CN106999465B

CN106999465B - 身体塑形

Info

Publication number: CN106999465B
Application number: CN201580068148.1A
Authority: CN
Inventors: 托马斯·克雷默斯; 冈纳·弗利克; 亨德里克·威廉·弗里林克; 赫曼·约翰·武尔登巴格
Original assignee: Scholeput Ltd
Current assignee: Scholeput Ltd
Priority date: 2014-10-14
Filing date: 2015-10-14
Publication date: 2020-08-14
Anticipated expiration: 2035-10-14
Also published as: EA201790693A1; EP3206678A1; CA3001981A1; WO2016060564A1; DK3206678T3; BR112017007673A2; ES2777549T3; US20210220241A1; US20170231885A1; WO2016060564A8; JP2017534610A; EP3206678B1; PT3206678T; CN106999465A

Abstract

本发明涉及用于局部给予的的药物组合物，用于在通过调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的方法中的用途，所述药物组合物包含肾上腺素能受体激动剂和/或拮抗剂的前体药物，其中前药具有为至少0的辛醇/水分配系数。本发明进一步涉及这种前药的美容和治疗应用，如它们在通过局部调节皮下脂肪组织来塑形哺乳动物身体的方法中的用途。本发明还涉及所述前药本身，以及制备这些前药的方法。

Description

身体塑形

技术领域

本发明涉及用于局部调节皮下脂肪组织的药物或前药，以及包含这些药物或前药的药物组合物。

背景技术

已知肾上腺素能受体激动剂和/或肾上腺素能受体拮抗剂的口服或局部给予用于各种目的，其中包括减脂。然而，已知的方法均未公开具有高辛醇/水分配系数的肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂或其前药局部靶向皮下脂肪组织的用途。采用肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂治疗哺乳动物受试者的缺点是全身浓度容易变得过高，这导致显著的副作用。

发明内容

本发明涉及用于局部给予的药物组合物，用于在通过调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的方法中的用途，该药物组合物包含用于肾上腺素能受体的激动剂和/或拮抗剂的前药，其中前药具有至少为0的辛醇/水分配系数。

在本文上下文中哺乳动物是任何哺乳动物，如狗、猫、马、小鼠、大鼠或人。优选所述哺乳动物是人。

本发明的优点在于当局部给予的时本发明的所述前药对脂肪组织具有高亲和力。

局部给予的是指将所述前药给药于哺乳动物的皮肤并渗透所述皮肤。或者，在本文上下文中的局部给予，可以是指前药通过显微注射或通过离子渗透(iontoforesis)进行给药。因此，在本发明上下文中的局部给予的与透皮施用是相同的。本发明的前药优选靶向存在于局部给予的部位的皮下脂肪组织。这导致所述前药在给药部位的皮下脂肪组织中的局部积累，并基本避免全身吸收。

由于前体药物被局部存在的内源性酶的作用而水解，因此本发明的所述前药物吸收于所述皮下脂肪组织中，导致所述局部脂肪组织中激动剂和/或拮抗剂的浓度增加，使得肾上腺素能受体激动剂和/或肾上腺素能受体拮抗剂从皮下脂肪组织内的前药中释放。能够从前药中释放激动剂或拮抗剂的酶包括，例如，脂肪酶、酯酶、对氧磷酶、羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶、胆碱酯酶、联苯水解酶、碱性磷酸酶、酰胺酶、转肽酶、CYP 450、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶、氨基肽酶。优选地，酶是脂肪酶。

内源酶，优选存在于皮下脂肪组织中的内源酶药物是否能够从前药中释放激动剂或拮抗剂，通过使前药经受所讨论的酶或组织，并通过合适的分析技术，如，例如UV-Vis光谱法、质谱法或气相色谱或液相色谱法，来测定药物是否从前药中释放。

前药对脂肪组织的高亲和力具有以下优点：局部脂肪组织中的激动剂或拮抗剂的浓度能够成倍增加，基本不影响激动剂或拮抗剂的全身浓度。这避免了与现有技术的肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂给药相关的副作用。

脂肪组织中增加的潜在浓度，相对于没有额外的激动剂或拮抗剂吸收到脂肪组织中的情况，增强了激动剂或拮抗剂对皮下脂肪组织的天然效果。这允许哺乳动物身体的局部塑形，因为激动剂或拮抗剂，与控制脂肪降解或控制皮下脂肪组织中的脂肪积累的肾上腺素能受体发生相互作用。

此外，局部给予途径避免了肝脏首通效应，有助于局部提高皮下脂肪组织中负责塑形的浓度。

本发明的药物组合物包含肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，具有辛醇/水分配系数至少0，优选至少1，更优选至少2，更优选至少2.3，更加优选至少2.5，甚至更优选至少3。辛醇/水分配系数是本领域技术人员公知的化合物的亲脂性的量度。

辛醇/水分配系数能够通过摇瓶(shake-flask)方法确定，方法包括将一些所关注的激动剂、拮抗剂或前药作为溶质，溶解于等量的辛醇和水的混合物中，并随后测定每种溶剂中的溶质的浓度。辛醇/水分配系数通过辛醇中溶质浓度相对于水中的浓度的比率进行计算，并表示为¹⁰log值。辛醇/水分配系数也称为logP。辛醇/水分配系数能够通过在标准化学软件，如ChemSketch^TM或ChemDraw^TM)中的计算而精确预测。

辛酸/水分配系数为0是指在辛醇和水相中溶质的浓度相等，而辛醇水分配系数为2表示辛醇中的溶质的浓度是水中溶质的浓度的100倍。

存在两种类型的肾上腺素受体：α-肾上腺素能受体和β-肾上腺素能受体。

通过激动剂(“α-激动剂”)刺激α-肾上腺素能受体，具有抑制脂肪酶活性的作用。抑制脂肪酶活性具有相对于甘油三酯生产而降低甘油三酯水解的作用。这具有增加组织中甘油三酯的量，从而增加皮下脂肪组织的量的作用。通过拮抗剂(“α-拮抗剂”)抑制α-肾上腺素能受体，具有相反的作用，并减少皮下脂肪组织的量。

通过激动剂(“β-激动剂”)刺激β-肾上腺素能受体，具有增加脂肪酶活性的作用，使甘油三酸酯的水解相对于甘油三酯产生而增加。随着甘油三酯的量减少，皮下脂肪组织的量降低。拮抗剂(“β-拮抗剂”)对β-肾上腺素能受体的抑制作用具有相反的作用，并导致皮下脂肪组织的量增加。

因此，β-肾上腺素能受体激动剂或α-肾上腺素能受体拮抗剂中的任一种，在皮下脂肪组织中存在量的增加具有减少皮下脂肪组织量的作用。β-肾上腺素能受体拮抗剂或α-肾上腺素能受体激动剂在皮下脂肪组织中存在量的增加具有增加皮下脂肪组织量的作用。

β-肾上腺素能受体可以是，例如β-1、β-2或β-3受体，但其优选是β-3受体。α-肾上腺素能受体优选是α-2肾上腺素能受体。

激动剂是激活(刺激)肾上腺素能受体的化合物，以及拮抗剂是抑制肾上腺素能受体的化合物；这能够通过研究化合物对合适的第二信使信号的影响而测试化合物是否是肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂。

用于本发明上下文的β-肾上腺素能受体的激动剂(也称为β-肾上腺素能受体激动剂或“β-激动剂”)是激活β肾上腺素能受体，优选β-3受体的任何化合物。可替代地或另外地，根据实施例中描述的方法，它是提升甘油的任何化合物。

化合物是否是β-肾上腺素能受体的激动剂(优选β-3肾上腺素能受体的激动剂)能够通过在化合物与合适的含受体材料培养时，测定第二信使信号的刺激或抑制进行测试。合适的第二信使信号是，例如环AMP(cAMP)。在cAMP作为第二信使的情况下，cAMP量的增加表示β-肾上腺素能受体受到刺激。相反，cAMP量的减少表明β-肾上腺素能受体受到抑制。

在α-肾上腺素能受体的情况下，激动剂会降低cAMP的量，而抑制剂增加cAMP的量。

激动剂可以是部分或完全激动剂(full agonist)。完全激动剂是在与受体结合时表现出受体最大活化的激动剂。相对于用完全激动剂实现的活化，部分激动剂是与受体结合时仅表现出部分激活的激动剂。通过用完全激动剂激活受体并通过基于如上所述的合适的第二信使信号记录激活作用以确定其最大激活作用的幅度，就能够区分部分和完全激动剂。如果用样品激动剂获得的第二信使信号与用完全激动剂获得的的信使信号一样高，则样品激动剂就是完全激动剂。如果第二信使信号较低，则是部分激动剂。对于本发明的情况，部分激动剂和完全激动剂均被当作激动剂，但优选完全激动剂。

激动剂能够直接或间接增加或减少第二信使信号。直接激活是指激动剂，通过激动剂和肾上腺素能受体之间的直接分子相互作用以增加第二信使信号。间接激活是指激动剂通过与不是肾上腺素能受体的种类的分子相互作用增加第二信使信号。或者，经由，诸如去甲肾上腺素的天然存在的β-激动剂的升高，通过，诸如再摄取抑制作用的机制而发生间接激活。

化合物是否是肾上腺素能受体的间接激动剂，能够通过去甲肾上腺素摄取分析测定，或磷酸二酯酶抑制作用分析测定进行测试。亲和力(IC50)通常处于0.05nM-200nM之间。肾上腺素能受体的间接激动剂包括，但不限于NE(去甲肾上腺素)摄取抑制剂、NE释放剂、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷酸环化酶激活剂和神经传递调节剂。优选地，本发明的间接肾上腺素能受体激动剂是氟***、毛喉素(forskolin)、咖啡因、茶碱、利莫那班(rimonabant)或***，最优选***，毛喉素或咖啡因。

肾上腺素受体激动剂的实例包括β-激动剂和α-激动剂。β-激动剂是优选的。在β-激动剂中，β-3激动剂是优选的。在α-激动剂中，优选α-2激动剂。在所有激动剂中，β-3激动剂和α-2激动剂是优选的，并且最优选的是β-3激动剂。

合适的β-激动剂(也称为肾上腺素能受体激动剂)的实例是章鱼胺(邻-、间-或对-章鱼胺，优选对-章鱼胺)、新弗林(邻-、间-或对-新弗林，优选对-新弗林)、去甲肾上腺素、肾上腺素、麻黄素、苯丙醇胺、酪胺、麻黄宁、苯乙醇胺、β-苯乙胺、大麦芽碱、异丙基去甲新弗林、N-甲基酪胺、沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、特布他林、吡丁醇、丙卡特罗、克伦特罗、奥西那林、非诺特罗、比托特罗、利托君、异丙肾上腺素、沙美特罗、福莫特罗、班布特罗、克伦特罗、奥达特罗、茚达特罗、阿米贝隆(SR-58611A)、CL316,243、L-742,791、L-796,568、LY-368,842、米拉贝隆(YM-178)、Ro40-2148、CGP 12177、索拉贝隆(GW-427,353)和BRL37,344。

优选的β-激动剂是章鱼胺(邻-、间-或对-章鱼胺，优选对-章鱼胺)、新弗林(邻-、间-或对-新弗林，优选对-新弗林)、去甲肾上腺素、肾上腺素、麻黄素、苯丙醇胺、酪胺、麻黄宁、苯乙醇胺、β-苯乙胺、BRL37,344、大麦芽碱、异丙基去甲新弗林、N-甲基酪胺、异丙肾上腺素、阿米贝隆(SR-58611A)、L-742,791、L-796,568、LY-368,842、米拉贝隆(YM-178)、Ro40-2148、CGP12177和索拉贝隆(GW-427,353)。

