CN107184957B - 一种重组人表皮生长因子粉剂及其制备方法、皮肤修护剂及其制备方法和使用方法 - Google Patents

一种重组人表皮生长因子粉剂及其制备方法、皮肤修护剂及其制备方法和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种重组人表皮生长因子粉剂，其是由如下以质量百分比计的组分制备而成：0.01‑0.05％重组人表皮生长因子、1.2‑3.5％甘露糖醇、2‑8％甘氨酸、0.01‑0.08％人血白蛋白和余量的第一纯化水。本发明还提供一种重组人表皮生长因子粉剂的制备方法的制备方法。本发明还提供一种皮肤修护剂。本发明还提供一种皮肤修护剂的制备方法。本发明还提供一种皮肤修护剂的使用方法。本发明粉剂中的重组人表皮生长因子不仅能促进表皮细胞增殖，还能促进正常表皮细胞的新陈代谢，而且保证了重组人表皮生长因子的活性，提高了重组人表皮生长因子的作用效率。

Description

一种重组人表皮生长因子粉剂及其制备方法、皮肤修护剂及 其制备方法和使用方法
技术领域
本发明涉及一种含重组人表皮生长因子制剂，尤其涉及一种重组人表皮生长因子粉剂及其制备方法、皮肤修护剂及其制备方法和使用方法。
背景技术
人表皮生长因子(hEGF)广泛存在于体液和多种腺体中，由于hEGF体内的含量极微，提取成本高且产品纯度低，使hEGF的应用受到了限制。随着基因工程技术的发展，生物学家通过基因重组技术，成功利用大肠杆菌为宿主生产hEGF，实现了工业化生产rhEGF。
hEGF分子结构由53个氨基酸组成，分子量6201道尔顿，分子内有6个半胱氨酸组成的二硫键，形成3个分子内环型结构，组成生物活性所必须的受体结合区域。实验研究表明，hEGF可刺激多种细胞的增殖，主要是表皮细胞、内皮细胞，可以用于角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合取得了很好的疗效；hEGF还能促进正常表皮细胞的新陈代谢，添加到美容护肤品中可以达到美白、抗皱、延缓衰老的作用。目前，国内以hEGF为原料生产的药品制剂有凝胶、水剂、敷料等品种。
但是，现有的以hEGF为原料生产的药品制剂存在以下缺陷：
(1)由于hEGF是一种生物活性蛋白质，hEGF在水溶液中活性一般只能保存7-10天，因此生产产品一般需要添加适当保护剂以减缓hEGF的失活，但目前还没找到一种能完全避免hEGF失活的物质；
(2)产品做成凝胶、敷料的产品生长因子活性好于水剂，但由于添加hEGF含量极微，凝胶和膏体流动性差，限制hEGF到达表皮作用部位发挥作用，水剂流动性好，但失活半衰期比凝胶和膏体大。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种重组人表皮生长因子粉剂，该粉剂中的重组人表皮生长因子不仅能促进表皮细胞增殖，可以用于角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合，还能促进正常表皮细胞的新陈代谢，起到美白、抗皱、延缓衰老的作用，而且保证了重组人表皮生长因子的活性，提高了重组人表皮生长因子的作用效率。
本发明的目的之二在于提供一种重组人表皮生长因子粉剂的制备方法，该制备方法制备为粉剂，既保证重组人表皮生长因子的活性和产品的经济有效性，而且步骤简单易操作，节省了人力物力。
本发明的目的之三在于提供一种皮肤修护剂，该皮肤修护剂不仅包括促进表皮细胞增殖和正常代谢的重组人表皮生长因子粉剂，而且包括促进皮肤吸收的修护水剂，使得重组人表皮生长因子更容易地进入皮肤发挥作用。
本发明的目的之四在于提供一种皮肤修护剂的制备方法，该制备方法将重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂分别制备后独立包装在同一个喷雾瓶中，使用时将两者混合即可，该方法使得重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂相对独立，这样保证了重组人表皮生长因子活性的稳定。
