CN106959347B - 环磷腺苷葡胺注射液药物组合物的质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及环磷腺苷葡胺注射液药物组合物及其质控方法和制法。具体的说，在一个实施方案中，本发明涉及的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中包含：环磷腺苷、葡甲胺、和酸碱调节剂，本发明还涉及包括使用高效液相色谱法测定注射液中的环磷腺苷含量和/或有关物质量以对所述药物组合物进行质量控制的方法。本发明还涉及制备本发明药物组合物的方法。本发明的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物具有如说明书所述的良好药学性质。

Description

环磷腺苷葡胺注射液药物组合物的质控方法

技术领域

本发明属于医药制剂技术领域，涉及一种可用于心力衰竭、心肌炎、病窦综合征、冠心病及心肌病，还可用于心律失常的辅助治疗的药物，特别是涉及一种环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，及其质控方法以及它们的制备方法，该环磷腺苷葡胺注射液药物组合物药物组合物具有良好的药学性质。

背景技术

本发明涉及的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物是一种有效的可用于心力衰竭、心肌炎、病窦综合征、冠心病及心肌病，还可用于心律失常的辅助治疗的药物。据信本发明的注射用环磷腺苷葡胺粉针剂通常可用于以下疾病：心血管疾病(冠心病、风心病、心肌炎、心律失常等)；脑血管疾病(脑缺血、脑血栓及其后遗症)；脑血管意外；肿瘤病人；手术病人(各种骨科手术、颅脑手术、器官移植、麻醉前常规用药等)；糖尿病、肾病等各种慢性消耗性疾病；各种肝炎；哮喘，银屑病，老年慢性支气管炎。

环磷腺苷(Adenosine Cyclophosphate)的化学名为6-氨基-9-β-D-呋喃核糖基-9H-嘌呤-4’,5’-环磷酸氢酯，分子式为C10H12N5O6P，分子量为329.21，其化学结构式为：

由于环磷腺苷微溶于水，在环磷腺苷中增加葡甲胺(Meglumine，1-脱氧-1-(甲氨基)-D-山梨醇，分子式C7H17NO5，分子量195.22)可以增加其溶解性，同时葡甲胺对磷酸二酯酶有一定的抑制作用，使之对环磷腺苷的分解作用降低，故环磷腺苷葡胺的正性肌力作用较相当量的环磷腺苷更强，因此临床常把环磷腺苷与葡甲胺结合成环磷腺苷葡胺使用，药理作用环磷腺苷葡胺为非洋地黄类强心剂，具有正性肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌；能改善窦房结P细胞功能。现有技术已有环磷腺苷葡胺注射液有不溶性微粒不稳定，遇光易降解等缺点，稳定性心较差。

环磷腺苷是一种核苷酸类药物，为非洋地黄类强心药。环磷腺苷(cAMP)是细胞内参与调节物质代谢和生物学功能的重要物质，是生命信息传递的“第二信使”。作为一个心血管药物，环磷腺苷具有穿透性好、药理作用温和、稳定性高、毒副作用小的优点。在体内环磷腺苷可以促进心肌细胞的存活，增强心肌细胞抗损伤、抗缺血和缺氧能力；促进钙离子向心肌细胞内流动，增强磷酸化作用，促进兴奋-收缩偶联，提高心肌细胞收缩力，增加心输出量；同时还扩张外周血管，降低心脏射血阻抗，减轻心脏前后负荷，增加心排出量，改善心功能。从而对心脏起到营养心肌、正性肌力、舒张血管、抗血小板凝聚和抗心律失常的作用。在临床上主要用于治疗心功能不全、心绞痛和心肌梗死。尤其是对洋对黄类强心药中毒或不敏感的患者。

进入细胞的环磷腺苷在发挥生物学效应后被磷酸二酯酶降解成5-腺苷-5′-磷酸(5-AMP)失去活性，进而被分解成腺苷和磷酸。环磷腺苷在临床上用于心功能不全、心绞痛和心肌梗死；对洋地黄类强心药中毒或不敏感的患者；治疗心律失常的辅助药物。

由于环磷腺苷的溶解性不足，人们将其制成与葡甲胺以克分子比1:1的方式混合制成注射剂以增加环磷腺苷的溶解度。尽管制备环磷腺苷葡胺制剂例如其粉针剂或水针剂时是以环磷腺苷和葡甲胺两种物料以克分子比1:1的比例直接投料制备得到的，但是人们偶有将其称为一种复盐的说法，例如据说形成以下结构的化合物：

现有技术中有诸多有关环磷腺苷葡胺技术例如其制剂技术例如其粉针剂或水针剂的技术报道。

CN101780099A(201010108233.5，邓学峰)涉及的环磷腺苷葡胺组合药物或是环磷腺苷组合药物，由如下重量份数的药效成分制成:环磷腺苷葡胺或是环磷腺苷20-60，赖氨酸阿司匹林100-200，还原型谷胱甘肽与维生素C重量比1∶10-15混合物200-300。发明了制备方法。本发明的环磷腺苷葡胺组合药物或是环磷腺苷组合药物，消除了现有技术制备的环磷腺苷葡胺或环磷腺苷的发热、皮疹、疼痛的不良反应。