更优选的β-激动剂是章鱼胺(邻-、间-或对-章鱼胺，优选对-章鱼胺)，新弗林(邻-、间-或对-新弗林，优选对-新弗林)、异丙肾上腺素，SR58611A、CGP12177、更加优选的是(邻-、间-或对-章鱼胺，优选对-章鱼胺)、新弗林(邻-、间-或对-新弗林，优选对-新弗林)和异丙肾上腺素、更优选对-章鱼胺、对-新弗林和异丙肾上腺素、而最优选对-章鱼胺和对-新弗林、优选对-章鱼胺。

在β-激动剂中，β-3激动剂是优选的，β-3激动是，例如章鱼胺(邻-、间-或对-章鱼胺，优选对-章鱼胺)、新弗林(邻-、间-或对-新弗林，优选对-新弗林)、异丙基去甲新弗林、阿米贝隆(SR-58611A)、L-742,791、L-796,568、LY-368,842、米拉贝隆(YM-178)、Ro40-2148、索拉贝隆(GW-427,353)、CGP 12177和BRL 37,344。

最优选的β-3-激动剂是(邻-、间-或对-)章鱼胺和(邻-、间-或对-)新弗林，最优选对-章鱼胺和对-新弗林。

合适的α-激动剂、4-NEMD、7-Me-马萨尼定、胍丁胺、阿可乐定、溴莫尼定、可乐定、地托咪定、右旋美托咪啶、法多咪啶(fadolmidine)、胍那苄、胍法辛、洛非西定、马萨尼定、美托咪定、甲基***、米伐折醇、利美尼定、罗米非定、他利克索、替托尼定、托洛尼定、甲苯噻嗪、赛洛唑啉和TDIQ。

优选的α-激动剂是丁苄唑啉、可乐定、胍那苄、甲苯噻嗪和胍法辛，最优选的α-激动剂是木犀草唑和甲苯噻嗪，最优选甲苯噻嗪。

肾上腺素能受体的拮抗剂包括，但不限于β拮抗剂、β-3拮抗剂和α-2拮抗剂。优选在本上下文中使用β-3拮抗剂。化合物是否是肾上腺素能受体的拮抗剂可以如上所述进行测定。

合适的β-拮抗剂的实例是卡替洛尔、纳多洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、***、索他洛尔、噻吗洛尔、醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他索洛尔、比索洛尔、塞利洛尔、艾司洛尔、美托洛尔、奈比洛尔、布新洛尔、卡维地洛、拉贝洛尔，优选的β-拮抗剂是喷布洛尔、吲哚洛尔、***、阿替洛尔、美托洛尔L-748,328、L-748,337、SR 59230A。优选地，本发明的β肾上腺素能受体拮抗剂是***、SR 59230A或美托洛尔，最优选地，***或SR 59230A，最优选SR 59230A。

合适的β-3拮抗剂的实例是L-748,328、L-748,337和SR 59230A。

合适的α-拮抗剂，具体而言是α-2拮抗剂的实例有阿立哌唑、阿塞那平、阿替美唑、西拉唑啉、氯氮平、依法克生、咪唑克生、洛拉西酮、美哌隆、米安色林、米氮平、萘吡坦、奥氮平、帕潘立酮、利培酮、苯氧基苯甲胺、酚妥拉明、吡贝地尔、萝芙素、罗替戈汀、喹硫平、去甲喹硫平、司普替林、妥拉苏林、育亨宾、齐拉西酮、佐替平，优选育亨宾。

前药定义为包含以上定义的肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂(与可水解部分共价结合)的化合物。在体内，前药通过水解激动剂或拮抗剂与可水解部分之间的共价键来释放激动剂或拮抗剂，从而释放前药。本发明的前药具有至少为0、优选至少1、更优选至少2、更优选至少2.3、更加优选至少2.5、甚至更优选至少3的辛醇/水分配系数(logP)。优选可水解部分比游离激动剂或拮抗剂更疏水，而使前药具有比游离激动剂或拮抗剂更高的logP。

在本文上下文中，可水解部分可以称为亲脂性的。在本文上下文中，亲脂性是指其logP为至少0，优选至少1，更优选至少2，更优选至少2.3，甚至更优选至少2.5，更加优选至少3。通常而言，这些基团是已知的，并且包含烷基基团。

合适的烷基基团优选是C2-C32烷基基团、优选C2-C24、更优选C4-C20直链或支链的饱和或不饱和烷基基团、更优选C2-C24、更优选C4-C20直链烷基基团。甚至更加优选的烷基基团是C5-C18饱和或不饱和烷基基团，如衍生自戊酸、庚酸、辛酸或癸酸的烷基基团，更优选C7-C12饱和或不饱和的脂肪烷基。本文上下文中的烷基基团可以是支链的，但优选烷基是直链的，其中，在一端的官能团用于与激动剂或拮抗剂连接。直链可以是饱和的，或者可以包含一个或多个双键。用于与激动剂或拮抗剂连接的合适官能团，例如有羧酸基团、酰卤或异氰酸酯。

在将前药给予于个体时，前药，例如，通过如上定义的内源性酶的作用在体内水解而释放激动剂或拮抗剂。

本发明的前药能够是酯、酰胺、氨基酸酯、磷酸酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、肟、N-曼尼奇(Mannich)碱、烯胺酮(enaminone)、亚胺、脲、PEG缀合物或基于分子内过程的前药。优选地，前药是酯，氨基甲酸酯或酰胺，更优选是酯或酰胺，最优选是酯。在吸收到脂肪组织中时，本发明的前药在体内发生水解而释放肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂，其随后通过对肾上腺素能受体的激动作用或拮抗作用而调节皮下脂肪组织。

在非常优选的实施方式中，本发明的前药是肾上腺素能受体激动剂的酯。在可替代的优选实施方式中，本发明的前药是肾上腺素能受体拮抗剂的酯。

在本文上下文中，酯是通过与酰化剂反应，在游离-OH基上用酯基酯化的化合物。优选地，酯基是亲脂性酯基。优选地，游离-OH基团位于肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂的苯环上。进一步优选地，所有游离-OH基团用亲脂性酯基团取代。

在本文上下文中，酯基可以是亲脂性的。在本文中亲脂性是指其logP为至少0、优选至少1、更优选至少2、更优选至少2.3、甚至更优选至少2.5、更加优选至少3。通常这些基团是已知的，并包含疏水性酯基，如例如，烷基酯，如优选C2-C32烷基酯。

优选地，酯基是C2-C24，更优选C4-C20直链或支链的饱和或不饱和烷基酯、更优选C2-C24、更优选C4-C20脂肪酸酯。甚至更优选的是，酯基是C5-C18饱和或不饱和脂肪酸酯，如戊酸酯、庚酸酯、辛酸酯或癸酸酯、更优选C7-C12饱和或不饱和脂肪酸酯、最优选的癸酸酯。在本文上下文中脂肪酸可以是支链的，但优选地，脂肪酸是直链的。优选本文上下文中的脂肪酸是天然存在的脂肪酸，即，在一端具有羧酸基团的n个碳原子的直链，直链可以饱和的，或可以包含一个或多个双键。

对于高皮肤渗透性，一种可替代的优选的脂肪酸酯基团是戊酸酯、庚酸酯、辛酸酯或癸酸酯、最优选戊酸酯。

前药可以根据多种合成途径制备。有机化学领域的技术人员能够想出合成本发明前药的无数方式。癸酸酯前药的合适途径如图5所描述的。这种途径可以适用于通过用不同的酰化剂取代癸酰氯而获得本发明的其它烷基酯前药。这样的实例是使用戊酰氯代替癸酰氯(C₉H₁₉COCI)而获得章鱼胺戊酸酯。此外，通过用不同的胺取代二苄基胺2而获得不同的胺部分。这样的一个实例描绘于图21中，其中使用了苄基甲基胺6代替二苄基胺2。方法也可以很容易地适于用另一种苯酚或双酚代替衍生自1的酚核，并适当地修改所使用的试剂量。

因此，图22中描绘了前药的潜在的一般合成途径，其中R_1a和R_1b为H或OH，R_1a和R_1b中至少一个为OH，R₂为H或甲基，X为离去基团，优选氯、溴或碘，R₃是苄基或烷基(优选甲基或异丙基)，R₄是C1-C331烷基而提供如上所定义的C2-C32烷基酯，并且其中至少R_5a和R_5b是R₄CO。

通常而言，本发明的酯前药还可以通过用水解部分(官能化以导致酯形成的)酯化肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂而制备。这可以是酰化剂；选择酰化剂使得酯化导致游离-OH基团被合适的酯基团取代。

酯化在溶液中，优选在0-140℃，更优选20-100℃的温度下，优选在本领域已知的酸性或碱性条件下适当地实现。碱性条件是优选的。优选地，前药随后进行分离和/或纯化。分离和/或纯化的合适方法包括，例如萃取，色谱和结晶，并且在本领域内是熟知的。

合适的酰化剂是，例如C4-C20直链或支链饱和或不饱和酸的酰卤，优选酰氯，或C4-C20直链或支链的饱和或不饱和烷基酸的酸酐。合适的酰化剂的实例是庚酰氯、辛酰氯、癸酰氯、十二烷酰氯、庚酸酐、辛酸酐、癸酸酐和十二烷酸酐。然而，本领域技术人员能够想出使用各种酰化剂实现酯化的无数方法，并且并不排除这些方法。

用于形成酯前药12的可替代的推广方案，例如描述于图23中，其中10是如上所述的肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，其具有游离OH-基团，游离OH-基优选是苄基或酚OH-基团；以及11是酰化剂，优选酰卤或酸酐，其中LG是离去基团，优选选自卤素(优选氯)，或羧酸盐，并且其中HM是如上定义的可水解部分。用于进行这种反应的条件在本领域内是公知的。

用于酯化的合适溶剂在本领域内是已知的，并优选包括极性非质子溶剂，如DMF、DMSO和吡啶，和极性质子溶剂，如甲醇、乙醇或芳族溶剂如甲苯或二甲苯。

在酯化期间达到酸性条件的合适酸在本领域内是已知的，并且包括，例如HCl、H₂SO₄、HNO₃或乙酸。在酯化期间达到碱性条件的合适碱的在本领域内也是已知的，并包括，例如KOH、NaOH、LiOH或吡啶。

如果本发明的前药是酰胺，则酰胺基优选形成于肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂的游离N-H基团上。本领域技术人员可以容易地设计出制备酰胺前药的方法。例如，潜在的方法是将前药的游离胺形式，通过游离胺经由作为官能团的羧酸辅助偶联至可水解部分，以转化为酰胺。用于辅助偶联的合适试剂，以及如何使用它们，都是众所周知的，并且包括，例如DCC、EDCI、HATU或HBTU。或者，激动剂或拮抗剂可以与如上所述的酰化剂反应。优选地，游离酚和苄基-OH基团在该反应期间通过合适的保护基团，如，例如甲氧基甲基醚(MOM)基团进行保护。

用于形成酰胺前药15的一般途径，例如描述于图24中，其中13是如上所述的肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，其具有包含至少一个胺氢的游离胺基，游离胺基优选伯烷基胺，其中R″选自H或C1-C8直链、支链或环状烷基，如甲基、乙基或异丙基，优选H，并且其中，优选地，游离OH基，更优选酚或苄基游离OH基团被合适的保护基团保护；并且其中14是如上定义的用羧酸基团官能化的可水解部分，并且其中，偶联剂可以是任何已知的偶联剂，如例如DCC、EDCI、HATU或HBTU。此类反应进行的条件在本领域内是熟知的。

氨基甲酸酯前药可以，例如通过使激动剂或拮抗剂的游离OH-基团，优选酚-OH基团，与包含异氰酸酯官能团的可水解部分反应进行制备。用于形成氨基甲酸酯前药18的一般途径，描述于图25中，其中16是如上所述的肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂，其具有游离OH-基团，所述游离OH-基优选苄基或酚OH-基；并且其中，17是如上定义的可水解部分，用异氰酸酯官能化。这种反应进行的条件在本领域内是公知的。

