CN107164281B - 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 - Google Patents
一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107164281B CN107164281B CN201710532433.5A CN201710532433A CN107164281B CN 107164281 B CN107164281 B CN 107164281B CN 201710532433 A CN201710532433 A CN 201710532433A CN 107164281 B CN107164281 B CN 107164281B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acetoin
- bacillus
- strain
- labeled
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title abstract description 13
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-UKLRSMCWSA-N dextrose-2-13c Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[13C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-UKLRSMCWSA-N 0.000 claims abstract description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000012467 final product Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 19
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 11
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 10
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 8
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-USBRANDWSA-N (3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound OC[C@H]1O[13CH](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-USBRANDWSA-N 0.000 description 2
- -1 3-hydroxy-2-butanone Chemical compound 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000003141 isotope labeling method Methods 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001948 isotopic labelling Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000004452 microanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
- C12P7/26—Ketones
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一株芽孢杆菌及其在制备13C标记的乙偶姻中的应用方法。该菌株为芽孢杆菌Bacillus sp.H‑18W,已于2017年6月16日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC M 2017346。该菌株革兰氏染色呈阳性,产芽孢,细胞形态为杆状,可在37–55℃生长。利用本发明菌株,以20g/L 13C标记的葡萄糖为碳源原料,经45℃发酵8h可得到7.5g/L 13C标记的乙偶姻。经过提取,最终可得纯度超过95%的13C标记的乙偶姻,乙偶姻的提取回收率超过30%。本发明在国内外首次实现了制备13C标记的乙偶姻,极具开发应用潜力。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一株芽孢杆菌及其在制备13C标记的乙偶姻中的应用。
背景技术
乙偶姻即3-羟基-2-丁酮,在食品、香料、化妆品、化学合成等领域有重要的用途(Xiao and Lu,2014)。国内外对乙偶姻的相关应用及基础研究很多,但至今仍有非常多的问题需要研究解决,例如乙偶姻在某些细胞内的分解代谢与物质转化机制、以乙偶姻为前体合成其他化合物时的一些反应机理等等,这些问题很难用一般的方法进行研究。
同位素示踪法是利用放射性同位素或稳定性同位素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法。同位素示踪所利用的放射性同位素或稳定性同位素及它们的化合物与自然界存在的相应普通元素及其化合物之间的化学性质和生物学性质是相同的,只是具有不同的核物理性质。因此,可以用同位素作为一种标记,制成含有同位素的标记化合物(如标记食物、药物和代谢物质等)代替相应的非标记化合物。对于放射性同位素,利用它们不断地释放出特征射线的核物理性质,可以用核探测器随时追踪它们在体内或体外的位置、数量及其转变等;对于稳定性同位素,它们虽然不释放射线,但可以利用它们与相应普通元素的质量之差,通过质谱仪、核磁共振仪等分析仪器来测定。20世纪70年代以来,随着放射性同位素示踪剂对人类健康与环境的不良影响以及气相色谱-质谱联用仪等分析技术的发展,稳定性同位素示踪剂开始逐渐替代放射性同位素示踪剂(Fernández-Fernándezet al.2017)。
但稳定性同位素示踪剂往往价格昂贵,用一般的方法难以制备。目前国内外还没有制备13C标记的乙偶姻的任何报道,更没有商品化的产品,这种情况大大制约了乙偶姻的相关基础研究。
参考文献:
Xiao Z,Lu JR(2014)Strategies for enhancing fermentative production ofacetoin:a review. Biotechnology Advances 32:492–503.
Fernández-Fernández M,Rodríguez-González P,Hevia Sánchez D,González-Menéndez P,Sainz Menéndez RM,García Alonso JI(2017)Accurate and sensitivedetermination of molar fractions of 13C-Labeled intracellular metabolites incell cultures grown in the presence of isotopically-labeled glucose.AnalyticaChimica Acta 969:35–48.
