CN107033236A - 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法 - Google Patents

一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107033236A
CN107033236A CN201710317433.3A CN201710317433A CN107033236A CN 107033236 A CN107033236 A CN 107033236A CN 201710317433 A CN201710317433 A CN 201710317433A CN 107033236 A CN107033236 A CN 107033236A
Authority
CN
China
Prior art keywords
serum albumin
human serum
fermentation broth
yeast fermentation
mixed
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710317433.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107033236B (zh
Inventor
林东强
褚文宁
吴启赐
姚善泾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN201710317433.3A priority Critical patent/CN107033236B/zh
Publication of CN107033236A publication Critical patent/CN107033236A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107033236B publication Critical patent/CN107033236B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，属于生物化工领域中的蛋白质层析分离技术。具体步骤如下：1)发酵液预处理，取含有人血白蛋白的酵母发酵液，离心去除酵母细胞，加入辛酸钠，加热，去除杂蛋白和灭活蛋白酶，离心分离，取上清液；2)柱层析，采用色氨酸为配基的混合模式介质，固定床层析分离上清液，上样pH值4.0～4.5，洗脱pH值7.0～9.0，收集洗脱峰。3)脱盐和干燥，将收集液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白。本发明的特色在于开发了一种新的分离工艺，可以从酵母发酵液中直接分离得到高纯度的人血白蛋白。方法的关键在于采用了以色氨酸为配基的混合模式介质，酵母发酵液无需调整离子强度，酸性条件下吸附，中性和弱碱性洗脱，具有洗脱条件温和、工艺简单、分离效率高、收率高的特点。