因此，本发明还涉及用于肾上腺素能受体激动剂和/或拮抗剂的前药，其中前药具有至少为0的辛醇/水分配系数，正如上面进一步定义的。前药可以是上述任何前药，但优选前药是酯或酰胺，最优选的是酯。本发明还涉及制备肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂前药的方法，包括将肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂与适当官能化的可水解部分偶联，并且分离出前药。可选地，前药随后，如通过色谱法或结晶法进行纯化。优选通过用酰化剂酯化实现偶联。

通过本发明的组合物对皮下脂肪组织进行调节，包括减少皮下脂肪(脂肪)组织的量，增加皮下脂肪组织的量或增强皮下脂肪组织。这通过前药对脂肪组织的亲和力实现，这导致脂肪组织中前药的吸收增强，使得在通过内源性酶的作用从前药中释放出激动剂或拮抗剂后，皮下脂肪组织会响应于激动剂或拮抗剂增加的存在量。

前药对脂肪组织的亲和力是指前药几乎完全吸收到脂肪组织中。前药不易吸收到血液中，而优选分布在脂肪组织中。这避免了前药在血液中的快速水解，并由此避免了激动剂和/或拮抗剂的高的全身浓度，从而排除了与肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂增加的血浆存在相关联的副作用。因此，皮下脂肪组织中前药的局部浓度导致激动剂或拮抗剂的局部浓度增加，而不会显著影响激动剂或拮抗剂的全身浓度。

在本文上下文中，皮下脂肪组织是哺乳动物皮肤正下方包含脂肪细胞的组织层。它是脂肪作为甘油三酯储存的组织层。

在皮下脂肪组织中储存的脂肪太多可能会表现出过剩的形体，这可以通过调节本文的脂肪组织进行降低。腹部、髋部、臀部或大腿上经常出现这种多余的脂肪，这些部位有时被称为体重减轻或身体塑形方案中著名的“问题区域”。因此，这些部位是本发明组合物，特别是包含β-肾上腺素能受体激动剂的前药和/或α-肾上腺素能受体拮抗剂的前药的组合物局部给予的的优选位点。这种组合物具有减少皮下脂肪组织的量的作用。通过测定BMI、腰围、臀围和胸围或皮肤褶皱就可以测定脂肪组织量的减少。

脂肪组织中储存的脂肪太少可能会显得过于苗条。这可以通过增加本文的皮下脂肪组织的量(“长胖”)而根据本发明进行调节。过于纤细的部位通常会在身体的面部、***、臀部或髋部出现，而这些部位是本发明的组合物，特别是包含β-肾上腺素能受体拮抗剂前药，和/或用于α-肾上腺素能受体激动剂的激动剂前药的组合物，局部给予的优选部位。这具有增加皮下脂肪组织的量的作用。

可替代地，身体脂肪可以存在于不均匀层中。在这种情况下，具有相对较少体脂肪的部分，可以用增加皮下脂肪组织量的本发明的局部给予的组合物进行治疗，而使之获得更均匀的脂肪组织层。在本文上下文中特别有利的是，在不同的部位施用根据本发明的两种组合物：一种治疗减少存在多余脂肪的部位的皮下脂肪组织，而一种治疗，增加在脂肪相对较少的部位的皮下脂肪组织。通过这种方式，就有可能实现厚度均匀的皮下脂肪组织层。

通过测定BMI、腰围、臀围和胸围或皮肤褶皱就可以测定脂肪组织量的增加。

此外，皮下脂肪可以使其内部结构或强度松弛，这可能导致皱纹或脂肪团(cellulite)的形成(“橙皮综合症”)。这可以通过施用根据本发明的组合物而增强皮下脂肪组织进行抵消。内部结构或强度的丧失，例如可以在个体的面部和颈部都可能经历。因此，这些部位是本发明增强皮下脂肪组织的组合物局部给予的的优选部位。

可替代地，脂肪团通常发生于个体的上腿、大腿和臀部上，而因此这些也是施用根据本发明增强皮下脂肪组织的组合物的优选部位。增强脂肪组织是指脂肪组织受到本发明化合物和方法的强度增加的影响。

这可以通过，例如用于测定皱纹的尺寸和功能的轮廓计测量法进行确定。皱纹尺寸可以在松弛条件下测定，而代表性参数被认为是平均“皱纹深度”、平均“皱纹面积”、平均“皱纹体积”和平均“皱纹组织储层体积”(WTRV)。脂肪团的严重程度可以通过目视检查或皱纹深度进行确定。

皮下脂肪组织的增强可以通过激动剂和/或拮抗剂的前药实现。优选地，这通过包含一种或多种肾上腺素能受体激动剂和拮抗剂的一种或多种前药的组合物实现，以达到β-和α-肾上腺素能受体的抑制和/或活化。

根据本发明的组合物的给予还可以通过减少皮下脂肪组织的量或通过增强组织以有效地去除脂肪团。因此，本发明进一步涉及如别处描述的肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂的前药在用于去除脂肪团的方法中的用途，以及涉及包含这种前药的组合物。优选前药是β-激动剂或α-拮抗剂、更优选β-激动剂、更优选β-3激动剂、最优选章鱼胺、新弗林或异丙肾上腺素、优选章鱼胺。最优选的前药是基于C5-C12可水解部分的前药，例如优选戊酸酯、庚酸酯、辛酸酯或癸酸酯前药。

通常而言，通过调节皮下脂肪组织而对哺乳动物身体塑体，会导致皮下脂肪组织的体积增加或减少、或增强皮下脂肪组织。优选地，塑形的效果是局部效应，这意味着效果发生于施用部位，而不是在未被施用前药的部位。在该实施方式中，前药局部在施用部位局部靶向皮下脂肪组织，以实现皮下脂肪组织的局部调节。

如果组合物包含β-肾上腺素能受体激动剂或α-肾上腺素能受体拮抗剂的前药，则调节作用优选包括减少皮下脂肪组织的量。这导致脂肪甘油三酯的水解以及脂肪酸和甘油释放到血液中。

如果组合物包含β-肾上腺素能受体拮抗剂或α-肾上腺素能受体激动剂的前药，则调节作用优选包括增加皮下脂肪组织的量。

本发明的优点在于，哺乳动物体内需要脂肪组织体积增加或减少的部位，可以由激动剂或拮抗剂随意靶向，而同时避免激动剂和/或拮抗剂的高的全身浓度。

本发明的前药的另一优点是其logP至少为0，正如其他地方所描述的。相对于激动剂或拮抗剂本身，这增加了通过皮肤的透皮吸收，从而增加吸收速率以及可以被吸收的前药的量，这允许增加皮下脂肪组织的调节。渗透作用，优选通过亲油基团，例如如上定义的可水解部分，优选酯基，例如亲脂性酯基团的存在而增强。此外，具有如所定义的logP的前药，优选分布于脂肪组织中，其从前药释放后进一步增强了激动剂或拮抗剂对脂肪组织的调节，本发明的前药在肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂上包含亲脂性酯基团。

β-肾上腺素能受体激动剂和/或α-肾上腺素能受体拮抗剂的前药的具体优点是它们的作用方式与所实现的效果是协同的。当前药在皮下脂肪组织中水解时，β-激动剂和/或α-拮抗剂刺激脂肪酶的作用。脂肪酶不仅会水解甘油三酯而导致皮下脂肪组织的减少，而且会水解前药本身。因此，前药的给予不仅会导致脂肪酶作用增加，而且还会导致前药水解增加。这就提供了前药对甘油三酯水解的作用发生自增强(自动催化)效应，因为水解产物(激动剂或拮抗剂)会刺激脂肪酶更进一步增加的作用。这种循环使得这种实施方式在减少皮下脂肪组织的量方面特别有效。

如果组合物除了β-肾上腺素能受体激动剂的前药或α-肾上腺素能受体拮抗剂之外，还包括磷酸二酯酶抑制剂，则对β-受体刺激或α-受体抑制的影响就会扩增。因此，在特别优选的实施方式中，组合物包含β-激动剂和/或α-拮抗剂的前药，以及磷酸二酯酶抑制剂或其前药，或腺苷酸环化酶刺激剂或其前药，以增强脂肪分解效应。合适的腺苷酸环化酶刺激剂或磷酸二酯酶抑制剂是毛喉素、咖啡因和茶碱、优选咖啡因。磷酸二酯酶抑制剂或腺苷酸环化酶刺激剂的前药与对于肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂前药的定义是一致的。

本发明的前药可以通过改变亲水基团，如酯或酰胺基团而对经皮施用进行优化。本发明优选的前药是肾上腺素能受体激动剂的亲脂性酯，特别地用于减少皮下脂肪的量。替代的优选的前药是肾上腺素能受体拮抗剂的亲脂性酯，特别地用于增加皮下脂肪的量。亲脂性被定义为对非极性环境而不是极性环境具有亲和力，并且亲脂基团是增加对非极性环境的亲和力的基团。作为本发明组合物中前药，更优选地是肾上腺素能受体激动剂的亲脂性酯，优选β-3肾上腺素能受体激动剂。

根据本发明的激动剂或拮抗剂的前药可以是中性分子，但也可以具有任何药学上可接受的盐形式，或者与药学上可接受的分子，例如稳定剂进行络合。合适的盐是，例如氢溴酸盐、盐酸盐、酒石酸盐或柠檬酸盐。

此外，本发明的具有一个或多个立体中心的前药可以在立体中心上具有R或S构型，或者该前药是R和S立体异构体的混合物。因此，本发明的前药可以是纯立体异构体，或不成比例的立体异构体混合物，包括对映体混合物和非对映体混合物。优选地，前药是外消旋混合物。

本发明进一步涉及局部给予的的药物组合物，其包含一种或多种肾上腺素能受体激动剂、一种或多种肾上腺素能受体拮抗剂、以及肾上腺素能受体的激动剂和/或拮抗剂的一种或多种前药。因此，包含一种或多种前药的组合物还可以包含一种或多种“游离”激动剂和/或拮抗剂。在本文上下文中，游离是指激动剂或拮抗剂没有共价结合于可水解部分，而是代替地，以对肾上腺素能受体具有最高亲和力的形式。在该实施方式中优选的是游离激动剂和拮抗剂具有至少为0的logP。更优选的是，游离激动剂和拮抗剂具有至少1的logP、更优选至少2、更优选至少2.3、更优选至少2.5、以及最优选至少为3的logP。

游离激动剂和/或拮抗剂可以对脂肪酶作用具有与前药相同或相反的影响。如果激动剂和/或拮抗剂对酶作用具有与前药相同的作用，则是优选的。因此，包含β-激动剂和/或α-拮抗剂的一种或多种前药的组合物也可以包含一种或多种游离β-激动剂和/或游离α-拮抗剂。还优选的是包含一种或多种β-拮抗剂的前药和/或一种或多种α-激动剂的前药的组合物，该组合物也包含一种或多种游离β-拮抗剂和/或一种或多种游离α-激动剂。

在优选的实施方式中，组合物包含按总激动剂拮抗剂和前药的mol％计，至少5％、优选至少10％、更优选至少20％、优选至少30％、优选至少40％、更优选至少50％、更优选至少60％、更优选至少70％、更优选至少80％、更优选至少90％、更优选至少95％、以及最优选至少98％的前药。

本发明优选还涉及包含一种或多种肾上腺素能受体激动剂的一种或多种前药和一种或多种肾上腺素能受体拮抗剂的一种或多种前药的组合的组合物，该组合物可以进一步包含如上所述的游离激动剂和/或拮抗剂。优选地，组合物包含一种或多种β肾上腺素能受体激动剂的一种或多种前药和/或一种或多种α-肾上腺素能拮抗剂的一种或多种前药。可替代的优选的组合物包含一种或多种β-肾上腺素能受体拮抗剂的一种或多种前药和/或一种或多种α-肾上腺素能受体激动剂的一种或多种前药。