CN103613626A(201310619163.3，美林)涉及一种环磷腺苷化合物及其环磷腺苷葡胺药物组合物。本发明环磷腺苷化合物为晶体，采用X-射线粉末衍射测定，其图谱中特征峰在2θ±0.2°为5.8°、 6.9°、7.6°、11.3°、16.5°、19.2°、21.7°、22.6°、24.0°、25.9°、30.1°、31.2°、33.4°显示。本发明还提供有效成分为本发明所述的环磷腺苷化合物的注射液和环磷腺苷葡胺组合物注射液及其环磷腺苷葡胺葡萄糖组合物注射液。本发明环磷腺苷注射液相比现有技术稳定性有显著提高，处方中添加L-苹果酸、酒石酸钠可以进一步提高稳定性。

CN102988305A(201210303740.3，姚云)涉及一种含有环磷腺苷葡胺化合物的药物组合物，特别涉及一种环磷腺苷葡胺的冻干粉针制剂及其制备方法，每1000支注射剂，由以下配比的组分制成：环磷腺苷葡胺20g；甘露醇100-200g；EDTA钙1-3g；维生素C1-2g，摩尔比为1：4的柠檬酸氢二钠和柠檬酸三钠缓冲液2000ml。

CN1579413A(200410013546.7，江卫世)公开了注射用环磷腺苷葡胺及其制备工艺。在环磷腺苷葡胺溶液中，随着保存时间的延长，环磷腺苷会逐渐析出，使药液发生变质、浑浊，给病人应用会发生严重的不良反应，从而影响药品的疗效和用药的安全性。注射用环磷腺苷葡胺，其组成包括:环磷腺苷，所述的环磷腺苷与葡甲胺及赋形剂制成冻干粉针剂，其重量份数为环磷腺苷1.7～ 63、葡甲胺1.0～37、赋形剂0.675～90，所述的环磷腺苷与所述的葡甲胺的重量份数比为1.7∶1， pH值为3.5-9.0，性状为白色或类白色冻干块状物或粉末，与三氯化铁试液反应初显棕红色沉淀，随即溶解成棕红色溶液。本产品用于治疗心力衰竭、心肌炎、病窦综合症、冠心病及心肌病，也可用于心律失常的辅助治疗。

CN1459288A(03124559.5，赵琛)涉及一种环磷腺苷葡胺大输液制剂及其制备方法以及该大输液制剂中环磷腺苷葡胺含量测定方法。环磷腺苷葡胺的等渗大输液制剂，其配方为100ml制剂中含主药环磷腺苷葡胺54-66mg，等渗介质葡萄糖4.5-5.5g或氯化钠0.85-0.95g。本发明确定了环磷腺苷葡胺大输液制剂稳定的关键条件pH值范围及其大输液制剂制备方法、并解决了环磷腺苷葡胺含量测定方法，有利于对环磷腺苷葡胺大输液制剂生产质量的控制，从而制定合适的生产方法，使环磷腺苷葡胺大输液制剂得以工业化大批量生产成为可能。使用本制剂，可避免从小针抽取药液注入葡萄糖或氯化钠大输液的中间环节，杜绝了用药过程中的交叉感染和污染，使用药更为安全、方便。本发明可制成多种规格，供医护人员酌情选用。

CN101721357A(200810230677.9，华中)公开了环磷腺苷葡胺大容量注射剂的一种过滤方法。本发明将环磷腺苷葡胺大容量注射液的配制液首先经预处理，然后再经超滤技术处理，确保了大分子无效成分被完全去除，制成的注射剂澄明度高、有关物质小、热原合格、稳定性好。

CN1923180A(200610116409.5，万邦)及一种注射用环磷腺苷葡胺的制备工艺，属化学制药。一种注射用环磷腺苷葡胺的制备工艺:取6％环磷腺苷葡胺溶液并在其溶液中加入赋形剂无菌粉，搅拌溶解，加入注射用水稀释，调PH值在5.5～7.0范围内，冷却，当品温达到-35℃至1-2小时后，冷凝，当冷凝器温度降至-45℃时，抽真空至压力为-1.5×10-2KPA，以3℃/小时速度升温，当品温达室温或30℃以上，保温2小时，整个冻干过程需24-26小时。本发明的注射用环磷腺苷葡胺，是采用现代制剂技术制成的无菌冻干粉针剂，可常温运输、保存，提高了该产品的稳定性和安全性。本产品的制备工艺简单，科学合理，容易操作。

CN101455631A(200910060427.X，德康)涉及一种环磷腺苷葡胺注射液及其制备工艺，它是将枸橼酸放入磁力搅拌罐中，加配制量50％注射用水搅拌使溶解，再将环磷腺苷、葡甲胺加入上述溶液中，搅拌使溶解，并按体积加入0.02％针用活性炭，搅拌30分钟，粗滤除炭，制得环磷腺苷葡胺溶液备用，补加注射用水至全量，用10％氢氧化钠溶液调节PH值至6.0-6.5，制成无色的澄明注射液。本发明不但具有作用直接、快速等优点，而且本品不良反应少，可常温运输、保存，因而提高了该产品的稳定性和安全性。

