CN107132102A - 一种改进的猪寄生虫病粪检方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种改进的猪寄生虫病粪检方法。先往猪粪便中加入尿素溶液,同时加入表面活性剂,搅拌混匀并过滤粗粪渣后静置,滴加除泡剂后再静置,取表层溶液进行镜检。本发明克服了传统饱和食盐水漂浮法的缺陷,通过利用尿素使蛋白质变性的原理,除去检测物中的蛋白质;再加入一定量的表面活性剂,利用表面活性剂的亲水憎油基和亲油憎水基,使粪便中的脂肪乳化成小分子脂滴,从而除去脂肪对检测的影响,同时加入除泡剂去除在使用表面活性剂时因搅拌而产生的气泡从而改善镜检视野,提高检测率;本发明操作简单、方便,检测率高,原料易得,很适合在实际临床中推广使用。
Description
技术领域
本发明属于动物疾病诊断技术领域。更具体地,涉及一种改进的猪寄生虫病粪检方法。
背景技术
猪球虫病是寄生于猪肠道上皮细胞的艾美耳属球虫和等孢属球虫引起,以腹泻和消瘦为主要症状。不同品种和生长阶段的猪均能感染猪球虫,其中哺乳期仔猪对猪等孢球虫(Isospora suis)的易感性最高,临床常出现水样腹泻,生长缓慢甚至死亡。猪等孢球虫流行广泛,在加拿大70%的猪场能检测到猪等孢球虫,在国内,四川感染率甚至高达87.50%。猪球虫病给养殖业带来严重的经济损失。
基于早发现早治疗的原则,及时地检测诊断猪球虫病可减少很大的经济损失。但是传统的粪检方法在检测球虫病时存在许多问题,特别是哺乳仔猪球虫病,由于哺乳猪仔消化***未发育完善,在感染猪等孢球虫时,导致肠道受损,消化不良,粪便中存在大量未消化的蛋白质、脂肪等杂质,在用饱和食盐水漂浮法的漂浮过程中,由于高浓度盐使蛋白质发生盐析现象,使蛋白质漂浮于液表,再加上液表漂浮着大量的脂肪,导致镜检时镜检视野不清晰,检测率低,检测困难,检测假阴性率随之升高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中猪球虫病粪检方法检测率低等缺陷和不足,提供一种的猪寄生虫病粪检方法,利用猪寄生虫虫卵/卵囊在高比重溶液可被漂浮的原理,选用尿素作为溶质的漂浮法取代现临床上惯用的饱和食盐水漂浮法,饱和尿素溶液的比重与饱和食盐水相当,且能使蛋白质变性,同时使用皂粒(主成分为脂肪酸纳)除去脂肪,再用硅酸盐除泡剂解决检测过程的气泡问题,从而改善了镜检视野,提高了检测率,准确度高。所述方法操作简单、方便,检测率高,原料易得,很适合在实际临床中推广使用。
本发明的目的是提供一种改进的猪寄生虫病粪检方法。
本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的:
一种改进的猪寄生虫病粪检方法,所述方法为往猪粪便中加入尿素溶液,同时加入表面活性剂,搅拌混匀并过滤粗粪渣后静置,滴加除泡剂后再静置,取表层溶液进行镜检。
本发明利用猪寄生虫虫卵/卵囊在高比重溶液可被漂浮的原理,选用尿素作为溶质的漂浮法取代现临床上惯用的饱和食盐水漂浮法,饱和尿素溶液的比重与饱和食盐水相当,且能使蛋白质变性,可以除去检测物中的蛋白质;同时加入表面活性剂,利用表面活性剂的亲水憎油基和亲油憎水基,使粪便中的脂肪乳化成小分子脂滴,从而除去脂肪对检测的影响;由于在表面活性物质除脂肪杂质时,搅拌过程中会产生一定气泡,难以消散,所以可以通过加入一定量的除泡剂除去气泡,使镜检视野更清晰,提高了检测率。
优选地,所述方法为往猪粪便中加入尿素溶液,同时加入表面活性剂,搅拌混匀并过滤粗粪渣后静置1~2min(优选1min),再滴加1~2滴除泡剂(优选1滴),静置10 min~15min(优选15min)后取液表溶液进行检测。
优选地,所述过滤粗粪渣为用60目铜筛过滤粗粪渣。
优选地,所述猪粪便与尿素溶液以及表面活性剂的质量体积比为1g:6~10ml:0.1~0.3g。
优选地,所述尿素溶液的质量分数为50%。
优选地,所述表面活性剂为脂肪酸盐。
更优选地,所述脂肪酸盐为皂粒;使用前,可将皂粒研磨成粉末,以提高皂粒在溶液中的扩散速度。
优选地,所述除泡剂为硅酸盐除泡剂。
所述硅酸盐除泡剂中的硅酸盐含疏水活性物质,可吸附表面活性物,使气泡表面张力变大导致其破裂,可很快的解决气泡的问题。
优选地,所述猪寄生虫病为猪球虫病。
由于哺乳仔猪的营养完全依赖于母乳,感染猪等孢球虫后的乳猪粪便成分含有未吸收完全的蛋白质、脂肪等物质,给哺乳仔猪球虫卵囊的检测带来一定的困难,而本发明所述方法恰好解决了上述问题,因此本发明所述方法尤其适用于仔猪球虫病的检测。
优选地,所述猪球虫病为猪等孢球虫病。
作为一种可选择的实施方式,本发明所述方法用于仔猪球虫病粪检时的具体操作方法包括如下步骤:
S1.将皂粒烘干,用研钵研成粉末;将尿素溶液配制成质量分数为50%的漂浮溶液。