在本发明的药物组合物中，前药优选以0.001-1000mg/mL、更优选为0.01-100mg/mL、更优选0.1-10mg/mL的浓度存在。水凝胶的密度可以为0.8-1.2g/mL、优选0.9-1.1g/mL。游离激动剂或拮抗剂，如果存在可以以相同的浓度范围存在。

本发明的组合物优选还包含药学上可接受的载体。合适的载体包括，但不限于水凝胶、皮肤霜、皮肤香波、皮肤泡沫、皮肤粉末、皮肤凝胶、皮肤洗剂、皮肤软膏、皮肤贴剂、皮肤敷剂、皮肤膏、皮肤抹布、皮肤溶液、皮肤喷雾、离子渗透贴片、棒或注射剂。优选的载体是水凝胶、皮肤霜、皮肤凝胶、皮肤洗剂或皮肤软膏。

进一步优选地，药物组合物是乳剂、泡沫、凝胶、洗剂、软膏、贴剂、糊剂、溶液或喷雾剂，优选皮肤凝胶或皮肤洗剂。或者药物组合物对于显微注射或离子渗透都是药学上可接受的。

本发明的前药优选以0.001-1000mg/cm²、优选0.01-100mg/cm²、最优选0.1-10mg/cm²施用于皮肤。游离激动剂或拮抗剂，如果存在可以以相同的浓度范围施用。

组合物可以另外包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。合适的赋形剂是透皮吸收改进剂、稳定剂、着色剂、乳化剂防腐剂、粘度增强剂、湿润剂、气味改进剂和皮肤紧肤剂。

合适的透皮吸收的改进剂的实例是烟酸酯、有机溶剂(二甲基亚砜、醇和链烷醇(乙醇、癸醇)、丙二醇、氮酮(azone)、吡咯烷酮、萜烯)、表面活性剂(洗涤剂)、脲和水杨酸。

合适的稳定剂的实例是抗氧化剂。合适的抗氧化剂在本领域内是已知的，并可以是水溶性的或脂溶性的。合适的脂溶性稳定剂和抗氧化剂是dl-α-生育酚和丁基羟基甲苯；适量的水溶性稳定剂和抗氧化剂是抗坏血酸，焦亚硫酸钠和乙二胺四乙酸二钠。

合适的着色剂的实例是氧化铁(黄色、红色、棕色)和叶绿素。

乳化剂可以是离子型或非离子型。离子型乳化剂的实例是烷基硫酸盐和季铵盐。非离子型乳化剂的实例是聚乙二醇、脂肪、醇醚(西土马哥类)、脱水山梨糖醇酯(sorbitanolest)(＝司盘80)和聚乙二醇脱水山梨醇醚(＝聚山梨醇酯80，吐温80)。

合适的防腐剂的实例是对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸衍生物)、山梨酸、氯己定二葡萄糖酸盐、溴棕三甲铵、苯酚、苯氧基乙醇、丙二醇、乙醇和甘油。

粘度增强剂的实例是纤维素衍生物、无机胶体、聚丙烯酸衍生物(卡波姆)和天然粘度增强剂，如，例如黄蓍胶。

湿润剂的实例是甘油、聚乙二醇和山梨糖醇70％。

气味改进剂的实例是玫瑰油、薰衣草油和其他精油。

皮肤紧肤剂(skin tightener)的实例是胶原蛋白、PhytoCellTec干细胞、生长因子、肽、三肽、六肽、抗氧化剂、润肤剂、皮脂控制剂、抗炎剂、胶原蛋白生产剂、植物甾醇类、糖脂和多酚。

本发明进一步涉及通过局部调节皮下脂肪组织而对哺乳动物身体塑形的方法，方法包括，局部给予如上所述的药物组合物。优选这种方法是美容方法。

在本发明的美容方法中，通过局部调节皮下脂肪组织可以对哺乳动物身体塑形。在本发明的美容方法中，减少或增加脂肪组织的量会改变受试者的身体外观。这种作用允许受试者在任何需要这种效果的身体部位随意增加或减少皮下脂肪组织的体积。由于皮下脂肪通常与“问题区域”(积极寻求有吸引力的身体外观的个人认为特别难以解决的)有关，这允许对这些区域进行靶向的局部调节。因此，可以获得更有吸引力的身体外观，而没有治疗益处。对此目的特别优选的是β-肾上腺素能受体，优选β-3受体的激动剂的前药。

此外，本发明的美容方法允许通过减少或增加皮下脂肪组织的量或通过增强皮下脂肪组织而治疗皱纹。

可替代地，本发明的组合物可以用于医疗中以便在哺乳动物中获得健康体重，例如在治疗中，通过调节皮下脂肪组织以便为超重或体重过少的个体获得健康的体重。特别优选的是β-肾上腺素能受体，优选β-3肾上腺素能受体激动剂的前药，适用于通过减少皮下脂肪组织在超重个体中获得健康体重的方法。这可以在治疗或预防肥胖和II型糖尿病中可能是非常有利的。

美容方法和医疗方法可以通过患者类型进行区分。在评价BMI超过25的体重超重引起的肥胖或II型糖尿病风险增加的个体中，给予根据本发明减少皮下脂肪组织的组合物是医疗性的。在风险没有增加的个体中，如在BMI低于25的个体中，给予根据本发明减少皮下脂肪组织的组合物则是美容性的。

对于根据本发明增加皮下脂肪组织的组合物，向具有严重超轻体重的个体给予，例如BMI低于18.5的个体，就是医疗性的，而对于BMI高于18.5的个体给予则是美容性的。

施用根据本发明通过增强组织而调节皮下脂肪组织的组合物则总是美容性的，而与患者类型无关。

根据本发明的组合物可以作为如上所述的唯一美容性的或治疗性治疗给予，但也可以与进一步已知的治疗组合。例如，根据本发明的前药的局部给予的可以与口服给予的药物组合。具有减少皮下脂肪组织作用的本发明的前药可以适当地与具有相同目的的口服治疗组合。这样的治疗可以是，例如组合物的局部给予，所述组合物包含β-3受体激动剂的前药与咖啡因的口服给予组合。

可替代地，本发明涉及如上定义的一种或多种前药用于在制备适用于治疗肥胖症或II型糖尿病的药物中的用途。

由于多种可能的变化，不能描述参数或参数组的所有组合。因此，针对特定特征描述的任何范围或可能性都设想为与另一特征的任何其它范围或可能性一起使用。

描述发明的条款：

1.一种适用于局部给予的药物组合物，用于在通过调节皮下脂肪组织而对哺乳动物身体塑形的方法中的用途，该药物组合物包含肾上腺素能受体的激动剂和/或拮抗剂，和/或激动剂或拮抗剂的前药，其中激动剂，拮抗剂或前药具有至少0的辛醇/水分配系数。

2.根据条款1的药物组合物，其中激动剂、拮抗剂或前药对皮下脂肪组织具有亲和力而实现对皮下脂肪组织的局部调节。

3.根据条款1或2的药物组合物，其中调节作用包括减少或增加皮下脂肪组织的量，或增强皮下脂肪组织。

4.根据条款1-3中任一项的药物组合物，其中激动剂是β-激动剂或α-激动剂，和/或其中，拮抗剂是β-拮抗剂或α-拮抗剂。

5.根据条款4的药物组合物，其中

·β-激动剂是章鱼胺、对-新弗林、间-新弗林(脱氧肾上腺素)、去甲肾上腺素、肾上腺素、麻黄素、苯丙醇胺、酪胺、麻黄宁、苯乙醇胺、β-苯乙胺、大麦芽碱、异丙基去甲新弗林、N-甲基酪胺、沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、特布他林、吡丁醇、丙卡特罗、克伦特罗、奥西那林、非诺特罗、比托特罗、利托君、异丙肾上腺素、沙美特罗、福莫特罗、班布特罗、克伦特罗、奥达特罗、茚达特罗、阿米贝隆(SR-58611A)、CL 316,243、L-742,791、L-796,568、LY-368,842、米拉贝隆(YM-178)、Ro40-2148、索拉贝隆(GW-427,353)、BRL37,344；

·α-激动剂是4-NEMD、7-Me-马萨尼定、胍丁胺、阿可乐定、溴莫尼定、可乐定、地托咪定、右旋美托咪啶、法多咪啶、胍那苄、胍法辛、洛非西定、马萨尼定、美托咪定、甲基***、米伐折醇、利美尼定、罗米非定、他利克索、替托尼定、托洛尼定、甲苯噻嗪、赛洛唑啉和TDIQ；

·β-激动剂是卡替洛尔、纳多洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、***、索他洛尔、噻吗洛尔、醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他索洛尔、比索洛尔、塞利洛尔、艾司洛尔、美托洛尔、奈比洛尔、布新洛尔、卡维地洛、拉贝洛尔、优选喷布洛尔、吲哚洛尔、***、阿替洛尔、美托洛尔L-748,328、L-748,337、SR 59230A；或

α拮抗剂是阿立哌唑、阿塞那平、阿替美唑、西拉唑啉、氯氮平、依法克生、咪唑克生、洛拉西酮、美哌隆、米安色林、米氮平、萘吡坦、奥氮平、帕潘立酮、利培酮、苯氧基苯甲胺、酚妥拉明、吡贝地尔、萝芙素、利培酮、罗替戈汀、喹硫平、去甲喹硫平、司普替林、妥拉苏林、育亨宾、齐拉西酮、佐替平。

6.根据条款1-5中任一项的药物组合物，其中前药是亲脂性酯。

7.根据条款6的药物组合物，其中亲脂性酯是C4-C20烷基酯。

8.根据条款7的药物组合物，其中亲脂性酯是丁酸酯、庚酸酯或癸酸酯。

9.根据条款1-8中任一项的药物组合物，其中激动剂、拮抗剂或前药以0.001-1000mg/mL的浓度存在于组合物中。

10.根据条款1-9中任一项的药物组合物，其中药物组合物是乳剂、泡沫、凝胶、洗剂、软膏、贴剂、糊剂、溶液或喷雾剂。

11.一种通过局部调节皮下脂肪组织而对哺乳动物身体塑形的方法，该方法包括局部给予根据第条款1-10项任一项的药物组合物。

12.根据条款11的方法，其中该方法是美容方法。

13.根据条款11或12的方法，其中激动剂、拮抗剂或前药以0.001-1000mg/cm²的剂量给予。

14.一种肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂的亲脂性酯。

15.一种根据条款14的亲脂性酯，用于医疗用途，优选治疗II型糖尿病或肥胖症。

16.一种如条款14中定义的亲脂性酯，用于在哺乳动物身体塑形的方法中的用途。

17.一种制备肾上腺素能受体激动剂的亲脂性酯或肾上腺素能受体拮抗剂的亲脂性酯的方法，包括用酰化剂酯化肾上腺素能受体激动剂或肾上腺素能受体拮抗剂。

本发明现在将通过以下非限制性的实施例进行举例说明。

附图说明

图1：磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)、PBS/大鼠脂肪悬浮液、或PBS/人体脂肪悬浮液(菱形n＝3、正方形n＝2、三角形n＝2)中章鱼胺癸酸酯(“octdec”)的水解。

图2：用章鱼胺或章鱼胺癸酸钠培养PBS/人体脂肪悬浮液对甘油产生的影响。

图3：在腰身上用卡波姆水凝胶(0.5ml，在3×3cm上)，接着用卡波姆水凝胶(0.5ml，在3×3cm上)中的5mg/ml章鱼胺癸酸酯处理大鼠的效果。处理在每日上午9点和下午4点进行两次(每次n＝4)。