CN102283804A(201010214356.7，方明)涉及一种环磷腺苷葡胺注射液及其制备方法。其制备工艺是取适量注射用水，加入氯化钠、环磷腺苷、葡甲胺，搅拌使完全溶解，按体积加入0.05～ 0.2％(W/V)针用活性炭，搅拌15～30分钟，过滤除炭，补加注射用水至近全量，用磷酸盐缓冲液调pH值至6.0～6.5之间，补加注射用水至全量，检测半成品合格后，过滤，灌封(全过程充氮气)，灭菌，灯检、包装即得。其优点在于:选用了适宜的溶媒及附加剂，改善了环磷腺苷葡胺的溶解性及稳定性，采用最终灭菌的制备方法，有效地保证了药品的无菌保证水平。具有组方、工艺简单，生产成本低，药物稳定性、安全性强等特点。

CN102600070A(201110435919.X，德康)涉及一种化学药品的制备方法，具体地说是一种环磷腺苷葡胺组合物注射液及其制备。其重量份数为：环磷腺苷5-15份、葡甲胺3-10份、枸橼酸2.0-2.2 份、氢氧化钠0.6-0.8份、氯化钠2-4份、注射用水2-5份；制备步骤如下：取枸橼酸，加注射用水搅拌溶解后，用氢氧化钠调节pH值至5.9～6.5形成缓冲溶液，再加入氯化钠和助溶剂搅拌溶解，加入注射用水，边搅拌边加入环磷腺苷、葡甲胺，待完全溶解后，加入活性炭搅拌，经过滤、回流制成无色的澄明液体。本发明注射液澄明度好，稳定性好，用药安全。

CN102796156A(201210314213.2，宁辉)涉及一种环磷腺苷二葡甲胺化合物及其制备方法，提供由1分子环磷腺苷与2分子的葡甲胺形成的化合物、其制备方法，以及包含它的药物组合物。所述化合物水溶性、稳定性均优于现有化合物。

CN102258531A(201110102704.6，宁辉)提供了一种含有环磷腺苷与葡甲胺的药物组合物及其制备方法，其包含作为活性成分的环磷腺苷、作为稳定剂的葡甲胺和作为骨架的甘露醇，以一定配比存在。本发明组合物使环磷腺苷的降解最小化，从而保护了药物稳定性、有效性和安全性。

CN101455631A(200910060427.X，德康)涉及一种环磷腺苷葡胺注射液及其制备工艺，它是将枸橼酸放入磁力搅拌罐中，加配制量50％注射用水搅拌使溶解，再将环磷腺苷、葡甲胺加入上述溶液中，搅拌使溶解，并按体积加入0.02％针用活性炭，搅拌30分钟，粗滤除炭，制得环磷腺苷葡胺溶液备用，补加注射用水至全量，用10％氢氧化钠溶液调节PH值至6.0-6.5，制成无色的澄明注射液。本发明不但具有作用直接、快速等优点，而且本品不良反应少，可常温运输、保存，因而提高了该产品的稳定性和安全性。

然而，现有的环磷腺苷葡胺制剂特别是其水针剂注射液仍然存在有待克服的技术问题。因此，本领域技术人员仍然期待有新的方法来制备具有良好药学性能的环磷腺苷葡胺注射液水针剂药物组合物。

发明内容

本发明目的在于提供一种具有良好药学性能的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物。本发明人已经出人意料地发现，具有本发明组合物特征的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物能够有益地实现上述目的。本发明因此而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中包含：环磷腺苷、葡甲胺、和酸碱调节剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其为注射液形式的药物组合物。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其每1ml中环磷腺苷的量为8～12mg，例如9～11mg。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中环磷腺苷与葡甲胺的摩尔比为1：1。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠，其用量是调节注射液的pH值至6.4～6.7之间。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中还包括氯化钠。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中还包括氯化钠，该注射液每1ml中氯化钠的量为2～4mg，例如该注射液每1ml中氯化钠的量为2.5～3.5mg。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其中所述氯化钠是预先与环磷腺苷一起配制成溶液并在pH值低于4.5(例如pH值3.5～4.0)的条件下用活性炭吸附处理的。已经出人意料的发现，当使用适量氯化钠预先对环磷腺苷进行特定处理后，制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物具有优异的性质例如化学稳定性。

根据本发明第一方面任一实施方案的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物，其是照包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

进一步的，本发明第二方面提供了制备环磷腺苷葡胺注射液药物组合物的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中包含：环磷腺苷、葡甲胺、氯化钠和酸碱调节剂，该方法包括如下步骤：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其所制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物为注射液形式的药物组合物。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其所制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物每 1ml中环磷腺苷的量为8～12mg，例如9～11mg。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其所制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中环磷腺苷与葡甲胺的摩尔比为1：1。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠，其用量是调节注射液的pH值至6.4～6.7之间。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其所制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物每 1ml中氯化钠的量为2～4mg，例如该注射液每1ml中氯化钠的量为2.5～3.5mg。

