⅶ区洗脱分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；所述方法通过阀门切换、泵的启停或/和流速调控等智能控制实现。

Description

一种连续色谱的方法及其设备
技术领域
本发明涉及一种连续色谱的方法及其装备，特别涉及一种多柱连续色谱的方法及其装备。
背景技术
色谱分离纯化技术是获得高纯度化合物必备的重要手段。在所有分离纯化技术中，色谱是产能最低、成本最高、操作人员素质要求高，操作精细、费时、耗力的技术。多年来，人们一直致力于提升色谱技术的产能、降低其成本，并使其操作简单方便。
分离对象一般含有前杂、目标化合物和后杂。根据分离的难易，色谱分为置换色谱（Displacement Chromatography）和洗脱色谱（Elution Chromatography）。置换色谱适于保留值与目标化合物保留值差异很大的杂质的分离，一般用于目标化合物的富集或初步纯化。洗脱色谱适于目标化合物与相邻杂质的精细分离。根据色谱过程的连续性，色谱又分为连续色谱（Continuous Chromatography）和单柱色谱（Batch Chromatography）。连续洗脱色谱又细分为模拟移动床（Simulated Moving Bed，SMB）和连续单柱色谱（ContinuousBatch Chromatography，CBC）。相对而言，连续色谱具有更高的分离能力、更高的产能和更低的消耗。
SMB技术由Broughton博士首创，1961年美国油品公司（UOP）公开了SMB在石油化工上应用（美国专利2985589）。此后，SMB技术得到不断的完善提高【美国专利 3706812、4157267、4267054、4293346、4312678、4313015、4332623、4359430、4379751、4402832、4412866、4461649、4533398、5064539、5127957、5387347、6331250、6896811、7229558、7479228、8282831、8496836等，其中值得关注的有Varicol技术（WO-A-2004/039468）、Powerfeed技术（Journal of Chromatography A, 2003, 1006:87-99）、Modicon技术 (WO2004/014511)和溶剂梯度模式（美国专利4031155）等】，使得SMB成为应用最广泛的色谱模式。
尽管有一次SMB用于多组份混合物分离的报道（美国专利6331250、7479228和8282831等），但是，很难高产能地获得高纯度目标化合物，这类技术一般利用SMB的强大产能对多组份混合物进行粗分离，以降低后续色谱的负荷、增强后续色谱的产能。原理上，SMB仅适于2组份混合物的分离，当SMB用于三组份混合物的分离时，要么在同一装置上分离两次，要么用2套SMB装置联动。SMB的产能一般为单柱色谱的2～10倍，连续单柱色谱的产能为单柱色谱的2～4倍。因而，对于多组份混合物的分离，SMB不一定比连续单柱色谱更具优势。对于某些2组份混合物的分离，连续单柱色谱比SMB更具优势。这激起了人们对连续单柱色谱的研究。
单柱色谱在一支满足分离所需长度的色谱柱上依次进行上样、洗脱前杂、洗脱目标化合物和洗脱后杂等操作。单柱色谱的填料利用率低、溶剂用量大、耗时长、产能低。可以在软件的控制下，使上述单柱色谱过程自动连续进行。但是，此连续过程的产能取决于进样频率，而进样频率由多组份混合物的总峰宽度决定（前一样品的后杂不能叠盖后一样品的目标峰，后一样品的前杂不能叠盖前一样品的目标峰）。因而，这种连续单柱色谱对单柱色谱的缺陷没有本质性改善。
Snyder等（美国专利4204952，1980年）将一短一长两支色谱柱组成分离所需长度的色谱柱，在短柱上除去大量的前杂和后杂，经过粗分的目标混合物再由长柱进行精细分离；由此极大地降低了总峰宽度、提高了进样频率、增强了色谱分离能力，使产能提高了一倍以上。该技术装备简单，可以使用两种不同分离特性的填料。但是，在短柱和长柱上所进行的上样、洗脱前杂、洗脱目标化合物和洗脱后杂等操作仍然依次进行，耗时仍然较长，产能提升的空间有限。
