CN107058420A - 一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法 - Google Patents

一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,包括以下步骤:1)以甲壳素为原料,溶于水中,不断搅拌,氢氧化钠溶液调pH至8.5,50℃,加入甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;2)加盐酸调pH至5.5,加壳聚糖酶和纤维素酶,50℃恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;3)调pH至碱性,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳寡糖溶液,所述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,返入下一批反应中;4)所述已降解的壳聚糖溶液蒸馏浓缩,得浓缩液,加酒精,过滤,烘干,得壳寡糖。本发明的制备方法,反应条件简单,步骤少;效率高,利于工业大规模生产;得到较纯的壳寡糖产物。

Description

一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,特别涉及一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法。
背景技术
寡糖又叫壳聚寡糖、低聚壳聚糖,是将壳聚糖经特殊的生物酶技术(也有使用化学降解、微波降解技术的报道)降解得到的一种聚合度在2~20之间寡糖产品,分子量≤3200Da,是水溶性较好、功能作用大、生物活性高的低分子量产品。它具有壳聚糖所没有的较高溶解度,全溶于水,容易被生物体吸收利用等诸多独特的功能。
目前,制备壳寡糖的方法包括以下步骤:用甲壳素制备壳寡糖,将甲壳素加到50%的浓氢氧化钠中,加热煮4-6小时,用水洗至中性,过滤得到壳聚糖,再将壳聚糖溶解于稀酸中,用碱调节pH至5-6,加入酶在合适的温度下搅拌得到壳寡糖溶液。
上述步骤的不足之处:原料甲壳素要先由甲壳素脱乙酰得到壳聚糖,不能一步到位的生产出壳寡糖,步骤多,而若是以壳聚糖为原料则过于昂贵;生产过程中要经过多次过滤洗涤,步骤繁琐,使用了大量酸碱无法回收,增加了生产成本且会造成环境污染;生产出的壳寡糖溶液中还有未反应完全的长链多糖,产物不纯。
发明内容
鉴于上述现有技术存在的缺陷,本发明的目的是提出一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,反应条件简单,步骤少;用酶的方法绿色环保效率高,有利于工业大规模生产;得到较纯的壳寡糖产物;而滤出未降解的壳多糖还可以加入到下一批反应中继续反应。
本发明的目的将通过以下技术方案得以实现:
一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,所述方法包括以下步骤:
1)以甲壳素为原料,溶于水中,不断搅拌,氢氧化钠溶液调pH至8.5,50℃,加入甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加盐酸调pH至5.5,加壳聚糖酶和纤维素酶,50℃恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)调pH至碱性,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳寡糖溶液,所述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,返入下一批反应中;
4)所述已降解的壳聚糖溶液蒸馏浓缩,得浓缩液,加酒精,过滤,烘干,得壳寡糖。
上述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,步骤1)中所述甲壳素与甲壳素脱乙酰酶质量比为100∶0.1。
上述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,步骤2)中所述壳聚糖酶与所述纤维素酶的质量比为1∶1,所述甲壳素与壳聚糖酶质量比为100∶0.1。
上述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,步骤4)中所述浓缩液的体积与所述壳聚糖溶液的体积比为20∶100。
上述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,步骤4)中所述酒精的体积与所述浓缩液的体积比为3∶1。
与现有技术相比,本发明提供的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,达到了如下效果:将甲壳素直接制成壳寡糖,反应条件简单,步骤少;用酶的方法绿色环保效率高,有利于工业大规模生产;利用壳寡糖在碱性溶液中可溶,而长链糖在碱性溶液中不溶的性质进行过滤去除得到的产物较纯;而滤出未反应完全的壳多糖还可以加入到下一批反应中继续反应;本发明重现性好,适用于工业化生产。
以下便结合实施例,对本发明的具体实施方式作进一步的详述,以使技术方案更易于理解、掌握。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明,但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得,下面实施例并非用以限制本发明的专利范围,凡未脱离本发明所为的等效实施或变更,均应包含于本专利保护范围中。
实施例一
1)称取100g甲壳素,溶于1L水中,50℃水浴,不断搅拌,用10%浓度氢氧化钠溶液调pH至8.5,加入0.1g甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加31%盐酸调pH至5.5,可见大部分壳聚糖沉淀溶于水中,形成高粘度溶液,加入壳聚糖酶0.1g和纤维素酶0.1g,50℃水浴恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)加入10%氢氧化钠调pH至8.2,过滤,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳聚糖溶液,此时已降解的壳聚糖溶液为淡黄色澄清液体,上述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,加入到下一批制备方法步骤2)中,循环往返,以提高壳寡糖的产率;
4)蒸馏浓缩至已降解的壳聚糖溶液的20%,得浓缩液,加入与所述3倍体积浓缩液的酒精使壳寡糖析出,再用酒精洗涤一次后过滤烘干粉碎,得壳寡糖,密封包装储存。
本实施例的壳寡糖,外观呈浅黄色粉末,分子量3500,纯度>95%,脱乙酰度90.5%,灰分<1%,收率85.3%。
实施例二
1)称取100g甲壳素,溶于1L水中,50℃水浴,不断搅拌,用10%浓度氢氧化钠溶液调pH至8.5,加入0.1g甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加31%盐酸调pH至5.5,可见大部分壳聚糖沉淀溶于水中,形成高粘度溶液,加入壳聚糖酶0.1g和纤维素酶0.1g,50℃水浴恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)加入10%氢氧化钠调pH至8,过滤,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳聚糖溶液,此时已降解的壳聚糖溶液为淡黄色澄清液体,上述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,加入到下一批制备方法步骤2)中,循环往返,以提高壳寡糖的产率;
4)蒸馏浓缩至已降解的壳聚糖溶液的20%,得浓缩液,加入与所述3倍体积浓缩液的酒精使壳寡糖析出,再用酒精洗涤一次后过滤烘干粉碎,得壳寡糖,密封包装储存。
本实施例的壳寡糖,外观呈浅黄色粉末,分子量3500,纯度>95%,脱乙酰度91%,灰分<1%,收率86%。
实施例三
1)称取100g甲壳素,溶于1L水中,50℃水浴,不断搅拌,用10%浓度氢氧化钠溶液调pH至8.5,加入0.1g甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加31%盐酸调pH至5.5,可见大部分壳聚糖沉淀溶于水中,形成高粘度溶液,加入壳聚糖酶0.1g和纤维素酶0.1g,50℃水浴恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)加入10%氢氧化钠调pH至8.5,过滤,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳聚糖溶液,此时已降解的壳聚糖溶液为淡黄色澄清液体,上述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,加入到下一批制备方法步骤2)中,循环往返,以提高壳寡糖的产率;
4)蒸馏浓缩至已降解的壳聚糖溶液的20%,得浓缩液,加入与所述3倍体积浓缩液的酒精使壳寡糖析出,再用酒精洗涤一次后过滤烘干粉碎,得壳寡糖,密封包装储存。
本实施例的壳寡糖,外观呈白色粉末,分子量3450,纯度>95%,脱乙酰度90.8%,灰分<1%,收率84.8%。
实施例四
1)称取100g甲壳素,溶于1L水中,50℃水浴,不断搅拌,用10%浓度氢氧化钠溶液调pH至8.5,加入0.1g甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加31%盐酸调pH至5.5,可见大部分壳聚糖沉淀溶于水中,形成高粘度溶液,加入壳聚糖酶0.1g和纤维素酶0.1g,50℃水浴恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)加入10%氢氧化钠调pH至8.5,过滤,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳聚糖溶液,此时已降解的壳聚糖溶液为淡黄色澄清液体,上述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,加入到下一批制备方法步骤2)中,循环往返,以提高壳寡糖的产率;
4)蒸馏浓缩至已降解的壳聚糖溶液的20%,得浓缩液,加入与所述3倍体积浓缩液的酒精使壳寡糖析出,再用酒精洗涤一次后过滤烘干粉碎,得壳寡糖,密封包装储存。
本实施例的壳寡糖,外观呈浅黄色粉末,分子量3550,纯度>95%,脱乙酰度91.2%,灰分<1%,收率85.6%。
实施例5以实施例1的制备方法为例,分别将甲壳素脱乙酰酶、壳聚糖酶和纤维素酶的选取如表1中的温度与pH,得出最适温度与pH。
表1甲壳素脱乙酰酶、壳聚糖酶和纤维素酶的最适温度与pH
由表1得出:甲壳素脱乙酰酶的最适温度为50℃,最佳pH为8.5;壳聚糖酶和纤维素酶的最适温度为50℃,最佳pH为5.5,所得的壳寡糖收率最高,效果最理想。其中,
上述说明示出并描述了本发明的若干优选实施例,但如前所述,应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式,不应看作是对其他实施例的排除,而可用于各种其他组合、修改和环境,并能够在本文所述发明构想范围内,通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围,则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims (5)