进一步的，本发明第三方面提供了对环磷腺苷葡胺注射液药物组合物进行质量控制的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中包含：环磷腺苷、葡甲胺、和酸碱调节剂，该质量控制方法包括使用高效液相色谱法测定注射液中的环磷腺苷含量和/或有关物质量。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物为注射液形式的药物组合物。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物每1ml 中环磷腺苷的量为8～12mg，例如9～11mg。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中环磷腺苷与葡甲胺的摩尔比为1：1。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠，其用量是调节注射液的pH值至6.4～6.7之间。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中还包括氯化钠。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中还包括氯化钠，该注射液每1ml中氯化钠的量为2～4mg，例如该注射液每1ml中氯化钠的量为 2.5～3.5mg。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述氯化钠是预先与环磷腺苷一起配制成溶液并在pH值低于4.5(例如pH值3.5～4.0)的条件下用活性炭吸附处理的。已经出人意料的发现，当使用适量氯化钠预先对环磷腺苷进行特定处理后，制得的环磷腺苷葡胺注射液药物组合物具有优异的性质例如化学稳定性。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物是照包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05～0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22μm微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述高效液相色谱法对环磷腺苷进行含量测定和有关物质测定的步骤包括如下操作：

(1)中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；

(2)色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(例如，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm)，以0.01磷酸溶液-乙腈以体积比95：5的混合液为流动相，流速 1ml/min，柱温30℃，检测波长为259nm；取***适用性试验溶液测定，理论板数按环磷腺苷峰计应不低于5000，环磷腺苷与腺苷之间的分离度应大于2；

(3)溶液制备：

取环磷腺苷葡胺注射液药物组合物适量，加流动相稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1mg 的溶液，过滤，作为有关物质检查用供试品溶液(即，1000μg/ml)；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为10μg/ml的溶液，作为有关物质检查用对照溶液(即，10μg/ml)；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于20ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为50μg/ml的溶液，作为含量测定用供试品溶液(即，50μg/ml)；

精密称取环磷腺苷对照品适量，用流动相溶解并制成浓度为50μg/ml的溶液，作为环磷腺苷含量测定用对照品溶液(即，50μg/ml)；

精密称取环磷腺苷对照品、腺苷对照品各适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1000μg、腺苷10μg的混合溶液，作为***适用性试验溶液(即，1000μg/ml+10μg/ml)；

(4)测定：

精密量取***适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论板数和环磷腺苷与腺苷之间的分离度峰之间的分离度，并确定环磷腺苷与腺苷二者的保留时间；

分别精密量取有关物质检查用供试品溶液和有关物质检查用对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的3倍，读取供试品溶液色谱图中主成峰峰面积和各杂质的峰面积，当检测到存在杂技时，以有关物质检查用对照溶液色谱图中主成份峰面积为1.0％，计算供试品溶液色谱图中各杂质相对于环磷腺苷的百分含量，即得到供试品中的单一杂质的含量 (即，例如，如果对照溶液主峰面积为100，供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为115，则该杂质相对于环磷腺苷的百分含量，简称该杂质含量为1.15％；供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为87，则该杂质含量为0.87％)；

分别精密量取含量测定用供试品溶液和含量测定用对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的2倍，得到两个色谱图，分别读取两色谱图中主成峰峰面积，按外标法以峰面积计算供试品中环磷腺苷的含量。

上述方法与何晓艳等的文献(何晓艳，等，HPLC法测定环磷腺苷葡胺注射液中环磷腺苷的含量，中国药师，2011，14(5):682)公开的一种测定环磷腺苷制剂中活性成分含量的方法基本相同，本发明经用上述方法测定，环磷腺苷理论板数75000，环磷腺苷与腺苷的分离度约2.73，环磷腺苷拖尾因子1.008，环磷腺苷保留时间约6.69，腺苷相对于环磷腺苷的相对保留时间RRT＝0.88，这些结果与何晓艳文献结果基本一致。然而，在环磷腺苷制剂中，使用上述方法测定，在相对保留时间约RRT＝1.08处存在一个明显的未知杂质，此杂质与环磷腺苷峰之间的分离度约为1.35，分离度不满意，影响到环磷腺苷和该未知杂质峰面积的计算。因此，上述HPLC法仍然是存在不足的。

根据本发明第三方面任一实施方案的方法，其中所述高效液相色谱法的流动相中还添加 0.2～0.5w/v％的甲酸。在一个实施方案中，所述流动相中还添加0.3w/v％的甲酸。已经发现，当在流动相中添加0.3w/v％的甲酸时，相对于未添加甲酸的情形，理论板数、环磷腺苷与腺苷的分离度、环磷腺苷拖尾因子、环磷腺苷保留时间、腺苷RRT这些参数基本上未变化，但是未知杂质保留时间后延至RRT约为1.17(其在本发明中可称为杂质RRT1.17)且与环磷腺苷之间的分离度达到 2.42，完全满足测定主成分和该未知杂质的要求。另外，已经发现，当将甲酸替换为乙酸这种类似的有机酸时，却完全达不到上述分离效果，即未知杂质RRT约为1.08且与环磷腺苷之间的分离度为1.39，其余参数基本相同。

另外，已经发现，环磷腺苷制剂中上述杂质RRT1.17在原料药和初始制成的制剂中基本不存在(或者含量极低)，而是在长期贮藏过程中渐渐增加的。已经发现，当在制备本发明环磷腺苷制剂时向制剂中添加少量的氯化钠并使该氯化钠以特殊的操作方式处理来制备该制剂时，所得制剂在长期贮藏过程中杂质RRT1.17的增加速度极低，这是现有技术根本无法预期的。

根据本发明任一实施方案的药物组合物，其是注射液型水针剂，其每瓶中包括的环磷腺苷重量为5～30mg，例如每瓶中包括的环磷腺苷重量为8～25mg。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