图4：用卡波姆水凝胶(0.5ml，在3×3cm上)接着用卡波姆水凝胶(0.5ml，在3×3cm上)中的5mg/ml章鱼胺癸酸酯处理大鼠对血浆甘油水平的影响(每次n＝4)。

图5：章鱼胺癸酸的潜在合成路线。

图6：在不同浓度的人体脂肪下，10和100微克章鱼胺癸酸酯(图6a和图6b)以及10和100微米新弗林癸酸酯(图6c&d)的体外水解。

图7：血浆中章鱼胺癸酸酯的水解。

图8：章鱼胺癸酸酯、章鱼胺戊酸酯和新弗林癸酸酯在PBS中，在37℃下的水解。

图9：章鱼胺和新弗林在PBS中，在37℃下的稳定性。实验是n＝2。

图10：通过β拮抗剂***(图10a和c)和脂肪酶抑制剂奥利司他(图10b和d)，章鱼胺癸酸酯10μM和新弗林癸酸酯10μM的脂肪悬浮液中的水解的抑制。实验是n＝4-8。相同的数据可以及时表示(图10e)。

图11：在施用0.25ml章鱼胺水凝胶2.75mg/ml、章鱼胺癸酸酯5mg/ml和章鱼胺戊酸酯3.98mg/ml之后，通过人皮肤的体外皮肤渗透。渗透在施用后2h时皮肤下60ml灌注浴的浓度。实验是n＝2-3。

图12：在施用0.25ml章鱼胺(2.75mg/ml)、章鱼胺癸酸酯(5mg/ml)和章鱼胺戊酸酯(3.98mg/ml)后，施用之后20小时，在人皮下脂肪深度渐增时各层中章鱼胺的组织浓度。

图13：在37℃下4小时内，以250mg/ml人体脂肪悬浮液的异丙肾上腺素(图13a)、章鱼胺(图13b)、新弗林(图13c)和***(图13d)对甘油形成的影响。实验是n＝4-20。

图14：对腹部和臀部施加包含2.75mg/ml游离章鱼胺的水凝胶(2.5ml，每天一次)的效果，对人腰身施加包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯的水凝胶(2.5ml，每天一次)和包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯的水凝胶(5ml，每日两次)的效果。实验是两次实验的平均值(n＝2)。

图15：对腹部和臀部施加不含激动剂或拮抗剂的对照水凝胶(2.5ml，每日一次)、含2.75mg/ml章鱼胺的对照水凝胶(2.5ml，每日一次)的效果，对单个个体的腰围施加5mg/ml章鱼胺癸酸酯(“OctDec”，2.5ml，每日一次，和5ml，每日两次)和3.98mg/ml章鱼胺戊酸酯(“OctPent”，2.5ml，每日一次)的效果和5mg/ml新弗林癸酸酯(“SynDec”，2.5ml，每天一次，和5ml，每天一次)的效果。

图16：包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯(5ml，每天两次)的水凝胶对腹部和臀部皮肤褶皱的影响。实验是2或3次实验的平均值(n＝2-3)。

图17：在单次给予包含章鱼胺癸酸酯(5mg/ml，2.5ml和5ml；图17a)的水凝胶；游离章鱼胺(2.75mg/ml，2.5ml和5ml；图17b)和章鱼胺戊酸酯(3.98mg/ml，2.5ml；图17c)时章鱼胺的血浆水平。实验是一次或两次实验的平均值(n＝1-2)。

图18：在用包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯的水凝胶(5ml，每日两次)进行慢性治疗期间，在施用后12小时的游离章鱼胺的血浆水平。实验是1次或2次实验的平均值(n＝1-2)。

图19：在腹部和臀部上施用包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯的水凝胶(5ml，每天两次)时的收缩、舒张和心率。数据代表两人的平均值。

图20：在37℃下，在4小时内，以250mg/ml人体脂肪悬浮液的β-3激动剂(SR58611A，CL 316243，CGP12177)、β拮抗剂(SR 59230A)，α-2拮抗剂育亨宾(“Yo”)、α-2激动剂甲苯噻嗪(“Xyl”)和磷酸二酯酶抑制剂咖啡因(“Cof”)对甘油形成的影响。实验为n＝3-4。

图21：新弗林癸酸的潜在合成路线。

图22：本发明的前药酯的一般合成方法，其中R_1a和R_1b为H或OH，并且R_1a和R_1b中的至少一个是OH，R₂为H或甲基，X为离去基团，优选氯、溴或碘离子，R₃是苄基或烷基(优选甲基或异丙基)，R4是C1-C31烷基基团，以提供如上所定义的C2-C32烷基酯，并且其中，至少R_5a和R_5b为R₄CO。

图23：用于合成酯前药的一般路径，其中10是如别处定义的肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，其具有游离OH-基团，其游离OH-基优选是苄基或酚类OH-基团；并且其中，11是酰化剂，优选酰卤或酸酐，其中LG是离去基团，优选选自卤素(优选氯)或羧酸根，并且其中，HM是如其它地方定义的可水解部分。

图24：形成酰胺前药15的一般路径，其中13是别处描述的肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，其具有包含至少一个胺氢的游离胺基、游离胺基优选是伯烷基胺，其中R″选自H或C1-C8直链、支链或环状的烷基，如甲基，乙基或异丙基，优选H，并且其中，优选游离OH-基，更优选酚或苄基游离OH-基团被合适的保护基团保护，并且其中，14是如在别处定义的用羧酸基团官能化的可水解部分，并且其中，偶联剂可以是任何已知的偶联剂，如DCC、EDCI、HATU或HBTU。

图25：用于形成氨基甲酸酯前药18的一般途径，其中16是如其他地方描述的肾上腺素能受体的激动剂或拮抗剂，其具有游离OH-基团，游离OH-基优选苄基或酚类的OH-基团；并且其中，17是如在别处定义的可水解部分，用异氰酸酯进行官能化。

具体实施方式

实施例：

材料和方法

化学品

外消旋对-章鱼胺盐酸盐(“章鱼胺”或“oct”)，外消旋对-新弗林(“新弗林”或“syn”)和(S)-(-)-***盐酸盐(“***”或“Prop”)从Sigma获得。p-章鱼胺癸酸盐酸盐通过Syncom(Groningen，荷兰)合成。L-(-)-去甲肾上腺素双酒石酸盐购自SigmaAldrich。其他化合物常规地从商业供应商获得。

卡波姆水凝胶

实施例3、4和5的卡波姆水凝胶通过将0.1g二钠-EDTA(Fagron)溶解于约50mL水中制成。加入10g丙二醇。使用thurax将1g卡波姆974P(Fagron)分散。

将缓血酸胺(Fagron)溶于10mL水中并加入卡波姆凝胶中。加入20mL乙醇(96％)在有或无癸酸章鱼胺之下并thurax分散。加入水至总重量为100g。用Thurax均质化后，将水凝胶转移至50mL管中。

将章鱼胺癸酸酯(0.5g)最大量溶解于20mL乙醇(96％)中。在超声5min后，形成微悬浮液。将20mL微悬浮液加入到卡波姆水凝胶中而不是20mL乙醇中。水凝胶的终浓度为5mg/mL。

其它实施例中的(卡波姆)水凝胶进行类似制备。通过将100mg EDTA二钠溶解于50mL超纯水中制成水凝胶。加入10g丙二醇并混合。用转子-定子将1g卡波姆974P分散于溶液中。将1g缓血酸胺溶于10mL水中，并与分散的卡波姆混合。加入水至80g重量。将水凝胶储存于4℃下待用。

在15mL 70％乙醇中将适量的章鱼胺、章鱼胺癸酸酯、章鱼胺戊酸酯和新弗林癸酸酯或其它前药在30℃下用超声处理5分钟而溶解。将15mL获得的乙醇溶液加入到35g水凝胶中，并使用转子定子进行混合而达到所示的最终浓度。将终化的水凝胶转移到50mL管中并在4℃下保存。

终化的水凝胶含有0.73mmol/50mL水凝胶的游离章鱼胺或章鱼胺前药，或0.70mmol/50mL水凝胶的新弗林癸酸盐。对于这些水凝胶的制备，使用了137.8mg章鱼胺盐酸盐，250mg章鱼胺癸酸盐酸盐，199mg章鱼胺戊酸盐酸盐或250mg新弗林癸酸盐酸盐。

对于具有不同浓度的水凝胶，可以很容易地改变前药的量而获得水凝胶中前药的特定浓度。

根据这些制备方法与步骤制备的水凝胶具有1.0g/mL的密度。

章鱼胺癸酸酯前药的合成(图5)

2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮(3)

将溴化物1(4.8g，22.3mmol)在35mL甲苯中的混合物在冰中冷却。滴加二苄基胺2(8.8g，8.6mL，2当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤并蒸发溶剂，以获得粗制品2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮(3；9.7g，定量)，作为红色固体。

4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基癸酸酯(4)

向2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮3(7.35g，粗制，17.8mmol)在100mL丙酮中的混合物中加入K₂CO₃(4.5g，1.8当量)。将混合物回流1小时。将混合物冷却并滤出固体。蒸发溶剂，得到7g黄色油。将这种油溶于50mL丙酮中。向该混合物中加入癸酰氯(3.1mL，1.5当量)和Et₃N(3.6mL，1.5当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。滤出固体，并蒸发溶剂，得到8.4g黄色油。将油通过柱色谱法(SiO₂，EtOAc/庚烷1:9)纯化，得到黄色油状的4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基癸酸酯(4；5.25g，61％)，其在静置时固化。

4-(2-氨基-1-羟乙基)苯基癸酸酯(5)

向4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基癸酸酯4(5.25g，10.8mmol)在100mL***中的混合物中，加入4N HCl的二噁烷溶液(8mL，3当量)。将混合物在室温下搅拌5分钟并蒸发溶剂。将混合物溶于100mL乙醇中。向混合物中加入500mg 10％Pd/C，并将混合物在1bar H₂下搅拌3小时。滤去Pd/C，蒸发溶剂，得到2.5g粘稠/泡沫状固体。将固体在7.5mL磷酸盐缓冲液(KH₂PO₄/K₂HPO₃pH＝7)中研磨，得到白色沉淀。将沉淀物滤出，用水、丙酮洗涤并干燥，得到1.32g白色固体。将物质(章鱼胺癸酸酯游离碱，校正？)置于10mL水中。滴加HCl水溶液直至溶液澄清。将混合物冻干，并收集固体，以获得作为白色蜡状固体的4-(2-氨基-1-羟基乙基)苯基癸酸酯(5；990mg，27％)。纯度(LC-MS)：>93％。

章鱼胺戊酸酯前药的合成

章鱼胺戊酸酯的合成按照与图5所示的相同路径进行，但用戊酰氯代替癸酰氯。

2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮(3)

将溴化物1(50g，232mmol)在350mL甲苯中的混合物在冰上冷却。在30分钟内滴加二苄基胺2(90mL，2当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物过滤并蒸发溶剂，得到粗制品2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮(3；91.6g，定量)，为红色油。这种油在下一步骤中直接使用。

4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基戊酸酯

向2-(二苄基氨基)-1-(4-羟基苯基)乙酮3(30.5g，粗制品，假定为77.3mmol)在400mL丙酮中的混合物中加入K₂CO₃(19.5g，1.8当量)。将混合物回流1小时。将混合物冷却并滤出固体。溶剂蒸发至剩余约一半的量。向溶液中加入戊酰氯(11.1mL，1.2当量)和Et₃N(15.6mL，1.5当量)。将混合物在室温下搅拌过夜。滤出固体，蒸发溶剂，得到4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基戊酸酯(4；35.4g，定量)，为黄色油，其在静置时固化。在下一步骤中直接使用。

4-(2-氨基-1-羟乙基)苯基戊酸盐酸盐

(章鱼胺戊酸盐酸盐)