发明内容
针对上述目前现状,本发明提供一株芽孢杆菌及其在制备13C标记的乙偶姻中的应用方法。
本发明提供的芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址:中国·武汉·武汉大学(湖北省武汉市武昌区八一路299号),保藏编号为CCTCC M2017346,保藏日期为2017年6月16日。
本发明提供一株芽孢杆菌,并利用这株芽孢杆菌发酵制备13C标记的乙偶姻。本发明提供的芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W革兰氏染色呈阳性,产芽孢,细胞形态为杆状。通过对本发明菌株的16S rDNA进行测序,并将本发明菌株的16S rDNA序列与EzTaxon数据库中已收录的细菌模式菌株的16S rDNA序列进行核苷酸序列同源性比对,发现本发明菌株的16S rDNA序列与已知芽孢杆菌(Bacillus)属菌株的16S rDNA序列的同源性大于99%。本发明菌株的16S rDNA 序列已提交到GenBank数据库中,登录号为MF405208。本发明菌株芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W 可在37–55℃温度范围内生长。
采用本发明提供的芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W,发酵制备13C标记的乙偶姻的方法,其涉及的实施步骤如下:
第一步:活化菌株:将本发明提供的菌株芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W划线接种到Luria-Bertani固体培养基上,置于45℃的恒温箱中培养8–12h,至菌落生长丰满。
所述Luria-Bertani固体培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠,17g 琼脂粉。调培养基pH至7.0。
第二步:制备液体种子:用接种环挑取上述步骤获得的菌落,接种到Luria-Bertani液体培养基中,45℃摇床培养10h。采用体积为250mL的挡板摇瓶,装液量为50mL;采用回旋式摇床,转速设定在100rpm。
所述Luria-Bertani液体培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠。调培养基pH至7.0。
第三步:发酵生产13C标记的乙偶姻:将上述步骤获得的液体种子按5%体积比接种到发酵培养基中,采用体积为250mL的挡板摇瓶,装液量为50mL;采用回旋式摇床,转速设定在100rpm。45℃发酵培养8h时停止发酵,收集发酵液,以8000rpm离心10min,收集上清液,采用气相色谱仪检测目标产物的产量。
所述发酵培养基每升中含有:10g酵母粉,10g酪蛋白水解物,20g 13C标记的葡萄糖。
第四步:提取13C标记的乙偶姻:将上述步骤获得的上清液置于旋转蒸发仪中,抽真空,在45℃条件下旋转蒸发,收集馏分。用等体积的二氯甲烷对收集到的馏分萃取4次,将有机相合并,并于35℃抽真空旋转蒸发开始去除二氯甲烷。当釜底剩余物体积为旋转蒸发开始时总体积的约2%时,终止旋转蒸发过程。收集釜底剩余物并置于室温下自然挥发,继续除去产物中残余的二氯甲烷,其间用气相色谱仪检测二氯甲烷去除进度。最后,用气相色谱仪和气相色谱-质谱联用仪检测、鉴定终产物。
利用本发明所述芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W,采用上述发酵方法,45℃发酵8h可以由 20g/L的13C标记的葡萄糖产生7.5g/L的13C标记的乙偶姻。经过提取,最终可得纯度超过 95%的13C标记的乙偶姻,乙偶姻的提取回收率超过30%。
本发明在国内外首次实现了制备13C标记的乙偶姻,极具开发应用潜力。
附图说明
图1是由芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W CCTCC M 2017346发酵制备提取所得的13C标记的乙偶姻产物经气相色谱仪(配置氢火焰离子化检测器)测得的纯度表征图;图2是本发明制备所得的13C标记的乙偶姻产物经气相色谱-质谱联用仪(配置电子轰击离子源)测得的质谱鉴定图;图3是用于对照分析的普通乙偶姻经气相色谱-质谱联用仪(配置电子轰击离子源) 测得的质谱图。
具体实施方式
实施例1:菌株富集筛选与分离纯化
1.1环境样品采集
从山东省青岛市一处外窗台的灰尘中采集样品。
1.2菌株初筛
将上述样品加入到无菌水中,快速搅拌并自然沉降10min,然后取上清液适当稀释后涂布到Luria-Bertani固体培养基上,在45℃培养8–12h。挑取单菌落,经多次划线分离纯化得到纯的菌株。所述Luria-Bertani固体培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠,17g琼脂粉。调培养基pH至7.0。
1.3菌株复筛
将上述实验得到的纯的菌株,接种到复筛培养基中,在45℃摇瓶培养24h,用气相色谱仪检测产物。所述复筛培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠,20g葡萄糖。调培养基pH至7.0。
经过复筛,发现1株细菌乙偶姻产量较高,将此菌株命名为H-18W,即为本发明菌株。将得到的目的菌株采用斜面传代法、低温甘油法、低温真空干燥法等常规方法保存备用。
实施例2:菌株鉴定与保藏
将实施例1得到的菌株H-18W进行检验,其革兰氏染色呈阳性,产芽孢,细胞形态为杆状;45℃条件下,采用Luria-Bertani固体培养基培养8h,可得到直径大小约为2–3mm、表面有褶皱的灰白色菌落。经检验,本发明菌株H-18W可在37–55℃范围内生长。
通过对本发明菌株的16S rDNA进行测序,并将本发明菌株的16S rDNA序列和EzTaxon 数据库中已收录的细菌模式菌株的16S rDNA序列进行核苷酸序列同源性比对,发现本发明菌株的16S rDNA序列与已知芽孢杆菌(Bacillus)属的菌株的16S rDNA序列的同源性大于 99%,因此将该菌株鉴定为芽孢杆菌(Bacillus)属。