环磷腺苷葡胺为非洋地黄类强心剂，具有正改正肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌；能够改善窦房结P细胞功能。环磷腺苷葡胺进入人体，在血液中的半衰期为60～150min，由于其有较好的亲水性，尤其是脂溶性较强，较易透过脂溶性细胞膜进入心肌细胞内发挥作用，经磷酸二酯本科分解形成5-AMP，再经5-AMP本科降解为腺苷和磷酸，环磷腺苷葡胺在用药后10～20min 后开始作用，显效高峰时间在1～2小时，药效消失时间在6～8小时。

本发明环磷腺苷葡胺制剂的主要成份为环磷腺苷葡胺，系环磷腺苷与葡甲胺按摩尔比约1：1 比例制备得到的，是非洋地黄类强心剂，具有正性肌力作用，增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量，改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌细胞，能改善窦房结的p细胞功能，临床上已用于治疗心力衰竭、冠心病、脑梗死及其它疾病。。

本发明环磷腺苷葡胺制剂可用于治疗心血管疾病。

对充血性心力衰竭的治疗作用方面。充血性心力衰竭常见于冠心病、扩张型心肌病、风湿性心脏病等，应用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗充血性心力衰竭48例。治疗组48例中男性28例，女性20例，心功能Ⅱ—Ⅲ级30例，Ⅳ级18例，对照组40例，男性24例，女性16例，心功能Ⅱ—Ⅲ级28例，Ⅳ级16例。性别年龄及心功能分级比较为无显著性意义(p>0.05)。治疗组用环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克加入3％葡萄糖或0.9％生理盐水250毫升中，静脉滴入，两周为一疗程，使用两个疗程。对照组仅给予强心利尿和肾素血管紧张转换酶抑制剂治疗。治疗组：显效17例(35.4％)，有效26例(54.18％)，无效5例(10.42)，对照组：显效6例(15％)，有效23例(57.5％)，无效11例 (27.5)，治疗组总有效率89.58％，对照组72.5％，治疗组总有效率明显高于对照组。

结果显示治疗组明显优于对照组，环磷腺苷葡胺注射制剂，能显著改善冲血性心力衰竭患者的心肌舒缩功能，提高运动耐力，改善生活质量。

运用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗84例充血性心力衰竭，两组均用强心，利尿，扩血管治疗，治疗组加用环磷腺苷葡胺注射制剂60毫克至180毫克，加入5％葡萄糖或生理盐水250毫克中，静脉滴入，每日一次，15天为一疗程。治疗组显效31例(73.8％)，有效10例，(23.8)，无效1例 (2.4％)有效19例(45.2％)，无效6例(14.3％)，总有效率36例(85.7％)。与对照组比较(p<0.01)。

结果显示环磷腺苷葡胺注射制剂治疗组症状缓解，心力衰竭改善程度显著好于对照组。认为环磷腺苷葡胺注射制剂能通过扩张外周血管、减少心脏前后负荷，能明显改善心力衰竭患者的症状体征，具有显著疗效。

运用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗冠心病心力衰竭39例，治疗组与对照组均使用强心、利尿扩血管。治疗组加用环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克加入5％葡萄糖或生理盐水250毫克，在90分钟左右滴完，每天一次，14天为一个疗程。治疗组总有效率92.3％，对照组69.2％(p<0.05)。治疗组用药后症状明显改善，左室功能明显增强，每搏量，每分输出量，左室射血分数用药后显著性差异(p<0.05)，未见不良反应。

对冠心病的治疗作用方面。将冠心病58例分成两组，治疗组30例，使用环磷腺苷葡胺90 毫克加入5％葡萄糖或生理盐水中25毫克，静脉滴入，每日一次，15天为一个疗程。对照组28 例用复方丹参注射制剂15毫克加入5％葡萄糖或生理盐水250毫克中，静脉滴入，每日一次，15 天为一个疗程。两组临床治疗比较，环磷腺苷葡胺注射制剂在改善心电图、胸闷、心绞痛、心悸、气促等症状显效率明显，用于复方丹参注射制剂组，改善心功能的总有效率也明显用于对照组。

结果证实环磷腺苷葡胺注射制剂具有正性肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，扩张血管、降低心肌耗氧，改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌，缓解冠心病的临休症状优于复方丹参注射制剂。

对肺心病的治疗作用方面。使用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗肺心病45例，男性39例，女性 6例，年龄65—70岁，病史5—25年。环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克加入5％葡萄糖或生理盐水 250毫克中，静脉滴入，每日一次，10—15日为一个疗程，用药期间同时用其他扩血管药及强心剂利尿药。临床观察显示，肺心病给用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗后胸闷、心悸、气促肝功能、肾功能、肺功能，心电图显效率在83％以上，总有效率95％以上。认为该药是治疗肺心病，特别是伴心力衰竭的一线药物，可扩张血管，降低肺动脉压，增强心肌收缩力改善心、肝、肺、肾功能，提高生存质量，延长生存期。是安全、有效、具有良好应用前景的正性肌力药物。