向4-(2-(二苄基氨基)乙酰基)苯基戊酸酯4(12.75g，粗制品，约27mmol)在250mL***中的混合物中加入4N HCl的二噁烷溶液(20mL，3当量)。将混合物在室温下搅拌10分钟并蒸发溶剂。将固体在***中研磨，通过过滤分离并干燥。将固体溶于250mL乙醇中。向混合物中加入1g 10％Pd/C，将混合物在1巴H₂气氛下搅拌4夜。滤去Pd/C，蒸发溶剂，得到5.8g粗的HCl盐，为黄色固体。将该固体在150mL磷酸盐缓冲液(KH₂PO₄/K₂HPO₃pH＝7)中研磨1小时，得到浅黄色沉淀。滤出该沉淀物，用水、丙酮、***洗涤，干燥，得到4.7g游离碱，为白色固体。将该物质取于50mL水中。滴加浓HCl水溶液(2.0mL，1.2当量)，并将混合物在室温下搅拌直至得到澄清溶液(约10分钟)。将混合物冻干，收集固体，以得到4-(2-氨基-1-羟基乙基)苯基戊酸盐酸盐(5；5.1g，62％来自1，在3个步骤内)，为浅黄色粘稠固体。纯度(LC-MS)：>86％。

新弗林癸酸酯前药的合成

新弗林癸酸酯的合成按照与图5所示的相同的路径进行，但用苄基甲基胺代替二苄胺。路线如图21所示。

2-(苄基(甲基)氨基)-1-(4-羟基苯基)乙-1-酮(7)

向冰/水冷却的溴化物1(50.0g，233mmol，1.0当量)在甲苯(350mL)中的悬浮液中加入苄基甲基胺(60.0mL，465mmol，2.0当量)，并且内部温度从7℃升高至22℃。在反应期间，混合物首先变成稀悬浮液，随后形成浓悬浮液。第二天，¹H-NMR表现出92％的转化率，并加入另外的苄基甲基胺(6.0mL，46.5mmol，0.2当量)。再搅拌2小时后，将反应混合物浓缩至干。残余物在水(250mL)和EtOAc(4×400mL)之间分配。将合并的有机层用盐水(200mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并浓缩至干(dryness)。将残余物(64.3g)置于EtOAc中并搅拌过夜。将获得的悬浮液冷却至-18℃，并通过过滤收集产物(29.9g)。将滤液浓缩至干，并通过柱色谱纯化(300g二氧化硅，用1:1EtOAc:CH₂CCl₂洗脱)。合并纯的级分并浓缩至干，并与上述分离的纯物质混合。这得到标题化合物，为白色固体(总计50.9g，产率86％)。

4-(N-苄基-N-甲基甘氨酰)苯基癸酸酯(8)

将苯酚7(50.9g，199mol，1.0当量)溶于丙酮(1000mL)中，并用K₂CO₃(49.5g，358mmol，1.8当量)处理，并将混合物加热回流2小时。冷却至室温后，通过过滤除去固体。浓缩样品的¹H-NMR表明原料完全转化为盐。

将癸酰氯(18.1mL，89.6mmol，1.5当量)加入到300mL上述丙酮溶液(59.7mmol钾盐，1.0当量)中。所得到的稀悬浮液用Et₃N(12.4mL，89.6mmol，1.5当量)处理，形成浓悬浮液，同时内部温度升至35℃。3小时后取样，TLC表明起始原料完全消耗。通过过滤除去固体，并将滤液浓缩至干。这提供了标题化合物和癸酰氯的混合物(28.5g，最多59.7mmol)，其将直接用于下一步骤。

4-(1-羟基-2-(甲基氨基)乙基)苯基癸酸酯(9)

(新弗林癸酸盐酸盐)

向4-(N-苄基-N-甲基甘氨酰基)苯基癸酸酯8(10.4g，粗制品品，约25mmol)在200mL***中的混合物中加入4N HCl的二噁烷溶液(15mL，3当量)。将混合物在室温下搅拌10分钟，蒸发溶剂，以得到黄色油。将油溶于200mL乙醇中。向混合物中加入1g 10％Pd/C，并将混合物在1巴H₂气氛下搅拌4晚(4nights)。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后蒸发至干。粗产物(10.7g)按照3克分批通过反相柱层析纯化。将含有产品的各批次合并。真空除去乙腈，并通过冷冻干燥除去水层。得到产物，为灰白色产物(1.9g，21％)。

伦理批准

所有实验均符合道德准则。

实施例1：酯前药的极性计算

极性计算在母体化合物的不同酯之间进行。表1描述了这些计算的结果。亲脂性随丁酸酯、戊酸酯、庚酸酯和癸酸酯分别通常增加1、1.5、2.5和4的logP。

表1.酯前药的极性的LogP计算(ACD Chemsketch计算的logP)。

实施例2：体外酯水解分析测试

从雄性wistar大鼠(400g，Harlan Zeist)收获腹部脂肪组织，并储存于-80℃直到使用。人体脂肪组织获得自美容手术，并储存于-80℃直到使用。在磷酸盐缓冲盐水(PBS(Irvine Scientific))中将组织进行1分钟thurax均质化(大鼠组织为80mg/mL，而人组织为240mg/mL)。

使用温度为30度恒温的50mL烧杯测量释放的章鱼胺。通过设置于280nm和2.56AUFS的UV检测器(SPD-10AVp Shimadzu UV/VIS)以1mL/min(Gilson小型泵3)泵送30mLPBS(搅拌之下)。将出口再循环回烧杯中。UV信号在设置为1mm/min和1mV增益的平板记录仪(Kipp)上记录。

章鱼胺和章鱼胺癸酸酯溶液(1mM)在超纯水中制备，并加入1μL/mL1.8％盐酸。章鱼胺癸酸酯在30度下超声处理30min。

在UV检测器对PBS稳定后，向PBS中加入1mL组织悬浮液。在UV信号稳定后，加入5mL的1mM的章鱼胺癸酸酯。在不添加组织悬浮液的情况下，进行对照实验以监测PBS中癸酸酯的自发的水解。

结果

UV谱采集自章鱼胺和章鱼胺癸酸酯。章鱼胺在279nm处显示最大紫外吸收，而章鱼胺癸酸酯在269nm处显示最大吸收。章鱼胺的相对强度比章鱼胺癸酸酯高约10倍。

图1示出了体外水解实验的结果。章鱼胺癸酸酯以10％/110min的速率自发水解成章鱼胺。在大鼠脂肪悬浮液存在期间，章鱼胺癸酸酯水解更快，在110min内产生了超过50％的游离的章鱼胺。在浓度比大鼠组织高三倍的人类脂肪组织存在下，癸酸酯水解在110分钟内产生超过40％的转化率。

由此，显而易见的是章鱼胺的酯前药，章鱼胺癸酸酯的水解在脂肪组织存在下比在PBS中更快。这必须由脂肪组织如，例如内源性酶的存在引起，其中脂肪酶已知会水解酯。

实施例3章鱼胺癸酸酯对人体脂肪甘油生产的影响的体外分析测试

使用特氟隆陶器在含有6mM葡萄糖(2.4g脂肪组织/10mL)的10mL PBS中处理(potter)人体脂肪组织。将悬浮液转移到50mL烧杯中，并在37摄氏度下轻轻搅拌以保持均匀性。将0.3mL悬浮液转移到2mL反应小瓶中，加入章鱼胺(终浓度1μM)和章鱼胺癸酸酯(终浓度为10μM)并加入PBS/葡萄糖至2mL终体积，将小瓶在37摄氏度下培养2小时。

将样品以4000rpm离心2min，并在除去随脂族漂浮的脂肪后取出10μL样品。

使用酶试剂盒(Sigma Aldrich)分析样品并使用直流注射(Vici阀与Shimadzu 10ADvp HPLC泵组合，按照0.15mL/min，阀门前是赛默飞15×2.1C18柱，并使用超纯水作为流动相)20μL至HPLC荧光检测器(Shimadzu RF 10Axl)中测以定荧光强度。通过制备校准样品2-1000微摩尔浓度进行校准。

结果

图2示出了章鱼胺和章鱼胺癸酸酯对人体脂肪悬浮液中甘油生产的影响。与章鱼胺培养2小时后，水平升高(P＝0.10，双尾t检验)，而对于章鱼胺癸酸酯达到了显著水平(P＝0.047，双尾t检验)。

实施例4章鱼胺癸酸酯渗透通过人皮肤的体外分析测试

人皮肤切成4×4cm并用PBS洗涤。去除皮下脂肪，并将皮肤固定在含有PBS填充的50mL搅拌的烧杯中，使得PBS和皮肤内部之间没有空气。暴露于外部的皮肤的开放表面为4.9cm²。向PBS加入1毫升0.221mg/mL在PBS中均质化(thurax)的人体脂肪。

在稳定0.5小时后，通过在皮肤中轻轻摩擦1分钟给予1mL含有5mg/mL章鱼胺癸酸酯的水凝胶。皮肤通过倒置的20mL烧杯而盖住，并放置过夜，发生渗透和水解。在t＝0和t＝1000min时取样，并在-80摄氏度立即冷冻。

使用具有UV检测的HPLC分析样品。使用Shimadzu HPLC泵(10ADvp)与带有ThermoHPLC柱(150mM×2.1mM，BDS hypersil，C18)的valco注射阀(20微升环)组合。在279nm处检测章鱼胺，并通过注射标准品0-1000μM进行校准。流动相由786mg KH₂PO₄、500mL超纯水、15mL MeOH、0.5mL乙酸(99％)和55.55mg七磺酸(heptasulfonic acid)组成，并以0.25mL/min泵送通过体系。

结果

在章鱼胺癸酸酯水凝胶的施用之后1000min，在烧杯中检测到的章鱼胺浓度为0.524微摩尔(0.294sem)。渗透/转化百分率计算为0.18+0.09％。

由此表明，章鱼胺癸酸酯前药会穿透皮肤并且在渗透后，在脂肪组织(其中是脂肪酶)的存在下被水解。

实施例5：章鱼胺癸酸酯水凝胶处理对大鼠腰部和体重的体内作用

雄性Wistar大鼠(约500g)每日秤重，测量腰围。动物在下次处理前至少12小时要每周剃毛一次，以确保伤口愈合。

首先将动物用不含前药的卡波姆水凝胶(每天两次腹部施用3×3cm)处理1个月，然后用含有5mg/mL章鱼胺癸酸酯(施用浓度0.277mg/cm²)的0.5mL卡波姆水凝胶处理动物。在第8、21、36天(化合物处理开始)、51和58天采集尾静脉血(100μL血浆，5μL肝素500IE/100μL血液)。血液离心(10分钟14KRPM)以及将血浆储存于-80℃。

用章鱼胺癸酸酯处理3周后(最后一次施用后16小时)，使用异氟醚(2％，0.8l/minO₂)麻醉动物，并将微量透析探针(2cm纤维素膜，Brainlink，荷兰)***腹部脂肪中用于测定章鱼胺。探针以1.5μL/min灌注盐水，并在300μL小瓶中收集30min样品。***探针后15min开始收集样品。

分析

用SymDAQ衍生化后，使用LC-MSMS(Shimadzu 20ADvp与Sciex API 4000结合)分析血液和透析液样品的章鱼胺。简言之，将22.5微升样品与0微升0.5mg/mL SymDAQ试剂混合并注入柱上。用0.01-8nm的样品进行校准。

使用酶试剂盒(Sigma Aldrich)对血液样品的甘油进行分析，并使用直流注射(Vici阀与shimadzu 10 ADvp hplc泵组合，按照0.15mL/min，在阀门之前赛默飞15×2.1C18柱，并使用超纯水作为流动相)20μL至HPLC荧光检测器(Shimadzu RF 10Axl)中测定荧光强度。通过制备校准样品2-1000微摩尔进行校准。