Aumann等（美国专利8496836，2013年）构建一个多柱***，***分为5个区：上样除前杂区，分离区，目标化合物洗脱区，目标化合物-后杂混合物洗脱区和后杂洗脱区。其特点是，上样除前杂、分离、目标化合物洗脱、目标化合物-后杂混合物洗脱和后杂洗脱等在不同的区同时进行，降低了色谱过程所需时间。但是，该技术中，进入分离区的样品仅仅除去了大量前杂，没有除去后杂，对总峰宽度和色谱负荷的降低有限，对进样频率、分离能力和产能的提升不显著。该技术装备相对复杂，并且不能使用两种不同分离特性的填料。
综上所述，分离领域迫切需求进样频率更高、分离能力更强的连续单柱色谱方法与装备，以进一步提高产能、降低成本。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种进样频率更高、分离能力更强的连续单柱色谱方法与装备，可进一步提高产能、降低成本。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：由多支短色谱柱构建连续色谱***，该***分为两大区：粗分离区和精分离区。粗分离区由五个亚区组成：上样区、去前杂区、去后杂1区、样品洗脱区、去后杂2区，依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ区。精分离区由两个亚区组成：精分离区和样品洗脱区，依次定义为Ⅵ和Ⅶ区。亚区由1～n（n =1、2、3、4、5、6或7）支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道或/和阀门接口连接；在该***上的色谱方法为：多组份样品在Ⅰ区脉冲进样；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区末柱进位为Ⅱ区首柱，在Ⅱ区除去前杂（将目标化合物洗脱至刚穿透Ⅱ区）；经阀门切换，Ⅱ区末柱进位为Ⅳ区首柱，样品在Ⅳ区将目标化合物洗脱至刚好完全进入Ⅳ区末柱；在Ⅲ和Ⅴ区除去后杂；经阀门切换，Ⅳ区末柱进位为Ⅵ区首柱，样品在Ⅵ区进行精细分离（将目标化合物洗脱至刚穿透Ⅵ区）；经阀门切换，Ⅵ区末柱进位为Ⅶ区首柱，在Ⅶ区洗脱分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；上述方法通过阀门切换、泵的启停或/和流速调控等智能控制实现。
本发明所提供的上述方法及其装备中，采用同一几何尺寸的的色谱柱。所述色谱柱的直径为10～2000mm，色谱柱直径大小直接决定产能的高低。各亚区色谱柱的总长度与各亚区的职能相关，主要由样品属性、填料属性和填料粒度决定，柱长与填料粒度呈反比关系，并受均一性装填技术的影响；亚区内色谱柱的长度为50～600mm，最短柱长应能容纳一次上样量内所有的目标化合物。
本发明所提供的上述方法及其装备中，所述色谱柱可以都装填同一种填料，也可以粗分离区内的色谱柱都装填一种填料，精分离区内的色谱柱都装填另一种填料，如粗分离区内色谱柱装填填料的吸附性能为：A＜B＜C，精分离区内色谱柱装填填料的吸附性能为：A＜C＜B。
本发明所提供的上述方法及其装备中，所述阀门为多流路旋转阀、单流路多口旋转阀或/和截止阀，其中以多流路旋转阀最为简洁。
本发明所提供的上述方法及其装备中，所述色谱柱之间的连接方式为：阀体-阀接口-色谱柱-阀接口-阀体-阀接口-色谱柱-阀接口-阀体-，或阀体-阀接口-色谱柱-管道-(色谱柱) n -管道-色谱柱-阀接口-阀体-。当亚区色谱柱的连接方式为：阀体-阀接口-色谱柱-管道-(色谱柱) n -管道-色谱柱-阀接口-阀体时，首柱与末柱之间的n支色谱柱不参与色谱柱循环；此时n支短色谱柱可用一支等长的长色谱柱替代。
本发明所提供的上述方法及其装备中，所述多组份样品最少包括1个前杂A、1个后杂C和1个目标化合物B共3个组份。
本发明所提供的上述方法及其装备中，所述脉冲进样的频率与阀门切换频率相等，进样一次，切换一次，或切换一次，进样一次。
本发明所提供的上述方法及其装备中，洗脱各区的流动相可以相同，也可以不相同，流动相可以是等度的，也可以是线性、拟线性或非线性的。
本发明所提供的上述方法及其装备，可根据具体分离对象进行多种适应性修改，如：将Ⅰ区与Ⅱ区合并、省去Ⅲ区、Ⅶ区与Ⅱ区有连通管道（用于循环含少量后杂的目标化合物）、Ⅶ区采用逆流洗脱，以及将粗分离区与精分离区构建为两套独立的***，两套***通过同步联动实现分离过程等。