对扩张型心肌病的治疗作用方面。使用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗扩张型心肌病44例，治疗组使用环磷腺苷葡胺注射制剂静脉滴入，加用强心、利尿、扩血管治疗，对照组是用强心、利尿、扩血管等一般治疗。治疗前使用彩色心动仪测左室舒缩功能，结果显示，治疗组左室舒张早期血流峰值速度上升，左室舒张晚期血流峰值速度下降，心脏舒张功能明显改变，每搏输出量，射血分数，心脏指数均有改善，心律失常发生率降低。

对高血压病的治疗作用方面。使用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗高血压病48例，治疗组用环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克加入5％葡萄糖或生理盐水250毫克中，静脉滴入，每日一次，连续用 15日。对照组42例，仅口服拜新同(拜耳公可生产)30毫克，每日一次，共用15日。治疗组合对照组均使用其他降压药物及降脂药，结果对照组降压有效率91.67％。收缩压舒张压均有显著下降，头昏、眼花、头痛等症状显著，明显优于对照组，认为环磷腺苷葡胺注射制剂是一种治疗显著，安全性好的降压药物。

环磷腺苷葡胺制剂可用于治疗脑梗死。使用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗脑梗死32例。治疗组 32例，使用环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克加入5％葡萄糖或生理盐水250毫克中，静脉滴入，每日一次，连续用20日为一个疗程。对照组32例，使用胞二磷胆盐0.5加入5％葡萄糖或生理盐水 250毫克中，静脉滴入，每日一次，连续用20日为一个疗程。结果治疗组总有效率93.8％，对照组81.3％，两组治疗有明显差异。认为环磷腺苷葡胺注射制剂可促进脑内细胞内线粒体内能量代谢，增加脑血流量，提高脑氧分压，减轻脑水肿，缩小脑梗死范围，促进脑功能恢复。治疗脑梗死疗程短，神经损害轻，取得了良好疗效。

环磷腺苷葡胺制剂可用于治疗慢性肾功能衰竭。使用环磷腺苷葡胺注射制剂治疗慢性肾功能衰竭，治疗组20例，在常规治疗基础上加用环磷腺苷葡胺注射制剂90毫克生理盐水250毫克中，静脉滴入，每日一次，连续用15日为一个疗程，一般1—2疗程。对照组20例，仅给予常规治疗。结果治疗组显效4例，(20％)，有效8例(40％)，稳定3例，(15％)，无效3例(25％)。对照组显效 3例(15％)，有效5例(25％)，稳定6例，(30％)，无效6例(30％)。通过观察对肾功能不全失代偿的治疗有较好疗效，对肌酐大于707umol/l的肾功能衰竭患者治疗差。慢性肾功能衰竭失代期患者在采用传统的透析治疗同时配合环磷腺苷葡胺注射制剂治疗，能取得延缓慢性肾功能衰竭发展的作用。

在本发明中，符号％，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8％以下，此时该符号％表示重量/重量的百分数(w/w， g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，％表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，％表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号％表示重量/重量百分数。

在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到西林瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。

本发明提供的环磷腺苷制剂可以在25℃以下干燥处保存至少24个月，可以满足一般的注射制剂的贮藏要求。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，使用的pH调节剂(在本发明中亦即酸碱调节剂)，如无另外说明，是1mo1/L磷酸氢二钠溶液或0.1mol/L磷酸调节溶液，其用量是使制备的制剂调节到规定值或范围。

下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备制剂的方法。在下面配液制备各种组合物中，如未另外说明，每批的总配液量为10000ml，但是列明配方时，均以相对于环磷腺苷9.42mg/ml 的量阐明，并且以每瓶含环磷腺苷18.82mg的量分装到玻璃瓶中；得到的制每瓶中含环磷腺苷 18.8mg，相当环磷腺苷葡胺30mg。

一、组合物质量控制方法

采用高效液相色谱法，对本发明所得环磷腺苷制剂进行含量测定和有关物质测定，步骤包括如下操作：

(1)中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；

(2)色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(本实例中，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm)，以0.01磷酸溶液-乙腈以体积比95：5的混合液并且在该混合液中补充添加0.3w/v％的甲酸为流动相，流速1ml/min，柱温30℃，检测波长为259nm；取***适用性试验溶液测定，理论板数按环磷腺苷峰计应不低于5000，环磷腺苷与腺苷之间的分离度应大于2；

(3)溶液制备：

取环磷腺苷葡胺注射液药物组合物适量，加流动相稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1mg 的溶液，过滤，作为有关物质检查用供试品溶液(即，1000μg/ml)；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为10μg/ml的溶液，作为有关物质检查用对照溶液(即，10μg/ml)；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于20ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为50μg/ml的溶液，作为含量测定用供试品溶液(即，50μg/ml)；

精密称取环磷腺苷对照品适量，用流动相溶解并制成浓度为50μg/ml的溶液，作为环磷腺苷含量测定用对照品溶液(即，50μg/ml)；

精密称取环磷腺苷对照品、腺苷对照品各适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1000μg、腺苷10μg的混合溶液，作为***适用性试验溶液(即，1000μg/ml+10μg/ml)；

(4)测定：

精密量取***适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论板数和环磷腺苷与腺苷之间的分离度峰之间的分离度，并确定环磷腺苷与腺苷二者的保留时间；