S2.取3 g仔猪粪于100 ml烧杯中,先加入10 ml尿素溶液,同时加入0.1 g皂粒粉,充分搅拌均匀,再加入20 ml尿素溶液,再次搅匀,用60目铜筛过滤,静置1 min后滴加一滴硅酸盐除泡剂,用玻璃棒轻轻搅动液面,静置15 min。
S3.用取液环取液表溶液2~3滴于载玻片同一位置,在光学显微镜下观察,检测卵囊数。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
(1)本发明克服了传统饱和食盐水漂浮法的缺陷,通过利用尿素溶液与表面活性剂,有效去除了猪粪便中的蛋白质与脂肪,通过加入除泡剂除去气泡,从而改善了镜检视野,提高了检测率。
(2)本发明操作简单、方便,检测率高,原料易得,很适合在实际临床中推广使用。
附图说明
图1为实施例1各组镜检结果,a、b、c、d分别代表1、2、3、4组的试验结果。
图2为实施例2皂粒粉最佳量的测定实验粪检杯中液表层的油光对比图,a、b、c、d、e、f分别表示第1、2、3、4、5、6组的试验结果。
图3为皂粒粉最佳量的测定实验镜检对比图,a、b、c、d、e、f分别表示第1、2、3、4、5、6组的试验结果。
图4为本发明最佳的漂浮时间的测定实验的折线图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明,本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明,以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1 一种改进的猪球虫病粪检方法
1、取12 g油脂粘稠状仔猪粪便充分混匀,平分四份装入四个粪检杯,编组为1、2、3、4组。
第1组加入30 ml饱和食盐水溶液;
第2组加入30 ml尿素溶液(50%);
第3组加入30 ml尿素溶液(50%)同时加入少许皂粒粉溶液;
第4组在第3组的基础上漂浮一分钟后加入一滴除泡剂;
上述各组中溶液在漂浮一定时间后,用取液环取2~3环上层液于载玻片同一位置镜检,对比各个视野中的清晰度。
2、结果
结果如图1所示,第4组(尿素+皂粒粉+硅酸盐除泡剂)效果最好,可用于实际生产当中猪球虫病的检测。
实施例2 猪球虫病粪检的皂粒粉最佳量的测定
1、由于皂粒主要成分脂肪酸盐是表面活性物质,搅拌过程中,会产生一定气泡,当加入的皂粒粉量越多,产生的气泡越多,影响检测,气泡过多时,除泡剂除泡也显得有些困难,而且加得过多也是一种浪费,因此,需要对皂粒粉的添加量进行确定,实验步骤如下:
(1)取18 g油脂粘稠状仔猪粪便先充分混匀,平分为六份加入到6个100 ml粪检杯中,分为1~6组,第1组加入30ml饱和食盐水,其余各组分别加入30 ml尿素溶液(50%),充分搅拌至粪便完全溶解,过滤。
(2)设置皂粒粉量的梯度:0 g,0.1 g,0.3 g,0.5 g,0.7 g,分别加入第2、3、4、5、6组烧杯中,第1组为饱和食盐水组作对照,充分搅拌。
(3)观测杯中的油脂层(如图2所示),同时用取液环取环上层液于载玻片中,镜检,对比各个视野中的清晰度。
2、结果
重复多次实验,表明第3组的含量为最佳皂粒粉量,烧杯中液表层的油光最淡(如图2c)且镜检视野观测最清晰(如图3c)。
实施例3 猪球虫病粪检的最佳漂浮时间的测定
1、由于尿素溶液(50%)的比重为1.14,不同于而饱和食盐水的比重1.20,因此漂浮时间不能参照饱和食盐水,需要重新确定,实验步骤如下:
(1)设置漂浮时间梯度为0 min,5 min,10 min,15 min,20 min,25 min。
(2)取6个100 ml烧杯,每个烧杯中加入30 ml尿素溶液(50%)。
(3)每个烧杯中加入10000个球虫卵囊,同时充分搅拌并开始计时。
(4)从0 min开始,每过5 min分别用取液环从杯子中间及附近各取一环加到载玻片的同一位置,加上盖玻片,随机取5行或者5列计算球虫卵囊的数量,以确定最佳的漂浮时间。
2、结果
三次重复实验结果如表1所示,卵囊数随漂浮时间的变化折线图如图4所示,从上述数据可以得出看出:当漂浮时间为10 min~15 min时,即可进行观察。
表1 卵囊数随漂浮时间的变化关系
实施例4 改进的猪球虫病粪检方法的应用
1、改进的猪球虫病粪检方法的应用
(1)将30 g油脂粘稠状仔猪粪便先充分混匀,平分装入六个100 ml烧杯中,平分两组(第一组,第二组)。每组的三个平行组编号都为1~3。
(2)第一组每杯加30 ml饱盐水,第二组每杯30 ml尿素溶液(50%)同时加入0.1 g皂粒粉。并在每杯中加入1万个卵囊。混匀,用60目铜筛过滤,1 min后向第二组每杯加一滴除泡剂,轻轻搅拌液面。每组用取液环取三滴,每滴中随机取三个视野计卵囊数,每个烧杯的卵囊计数,以三滴的平均数计数。
2、结果
结果如表2所示,第二组(尿素+皂粒粉+硅酸盐除泡剂漂浮法组)检测出的卵囊量明显多于饱和食盐水漂浮法。
表2
实施例5 改进的猪球虫病粪检方法的临床应用
1、改进的猪球虫病粪检方法的临床应用
(1)取三个猪场仔猪粪便,各20份样,将每份样充分混匀,待用。
(2)准备120个100 ml杯,平分两组。第一组设置为饱和食盐水组,第二组设置为尿素+皂粒粉+除泡剂组。将每份的样品平分两份进行两组实验,并一一对应检测比较,然后向第一组加入30 ml饱和食盐水,第二组加入30 ml尿素+皂粒粉溶液,充分混匀,用60目铜筛过滤,1 min后向第二组每杯加一滴除泡剂,轻轻搅拌液面。
2、结果
检测结果如表3所示,第二组(皂粒粉+尿素+除泡剂组)三个猪场等孢球虫阳性率分别为:35%,25%,33%,而饱和食盐水组分别为:5%,5%,10%。表明第二组(即本发明方案)检测的阳性率明显优于第一组。
表3
Claims (10)
1.一种猪寄生虫病粪检方法,其特征在于,往猪粪便中加入尿素溶液,同时加入表面活性剂,搅拌混匀并过滤粗粪渣后静置,滴加除泡剂后再静置,取表层溶液进行镜检。
2.根据权利要求1所述的粪检方法,其特征在于,所述搅拌混匀并过滤粗粪渣后静置的时间为1~2min,滴加除泡剂后再静置的时间为10 min~15 min。
3.根据权利要求1所述的粪检方法,其特征在于,所述猪粪便与尿素溶液以及表面活性剂的质量体积比为1g:6~10ml:0.1~0.3g,所述除泡剂的用量为1~2滴。
4.根据权利要求1~3任一项所述的粪检方法,其特征在于,所述尿素溶液的质量分数为40~60%。
5.根据权利要求1~3任一项所述的粪检方法,其特征在于,所述表面活性剂为脂肪酸盐。
6.根据权利要求1~3任一项所述的粪检方法,其特征在于,所述除泡剂为硅酸盐除泡剂。
7.根据权利要求5所述的粪检方法,其特征在于,所述脂肪酸盐为皂粒。
8.根据权利要求1~7任一项所述的粪检方法,其特征在于,所述猪寄生虫病为猪球虫病。
9.权利要求1~8任一项所述的粪检方法在猪球虫病检测中的应用。
10.根据权利要求9所述的粪检方法,其特征在于,所述猪球虫病为猪等孢球虫病。
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CN201710465973.6A Pending CN107132102A (zh) | 2017-06-19 | 2017-06-19 | 一种改进的猪寄生虫病粪检方法 |
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CN (1) | CN107132102A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109652315A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-04-19 | 佛山市正典生物技术有限公司 | 一种提高猪球虫卵囊分离效率和洁净度的方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101424613A (zh) * | 2008-04-08 | 2009-05-06 | 廖党金 | 一种寄生虫虫卵检测方法 |
CN102131928A (zh) * | 2008-08-26 | 2011-07-20 | 奥林巴斯株式会社 | 粪便试样的调制方法、粪便试样调制用溶液、及粪便采集用试剂盒 |
CN103884716A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-25 | 北京林业大学 | 一种林麝粪便寄生虫卵检测方法 |
CN104215635A (zh) * | 2014-09-10 | 2014-12-17 | 南通市卫生监督所 | 生食水产品寄生虫的检测方法 |
CN105102629A (zh) * | 2013-01-22 | 2015-11-25 | 艾米克罗齐公司 | 用于检测病原体的快速方法 |
CN106769327A (zh) * | 2017-01-23 | 2017-05-31 | 湖南省天骑医学新技术股份有限公司 | 一种收集蠕虫虫卵的夹层杯及检验方法 |
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2017
- 2017-06-19 CN CN201710465973.6A patent/CN107132102A/zh active Pending
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