CN106928192A - 一种嘧啶类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种嘧啶类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种嘧啶类化合物，结构如式(I)所示：式中，R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基、取代芳基或基团P中的一种，P基团为R3选自氢或基团Q，基团Q为

Description

一种嘧啶类化合物及其制备方法和应用
技术领域：
本发明涉及有机化学和药物化学领域，具体涉及一种嘧啶类化合物及其制备方法和应用。
背景技术：
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的一大疾病，恶性肿瘤已成为我国第二大致死疾病，仅次于心脑血管疾病。传统抗肿瘤药物主要分为烷化剂、抗代谢、生物碱、激素和抗生素五个主要类别。传统的抗肿瘤药物大都是偶然发现或者基于其结构与关键造血因子的相似性开发。例如，第一个修饰DNA的药物由芥子气衍生而来：在战争中受芥子气毒害的幸存者患有白细胞减少症病，这引导人们在1943年使用芥子气衍生物氮芥治疗淋巴瘤。在二十世纪的后几十年中，这类药物的使用(用量，时机及方案)纯粹基于临床观察来决定。直到后来才慢慢明白这些化疗药物的作用机理：干扰DNA的完整性；干扰DNA的复制；作用于有丝***纺锤体中微管，阻止染色体向两极中心体的移动，从而抑制有丝***。这些早期的抗肿瘤药物(如铂衍生物，拓扑异构酶抑制剂，核苷类似物，长春新碱类和紫杉醇)在现在仍然是临床上使用较多的药物，它们能成功地治疗很多癌症，但它们并不是对所有类型的癌症都有效。重要的是，这些化疗药物有可能导致继发性恶性肿瘤。此外，这些药物对肿瘤细胞和正常细胞缺乏选择性，存在很高的细胞毒性，会抑制快速增长的正常细胞(如肠上皮细胞、毛发细胞、生殖细胞)和心肌细胞、外周神经细胞，因此常伴随有严重的毒副反应，这极大地制约了它们的临床药效和应用。
随着分子医学和分子生物学的发展，传统抗肿瘤药物的局限性和肿瘤细胞分子机制的阐明，开发广谱低毒或具有靶向性的抗肿瘤药物已成为人们最为关注的热点。抗癌药物的研究已经从传统的，非特异的细胞毒药物向作用于多信号传导分子，多环节的选择性靶向抗癌药物发展。癌细胞靶点主要涉及多种信号通路，主要是基因融合的产物、获得性突变、过表达的癌基因。这些靶点有的是基因上发生改变并对癌细胞生长发展至关重要的，被称为癌基因成瘾性(oncogene addiction)，其他靶点并没有在基因上发生改变，但是对肿瘤细胞比正常细胞更为重要，被称为非癌基因成瘾性(non-oncogene addiction)。
2014年，著名的学术期刊《自然》(Nature)在同一期中连续发表两篇论文(Nature508,215–221；Nature 508,222–227)，证实8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(human mutT homologueMTH1；8-oxoguanine nucleoside triphosphatase)可作为抗肿瘤的一个新的非癌基因成瘾性靶点。
MTH1的主要生物功能是修复因自由基导致的DNA氧化损伤。氧在体内代谢中会产生一系列活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)。作为碱基基本组成之一的鸟嘌呤，其氧化电势最低，最容易被ROS氧化。目前已被确认的鸟嘌呤氧化产物有15种，其中羟自由基可使鸟嘌呤8位碳原子氧化，形成8-羟基-脱氧鸟嘌呤(8-oxoguannine，8-oxoG)，鸟嘌呤C8位的氧化形成8-oxoG是最多见的，数量也是最多的，且具有遗传毒性，而且越来越多的研究表明，8-oxoG较为稳定地在体内存在且容易被检测，被视为重要的DNA氧化损伤的生物标志物之一。8-oxoG的存在会导致DNA链在复制时发生错配，进而发生DNA断裂、突变和细胞凋亡。而MTH1可以清除8-oxoG。有趣的是，MTH1在很多肿瘤细胞中高表达(Mol.Cell.Biol.24,465–474；Oncogene 30,1489–1496)，因此MTH1抑制剂可以被开发为抗肿瘤药物。目前所知的MTH1抑制剂还很少，只有上述两篇《自然》论文中各自发表的两类抑制剂，以TH588和(S)-crizotinib为代表，
其中TH588选择性抑制MTH1且抑制活性(IC50＝15.0nM)较好。但是，TH588的对肿瘤细胞的抑制活性却偏低。
发明内容：
本发明的目的是提供一种具有8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶抑制活性的嘧啶类化合物，为了得到对肿瘤细胞具有高抑制活性的MTH1抑制剂，本发明以TH588为先导化合物，应用计算机辅助药物设计手段，设计合成了一系列结构新颖的MTH1抑制剂。
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
一种嘧啶类化合物，结构如式(I)所示:
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基、取代芳基或基团P中的一种，P基团为
R3选自氢或基团Q，基团Q为其中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；
基团P和基团Q至少出现一个；
m为1-7；n为1-7。
优选地，嘧啶类化合物结构如式(Ia)所示:
式中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基或Cl-6全氟烷基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7。
优选地，嘧啶类化合物结构如式(Ib)所示:
式中，R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；m为1-7。
优选地，嘧啶类化合物结构如式(Ic)所示：
式中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；m为1-7；n为1-7。
优选地，所述嘧啶类化合物包括以下化合物：