结果

图3示出了用对照卡波姆水凝胶处理动物，然后用5mg/mL章鱼胺癸酸酯水凝胶处理动物的效果。虽然动物重量根据其生长曲线保持倾斜，但腰围线从施用章鱼胺卡波姆水凝胶开始发生了显著降低，处理3周后达到约10％的降低。与使用单因素方差分析P<0.001(单因素方差分析RM-邦弗朗尼(Bonferroni)事后检验：p＝0.05)的对照处理相比，腰围显著减少。

图4示出了用章鱼胺癸酸酯卡波姆水凝胶处理，对血浆甘油水平的影响。15天后水平升高(P＝0.101，t-检验双尾)，处理22天后达到显著性(P＝0.024，t-检验，双尾)。

在用章鱼胺癸酸酯卡波姆水凝胶处理开始之前，经治疗15天和22天之后，章鱼胺的血浆水平处于LLOQ(定量下限(0.1nm))之下。这说明治疗不会导致显著的全身性的章鱼胺接触。章鱼胺的皮下水平为0.96nM±0.36nM，甚至在最后一次施用后16小时超过血浆水平。

因此，根据本发明的章鱼胺前药的局部给予的会减少皮下脂肪组织的量，而不会导致游离章鱼胺的全身浓度增加。

实施例6：水解实验(图6、7、8、9和10)

从接受美容手术的肥胖女性受试者获得人体腹部脂肪组织。使用Teflon Potter端将组织在530rpm下用5mM D(+)-葡萄糖单水合物在PBS溶液中(Irvine Scientific)中进行处理(Potter RW 19Nr 29795，Janke&Kunkel KG)。

搅拌组织悬浮液(1、7.5、25或240mg脂肪/ml PBS，或血浆(plasma))，并将1.98ml等分式样转移到聚丙烯2ml螺旋盖小瓶(Sarstedt)中。以指定浓度加入前药酯(章鱼胺癸酸酯和新弗林癸酸酯)，混合并在37℃下培养(图6)。当研究脂肪酶的抑制作用时，在加入前药酯的前5分钟，加入***或奥利司他(图10)。

加入前药后15分钟，通过加入20微升1.8％HCl终止脂肪分解。将样品离心(在4℃下，13000rpm离心3分钟)，并将上清液储存于-18℃用于分析。为了分析在血浆中的水解(图7)，将10微升全血加入到含有所指示的浓度的章鱼胺癸酸酯的1ml PBS中。为了酯、章鱼胺和新弗林在PBS(图8和9)中的稳定性，在无脂肪或无血液的PBS中进行培养。

使用HPLC UV分析样品。将Gilson 234自动注射器和Shimadzu hplc泵(10AdVP)与设置为270nm的shimadzu UV(10AVp)结合使用。使用反相HPLC柱(赛默飞BDS Hypersil C18150mm×2.1mm，3微米)分离样品。流动相由1.6g KH₂PO₄，110mg 1-庚磺酸钠，1L超纯水，15ml甲醇和1ml乙酸组成，流速为0.175ml/min。

结果

悬浮液中的脂肪组织的量增加导致章鱼胺癸酸酯和新弗林癸酸酯的水解速率更高(图6a-d)。这表明章鱼胺癸酸酯和新弗林癸酸酯都通过存在的脂肪组织，特别是通过脂肪组织中存在的内源性酶，特别是脂肪酶进行水解。

章鱼胺癸酸酯也可以在血浆中水解(图7)，这确保了少量进入血液的前药迅速转化为游离的章鱼胺，因此前药不会分布于整个身体内。

章鱼胺癸酸酯(“octdec”)、章鱼胺戊酸酯(“octpent”)和新弗林癸酸酯(“syndec”)的水解，以比在血浆或脂肪组织存在下低得多的速率，发生于PBS中(图8)。这表明内源化合物，最可能的酶，如脂肪酶是造成本发明的前药水解成活性肾上腺素能受体激动剂和/或拮抗剂增加的原因。

游离章鱼胺或新弗林在PBS中是稳定的(图9)。

给予根据本发明的前药的自增强、自动催化作用如下所示。如果如上所述将章鱼胺癸酸酯(“OD”)或新弗林癸酸酯(“SD”)加入到脂肪悬浮液中，则在15分钟后观察到约40％至45％水解的基础水平(图10)。

***是一种β-受体拮抗剂。***的β-拮抗作用通过受体介导的具有抑制脂肪酶作用的效果。已经证明，相对于对照物，加入量越来越多的***会降低章鱼胺癸酸酯(图10a)或新弗林癸酸酯(图10c)的水解。因此，脂肪组织的脂肪酶至少部分导致章鱼胺癸酸酯和新弗林癸酸酯在脂肪组织存在下水解。

在将奥利司他加入悬浮液中时，这更加明显。奥利司他是脂肪酶拮抗剂，因此阻断了脂肪酶本身。它对β-受体介导的刺激或脂肪酶的抑制没有影响。将奥利司他加到章鱼胺癸酸酯(图10b)或新弗林癸酸酯(图10d)的悬浮液中会进一步抑制脂肪酶对章鱼胺癸酸酯或新弗林癸酸酯的水解作用。通过阻断脂肪酶本身，前药的水解比通过阻断β-受体得以更大程度地受到抑制，β-受体仅具有抑制脂肪酶活化的作用。

这些结果应在上下文中进行评价。水解产物(章鱼胺或新弗林)本身具有刺激β-肾上腺素能受体从而刺激脂肪酶活性的作用，这通过，例如甘油生产的增加就可以看出(图2和图4)。脂肪酶活性还会导致本发明的前药的水解(图6a-d)。

这表明局部给予的本发明的前药会导致前药局部水解而产生游离章鱼胺或新弗林，这会导致脂肪酶活性增加。脂肪酶活性增加会导致前药水解增加，以及甘油三酸酯水解增加。因此，本发明的前药通过脂肪酶的活化而自催化其自身的水解，并且这种活化伴随着导致甘油三酸酯(脂肪组织)的水解增加。因此，前药对脂肪酶的作用刺激了脂肪酶对前药的作用，导致甘油三酸酯水解大大增加。因此，脂肪酶活化和前药水解之间存在明显的协同作用。

此外，由于本发明的前药的高logP，前药优先在脂肪组织中吸收，其中将会发现脂肪酶并且在这种情况下甘油三酯将被水解。根据本发明的权利要求，这导致甘油三酸酯的高效水解。因此，上述自催化水解机理与导致前药在脂肪组织中分配的前药性能logP之间存在进一步的协同作用。

据假设，合理预期的是通过抑制脂肪酶活性而增加皮下脂肪组织的量也可能发生相反的效果。这是因为从实验中可以看出，抑制脂肪酶活性从未达到100％，以至于残留了一些残留的脂肪酶活性。因此，在抑制脂肪酶活性的激动剂或拮抗剂(如上的β-拮抗剂和/或α-激动剂)的情况下，也仍然存在一些脂肪酶活性，允许前药水解并进一步抑制脂肪酶活性。这将会导致皮下脂肪组织的量局部增加、和/或皮下脂肪组织增强。

然而，由于刺激脂肪酶活性的激动剂和拮抗剂(如上的β-激动剂和/或α-拮抗剂)的自身催化效果最强，刺激脂肪酶活性的前药是优选的。

实施例7：皮肤渗透

解剖来自进行美容外科手术的肥胖女性受试者的人体皮肤，并将其夹在皮肤渗透室内，这允许6.25cm²的皮肤暴露于含有7.5mg/ml处理组织的60ml搅拌的PBS(5mM葡萄糖)，以便在渗透时转化前药。将0.25ml含有2.75mg/ml游离章鱼胺、5mg/ml章鱼胺癸酸酯或3.98mg/ml章鱼胺戊酸酯的水凝胶施用于皮肤一次，并使其渗透2小时，确保前药全部水解成游离章鱼胺。室恒温于37℃。用1ml注射器从PBS处理组织中取样，并使用LC-质谱进行分析。假设完全转化，该分析测试评价了章鱼胺前药基于等量章鱼胺，通过皮肤的总渗透量，并将其与等量的章鱼胺本身的渗透量进行比较。

使用HPLC分光光度法分析样品。将Shimadzu HPLC(LC20AD泵和SIL 10ADvp注射器)与sciex API 4000质谱仪结合使用。HPLC柱是在35℃恒温的Phenomenex，Synergi Max(BOL-P-RP2.5-036)，3.0×100mm，2.5μM。流动相由超纯水(“UP”)中的洗脱液A：0.1％甲酸(“FA”)和洗脱液B：70％乙腈(“ACN”)+0.1％FA组成，总流速为0.3ml/min。补液流由洗脱液C：以0.15ml/min的0.1％在ACN中的FA和洗液：UP/ACN/FA＝50/50/0.1组成。

章鱼胺的分离通过在4分钟内从0-40％洗脱液B梯度跑柱，并随后接下来的1.5分钟内100％洗脱液B洗脱而完成。梯度保持于100％B持续0.5分钟。

在沉淀(25nm在ACN UP/FA 95％/5％/0.1％中的章鱼胺-d3)之后测定章鱼胺。10μL样品加入到15μL沉淀溶剂中并涡旋10秒。样品13000rpm离心5分钟，并将14μL 0.1％在UP中的FA加到6μL上清液中，涡旋10秒。自动注射器经过编程而加入20微升0.5mg/ml SymDAQ试剂(在线)，并注入35微升。SymDAQ试剂通过将5mg SymDAQ溶于4.5ml UP、5ml 0.25MNaHCO₃、0.5ml甲醇(“MeOH”)和20μL 2-巯基乙醇中进行制备。

表1.MSMS的设置

表2.MSMS的设置

结果

包含游离章鱼胺的水凝胶的局部给予导致章鱼胺少量渗透通过皮肤。章鱼胺癸酸酯和戊酸酯的渗透率为约10倍高(图11)。

实施例8：皮肤和脂肪渗透分析测试

在4℃下解剖来自接受美容手术的肥胖女性受试者的具有附着的皮肤的人体脂肪立方体(5×5×5cm)。将立方体转移到容器中而使皮肤覆盖容器的边缘。将含有2.75mg/ml游离章鱼胺、5mg/ml章鱼胺癸酸酯或3.98mg/ml章鱼胺戊酸酯的0.25ml水凝胶施用一次，并使其渗透20小时。立方体随后在-80℃下冷冻。

在解冻后，小心取出皮肤，注意不要污染下面的脂肪。解剖脂肪而产生直接在施用部位之下的1×1cm的脂肪柱。将柱切片，而得到0.5cm厚的切片，覆盖施用部位的0-2cm的脂肪深度。将组织在5ml PBS(5mM葡萄糖)中超声处理，将样品离心(在4℃，13000rpm，30分钟)。用注射针和注射器除去澄清的上清液并冷冻直到分析。如实施例7中进行章鱼胺的分析。

结果

章鱼胺、章鱼胺癸酸酯和章鱼胺戊酸酯渗透穿过了皮肤和脂肪组织。章鱼胺癸酸酯和戊酸酯的施用导致所有脂肪层中游离章鱼胺的浓度高于包含章鱼胺的水凝胶的施用(图12)。

实施例9：体外甘油产生的分析测试

将从接受美容手术的肥胖女性受试者获得的人体腹部脂肪组织在PBS溶液(Irvine Scientific)中用5mM D(+)-葡萄糖一水合物使用Teflon potter端以530rpm进行处理(Potter RW 19 Nr 29795，Janke&Kunkel KG)，而提供250mg/ml的人体脂肪悬浮液。

将脂肪悬浮液搅拌并将1.75ml等分试样转移到聚丙烯2ml螺旋盖小瓶(Sarstedt)中。以所示的浓度加入测试化合物，并将小瓶在37℃下培养4小时。小瓶每小时进行混合。通过分析对照物(未培养但相反立即冷冻的悬浮液)相对于培养4h的对照样品的甘油含量计算4小时内的甘油产量。产生的甘油量设定为100％。实验样品的甘油含量表示为对照物的％。