本发明菌株芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W已于2017年6月16日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC M 2017346。
实施例3:采用芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W发酵制备、提取13C标记的乙偶姻的方法
3.1活化菌株
将本发明提供的菌株芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W划线接种到Luria-Bertani固体培养基上,置于45℃的恒温箱中培养8–12h,至菌落生长丰满。
所述Luria-Bertani固体培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠,17g 琼脂粉。调培养基pH至7.0。
3.2制备液体种子
用接种环挑取上述步骤获得的菌落,接种到Luria-Bertani液体培养基中,45℃摇床培养 10h。采用体积为250mL的挡板摇瓶,装液量为50mL;采用回旋式摇床,转速设定在100rpm。
所述Luria-Bertani液体培养基每升中含有:10g蛋白胨,5g酵母粉,10g氯化钠。调培养基pH至7.0。
3.3发酵生产13C标记的乙偶姻
将上述步骤获得的液体种子按5%体积比接种到50mL发酵培养基中,采用体积为250mL 的挡板摇瓶,装液量为50mL;采用回旋式摇床,转速设定在100rpm。所述发酵培养基每升中含有:10g酵母粉,10g酪蛋白水解物,20g D-葡萄糖-1-13C。45℃发酵培养8h时停止发酵,收集发酵液,以8000rpm离心10min,收集上清液,采用气相色谱仪检测目标产物的产量。
经检测,利用本发明所述芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W,采用上述发酵方法,45℃发酵8h 可以由20g/L的D-葡萄糖-1-13C产生7.5g/L的13C标记的乙偶姻。
3.4提取13C标记的乙偶姻
将上述步骤获得的发酵液上清液约50mL置于旋转蒸发仪中,抽真空,在45℃条件下旋转蒸发,收集馏分。用等体积的二氯甲烷对收集到的馏分萃取4次,将有机相合并,并于35℃抽真空旋转蒸发开始去除二氯甲烷。当釜底剩余物体积为旋转蒸发开始时总体积的约2%时,终止旋转蒸发过程。收集釜底剩余物并置于室温下自然挥发,继续除去产物中残余的二氯甲烷,其间用气相色谱仪检测二氯甲烷去除进度。
最后,得到100μL终产物,用气相色谱仪测得其纯度为95.10%(附图1),计算得到提取回收率为33%,终产物中杂质主要为残余二氯甲烷,占2.43%。经气相色谱-质谱联用仪对照鉴定(附图2、3),终产物确定为13C标记的乙偶姻,其中m/z 89和90分子的丰度分别是普通乙偶姻中m/z 89和90分子丰度的3.62倍和19.63倍,完全满足一般同位素示踪研究的需要。
本发明在国内外首次实现了制备13C标记的乙偶姻,可按实施例类似的方法扩大生产,极具开发应用潜力。
Claims (3)
1.芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W,其在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCCM2017346。
2.权利要求1所述的芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W在制备13C标记的乙偶姻中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:利用所述芽孢杆菌Bacillus sp.H-18W制备13C标记的乙偶姻,所采用的碳源原料为13C标记的葡萄糖。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710532433.5A CN107164281B (zh) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710532433.5A CN107164281B (zh) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107164281A CN107164281A (zh) | 2017-09-15 |
CN107164281B true CN107164281B (zh) | 2020-06-23 |
Family
ID=59827895
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710532433.5A Expired - Fee Related CN107164281B (zh) | 2017-07-03 | 2017-07-03 | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107164281B (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101974444A (zh) * | 2010-05-13 | 2011-02-16 | 南京工业大学 | 一种高产d-核糖且联产乙偶姻的枯草芽孢杆菌 |
CN103627698A (zh) * | 2013-12-05 | 2014-03-12 | 江南大学 | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 |
WO2014146881A1 (de) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Wacker Chemie Ag | Mikroorganismenstamm und verfahren zur fermentativen herstellung von c4-verbindungen aus c5-zuckern |