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-6-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)己酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(乙炔氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(4-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(2-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2,4-二氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2-氯4-氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(2-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)乙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)丙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(7-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)庚基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(环丁氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(丙烯氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((3-乙炔苯基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)巯基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2,3-二氯苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-((2-氨基-6-苯基嘧啶-4-基)氨基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-氨基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(4-氰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-(吡咯-1-基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-三氟甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-乙炔基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((5-((E)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺。
本发明还提供了所述嘧啶类化合物的制备方法，可以选自如下几种合成路线：
由步骤Scheme 1组成：
其中，X选自O、S或NH；
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基或Cl-6全氟烷基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7；
LG选自F、Cl、Br、I、OMs、OTs或OTf中的一种，LG表示有机化学中常见的离去基团；
PG选自Boc、Fmoc或Cbz，PG表示有机化学中常见的氨基的保护基团。
或由步骤Scheme 2组成：
其中，R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；m为1-7；PG选自Boc、Fmoc或Cbz，PG表示有机化学中常见的氨基的保护基团。
或由步骤Scheme 3组成：
其中，X选自O、S或NH；m为1-7；n为1-7；
LG选自F、Cl、Br、I、OMs、OTs或OTf中的一种，LG表示有机化学中常见的离去基团；
PG选自Boc、Fmoc或Cbz，PG表示有机化学中常见的氨基的保护基团。
或由步骤Scheme 4组成：
其中，R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7；
PG选自Boc、Fmoc或Cbz，PG表示有机化学中常见的氨基的保护基团。
本发明的另一个目的在于提供嘧啶类化合物在制备治疗因8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常所引起的疾病药物中的应用。
优选地，所述疾病为肿瘤，包括实体瘤和液体瘤。
本发明化合物组成的药物组合物的应用中所述的肿瘤包括：肺癌、骨癌、膜腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、月工门区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、***、***癌、***癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾癌、中枢神经中枢***赘生物、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的一种或任意几种的组合。
本发明的目的还在于提供一种用于治疗因8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常所引起的疾病的药物，药物包含嘧啶类化合物中一种或几种或其在药学上可接受的盐、溶剂合物、前药。
本发明的有益效果是：本发明提出的嘧啶类化合物是8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(human mutT homologue MTH1；8-oxoguanine nucleoside triphosphatase)抑制剂，可用于治疗因8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常所引起的疾病，例如肿瘤。
具体实施方式：
以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
除特别说明，本发明使用的设备和试剂为本技术领域常规市购产品。
根据本领域普通技术人员的公知常识，化学反应多数情况下需要在溶剂中进行，制备本发明的化合物常用的溶剂(solvent)包括但不限于水、甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、二氯甲烷、1，2－二氯乙烷、氯仿、四氢呋喃、二氧六环、乙酸乙醋、乙醋、甲基叔丁醋、已烷、环己烷、甲苯、乙腈、乙二醇二甲醚、N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或这些溶剂中的两种或多种的混合物等。
化学反应有些情况下需要在碱存在的情况下发生，制备本发明的化合物常用的碱(Base)包括但不限于Et3N、i-Pr2NEt、吡啶、DBU、DABCO、NaOH、KOH、CS2C03、Na2CO3、K2CO3、NaHCO3、KF、CsF、K3PO3、K2HPO4、KH2PO4、NaH、n-BuLi、s-BuLi、t-BuLi、NaN(SiMe3)2、LiN(SiMe3)2、KN(SiMe3)2或这些碱中的两种或多种的混合物等。