本发明由于采取以上技术方案，其具有以下优点：1、多组份样品在粗分离区除去大量的前杂和后杂后，再经精分离区进行精细分离，由此极大地降低了精分离区色谱负荷和总峰宽度、增强了色谱分离能力、提高了进样频率、提高了产能；2、粗分离区和精分离区的各色谱过程在各自不同的亚区同时进行，进一步降低了色谱过程所需时间，提升了产能；3、粗分离区和精分离区可使用分离属性不同的填料，可进一步提升色谱的分离能力。
本发明提供了一种进样频率更高、分离能力更强的连续单柱色谱方法与装备，可进一步提高产能、降低成本，可满足分离领域的切实需求。
附图说明
图1是本发明所提供方法及其装备的结构与色谱过程的原理示意图；
图2是本发明所提供的10位7流路旋转阀-12柱-1填料***的结构与色谱过程的示意图；
图3是本发明所提供的12位7流路旋转阀-12柱-2填料***的结构与色谱过程的示意图；
图4是本发明所提供的8位6流路旋转阀-8柱-2填料***的结构与色谱过程的示意图；
图5是本发明所提供的单流路旋转阀（截止阀组）-8柱-2填料***的结构与色谱过程的示意图；
图6是本发明所提供的单流路旋转阀（截止阀组）-12柱-1填料***的结构与色谱过程的示意图；
图7是本发明所提供的单流路旋转阀-截止阀-12柱-1填料***的结构与色谱过程的示意图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行详细的描述。
实施例一
如图1所示，本实施例所提供的装备***由1个12位7流路旋转阀、12支装填同一种填料的色谱柱、7台泵、2个检测器和1个收集器构建，该***分为两大区：粗分离区和精分离区。粗分离区由五个亚区组成：上样区（1号柱）、去前杂区（2和4号柱）、去后杂1区（3号柱）、样品洗脱区（5和7号柱）、去后杂2区（6号柱），依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ区（虚线框）。精分离区由两个亚区组成：精分离区（8、9、10和11号柱）和样品洗脱区（12号柱），依次定义为Ⅵ和Ⅶ区。亚区由1～4支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道通过阀门的接口连接。7台泵独立输送多组份样品液F和6种流动相S2～S7。6种流动相可以全部或部分相同，也可以完全不同；流动相可以是等度的，也可以是线性、拟线性或非线性的。Ⅱ区4号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制流动相S2供液泵的启动与停止。Ⅵ区11号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制旋转阀的切换。Ⅰ区进样泵和Ⅳ区流动相S4的供液泵为定时启停控制。Ⅶ区12号柱出口端与收集器相连，收集器采用定时收集控制。该***适于多组份样品的分离。
在该***上的色谱方法为：多组份样品F在Ⅰ区脉冲进样，进样频率与阀门切换频率相等，进样一次，切换一次；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区1号柱进位为Ⅱ区2号柱，在Ⅱ区由流动相S2洗脱除去前杂（将目标化合物洗脱至刚好穿透4号柱）；经阀门切换，Ⅱ区4号柱进位为Ⅳ区5号柱，在Ⅳ区由流动相S4将目标化合物洗脱至刚完全进入7号柱；经阀门切换，Ⅳ区7号柱进位为Ⅵ区8号柱，样品在Ⅵ区由流动相S6洗脱经过8号、9号、10号和11号柱进行精细分离（将目标化合物洗脱至刚穿透11号）；经阀门切换，Ⅵ区11号柱进位为Ⅶ区12号柱，在Ⅶ区由流动相S7洗脱，并分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；在Ⅲ和Ⅴ区分别由流动相S3和流动相S5除去后杂。上述方法通过旋转阀沿虚线箭头方向的步进切换而实现，步进步幅为30°，色谱柱在12支色谱柱上循环，如首次切换后：Ⅰ区为12号柱，Ⅱ区为1号和3号柱，Ⅲ区为2号柱，Ⅳ区为4号和6号柱，Ⅴ区为5号柱，Ⅵ区为7号、8号、9号和10号柱，Ⅶ区为11号柱。在该***上，粗分离区和精分离区各色谱过程在各亚区内同时进行。
实施例二