1.一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
1)以甲壳素为原料,溶于水中,不断搅拌,氢氧化钠溶液调pH至8.5,50℃,加入甲壳素脱乙酰酶,恒温反应6小时,得壳聚糖溶液;
2)加盐酸调pH至5.5,加壳聚糖酶和纤维素酶,50℃恒温搅拌2小时,得壳寡糖溶液;
3)调pH至碱性,得到未降解的壳聚糖残渣和已降解的壳寡糖溶液,所述未降解的壳聚糖残渣进行过滤,返入下一批反应中;
4)所述已降解的壳聚糖溶液蒸馏浓缩,得浓缩液,加酒精,过滤,烘干,得壳寡糖。
2.根据权利要求1所述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,其特征在于,步骤1)中所述甲壳素与甲壳素脱乙酰酶质量比为100∶0.1。
3.根据权利要求1所述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,其特征在于,步骤2)中所述壳聚糖酶与所述纤维素酶的质量比为1∶1,所述甲壳素与壳聚糖酶质量比为100∶0.1。
4.根据权利要求1所述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,其特征在于,步骤4)中所述浓缩液的体积与所述壳聚糖溶液的体积比为20∶100。
5.根据权利要求1所述的一种将甲壳素制备成壳寡糖的方法,其特征在于,步骤4)中所述酒精的体积与所述浓缩液的体积比为3∶1。
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