Description

一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法
技术领域
本发明属于蛋白质分离技术领域，涉及一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法。
背景技术
人血白蛋白是人体血浆中含量最丰富的蛋白质，约占血浆蛋白60％，主要生理功能是维持血浆渗透压，结合以及运输营养物质。临床用于治疗失血性休克、创伤性休克、急性血容量减少和低白蛋白血症等。还可作为细胞培养的添加成分、药物辅剂、赋形剂等，具有广泛的应用价值。
临床使用的人血白蛋白产品主要是从人源血浆中提取纯化，制备方法包括冷乙醇沉淀、硫酸铵沉淀、利凡诺沉淀、辛酸盐沉淀、层析等，原料紧张，分离复杂，且不能排除病毒或其它潜在致病因子的影响。利用现代生物技术构筑表达重组人血白蛋白的酵母细胞，可避免病毒感染，解决血源供应紧张等问题，具有良好的应用前景。但是，药用人血白蛋白的纯度要求高，而酵母发酵液组分复杂，含有蛋白酶、杂蛋白、核酸、脂肪酸、色素、多糖及热原物质等多种杂质，必须采用多步层析方法才能去除。
酵母发酵液一般pH约6.0，电导为15～25mS/cm。专利CN1127299和US5521287利用加热、稀释、调酸、阳离子交换层析、疏水作用层析、金属螯合层析、阴离子交换层析、硼酸钙沉淀等步骤，得到纯度较高的人血白蛋白。专利US5962649用阳离子交换扩张床吸附替代阳离子交换层析，缩短了工艺。不过，以上两种方法均采用阳离子交换层析捕获人血白蛋白，分离选择性有限，同时料液需要稀释处理，使得目标物浓度下降，吸附容量降低，处理量增大，过程时间延长。专利CN1854155公开了一种Capto MMC介质在酸性条件下捕获人血白蛋白，高盐淋洗去除杂质，中性且加盐条件下洗脱得到人血白蛋白，该方法得到的白蛋白收率为65.7％。专利CN 101768206A中保持专利CN1854155的上样和洗脱工艺不变，去除中间淋洗步骤，得到人血白蛋白纯度为92％，收率为71.3％。专利CN101260145也公布采用CaptoMMC分离重组人血白蛋白及其融合蛋白的层析纯化工艺，收率和纯度均为80％以上。上述基于Capto MMC的专利存在相似问题，纯度和收率普遍较低，部分工艺需要高盐淋洗去除杂质吸附，过程复杂。针对酵母发酵液的特点，提高人血白蛋白的捕获效率，开发一种高选择性、具有耐盐特性、收率高、过程简单的分离新方法，将有助于简化人血白蛋白的分离工艺，提高效率，节约成本。
混合模式层析是一种新型的生物分离技术，配基兼有多种功能基团，可以与目标蛋白产生多种相互作用，主要是疏水和静电相互作用。混合模式介质的配基密度通常较高，吸附容量大，具有耐盐吸附特性，洗脱条件温和，特别适合于大规模的分离纯化，已在抗体等蛋白的分离纯化中得到应用。MX-Trp-650M介质是TOSOH BIOSCIENCE公司开发的混合模式介质，以聚甲基丙烯酸酯微球为基质，色氨酸的氨基通过酰胺键偶联到基质上作为功能配基，配基结构见图1，主要用于抗体的精制纯化，如专利US0264685A1。查阅国内外专利和文献，未发现MX-Trp-650M及其类似介质用于从酵母发酵液中分离人血白蛋白
本发明利用混合模式层析的优势，以及人血白蛋白和小分子结合的特殊性，选用以色氨酸为主要功能配基的混合模式介质，直接从酵母发酵液中捕获人血白蛋白，开发一种混合模式层析分离人血白蛋白的新方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，具体包括如下步骤：
1)取含有人血白蛋白的酵母发酵液，通过离心去除酵母细胞，调节pH至6.0，加入辛酸钠至5～20mM，68℃加热30min，用离心机以8000～10000rpm转速离心10～20min，取上清液，得到人血白蛋白粗品溶液；
2)调节人血白蛋白粗品溶液的pH至4.0～4.5，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有以色氨酸为配基的混合模式介质的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到人血白蛋白溶液；
3)将人血白蛋白溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白；
所述的含有人血白蛋白的酵母发酵液为毕赤酵母表达重组人血白蛋白的发酵液，或者酿酒酵母表达重组人血白蛋白的发酵液；
所述的混合模式介质为MX-Trp-650M，或者以酰胺键偶联色氨酸氨基作为配基的层析介质；
所述的平衡缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液，pH值为4.0～4.5；
所述的洗脱缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-盐酸缓冲液或者甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，pH值为7.0～9.0，添加0-0.6M NaCl；
所述的步骤1)中调节酵母发酵液pH值和步骤3)人血白蛋白粗品溶液的pH调节所用酸溶液为乙酸或柠檬酸溶液，所用碱溶液为氢氧化钠溶液。
本发明针对酵母发酵液组分复杂、电导较高的特点，采用混合模式介质直接处理经预处理的酵母发酵液，充分利用混合模式层析的吸附容量大、选择性好、具有耐盐特性、洗脱条件温和等优势，提高分离效率，简化分离步骤，得到一个从酵母发酵液中直接分离人血白蛋白的新方法。本发明的优点在于：1)采用以色氨酸为主要功能配基的混合模式介质，利用色氨酸与人血白蛋白的特异性结合，提高人血白蛋白的吸附选择性，单步层析分离纯度高达95％以上，色素去除率达90％以上；2)混合模式介质具有良好的耐盐吸附特性，料液无需调节离子强度，直接上样，简化预处理步骤，提高分离效率；
3)混合模式介质的吸附容量大，上样量达到40mg/ml介质以上，过程处理量大；4)洗脱条件温和，pH中性或弱碱性条件下，利用静电排斥作用实现有效洗脱，人血白蛋白的回收率高，达到92％以上；5)工艺简单，易于放大。
附图说明
图1是混合模式介质的配基结构示意图。
图2是本发明混合模式层析分离人血白蛋白的层析分离谱图。
图3是本发明混合模式层析分离的料液和洗脱组分高效液相色谱分析图。
具体实施方式
本发明提供一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的方法。取含有人血白蛋白的酵母发酵液，通过离心澄清后，加入辛酸钠，加热，去除杂蛋白和灭活蛋白酶，离心分离，取上清液；将上清液通过混合模式层析柱进行分离，得到人血白蛋白。本发明方法得到的人血白蛋白纯度大于95％。
从酵母发酵液中分离人血白蛋白的方法包括如下步骤：
1)取含有人血白蛋白的酵母发酵液，通过离心去除酵母细胞，调节pH至6.0，加入辛酸钠至5～20mM，68℃加热30min，用离心机以8000～10000rpm转速离心10～20min，取上清液，得到人血白蛋白粗品溶液；
2)调节人血白蛋白粗品溶液的pH至4.0～4.5，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有以色氨酸为配基的混合模式介质的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到人血白蛋白溶液；
3)将人血白蛋白溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白；
所述的含有人血白蛋白的酵母发酵液为毕赤酵母表达重组人血白蛋白的发酵液，或者酿酒酵母表达重组人血白蛋白的发酵液；
所述的混合模式介质为MX-Trp-650M，或者以酰胺键偶联色氨酸氨基作为配基的层析介质；
所述的平衡缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液，pH值为4.0～4.5；
所述的洗脱缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-盐酸缓冲液或者甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，pH值为7.0～9.0，添加0-0.6M NaCl；
所述的步骤1)中调节酵母发酵液pH值和步骤3)人血白蛋白粗品溶液的pH调节所用酸溶液为乙酸或柠檬酸溶液，所用碱溶液为氢氧化钠溶液。
实施例1
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至5mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以8000rpm转速离心20min，得到上清液。调节上清液pH值为4.0，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)，洗脱液为20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为96.6％，收率为96.0％，色素去除率为90.2％。
实施例2
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至20mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以10000rpm转速离心10min，得到上清液。调节上清液pH值为4.5，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.5)，洗脱液为添加0.2M NaCl的20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为96.7％，收率为97.8％，色素去除率为91.4％。
实施例3
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至15mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以9000rpm转速离心15min，得到上清液。调节上清液pH值为4.2，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.2)，洗脱液为添加0.4M NaCl的20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，层析分离谱图如图2所示,HPLC分析纯度为98.5％，收率为97.4％，色素去除率为92.5％,液相分析谱图如图3所示。
实施例4
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至15mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以9000rpm转速离心15min，得到上清液。调节上清液pH值为4.0，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)，洗脱液为50mM的Tris-盐酸缓冲液(pH 8.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为96.8％，收率为96.3％，色素去除率为91.1％。
实施例5
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至20mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以8000rpm转速离心20min，得到上清液。调节上清液pH值为4.5，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.5)，洗脱液为50mM甘氨酸-氢氧化钠钠缓冲液(pH9.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为95.2％，收率为95.3％，色素去除率为90.2％。
实施例6
取含有重组人血白蛋白的酿酒酵母发酵液，电导率约20mS/cm，人血白蛋白浓度为8mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至10mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以9000rpm转速离心15min，得到上清液。调节上清液pH值为4.0，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml的MX-Trp-650M介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)，洗脱液为添加0.6M NaCl的20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为96.8％，收率为97.5％，色素去除率为90.0％。
实施例7
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至15mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以9000rpm转速离心15min，得到上清液。调节上清液pH值为4.0，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml以酰胺键偶联色氨酸的氨基作为配基的琼脂糖介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)，洗脱液为添加0.2M NaCl的20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为96.7％，收率为97.0％，色素去除率为92.2％。
实施例8
取含有重组人血白蛋白的毕赤酵母发酵液，电导率约24mS/cm，人血白蛋白浓度为10mg/ml。通过离心澄清后，调节pH至6.0，加入辛酸钠至15mM，68℃加热30min，沉淀杂蛋白和灭活蛋白酶，以9000rpm转速离心15min，得到上清液。调节上清液pH值为4.0，0.45μm滤膜过滤，取10ml作为进样样品。层析柱(内径0.5cm)中填充2ml以酰胺键偶联色氨酸的氨基作为配基的纤维素介质，平衡缓冲液为20mM的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)，洗脱液为添加0.2M NaCl的20mM磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(pH 7.0)，收集洗脱组分，脱盐，冷冻干燥，得到人血白蛋白，HPLC分析纯度为97.2％，收率为96.5％，色素去除率为91.1％。