本发明的目的之五在于提供一种皮肤修护剂的使用方法，将喷雾瓶中相对独立的重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂混合后，使重组人表皮生长因子粉剂溶解后，再喷涂至皮肤上，操作方便、使用便捷。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种重组人表皮生长因子粉剂，其是由如下以质量百分比计的组分制备而成：
Figure BDA0001316504580000031
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种重组人表皮生长因子粉剂的制备方法，包括，
备料步骤：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，直至溶解，得到第一混合液；
过滤步骤：将第一混合液经微孔过滤，得到第二混合液；
干燥步骤：将第二混合液放入真空冷冻干燥机中，抽真空升华，出料得到重组人表皮生长因子粉剂。
进一步地，备料步骤中，搅拌的速度为500-1000r/min，搅拌时间为8-12min。
进一步地，过滤步骤中，微孔滤膜的孔径为0.2-0.3μm。
进一步地，干燥步骤中，第二混合液放入真空冷冻干燥机后，真空冷冻干燥机先降温至-40至-30℃，预冻0.5-1.2h，然后自动加热，抽真空升华，升温至30-35℃，保持5-7h，最后再停机出料。
进一步地，干燥步骤中，真空压强为9-11MPa。
本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
一种皮肤修护剂，其是由前述的重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂制备而成；所述修护水剂是由如下以质量百分比计的组分制备而成：
Figure BDA0001316504580000041
本发明的目的之四采用如下技术方案实现：
一种皮肤修护剂的制备方法，包括重组人表皮生长因子粉剂制备步骤、修护水剂制备步骤和组合包装步骤；
重组人表皮生长因子粉剂制备步骤包括：
备料步骤：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，直至溶解，得到第一混合液A；
过滤步骤：将第一混合液A经微孔过滤，得到第二混合液A；
干燥步骤：将第二混合液A放入真空冷冻干燥机中，抽真空升华，出料得到重组人表皮生长因子粉剂；
修护水剂制备步骤包括：
配料步骤：按配比将透明质酸、胶原蛋白倒入混合罐，加入1/4-1/2的第二纯化水，加热溶解后，得到第一混合液B；
填料步骤：将甘油、海藻糖和甘草类黄酮倒入第一混合液B中，加入剩余的第二纯化水，搅拌均匀，得到第二混合液B；
微滤步骤：将第二混合液B经孔径为0.2-0.3μm的微孔过滤，得到修护水剂；
组合包装步骤包括：
将重组人表皮生长因子粉剂填充在喷雾瓶的上层，将修护水剂填充在喷雾瓶的下层，即得皮肤修护剂。
进一步地，修护水剂制备步骤的配料步骤中，加热至75-85℃，溶解后，降温至40-50℃，得到第一混合液B。
本发明的目的之五采用如下技术方案实现：
一种皮肤修护剂的使用方法，该皮肤修护剂为前述的制备方法得到的皮肤修护剂，使用方法包括以下步骤，
混合步骤：将喷雾瓶上层的重组人表皮生长因子粉剂溶解于喷雾瓶下层的修护水剂中，混合均匀，得到皮肤修护剂；
喷涂步骤：将喷雾瓶的喷射口放置于距离皮肤待修复位置5-10cm，按压喷雾瓶的喷头将皮肤修护剂喷涂于皮肤上，待皮肤修护剂被吸收即可。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
(1)本发明的重组人表皮生长因子粉剂，该粉剂中的重组人表皮生长因子不仅能促进表皮细胞增殖，可以用于角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合，还能促进正常表皮细胞的新陈代谢，起到美白、抗皱、延缓衰老的作用，而且保证了重组人表皮生长因子的活性，提高了重组人表皮生长因子的作用效率；