图2所示的本实施例同样是由12支装填同一种填料的色谱柱所构建的***，其结构与实施例一所提供***基本相同，色谱方法和功能与实施例一所提供***完全相同，它们的差异为：1、本实施例用1个10位7流路旋转阀构建***，阀位比实施例一少2位；2、Ⅵ区4支色谱柱中，中间2支（62和63）与首柱和末柱串联，置于阀外，不占阀位，不参与色谱柱循环；3、本实施例的步进步幅为36°。
本实施例所提供的装备***的特征在于：节约阀位可降低旋转阀直径；阀外2支短色谱柱可用一支等长色谱柱替代。
实施例三
如图3所示，本实施例所提供的装备***由1个12位7流路旋转阀、12支色谱柱、7台泵、2个检测器和1个收集器构建；该***分为两大区：粗分离区和精分离区。粗分离区由五个亚区组成：上样区（1号柱）、去前杂区（2和4号柱）、去后杂1区（3号柱）、样品洗脱区（5和1’号柱）、去后杂2区（6号柱），依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ区（虚线框）。精分离区由两个亚区组成：精分离区（2’、3’、4’和5’号柱）和样品洗脱区（6’号柱），依次定义为Ⅵ和Ⅶ区。亚区由1～4支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道通过阀门的接口连接。7台泵独立输送多组份样品液F和6种流动相S2～S7。6种流动相可以全部或部分相同，也可以完全不同；流动相可以是等度的，也可以是线性、拟线性或非线性的。Ⅱ区4号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制流动相S2供液泵的启动与停止。Ⅵ区5’号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制旋转阀的切换。Ⅰ区进样泵和Ⅳ区流动相S4的供液泵为定时启停控制。Ⅶ区6’号柱出口端与收集器相连，收集器采用定时收集控制。该***适于多组份样品的分离。
在该***上的色谱方法为：多组份样品F在Ⅰ区脉冲进样，进样频率与阀门切换频率相等，进样一次，切换一次；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区1号柱进位为Ⅱ区2号柱，在Ⅱ区由流动相S2洗脱除去前杂（将目标化合物洗脱至刚好穿透4号柱）；经阀门切换，Ⅱ区4号柱进位为Ⅳ区5号柱，在Ⅳ区由流动相S4将目标化合物洗脱至刚完全进入1’号柱；经阀门切换，Ⅳ区1’号柱进位为Ⅵ区2’号柱，样品在Ⅵ区由流动相S6洗脱经过2’号、3’号、4’号和5’号柱进行精细分离（将目标化合物洗脱至刚穿透5’号）；经阀门切换，Ⅵ区5’号柱进位为Ⅶ区6’号柱，在Ⅶ区由流动相S7洗脱，并分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；在Ⅲ和Ⅴ区分别由流动相S3和流动相S5除去后杂。上述方法通过旋转阀沿虚线箭头方向的步进切换而实现，步幅为60°。如首次切换后：Ⅰ区为6号柱，Ⅱ区为1号和3号柱，Ⅲ区为2号柱，Ⅳ区为4号和6’号柱，Ⅴ区为5号柱，Ⅵ区为1’号、2’号、3’号和4’号柱，Ⅶ区为5’号柱。在该***上，粗分离区和精分离区各色谱过程在各亚区内同时进行。
本实施例所提供装备***的构件、分区、亚区数以及亚区内色谱柱数和***运行模式都与实施例一相同，它们的差异为：1、本实施例使用2种不同的填料，1～6号柱用一种填料，1’～6’号柱用另一种填料；2、两种不同填料的色谱柱相间分布；3、本实施例的步进步幅为60°。本实施例所提供装备***的特征在于：色谱柱的循环仅在填料相同的柱上进行。
实施例四
如图4所示，本实施例所提供的装备***由1个8位6流路旋转阀、8支色谱柱（装填2种不同的填料，1～4号柱用一种填料，1’～4’号柱用另一种填料）、6台泵、2个检测器和1个收集器构建；该***分为两大区：粗分离区和精分离区。粗分离区由五个亚区组成：上样区（1号柱）、去前杂区（2号柱）、样品洗脱区（3和1’号柱）、去后杂区（4号柱），依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ区（虚线框）。精分离区由两个亚区组成：精分离区（2’和3’号柱）和样品洗脱区（4’号柱），依次定义为Ⅴ和Ⅵ区。