分别精密量取有关物质检查用供试品溶液和有关物质检查用对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的3倍，读取供试品溶液色谱图中主成峰峰面积和各杂质的峰面积，当检测到存在杂技时，以有关物质检查用对照溶液色谱图中主成份峰面积为1.0％，计算供试品溶液色谱图中各杂质相对于环磷腺苷的百分含量，即得到供试品中的单一杂质的含量 (即，例如，如果对照溶液主峰面积为100，供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为115，则该杂质相对于环磷腺苷的百分含量，简称该杂质含量为1.15％；供试品溶液色谱图中某杂质的峰面积为87，则该杂质含量为0.87％)；

分别精密量取含量测定用供试品溶液和含量测定用对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的2倍，得到两个色谱图，分别读取两色谱图中主成峰峰面积，按外标法以峰面积计算供试品中环磷腺苷的含量。

使用上述方法，测定下文制备例1-7所得全部制剂，结果：环磷腺苷理论板数约75000，环磷腺苷与腺苷的分离度约2.73，环磷腺苷拖尾因子约1.008，环磷腺苷保留时间约6.69，腺苷相对于环磷腺苷的相对保留时间约RRT＝0.88。另外，如果将上述HPLC法流动相中的甲酸去除或者改用同浓度的乙酸，上述这些测定参数基本不变。

使制备例1使所得制剂在35℃放置1月，使用上述HPLC法测定，结果显示，其理论板数、环磷腺苷与腺苷的分离度、环磷腺苷拖尾因子、环磷腺苷保留时间、腺苷RRT这些参数基本上未变化，但是在RRT1.17处出现一个明显的杂质峰(杂质RRT1.17)，杂质RRT1.17与环磷腺苷之间的分离度达到2.42，完全满足测定主成分和该未知杂质的要求。另外，当将上述HPLC法流动相中的甲酸去除或者改用同浓度的乙酸时，测定制备例1经35℃放置1月后的制剂时，虽然其理论板数、环磷腺苷与腺苷的分离度、环磷腺苷拖尾因子、环磷腺苷保留时间、腺苷RRT这些参数基本上未变化，但是RRT1.17杂质未出现而在约RRT＝1.08处出现一个峰面积基本与RRT1.17杂质相同的杂质峰，二者可能为同一杂质并且因流动相变化而导致保留时间的变化，经计算，此 RRT1.08杂质与环磷腺苷峰之间的分离度约为1.35，不能满足测定要求。上述结果表明，要有效的测定杂质RRT1.17，在流动相中添加少量甲酸是必须的，完全出人意料的是，不加甲酸或者添加与甲酸类似的物质乙酸时，却不能使主成分与该杂质RRT1.17有效的分离。

对于本文制备例1-7所得全部注射液，测定它们的含量，结果显示它们的环磷腺苷含量均在理论投料量的99～101％范围内。

对于本文制备例1-7所得全部注射液，测定它们的有关物质，特别是关注其中RRT1.17杂质量，结果显示这些制剂各单个杂质均小于0.1％，各杂质总和均小于0.25％，这些制剂的RRT1.17 杂质均小于0.02％，这些结果表明本文制备例1-7所得全部注射液在初始状态下均具有良好的性质。

对于本文制备例1-7所得全部注射液，使它们经35℃放置5月，测定它们的含量和有关物质，结果显示：这些制剂在含量方面与其在0月时相比变化基本一致，残余量(即5月含除以0月含量再乘以100％所得百分数)均在95～97％范围内；有关物质测定中，除了RRT1.17杂质外，各制剂之间在其它杂质变化方面基本一致，并且5月时各制剂的各单个杂质均小于0.15％，各杂质总和均小于0.3％；有关物质测定中，RRT1.17杂质的变化在制剂之间存在明显不同，具体是，制备例1-4各注射液的RRT1.17杂质与制剂0月时相比增加倍数(即5月杂质含量减去0月杂质含量再除以0月杂质含量所得的数值)为0.21～0.24倍，而制备例5-7各注射液的RRT1.17杂质与制剂0 月时相比增加倍数为3.37～4.61倍。这一结果表明，不同处方不同工艺所得制剂在稳定性方面呈现差异，特别是以RRT1.17杂质表征的稳定性差异。

另外，对于下文制备例1-4制得的全部注射液，照其国家药品标准(《化学药品地方标准上升为国家标准》，第十六册，第60页；或者国家药品标准YBH06462006，在0月时以及室温放置2 年后，照上述标准测定，全部制剂在两个时间点均符合上述各质量标准。

一、组合物制备例部分

制备例1、制备包含环磷腺苷葡甲胺的注射液

处方：环磷腺苷9.42mg、葡甲胺5.58mg、氯化钠3mg、酸碱调节剂适量、注射用水适量加至1ml。

制法：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.1w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

制备例2、制备包含环磷腺苷葡甲胺的注射液

处方：环磷腺苷9mg、葡甲胺(1：1，表示环磷腺苷与葡甲胺的摩尔比，在本文中有类似表述时均表示此含义)、氯化钠2.5mg、酸碱调节剂适量、注射用水适量加至1ml。

制法：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.05w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

制备例3、制备包含环磷腺苷葡甲胺的注射液

处方：环磷腺苷11mg、葡甲胺(1：1)、氯化钠3.5mg、酸碱调节剂适量、注射用水适量加至 1ml。

制法：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

制备例4、制备包含环磷腺苷葡甲胺的注射液

处方：环磷腺苷10mg、葡甲胺(1：1)、氯化钠3mg、酸碱调节剂适量、注射用水适量加至1ml。

制法：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5～4.0，按药液体积0.15w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20％的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.1w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um 的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液 pH值至6.4～6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

制备例5、制备环磷腺苷葡胺制剂

分别参照制备例1-4的配方和制法，不同的仅是不添加氯化钠，制得四批制剂。

制备例6、制备环磷腺苷葡胺制剂

分别参照制备例1-4的配方，但是在制备时，不是氯化钠与环磷腺苷预先单独处理而是与葡甲胺一起处理，制得四批制剂。具体制法如下：

(1)使环磷腺苷、葡甲胺和氯化钠加至配制量80％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至规定值(参照制备例1-2时调节药液pH值至3.5～4.0，参照制备例3-4时调节药液pH值至6.4～6.7)，按药液体积0.1w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使步骤(1)所得药液用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7；

(3)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

制备例7、制备环磷腺苷葡胺制剂

分别参照制备例1-4的配方，但是在制备时，不添加氯化钠，并且环磷腺苷与葡甲胺一起处理，制得四批制剂。具体制法如下：

(1)使环磷腺苷、葡甲胺加至配制量80％的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至规定值(参照制备例1-2时调节药液pH值至3.5～4.0，参照制备例3-4时调节药液pH值至6.4～6.7)，按药液体积0.1w/v％加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使步骤(1)所得药液用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7，用孔径为1um的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4～6.7；

(3)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

Claims (5)

1.对环磷腺苷葡胺注射液药物组合物进行质量检测的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中包含：环磷腺苷、葡甲胺、氯化钠和酸碱调节剂，该方法包括使用高效液相色谱法测定注射液中的环磷腺苷含量和有关物质量，包括如下操作：

(1)照中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；

(2)色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm，以0.01磷酸溶液-乙腈以体积比95：5的混合液为流动相，并在该流动相中还添加0.3w/v%的甲酸，流速1ml/min，柱温30°C，检测波长为259nm；取***适用性试验溶液测定，理论板数按环磷腺苷峰计应不低于5000，环磷腺苷与腺苷之间的分离度应大于2；在该色谱条件下，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物供试品的色谱图中存在相对于环磷腺苷的相对保留时间RRT=1.17的杂质；

(3)溶液制备：

取环磷腺苷葡胺注射液药物组合物适量，加流动相稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1mg的溶液，过滤，作为有关物质检查用供试品溶液；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为10μg/ml的溶液，作为有关物质检查用对照溶液；

精密量取有关物质检查用供试品溶液1ml置于20ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含环磷腺苷浓度为50μg/ml的溶液，作为含量测定用供试品溶液；

精密称取环磷腺苷对照品适量，用流动相溶解并制成浓度为50μg/ml的溶液，作为环磷腺苷含量测定用对照品溶液；

精密称取环磷腺苷对照品、腺苷对照品各适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有环磷腺苷1000μg、腺苷10μg的混合溶液，作为***适用性试验溶液；

(4)测定：

精密量取***适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论板数和环磷腺苷与腺苷之间的分离度峰之间的分离度，并确定环磷腺苷与腺苷二者的保留时间；

分别精密量取有关物质检查用供试品溶液和有关物质检查用对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的3倍，读取供试品溶液色谱图中主成峰峰面积和各杂质的峰面积，当检测到存在杂质时，以有关物质检查用对照溶液色谱图中主成份峰面积为1.0%，计算供试品溶液色谱图中各杂质相对于环磷腺苷的百分含量，即得到供试品中的单一杂质的含量；并根据此方法计算RRT=1.17的杂质的含量；

分别精密量取含量测定用供试品溶液和含量测定用对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至环磷腺苷保留时间的2倍，得到两个色谱图，分别读取两色谱图中主成峰峰面积，按外标法以峰面积计算供试品中环磷腺苷的含量；

所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物每1ml中环磷腺苷的量为8~12mg、氯化钠的量为2~4mg、环磷腺苷与葡甲胺的摩尔比为1：1，该组合物是照包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)使环磷腺苷和氯化钠加至配制量60%的室温注射用水中，搅拌溶解，用酸碱调节剂调节药液pH值至3.5~4.0，按药液体积0.05~0.15w/v%加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(2)使葡甲胺加至配制量20%的室温注射用水中，搅拌溶解，按药液体积0.05~0.15w/v%加入针用活性炭，搅拌吸附20分钟，过滤脱炭，备用；

(3)使步骤(1)和步骤(2)所得药液混合，用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4~6.7，用孔径为1um的钛棒过滤器过滤后，补加室温注射用水至配制量，测定溶液的pH值并用酸碱调节剂调节药液pH值至6.4~6.7；

(4)用孔径为0.22um微孔滤膜滤芯对溶液循环除菌过滤至滤液经可见异物检查合格后，再将药液无菌分装到玻璃瓶中，密封，即得。

2.根据权利要求1的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物每1ml中环磷腺苷的量为9~11mg。

3.根据权利要求1的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其组合。

4.根据权利要求1的方法，所述环磷腺苷葡胺注射液药物组合物中所述的酸碱调节剂是磷酸和/或磷酸氢二钠。

5.根据权利要求4的方法，所述酸碱调节剂的用量是调节注射液的pH值至6.4~6.7之间的量。