培养后冷冻实验样品。除去脂肪颗粒，并在解冻后，将样品离心(4℃，13000rpm，15分钟)，并将澄清上清液吸出并冷冻直到分析。

使用酶试剂盒(甘油分析试剂盒(Glycerol Assay Kit)，Sigma Aldrich)分析甘油。简言之，在96孔板(Corning)中，将100微升甘油分析测定反应混合物加入到10微升上清液的样品中，并在振荡15s后培养20分钟。由读板机(赛默飞Multiskan FC)在570nm读取吸光度。使用甘油标准曲线(0.015μM-1000μM)进行定量。

结果

异丙肾上腺素在0.1-约800nM变化的浓度下甘油含量增加(图13a)。

章鱼胺在0.1-100000nM变化的浓度下导致浓度甘油含量增加(图13b)。

新弗林在0.1nM到至少100000nM变化的浓度下导致甘油含量增加(图13c)。

***在0.1nM到至少1000nM的浓度下导致甘油含量或多或少恒定(图13c)。在高于1000nM的浓度下，甘油含量降低。

β3激动剂(SR58611A，CL316243，CGP12177)提高了甘油的生产，而β-拮抗剂SR59230降低了甘油生产(图20)。

α2拮抗剂育亨宾增加甘油的产生，而α2激动剂甲苯噻嗪却降低甘油产生(图20)。

磷酸二酯酶抑制剂咖啡因会增加甘油产生(图20)。

由这些结果可以看出，加入β-肾上腺素能受体激动剂章鱼胺、新弗林和异丙肾上腺素导致甘油三酸酯水解而提供增加的甘油含量。这种效应随着激动剂浓度的增加而增加，但在非常高的浓度下却会降低。目前推测β-受体脱敏作用会导致在β-肾上腺素能受体激动剂的高浓度下甘油含量降低。

加入β-肾上腺素能受体拮抗剂，***会具有相反的效果：在超过1000nM的浓度下甘油含量会降低，而这种效应随浓度增加而增加。目前推测的是，具有比***更高拮抗活性的拮抗剂将会表现出在较低浓度下的这种效应。

由图20可以看出，对于其他β-激动剂，以及对于α-拮抗剂也会出现本文中报道的效应。对于β-拮抗剂和α-激动剂发生了相反的效应，正如以上所描述的。

实施例10：在人类志愿者上的施用

对于腹部/臀部实验，对2名男性志愿者43和39岁(BIM分别为25.5和28)每天(在上午8点)监测腹部周长以及腹部和臀部的皮褶。每天监测血压和体重。对于腿部实验，对1名女性志愿者(42)岁(BMI 23.1)每天(在上午8点)监测腿围。

水凝胶中的施加

水凝胶每日一次，或每日两次如指示的，用5ml注射器进行施用而测定体积。

对于腹部实验，将指定体积的水凝胶施加于围绕肚脐半径为10cm的腹部。相同的体积施用于臀部区域。对于腿部实验，每只腿上施用2.5ml。

血浆采样

在彻底洗手后，用指刺采取血样。使用突出小瓶盖的毛细管对血液采样(40微升)，并旋转至含有10微升肝素20EI/ml的300微升小瓶中。吸取血浆并转移到300微升小瓶中并储存于-20℃直到进行分析。

如实施例7中描述的，分析章鱼胺。

血浆甘油分析

如上所述，使用酶试剂盒(Sigma)分析甘油。

皮肤褶皱

通过使用皮肤皱褶测定仪(Vetmeter Sli mguide C-120)通过测量臀部和腹部4cm的皮肤厚度而评价皮肤褶皱。

处理方案

在腹部和臀部上施用包含2.75mg/ml游离章鱼胺(2.5ml，每日一次)的水凝胶，在人腰围上施用包含5mg/ml章鱼胺癸酸酯的水凝胶(2.5ml，每日一次和5ml，每日两次)的效果进行研究(图14)。实验是两次实验的平均值(n＝2)。

此外，对腹部和臀部施用对照水凝胶，2.75mg/ml章鱼胺(2.5ml，每天一次)，对单个个体腰围上施用5mg/ml章鱼胺癸酸酯(2.5ml，每日一次和5ml，每天两次)和章鱼胺戊酸酯(2.5ml，每日一次)和5mg/ml新弗林癸酸酯(2.5ml，每日一次)的效果进行了研究(图15)。

此外，研究了5mg/ml章鱼胺癸酸酯(5ml，每日两次)对腹部和臀部皮肤褶皱的影响(图16)。实验是2或3次的平均值(n＝2-3)。

另外，给予章鱼胺癸酸酯(5mg/ml，2.5ml，每日一次和5ml，每日两次；图17a)；给予游离章鱼胺(2.75mg/ml，2.5ml，每日一次和5ml，每日两次；图17b)和给予章鱼胺戊酸酯(3.98mg/ml，2.5ml，每天一次；图17c)时监测章鱼胺的血浆水平。实验是一个或两次实验的平均值(n＝1-2)。

设置实验以比较等量的游离章鱼胺。因此，改变前药或章鱼胺的量而使之提供等量的游离章鱼胺。

结果

局部给予的包含章鱼胺癸酸酯(“octdec”)的水凝胶，不论每天使用2.5ml或每天两次使用5ml，在16天后都将腰围减少约4％。在相同处理方案中和以相同摩尔浓度局部给予的游离章鱼胺(“oct”)是无效的(图14)。

局部给予的包含章鱼胺癸酸酯(“octdec”)，章鱼胺戊酸酯(“octpent”)，或局部给予的新弗林(“sydec”)在21天后将腰围减少2％-5％，局部给予的游离章鱼胺(“oct”)在相同的处理方案中和以相同的摩尔浓度没有效果(图15)。

局部给予的包含章鱼胺癸酸酯的水凝胶在20天内将皮肤折皱减少10％-20％(图16)。

使用包含章鱼胺癸酸酯和戊酸酯前药的水凝胶的处理方案不导致游离章鱼胺的不可接受的血浆水平(图17a和c)。章鱼胺从脂肪组织缓慢释放到血浆中，且还未报道副作用。前药的给予导致游离章鱼胺的全身浓度是可接受的，这也是给予含有游离章鱼胺的水凝胶的情况(图17b)。然而，包含游离章鱼胺的水凝胶不会导致皮下脂肪组织的减少(图15)。

在采用含有章鱼胺癸酸酯(5mg/ml，5ml，每日两次)的水凝胶的慢性处理中，章鱼胺的血浆水平保持在可接受的值。未报道副作用(图18)。

在这些实验(图19)期间，血压(收缩(“syst”)和舒张(“dia”))和心率(“HR”)保持正常，并未报道副作用。

实施例11：脂肪团去除

将包含3.98mg/ml章鱼胺戊酸酯(5ml)的水凝胶每日一次施用于具有中度脂肪团区域的人类受试者。三天后，脂肪团明显减少。

Claims

1.一种用于局部给予的药物组合物，用于在通过调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的方法中的用途，所述药物组合物包含用于肾上腺素能受体的激动剂和/或拮抗剂的前药，其中所述前药是酯，所述前药包含所述激动剂或拮抗剂和可水解部分，其中所述前药具有为至少0的辛醇/水分配系数，

其中所述调节发生在局部给予的部位；

其中所述激动剂是称为β-激动剂的β-肾上腺素能受体的激动剂或称为α-激动剂的α-肾上腺素能受体的激动剂，和/或其中，所述拮抗剂是称为β-拮抗剂的β-肾上腺素能受体的拮抗剂或称为α-拮抗剂的α-肾上腺素能受体的拮抗剂；并且

所述β-激动剂是邻-章鱼胺、间-章鱼胺或对-章鱼胺，邻-新弗林、间-新弗林或对-新弗林，去甲肾上腺素、肾上腺素、麻黄素、苯丙醇胺、酪胺、麻黄宁、苯乙醇胺、β-苯乙胺、大麦芽碱、异丙基去甲新弗林、N-甲基酪胺、沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、特布他林、吡丁醇、丙卡特罗、克伦特罗、奥西那林、非诺特罗、比托特罗、利托君、异丙肾上腺素、沙美特罗、福莫特罗、班布特罗、奥达特罗、茚达特罗、阿米贝隆、CL 316,243、L-742,791、L-796,568、LY-368,842、米拉贝隆、Ro40-2148、CGP12177、索拉贝隆、BRL 37,344；

所述α-拮抗剂是阿立哌唑、阿塞那平、阿替美唑、西拉唑啉、氯氮平、依法克生、咪唑克生、洛拉西酮、美哌隆、米安色林、米氮平、萘吡坦、奥氮平、帕潘立酮、利培酮、苯氧基苯甲胺、酚妥拉明、吡贝地尔、萝芙素、罗替戈汀、喹硫平、去甲喹硫平、司普替林、妥拉苏林、育亨宾、齐拉西酮或佐替平；

所述β-拮抗剂是卡替洛尔、纳多洛尔、喷布洛尔、吲哚洛尔、***、索他洛尔、噻吗洛尔、醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他索洛尔、比索洛尔、塞利洛尔、艾司洛尔、美托洛尔、奈比洛尔、布新洛尔、卡维地洛、拉贝洛尔；

所述α-激动剂是4-NEMD、7-Me-马萨尼定、胍丁胺、阿可乐定、溴莫尼定、可乐定、地托咪定、右旋美托咪啶、法多咪啶、胍那苄、胍法辛、洛非西定、马萨尼定、美托咪定、甲基***、米伐折醇、利美尼定、罗米非定、他利克索、替托尼定、托洛尼定、甲苯噻嗪、赛洛唑啉、TDIQ。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中调节包括减少皮下脂肪组织的量、增加皮下脂肪组织的量、或增强皮下脂肪组织。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中调节包括减少皮下脂肪组织的量。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述前药具有至少2.3的辛醇/水分配系数。

5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中

·所述β-激动剂是对-章鱼胺或对-新弗林；

·所述β-拮抗剂是喷布洛尔、吲哚洛尔、***、阿替洛尔、美托洛尔L-748,328、L-748,337、SR 59230A。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述酯是C2-C32烷基酯。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述酯是丁酸酯、戊酸酯、庚酸酯、辛酸酯或癸酸酯。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述前药以0.001-1000mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物是乳剂、泡沫、凝胶、洗剂、软膏、贴剂、糊剂、溶液或喷雾剂。

10.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其中所述激动剂是β-激动剂。

11.根据前述权利要求中任一项所述的药物组合物，进一步包含磷酸二酯酶抑制剂和/或腺苷酸环化酶刺激剂。

12.权利要求1-11中任一项所限定的药物组合物在制备通过局部调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的药物中的用途，其中，所述药物被局部给予至所述哺乳动物身体。

13.通过应用权利要求1-11中任一项所限定的药物组合物用于非治疗目的地局部调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的方法，其中所述方法是美容方法。

14.根据权利要求12所述的用途，其中所述前药以0.001-1000mg/cm²的剂量给予。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述前药以0.001-1000mg/cm²的剂量给予。

16.一种用于章鱼胺的前药，所述前药是包含章鱼胺和可水解部分的酯，其中所述前药具有至少0的辛醇/水分配系数。

17.根据权利要求16所述的前药，其中所述前药具有至少2.3的辛醇/水分配系数。

18.根据权利要求16或17所述的前药，用于医疗用途。

19.根据权利要求16或17所述的前药，用于在通过调节皮下脂肪组织以塑形哺乳动物身体的方法中的用途。

20.根据权利要求16或17所述的前药在制备用于减少皮下脂肪组织的量、增加皮下脂肪组织的量、或者增强皮下脂肪组织的药物中的用途。

21.一种制备权利要求16所述的章鱼胺的前药的方法，包括用酰化剂酯化章鱼胺。