亚区由1～2支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道通过阀门的接口连接。6台泵独立输送多组份样品液F和5种流动相S2～S6。5种流动相可以全部或部分相同，也可以完全不同；流动相可以是等度的，也可以是线性、拟线性或非线性的。Ⅱ区2号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制流动相S2供液泵的启动与停止。Ⅴ区3’号柱出口端与检测器相连，以检测器信号控制旋转阀的切换。Ⅰ区进样泵和Ⅲ区流动相S3的供液泵为定时启停控制。Ⅵ区4’号柱出口端与收集器相连，收集器采用定时收集控制。该***适于后杂量少或无后杂的样品分离（一般经过SMB粗分离的样品，或置换色谱初步纯化后再经结晶等非色谱技术处理后样品）。
在该***上的色谱方法为：多组份样品F在Ⅰ区1号柱脉冲进样，进样频率与阀门切换频率相等，进样一次，切换一次；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区1号柱进位为Ⅱ区2号柱，在Ⅱ区由流动相S2洗脱除去前杂（将目标化合物洗脱至刚好穿透2号柱）；经阀门切换，Ⅱ区2号柱进位为Ⅲ区3号柱，在Ⅲ区由流动相S3将目标化合物洗脱至刚完全进入1’号柱；经阀门切换，Ⅲ区1’号柱进位为Ⅴ区2’号柱，样品在Ⅴ区由流动相S5洗脱经过2’号和3’号柱进行精细分离（将目标化合物洗脱至刚穿透3’号柱）；经阀门切换，Ⅴ区3’号柱进位为Ⅵ区4’号柱，在Ⅵ区由流动相S6洗脱，并分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；在Ⅳ由流动相S4洗脱除去后杂。
上述方法通过旋转阀沿虚线箭头方向的步进切换而实现，步幅为90°，色谱柱循环仅在填料相同的柱上进行。如首次切换后：Ⅰ区为4号柱，Ⅱ区为1号柱，Ⅲ区为2号和4’号柱，Ⅳ区为3号柱，Ⅴ区为1’号和2’号柱，Ⅵ区为3’号柱。在该***上，粗分离区和精分离区各色谱过程在各亚区内同时进行。
实施例五
本实施例是由截止阀或一种单流路多口旋转阀构建与实施例四相同的***。本实施例所提供的色谱***的构件为： 8支色谱柱（装填2种不同的填料，1～4号柱用一种填料，1’～4’号柱用另一种填料）、6台泵、2个检测器和1个收集器、截止阀60只，12件5通，4件4通，或12只4进1出旋转阀和4只3进1出旋转阀；即用60只截止阀、12件5通和4件4通，或12只4进1出旋转阀和4只3进1出旋转阀替代实施例四中的1个8位6流路旋转阀。60只截止阀、12件5通和4件可构建4进1出（也可视为1进4出）阀阀组12组，3进1出（也可视为1进3出）阀阀组4组。4进1出阀阀组和3进1出阀阀组分别与4进1出旋转阀和3进1出旋转阀功能相同。
上述构件按图5可构建成本实施例所提供的色谱***，该***的功能和色谱方法与施例四所提供的相同，其区别在于切换方法不同：1、本实施例所提供的色谱***是通过截止阀的 “开”“闭”实现切换，如图5中开启态阀门整体由右向左步进1位，便实现子色谱柱的步进切换；2、本实施例所提供的色谱***可视为两套独立的***，两套***通过同步联动实现分离过程。
实施例六
本实施例是由截止阀或一种单流路多口旋转阀构建与实施例一相同的***。本实施例所提供的色谱***的构件为： 12支色谱柱（装填同种填料）、7台泵、2个检测器和1个收集器、截止阀192只，12件8通，12件10通，或12只7进1出旋转阀和12只1进9出旋转阀；即用192只截止阀、12件8通和12件10通，或12只7进1出旋转阀和12只1进9出旋转阀替代实施例一中的1个12位7流路旋转阀。192只截止阀、12件8通和12件10通，可构建7进1出（也可视为1进7出）阀阀组12组，1进9出（也可视为9进1出）阀阀组12组。7进1出阀阀组和1进9出阀阀组分别与7进1出旋转阀和1进9出旋转阀功能相同。
由上述构件按图6构建成本实施例所提供的色谱***，该***的功能和色谱方法与施例一所提供的相同，其区别在于切换方法不同：本实施例所提供的色谱***是通过截止阀的 “开”“闭”实现切换，如图6中开启态阀门整体由右向左步进1位，便实现子色谱柱的步进切换。
实施例七
本实施例是由另一种单流路多口旋转阀构建与实施例一相同的***。本实施例所提供的色谱***的构件为： 12支色谱柱（装填同种填料）、7台泵、2个检测器和1个收集器、14只12进1出旋转阀、24件13通和12只2进1出阀；即用14只12进1出旋转阀、24件13通和12只2进1出阀替代实施例一中的1个12位7流路旋转阀。
7只12进1出旋转阀与12件13通按相同顺序同位并联（如7只阀的1号位由左至右接口按F、S2、S3、S4、S5、S6、S7的顺序与一个13通并联，7只阀的2号位由左至右接口按F、S2、S3、S4、S5、S6、S7的顺序与第二个13通并联），将7只阀的84个通路并联12个通路，构成一个大阀组。14只12进1出旋转阀与24件13通可构建成2个大阀组。
2个大阀组、12只2进1出阀和上述其它构件按图7便可构建成本实施例所提供的色谱***。该色谱***的功能和色谱方法与施例一所提供的相同，其区别在于切换方法不同：本实施例所提供的色谱***是通过截止阀的 “开”“闭”实现切换，如图7中开启态阀门整体由右向左步进1位，便实现子色谱柱的步进切换。
本发明仅以上述实施例进行说明，本发明所提供装备的构建和色谱过程的实施方法都是可以有所变化的。在本发明技术方案的基础上，凡根据本发明原理对装备构建和实施方法进行的改进或等同变换，均不应排除在本发明的保护范围之外。

Claims (10)

1.一种连续色谱的方法及其装备，其特征在于：所述装备为多柱连续色谱***，所述***分为两大区：粗分离区和精分离区；所述粗分离区由五个亚区组成：上样区、去前杂区、去后杂1区、样品洗脱区、去后杂2区，依次定义为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ区；所述精分离区由两个亚区组成：精分离区和样品洗脱区，依次定义为Ⅵ和Ⅶ区；所述亚区由1～n（n =1、2、3、4、5、6或7）支色谱柱串联构成，色谱柱与色谱柱之间由管道或/和阀门接口连接；所述方法为：多组份样品在Ⅰ区脉冲进样；一次进样后，经阀门切换，Ⅰ区末柱进位为Ⅱ区首柱，在Ⅱ区流动相洗脱除去前杂（将目标化合物洗脱至刚穿透Ⅱ区）；经阀门切换，Ⅱ区末柱进位为Ⅳ区首柱，在Ⅳ区流动相将目标化合物洗脱至刚完全进入Ⅳ区末柱；在Ⅲ和Ⅴ区流动相洗脱除去后杂；经阀门切换，Ⅳ区末柱进位为Ⅵ区首柱，样品在Ⅵ区进行精细分离（流动相将目标化合物洗脱至刚穿透Ⅵ区）；经阀门切换，Ⅵ区末柱进位为Ⅶ区首柱，在Ⅶ区流动相洗脱分段收集目标化合物和含有少量后杂的目标化合物；所述方法通过阀门切换、泵的启停或/和流速调控等智能控制实现。
2.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述色谱柱都为同一几何尺寸，直径为10～2000mm，长度为50～600mm。
3.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述色谱柱都装填的是同一种填料。
4.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述粗分离区内色谱柱都装填的是同一种填料，所述精分离区内色谱柱都装填的是另一种填料。
5.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述阀门为多流路旋转阀、单流路多口旋转阀或/和截止阀。
6.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述色谱柱之间的连接方式为：色谱柱—阀接口—阀体—阀接口—色谱柱，或色谱柱—管道—色谱柱。
7.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述洗脱所用的流动相是等度或/和梯度的。
8.如权利要求1和6所述的方法及其装备，其特征在于：所述洗脱所用的梯度流动相是线性、拟线性或/和非线性的。
9.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述的脉冲进样的频率与阀的切换频率相等。
10.如权利要求1所述的方法及其装备，其特征在于：所述的粗分离区和精分离区可构建成两套独立的***，通过这两套***的串联联动实现分离过程。
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