Claims (5)

1.一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，其特征在于包括如下步骤：
1)取含有人血白蛋白的酵母发酵液，通过离心去除酵母细胞，调节pH至6.0，加入辛酸钠至5～20mM，68℃加热30min，用离心机以8000～10000rpm转速离心10～20min，取上清液，得到人血白蛋白粗品溶液；
2)调节人血白蛋白粗品溶液的pH至4.0～4.5，用0.45μm滤膜过滤后，上样到填充有以色氨酸为配基的混合模式介质的层析柱中，平衡缓冲液冲洗，洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰对应的洗脱缓冲液，得到人血白蛋白溶液；
3)将人血白蛋白溶液脱盐，冷冻干燥，得到纯度大于95％的人血白蛋白；
所述的混合模式介质为MX-Trp-650M，或者以酰胺键偶联色氨酸氨基作为配基的层析介质；
所述的平衡缓冲液pH值为4.0～4.5；
所述的洗脱缓冲液pH值为7.0～9.0。
2.如权利要求1所述的一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，其特征在于所述的含有人血白蛋白的酵母发酵液为毕赤酵母表达重组人血白蛋白的发酵液，或者酿酒酵母表达重组人血白蛋白的发酵液。
3.如权利要求1所述的一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，其特征在于所述的平衡缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液。
4.如权利要求1所述的一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法，所述的洗脱缓冲液为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、Tris-盐酸缓冲液或者甘氨酸-氢氧化钠缓冲液，添加0-0.6M NaCl。
5.如权利要求1所述的一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法，其特征在于所述的步骤1)中调节酵母发酵液pH值和步骤3)人血白蛋白粗品溶液的pH调节所用酸溶液为乙酸或柠檬酸溶液，所用碱溶液为氢氧化钠溶液。
CN201710317433.3A 2017-05-05 2017-05-05 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法 Active CN107033236B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710317433.3A CN107033236B (zh) 2017-05-05 2017-05-05 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710317433.3A CN107033236B (zh) 2017-05-05 2017-05-05 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107033236A true CN107033236A (zh) 2017-08-11
CN107033236B CN107033236B (zh) 2021-03-23