CN105820988A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-08-03 | 中国石油大学(华东) | 一株芽孢杆菌及其在高温发酵生产乙偶姻和2,3-丁二醇中的应用 |
-
2017
- 2017-07-03 CN CN201710532433.5A patent/CN107164281B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101974444A (zh) * | 2010-05-13 | 2011-02-16 | 南京工业大学 | 一种高产d-核糖且联产乙偶姻的枯草芽孢杆菌 |
WO2014146881A1 (de) * | 2013-03-18 | 2014-09-25 | Wacker Chemie Ag | Mikroorganismenstamm und verfahren zur fermentativen herstellung von c4-verbindungen aus c5-zuckern |
CN103627698A (zh) * | 2013-12-05 | 2014-03-12 | 江南大学 | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 |
CN105820988A (zh) * | 2016-06-08 | 2016-08-03 | 中国石油大学(华东) | 一株芽孢杆菌及其在高温发酵生产乙偶姻和2,3-丁二醇中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Mario Fern andez-Fern andez等.Accurate and sensitive determination of molar fractions of 13C-Labeled intracellular metabolites in cell cultures grown in the presence of isotopically-labeled glucose.《Analytica Chimica Acta》.2017,第969卷35-48. * |
Metabolic Network Analysis of Bacillus clausii on Minimal and Semirich Medium Using 13C-Labeled Glucose;Torben Christiansen等;《Metabolic Engineering》;20020207;第4卷;159-169 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN107164281A (zh) | 2017-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109971681B (zh) | 老窖梭状芽孢杆菌及其用途 | |
CN113307848A (zh) | 具有抗真菌和清除自由基活性的环色-丝-缬-异亮-亮肽及制备方法 | |
CN106755186B (zh) | 一种中间苍白杆菌胞外多糖及其在土壤改良方面的应用 | |
CN110317744B (zh) | 一种生产蓝紫色素的马赛菌及其生产蓝紫色素的方法 | |
CN101624591A (zh) | 一种利用等离子体对微生物进行诱变育种的方法 | |
CN107164281B (zh) | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 | |
CN112725235B (zh) | 一种梭状芽孢杆菌属新菌株及其应用 | |
CN103756936B (zh) | 一种双头菌及其生产l(+)-酒石酸或其盐的方法 | |
CN113025515A (zh) | 高产灵菌红素的粘质沙雷氏菌Ka3菌株及其应用 | |
CN106754562B (zh) | 一种高产细菌多糖的菌株及其发酵中药废弃物制备多糖的方法 | |
CN111154679B (zh) | 一种黄曲霉毒素降解菌的高效发酵方法 | |
CN113817650A (zh) | 一株产吡嗪高温放线菌、分离筛选及应用 | |
CN105400712B (zh) | 耐受高浓度葡萄糖的巨大芽孢杆菌CGMCC No.10669及其应用 | |
CN113462594B (zh) | 一株产石杉碱乙的克吕沃尔氏菌属qnx-s26菌株及用途 | |
CN111961614B (zh) | 一株产胞外多糖的细菌cd-1 | |
HU et al. | A High Throughput Screening Method For 1, 3‐Dihydroxyacetone‐Producing Bacterium By Cultivation In A 96‐Well Microtiter Plate | |
CN113215064B (zh) | 一株产美沙达唑类化合物的黏细菌及其应用 | |
KR100220019B1 (ko) | 사이클로스포린 a 생성 변이균주, 이의 분별방법 및 사이클로스포린 a의 제조방법 | |
CN117887640B (zh) | 一株n-甲基吡咯烷酮降解菌株、菌剂及其应用 | |
CN113564080B (zh) | 一种产蔗糖磷酸化酶的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN110305808B (zh) | 一种高耐受1,5-戊二胺的大肠杆菌及其应用 | |
CN105603010B (zh) | 一种微生物转化的方法 | |
CN115323006A (zh) | 一种利用生物质进行生物制氢的方法 | |
CN105603007B (zh) | 一种微生物转化的方法 | |
CN117757696A (zh) | 一株约氏不动杆菌ho-2及其降解三氯乙烯的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200623 |