(2)本发明的重组人表皮生长因子粉剂的制备方法，该制备方法制备为粉剂，既保证重组人表皮生长因子的活性和产品的经济有效性，而且步骤简单易操作，节省了人力物力；
(3)本发明的皮肤修护剂，该皮肤修护剂不仅包括促进表皮细胞增殖和正常代谢的重组人表皮生长因子粉剂，而且包括促进皮肤吸收的修护水剂，使得重组人表皮生长因子更容易地进入皮肤发挥作用；
(4)本发明的皮肤修护剂的制备方法，该制备方法将重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂分别制备后独立包装在同一个喷雾瓶中，使用时将两者混合即可，该方法使得重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂相对独立，这样保证了重组人表皮生长因子活性的稳定；
(5)本发明的皮肤修护剂的使用方法，将喷雾瓶中相对独立的重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂混合后，使重组人表皮生长因子粉剂溶解后，再喷涂至皮肤上，操作方便、使用便捷。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
一种重组人表皮生长因子粉剂，其是由如下以质量百分比计的组分制备而成：
Figure BDA0001316504580000071
上述重组人表皮生长因子粉剂的制备方法，包括，
备料步骤：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，搅拌的速度为500-1000r/min，搅拌时间为8-12min，直至溶解，得到第一混合液；
过滤步骤：将第一混合液经微孔过滤，微孔滤膜的孔径为0.2-0.3μm，得到第二混合液；
干燥步骤：将第二混合液放入真空冷冻干燥机中后，真空冷冻干燥机先降温至-40至-30℃，预冻0.5-1.2h，然后自动加热，抽真空升华，真空压强为9-11MPa，升温至30-35℃，保持5-7h，最后再停机出料得到重组人表皮生长因子粉剂。
一种皮肤修护剂，其是由前述的重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂制备而成；修护水剂是由如下以质量百分比计的组分制备而成：
Figure BDA0001316504580000081
上述皮肤修护剂的制备方法，包括重组人表皮生长因子粉剂制备步骤、修护水剂制备步骤和组合包装步骤；
重组人表皮生长因子粉剂制备步骤包括：
备料步骤：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，直至溶解，得到第一混合液A；
过滤步骤：将第一混合液A经微孔过滤，得到第二混合液A；
干燥步骤：将第二混合液A放入真空冷冻干燥机中，抽真空升华，出料得到重组人表皮生长因子粉剂；
修护水剂制备步骤包括：
配料步骤：按配比将透明质酸、胶原蛋白倒入混合罐，加入1/4-1/2的第二纯化水，加热至75-85℃，溶解后，降温至40-50℃，得到第一混合液B；
填料步骤：将甘油、海藻糖和甘草类黄酮倒入第一混合液B中，加入剩余的第二纯化水，搅拌均匀，得到第二混合液B；
微滤步骤：将第二混合液B经孔径为0.2-0.3μm的微孔过滤，得到修护水剂；
组合包装步骤包括：
将重组人表皮生长因子粉剂填充在喷雾瓶的上层，将修护水剂填充在喷雾瓶的下层，即得皮肤修护剂。
一种皮肤修护剂的使用方法，该皮肤修护剂为前述的制备方法得到的皮肤修护剂，使用方法包括以下步骤，
混合步骤：将喷雾瓶上层的重组人表皮生长因子粉剂溶解于喷雾瓶下层的修护水剂中，混合均匀，得到皮肤修护剂；
喷涂步骤：将喷雾瓶的喷射口放置于距离皮肤待修复位置5-10cm，按压喷雾瓶的喷头将皮肤修护剂喷涂于皮肤上，待皮肤修护剂被吸收即可。
本发明的重组人表皮生长因子(活性7500万U/g)由深圳华生元基因工程发展有限公司提供，其余原料为市售医药级原料。
实施例1-5：
实施例1-5的皮肤修护剂，均是由重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂制备而成；重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂是由如下以质量百分比计的组分制备而成：
表1实施例1-5的重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂配比
Figure BDA0001316504580000101
上述皮肤修护剂均按照如下制备方法制备得到，制备方法包括重组人表皮生长因子粉剂制备步骤、修护水剂制备步骤和组合包装步骤；
重组人表皮生长因子粉剂制备步骤包括：
备料步骤：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，搅拌的速度为500-1000r/min，搅拌时间为8-12min，直至溶解，得到第一混合液；
过滤步骤：将第一混合液经微孔过滤，微孔滤膜的孔径为0.2-0.3μm，得到第二混合液；
干燥步骤：将第二混合液放入真空冷冻干燥机中后，真空冷冻干燥机先降温至-40至-30℃，预冻0.5-1.2h，然后自动加热，抽真空升华，真空压强为9-11MPa，升温至30-35℃，保持5-7h，最后再停机出料得到重组人表皮生长因子粉剂；
修护水剂制备步骤包括：
配料步骤：按配比将透明质酸、胶原蛋白倒入混合罐，加入1/4-1/2的第二纯化水，加热至75-85℃，溶解后，降温至40-50℃，得到第一混合液B；
填料步骤：将甘油、海藻糖和甘草类黄酮倒入第一混合液B中，加入剩余的第二纯化水，搅拌均匀，得到第二混合液B；
微滤步骤：将第二混合液B经孔径为0.2-0.3μm的微孔过滤，得到修护水剂；
组合包装步骤包括：
将重组人表皮生长因子粉剂填充在喷雾瓶的上层，将修护水剂填充在喷雾瓶的下层，即得皮肤修护剂。
对比例：
对比例为一种皮肤修护液，其是由重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂制备而成；重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂与实施例2的组分和配比相同，只是A溶液不需冷冻干燥步骤，直接与B溶液混合得到产品。
该皮肤修护液的制备方法包括：
1)按配比称量透明质酸、胶原蛋白，倒入混合罐，加入1/2纯化水，开动搅拌，升温，加热至80℃，继续搅拌15分钟，直至所有物质溶解后，降温至45℃，得到A溶液；
2)按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白、重组人表皮生长因子、甘油、海藻糖和甘草类黄酮，再加入剩余纯化水，搅拌10分钟，得到B溶液；
3)将A溶液与B溶液混合均匀，用0.22um微孔滤膜过滤，得到皮肤修护液。
效果评价及性能检测
为了考察活性物质重组人表皮生长因子不同比例对效果的影响，因此对实施例1-3以及对比例进行实验验证。
一、产品表皮生长因子活性稳定性试验对比
试验样品按规定温度条件保存，每隔一短时间取样检测，比较表皮生长因子活性，评价稳定性效果。表皮生长因子活性检测：按《中国药典》三部附录X H重组人表皮生长因子生物学活性测定方法。
1、按常规储存条件2-8℃保存
表2实施例2与对比例常规存储活性对比
Figure BDA0001316504580000121
从表2可见，实施例2的皮肤修护剂明显保持表皮生长因子活性稳定，12个月活力仅下降1％，而对比例的皮肤修护液12个月活性下降超过43.38％。
2、破坏性试验(储存温度30度)
表3实施例2与对比例破坏存储活性对比
Figure BDA0001316504580000131
由表3可见，皮肤修护剂稳定性比皮肤修护剂高，对比例的皮肤修护液30℃条件储存12个月液体产品活力下降70％，实施例2的皮肤修护剂仅为15.89％。
二、应用效果对比
1、试验方法
选小鼠的Balb 3T3细胞，在含有10％FBS(gibco公司)的DMEM(gibco公司)培养基置37℃CO2培养箱(MEMMERT INCO246)培养，将贴壁细胞洗脱、离心，用DMEM培养基稀释使细胞浓度为1×105左右，接种到96孔细胞培养板置37℃的CO2培养箱培养，待细胞生长较紧密的连接成单层后，用宽度为1.5mm的金属片在培养孔中央垂直划一道痕迹，吸出原培养液，每孔加100μL培养液洗两次，洗净悬浮细胞，然后各孔加入不同终浓度的培养液100μL，空白对照仅加入DMEM培养液100μL，每个浓度组做3个平行样。分别测量不同培养时间(0、6、12、18、24h)的划痕创面愈合情况。按创面愈合率％＝(0h创面面积-th创面面积)/0h创面面积×100％，计算样品对细胞修复的影响，数据处理用Imagepro-plus图像分析软件计算。
试验样品说明：空白为不添加(自然愈合)；实施例1、实施例2、实施例3和对比例的样品均为8℃储存一个月后使用。
2、试验结果
表4实施例1-3以及对比例应用效果对比
Figure BDA0001316504580000141
由表4可见，实施例1-3比空白对照组明显愈合快，相同成分配比的实施例2与对比例比较，实施例2的18h可以100％愈合，直接配制表皮生长因子到溶液样品的对比例要24h才愈合，皮肤修护剂明显比单纯液态的皮肤修护液效果显著。
综上所述，本发明的皮肤修护剂不仅包括促进表皮细胞增殖和正常代谢的重组人表皮生长因子粉剂，该粉剂中的重组人表皮生长因子不仅能促进表皮细胞增殖，可以用于角膜损伤、烧烫伤及手术等创面的修复和愈合，还能促进正常表皮细胞的新陈代谢，起到美白、抗皱、延缓衰老的作用，也保证了重组人表皮生长因子的活性，提高了重组人表皮生长因子的作用效率，而且包括促进皮肤吸收的修护水剂，使得重组人表皮生长因子更容易地进入皮肤发挥作用；同时，重组人表皮生长因子粉剂和修护水剂相对独立，这样保证了重组人表皮生长因子活性的稳定。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

Claims (1)

1.一种皮肤修护剂，其特征在于，其是由重组人表皮生长因子粉剂以及修护水剂制备而成；
所述重组人表皮生长因子粉剂是由如下以质量百分比计的组分制备而成：活性为7500万U/g的重组人表皮生长因子0.05％，甘露糖醇2.5％，甘氨酸5％，人血白蛋白0.5％，第一纯化水为91.95％；
所述修护水剂是由如下以质量百分比计的组分制备而成：甘油10％，海藻糖6％，透明质酸0.2％，胶原蛋白3％，甘草类黄酮0.2％，第二纯化水为80.6％；
所述重组人表皮生长因子粉剂制备步骤包括：
备料步骤：：按配比称量甘露糖醇、甘氨酸、人血白蛋白和重组人表皮生长因子，倒入混合罐，加入第一纯化水，搅拌，搅拌的速度为500-1000r/min，搅拌时间为8-12min，直至溶解，得到第一混合液；
过滤步骤：将第一混合液经微孔过滤，微孔滤膜的孔径为0.2-0.3μm，得到第二混合液；
干燥步骤：将第二混合液放入真空冷冻干燥机中后，真空冷冻干燥机先降温至-40至-30℃，预冻0.5-1.2h，然后自动加热，抽真空升华，真空压强为9-11MPa，升温至30-35℃，保持5-7h，最后再停机出料得到重组人表皮生长因子粉剂；
所述修护水剂制备步骤包括：
配料步骤：按配比将透明质酸、胶原蛋白倒入混合罐，加入1/4-1/2的第二纯化水，加热至75-85℃，溶解后，降温至40-50℃，得到第一混合液B；
填料步骤：将甘油、海藻糖和甘草类黄酮倒入第一混合液B中，加入剩余的第二纯化水，搅拌均匀，得到第二混合液B；
微滤步骤：将第二混合液B经孔径为0.2-0.3μm的微孔过滤，得到修护水剂；
所述皮肤修护剂是将重组人表皮生长因子粉剂填充在喷雾瓶的上层，将修护水剂填充在喷雾瓶的下层，即得皮肤修护剂。
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