Family

ID=59537486

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710317433.3A Active CN107033236B (zh) 2017-05-05 2017-05-05 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107033236B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114885608A (zh) * 2020-12-08 2022-08-09 通化安睿特生物制药股份有限公司 纯化重组蛋白的方法
CN116693659A (zh) * 2023-07-11 2023-09-05 浙江大学 一种分离重组人血白蛋白的两步混合模式层析方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007079886A1 (de) * 2005-12-22 2007-07-19 Csl Behring Gmbh Oktanoatreduziertes human albumin
WO2014145744A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibody purification and purity monitoring
CN105063142A (zh) * 2015-08-07 2015-11-18 山西瑞亚力科技有限公司 一种用混合模式层析填料制备免疫球蛋白G Fc片段的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007079886A1 (de) * 2005-12-22 2007-07-19 Csl Behring Gmbh Oktanoatreduziertes human albumin
WO2014145744A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibody purification and purity monitoring
CN105063142A (zh) * 2015-08-07 2015-11-18 山西瑞亚力科技有限公司 一种用混合模式层析填料制备免疫球蛋白G Fc片段的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QI-CI WU ET AL.: "A mixed-mode resin with tryptamine ligand for human serum albumin separation", 《JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A》 *
QICI WU ET AL.: "Preparation and evaluation of mixed-mode resins with tryptophan analogues as functional ligands for human serum albumin separation", 《CHINESE JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING》 *
吴启赐等: "基于色氨酸类似物的混合模式介质和人血白蛋白吸附性能", 《中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议》 *
褚文宁等: "基于96-孔板高通量筛选的人血白蛋白层析分离优化", 《中国生物化学与分子生物学会2016年全国学术会议》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114885608A (zh) * 2020-12-08 2022-08-09 通化安睿特生物制药股份有限公司 纯化重组蛋白的方法
CN116693659A (zh) * 2023-07-11 2023-09-05 浙江大学 一种分离重组人血白蛋白的两步混合模式层析方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107033236B (zh) 2021-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lee et al. L-asparaginase from Erwinia carotovora: an improved recovery and purification process using affinity chromatography
CN102532254A (zh) 一种从水稻种子中分离纯化重组人血清白蛋白的方法
CN105924498B (zh) 一种具有降血脂功效的绿豆蛋白的制备方法
CN101029077B (zh) 基因重组胰岛素前体纯化方法
CN113563457B (zh) 一种同时制备人纤维蛋白原、凝血因子ⅷ和纤溶酶原的方法
JP2538224B2 (ja) 百日咳抗原の精製
CN107033236A (zh) 一种从酵母发酵液中分离人血白蛋白的混合模式层析方法
CN1143866C (zh) 一种分离纯化香菇菌多糖的工艺
CN105085651B (zh) 一种酪蛋白磷酸肽单体及其制备方法
CN106520739A (zh) 一种亲和层析纯化尿激酶的方法
CN108059673B (zh) 一种人血清中分离免疫球蛋白IgG的方法
CN112521460A (zh) 一种纯化重组猪细小病毒vp2蛋白的层析工艺
CN1958603B (zh) 一种人绒毛膜促性腺素的纯化方法
CN101045750B (zh) 骆驼初乳免疫球蛋白IgA、IgG的提取工艺
CN102464713A (zh) 一种***的制备方法
CN107459572B (zh) 一种浓缩发酵液中水蛭素的方法
CN113956338B (zh) 一种从刀豆中同时提取脲酶和刀豆凝集素的方法
CN112979785B (zh) 一种制备高纯度乳铁蛋白的方法
CN1250567C (zh) 钙离子结合蛋白的提纯方法
CN112608395A (zh) 一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法
CN115948351B (zh) 一种分离纯化cvb1的方法
CN112062830A (zh) 一种快速制备重组人生长激素的纯化方法
CN106749623B (zh) 一种基于混合模式的扩张床吸附分离人血白蛋白方法
CN114867741A (zh) 纯化促卵泡激素的方法
CN108570098B (zh) 一种百日咳多种抗原成分的分离纯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant