CN106928287B - 一种从北葶苈子中提取酚苷化合物的方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从北葶苈子中提取酚苷化合物的方法及其应用，可有效挖掘北葶苈子的新作用，其解决的技术方案是，北葶新苷A，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1196，北葶新苷B，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1202，本发明从北葶苈子的水提物中从中分离并鉴定了两个新的酚苷化合物，即：北葶新苷A和北葶新苷B，且两个新酚苷化合物均能显著提高双氧水诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤的细胞存活率，具有心肌细胞保护作用，为制备心肌保护类药物提供了新的途径。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种从北葶苈子中提取酚苷化合物的方法及其应用。
背景技术
葶苈子为常用中药材，始载于《神农本草经》，列为草部下品，该药味辛、苦，性大寒，归肺与膀胱经，具有宣泄平喘、行水消肿的功效。2015版《中国药典》收录的“葶苈子”有南北之分，其中十字花科植物独行菜Lepidium apetalum Willd.的干燥成熟种子习称“北葶苈子”，而播娘蒿Descurainia sophia(L.)Webbex Prantl.的干燥成熟种子习称“南葶苈子”。现代药理学表明，北葶苈子主要具有强心作用，而其化学成分主要是黄酮类。而从葶苈子的水提物中分离新的化合物以及研究其应用至今还未见有这方面的相关报道。
发明内容
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从北葶苈子中提取酚苷化合物的方法及其应用，可有效挖掘北葶苈子的新作用。
本发明解决的技术方案是，从北葶苈子中提取酚苷化合物的方法：取炮制后的北葶苈子，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏状，浓缩的浸膏用北葶苈子2-3倍重量的体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上DianionHP-20柱(高多孔性苯乙烯的吸附/脱附树脂)，依次用水、20％乙醇(v/v)、40％乙醇(v/v)、60％乙醇(v/v)、95％乙醇(v/v)洗脱，将各部位减压浓缩干燥，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5(分别对应水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇洗脱部位，以下同)，组分A1经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6组分，B1经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸(其配比为茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100)喷雾薄层检识，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱(规格型号：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm)，流动相为乙腈:0.05％三氟乙酸(v/v)＝10:90，得到北葶新苷A和北葶新苷B；
其中，北葶新苷A，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1196(计算值455.1165)。其结构式如下：
北葶新苷B，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1202(计算值455.1165)，其结构式如下：
本发明从北葶苈子的水提物中从中分离并鉴定了两个新的酚苷化合物，即：北葶新苷A和北葶新苷B，且两个新酚苷化合物均能显著提高双氧水(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤的细胞存活率，具有心肌细胞保护作用，为制备心肌保护类药物提供了新的途径。
附图说明
图1为本发明北葶新苷A的1H-NMR谱(CD3OD)。
图2为本发明北葶新苷A的13C-NMR谱(CD3OD)。
图3为本发明北葶新苷A的DEPT 135谱(CD3OD)。
图4为本发明北葶新苷A的1H-1H COSY谱。
图5为本发明北葶新苷A的HSQC谱。
图6为本发明北葶新苷A的HMBC谱。
图7为本发明北葶新苷A的NOESY谱。
图8为本发明北葶新苷A的MS谱。
图9为本发明北葶新苷A的IR谱。
图10为本发明北葶新苷A的MS谱。
图11为本发明北葶新苷B的1H-NMR谱(CD3OD)。
图12为本发明北葶新苷B的13C-NMR谱(CD3OD)。
图13为本发明北葶新苷B的DEPT 135谱(CD3OD)。
图14为本发明北葶新苷B的1H-1H COSY谱。
图15为本发明北葶新苷B的HSQC谱。
图16为本发明北葶新苷B的HMBC谱。
图17为本发明北葶新苷B的NOESY谱。
图18为本发明北葶新苷B的MS谱。
图19为本发明北葶新苷B的IR谱。
图20为本发明北葶新苷B的MS谱。
图21为本发明北葶新苷A对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞存活率的影响(n＝6)。
图22为本发明北葶新苷B对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞存活率的影响(n＝6)。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
取北葶苈子8kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用20L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱(高多孔性苯乙烯的吸附/脱附树脂)，依次用水、20％乙醇(v/v)、40％乙醇(v/v)、60％乙醇(v/v)、95％乙醇(v/v)洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱(分别为361.0g、71.2g、89.6g、67.2g、28.7g)的组分，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1(25.3g)经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1(7.8g)经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1(1.2g)，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4(50.3mg)用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱(规格型号：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm)，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸(体积比10:90)，得到北葶新苷A(14.0mg,tR＝80.3min)和北葶新苷B(2.9mg,tR＝62.5min)。
实施例2
取北葶苈子2kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用5L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱(高多孔性苯乙烯的吸附/脱附树脂)，依次用水、20％乙醇(v/v)、40％乙醇(v/v)、60％乙醇(v/v)、95％乙醇(v/v)洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱(分别为90.1g、18.0g、22.5g、17.0g、7.3g)的组分，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1(6.2g)经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1(1.9g)经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1(300mg)，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4(13.0mg)用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱(规格型号：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm)，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸(10:90)，得到北葶新苷A(3.2mg,tR＝80.3min)和北葶新苷B(0.6mg,tR＝62.5min)。
实施例3
取北葶苈子1kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用3L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱(高多孔性苯乙烯的吸附/脱附树脂)，依次用水、20％乙醇(v/v)、40％乙醇(v/v)、60％乙醇(v/v)、95％乙醇(v/v)洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱(分别为45.0g、9.0g、11.3g、8.5g、3.6g)的组分，其中20％乙醇洗脱组分(9.0g)通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1(3.2g)经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1(0.9g)经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1(150mg)组分，C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4(6.3mg)用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱(规格型号：250×10mm,粒径5μm,孔径12nm)，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸(10:90)，得到北葶新苷A(1.8mg,tR＝80.0min)和北葶新苷B(0.4mg,tR＝62.0min)。
为了明确北葶苈子的药效物质基础，本发明采用水煎煮法对其进行提取，而由于其遇水发黏，使得水煎液提取率低不说，提取出来的成分绝大部分是粘液质，因此本发明首先采用清炒法，于240℃，炒制5.5min对其进行简单炮制，以使北葶苈子中的成分更易溶出，从北葶苈子的水提物中从中分离并鉴定了两个新的酚苷化合物，即：北葶新苷A和北葶新苷B，实验结果显示这两个新酚苷化合物均能显著提高双氧水(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤的细胞存活率，具有心肌细胞保护作用。并经试验进行了充分证明，相关试验资料如下：
1仪器与试药
核磁共振用BrukerAVANCEⅢ500核磁共振仪(TMS内标)(Bruker)，红外光谱用Nicolet is 10 Microscope Spectrometer(Thermo Scientific,USA)，高分辨质谱用Bruker maxis HD mass spectrometer，紫外光谱用Shimadzu UV-2401PC apparatus，高效液相色谱用Waters Alliance系列2695高效液相***，配备2998型二极管阵列检测器，Empower3色谱数据工作站，LC50型高压制备液相色谱仪，UV200型紫外检测器[赛谱锐思(北京)科技有限公司]，YMC-Pack ODS-A色谱柱(250×10mm.D.S-5mm,12mm)(YMC有限公司)，其余有N-1100型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，A-1000S型水流抽气机(上海爱朗仪器有限公司)，N-1111型冷冻水循环装置(上海爱朗仪器有限公司)，FDU-2110型冷冻干燥机(上海爱朗仪器有限公司)，DFZ-60508型真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)，AB204-N万分之一精密分析天平(METTLER TOLEDO)，iMARK型酶标仪(美国BIO-RAD)，二氧化碳培养箱(上海STIK)，超净工作台(苏净集团)，Arium 611VF超级组合型超纯水器(SARTORIUS)，倒置显微镜(Nikon)，PB-10酸度计(德国赛多利斯集团)。
柱层析填料Diaion HP-20、MCI Gel CHP-20(日本三菱化学公司)，Toyopearl HW-40(日本TOSOH公司)，Sephadex LH-20(Parmacia Biotech公司)，柱层析所用硅胶H(160-200目)为青岛海洋化工厂生产，培养皿、96孔培养板、细胞冻存管(Corning公司)，所用色谱纯试剂位天津四友精细化学品有限公司生产，所用分析纯试剂为北京化工厂和天津第三化学试剂厂生产。
DMEM高糖培养液(Gibco)，胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司)，胰蛋白酶(Gibco)，DMSO(Solarbio)；MTT(Biosharp)，H2O2溶液(天津市恒兴化学试剂制造有限公司)，水为超纯水，PBS缓冲液等为自配。
北葶苈子于2014年采自河南南阳，经鉴定为十字花科植物独行菜Lepidiumapetalum Willd.的干燥成熟种子。
2结构鉴定
北葶新苷A，淡黄色结晶性粉末(MeOH)，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1196(计算值455.1165)，UV(MeOH)λmax:206.0,230.0,315.0nm；IR(KBr)νmaxcm-1：3364,2931,1576,1489,1039。其结构式及核磁数据如下：
北葶新苷B，淡黄色结晶性粉末(MeOH)，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1202(计算值455.1165)，UV(MeOH)λmax:206.0,238.0,302.0nm；IR(KBr)νmaxcm-1：3413,2925,1672,1466,1246,1046。其结构式及核磁数据如下：
表1北葶新苷A和B的1H NMR(500MHz)和13C NMR(125MHz)数据(in CD3OD)
3北葶新苷A和北葶新苷B对双氧水(H2O2)损伤大鼠心肌细胞H9c2的保护作用试验
3.1细胞
H9c2细胞株购自深圳市百恩维生物科技有限公司。
3.2细胞培养
将H9c2培养在含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中(含青霉素和链霉素100kU·L-1)，置于37℃、5％CO2饱和湿度培养箱中培养，均取对数生长期细胞用于实验。
3.3H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞损伤模型的建立
传代培养时，将对数生长期的细胞以5×104的密度接种于96孔板中，待细胞完全贴壁后，换用含药的高糖DMEM培养液。H2O2给予含200μM H2O2的含血清高糖DMEM培养液培养6h。
3.4实验分组
每组设6个平行孔，设正常组(NC)、H2O2组(M)、北葶苈子各单体化合物给药组。H2O2组：给予含200μM H2O2的含血清高糖DMEM培养液培养6h；北葶新苷A和北葶新苷B给药组：分别给予含200μM H2O2和1、2、4、8、16、32、64μM北葶新苷A和北葶新苷B的含血清高糖DMEM培养液培养6h。
3.5MTT法检测北葶新苷A和北葶新苷B对H9c2损伤细胞存活率的影响
细胞接种于96孔板，贴壁后加药干预培养后，吸除上清液，各孔分别加入含1％MTT(5g/L)的高糖DMEM培养液200μl，37℃孵育4h，吸除上清液，加入150μL的DMSO，震荡10min使结晶充分溶解。用酶标仪检测490nm波长处OD值，用公式计算细胞存活率＝(OD实验组/OD对照组)×100％。实验重复3次，取平均值。
3.6统计方法
实验数据用均数±标准差表示，用SPSS18.0统计软件处理数据，各组间比较采用单因素方差分析(One-WayANOVA)，P<0.05表示有显著性意义，P<0.01表示有极显著性意义。3.7结果
研究结果表明：与空白组相比，模型组细胞活力显著降低(P<0.01)；与模型组相比，北葶新苷A给药剂量为1μM时，能够极显著提高细胞活力(P<0.01)，在2、4、8、16μM时，能够显著提高细胞活力(P<0.05)；北葶新苷B给药剂量在4、8、16、32μM时，能够显著提高细胞活力(P<0.05)。表明北葶苈子单体北葶新苷A和B对心肌细胞有一定的保护作用。
表2北葶新苷A对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞存活率的影响(n＝6)
注：与正常组比较:*P<0.05；**P<0.01与H2O2组比较:#P<0.05；##P<0.01
表3北葶新苷B对H2O2诱导的H9c2大鼠心肌细胞存活率的影响(n＝6)
注：与正常组比较:*P<0.05；**P<0.01与H2O2组比较:#P<0.05；##P<0.01
综上，从北葶苈子的水提物中分离并鉴定的两个新的酚苷化合物，实验结果显示这两个新酚苷化合物均能显著提高双氧水(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤的细胞存活率，具有心肌细胞保护作用，可有效用于制备心肌保护类药物，开发了北葶苈子的新用途，具有实际的临床意义和良好的应用推广价值。
Claims (7)
1.一种从北葶苈子中提取的酚苷化合物，其特征在于，北葶新苷A，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1196，其结构式如下：
北葶新苷B，分子式为C18H24O12[M+Na]+m/z 455.1202，其结构式如下：
2.权利要求1所述的从北葶苈子中提取的酚苷化合物的提取方法，其特征在于，取炮制后的北葶苈子，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏状，浓缩的浸膏用北葶苈子2-3倍重量的体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱，将各部位减压浓缩干燥，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为乙腈:0.05％三氟乙酸＝10:90，得到北葶新苷A和北葶新苷B。
3.根据权利要求2所述的从北葶苈子中提取的酚苷化合物的提取方法，其特征在于，取北葶苈子8kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用20L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱的组分，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1经Sephadex LH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸＝10:90，得到北葶新苷A和北葶新苷B。
4.根据权利要求2所述的从北葶苈子中提取的酚苷化合物的提取方法，其特征在于，取北葶苈子2kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用5L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱的组分，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1经SephadexLH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1，组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸＝10:90，得到北葶新苷A和北葶新苷B。
5.根据权利要求2所述的从北葶苈子中提取的酚苷化合物的提取方法，其特征在于，取北葶苈子1kg，于240℃，清炒5.5min，加北葶苈子10倍重量的水提取三次，每次1.5h，提取液减压浓缩至浸膏，浓缩的浸膏用3L体积浓度为80％的乙醇醇沉，将上清液离心过滤，浓缩至无醇味，上Dianion HP-20柱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱，将各部位减压浓缩干燥，分别得到水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、95％乙醇洗脱的组分，其中20％乙醇洗脱组分通过Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得组分A1～A5，组分A1经ODS-18反相柱色谱，依次用水、10％甲醇、20％甲醇、30％甲醇、40％甲醇、100％甲醇梯度洗脱，得到B1～B6，组分B1经SephadexLH-20柱色谱，依次用水、70％甲醇梯度洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，茴香醛-浓硫酸按茴香醛：浓硫酸：95％乙醇＝1:2:100配比，合并茴香醛-浓硫酸显色的部分再次上Sephadex LH-20柱，100％甲醇反复洗脱，茴香醛-浓硫酸喷雾薄层检识，合并显色部分，组分B1以上述方法反复进行三次，得到组分C1组分C1再经Toyopearl HW-40柱色谱，依次用水、20％乙醇、40％乙醇、70％乙醇梯度洗脱，得组分D1-D4，其中组分D4用半制备HPLC分离，色谱柱为YMC-Pack ODS-A色谱柱，流动相为乙腈-0.05％三氟乙酸＝10:90，得到北葶新苷A和北葶新苷B。
6.权利要求1所述的酚苷化合物在制备心肌保护药物中的应用。
7.权利要求2-5任一项所述提取方法提取的北葶新苷A、北葶新苷B在制备心肌保护药物中的应用。
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| 从北葶苈子中分离到的一个新苯乙酰胺类化合物;李孟等;《药学学报》;20161212(第12期);1881-1884 |
| 北葶苈子黄酮苷类成分研究Ⅱ;石萍萍等;《热带亚热带植物学报》;20151115(第06期);691-696 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| CN106928287A (zh) | 2017-07-07 |
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