化学反应有些情况下需要在偶联试剂存在的情况下发生，制备本发明的化合物常用的偶联试剂(coup1ing reagent)包括但不限于DCC、EDCI、HATU、TBTU、BOP、PyBOP、PyBrOP、DIC、HOBt、HOAt、CDI、DEPBT等。
本发明的化合物的制备方法中有些步骤需要脱保护基(deprotection)，当保护基是Boc时，常用的脱保护试剂包括但不限于HCl、TFA、H2SO4等；当保护基是Fmoc时，常用的脱保护试剂包括但不限于哌啶，二乙胺等；当保护基是Cbz时，常用的脱保护试剂包括但不限于浓HCl、H2+Pd/C等。
本发明的化合物的制备方法中的反应通常在常温下进行，但有时需要降低至－78℃或加热至200℃；反应通常在前述的溶剂及温度及常规搅拌条件下进行；当使用的碱、试剂、催化剂对水或氧气敏感时，反应需在无水无氧条件下进行。
“药学上可接受的盐”指本发明所述化合物与无机酸、有机酸通过化学反应形成的盐，这种盐保留本发明所述化合物的生物活性及有效性。所述的无机酸或有机酸可以为：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸、高氯酸、醋酸、柠檬酸、草酸、乳酸、苹果酸、水杨酸、酒石酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、取代的苯磺酸(例如，对甲基苯磺酸)、异烟酸、油酸、鞣酸、泛酸、抗坏血酸、丁二酸、马来酸、龙胆酸、富马酸、葡萄糖酸、糖醛酸、葡萄糖二酸或蔗糖酸、甲酸、苯甲酸、谷氨酸、双羟萘酸、山梨酸等。
“溶剂合物”指本发明所述化合物与化学上常用的溶剂以共价键、氢键、离子键、范德华力、络合、包合等形成的稳定物质，所述的溶剂可以为：甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、丙酣、乙酮、乙腈、甲基叔丁基醚等。
“前药”指通过化学合成或物理的方法将本发明中的化合物转化为另一种化合物，并将该化合物给予哺乳动物后，在动物体内被转化成本发明所述的化合物。利用“前药”方法通常是为了克服药物化合物本身不良或欠佳的物理化学性质或成药性。
实施例1
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺的制备：
第一步：
将2-氨基-4,6-二氯嘧啶(1g,6.45mmol)和3-氨基苯硼酸(0.96g,5.87mmol)溶于1,4－二氧六环(20ml)和水(5ml)中，加入碳酸钠(1.24g,11.74mmol)和四三苯基膦钯(170mg,0.15mmol)，于90℃反应2小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(50ml)和水(40ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物1-1(1g，产率78％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.28(s,1H),7.19(d,J＝7.8Hz,1H),7.13(t,J＝7.8Hz,1H),7.07(s,2H),6.72(dd,J＝7.8,2.4Hz,1H),5.31(brs,2H).MS(ESI,m/z):254.1[M+Na]+。
第二步：
将化合物1-1(1g,4.54mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺，依次加入5-(N-叔丁氧羰基氨基)戊酸(1.2g,4.54mmol)和EDCI(1.25g,9.08mmol)、N,N-二异丙基乙胺(1.6ml,9.08mmol)，在常温下反应5小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(40ml)和水(30ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物1-2(1.6g，产率90％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.68-7.64(m,3H),7.40(t,J＝8.0Hz,1H),7.06(s,1H),5.31(s,2H),4.61(s,1H),3.12(q,J＝6.3Hz,2H),2.38(t,J＝6.5Hz,2H),1.52–1.50(m,2H),1.43–1.40(m,4H),1.40(s,9H).
第三步：
将化合物1-2(1.6g,4.05mmol)溶于正丁醇，加入环丙胺(2.77ml,40mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.57ml,20mmol)，在95℃反应24小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(40ml)和水(30ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物1-3(1.3g，产率74％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(2,1H),7.98(s,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,1H),7.34(t,J＝7.6Hz,1H),6.44(s,1H),5.85(s,1H),5.43(brs,2H),4.71(s,1H),3.60(t,J＝6.3Hz,2H),3.08(q,J＝6.5Hz,2H),2.60(s,1H),2.35–2.32(t,J＝6.3Hz,2H),1.73–1.66(m,2H),1.50–1.32(m,13H),0.85–0.82(m,2H),0.62–0.59(m,2H).MS(ESI,m/z):441.2[M+H]+。
第四步：
将化合物1-3(1.3g,3mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入三氟乙酸(2ml)，常温下反应2小时，减压蒸除溶剂，得到棕色油状物。将油状物用二氯甲烷(20ml)溶解，依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.6ml,9mmol)，反-3(3-吡啶基)烯丙酸(448mg,3mmol)、EDCI(1.7g,9mmol)、DMAP(73mg,0.6mmol)，在常温反应4小时，加入饱和氯化铵(20ml)，用二氯甲烷萃取(20mlx3)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物1((E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺)(0.9g，产率68％)。
产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝2.2Hz,1H),8.53(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.97(s,1H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝8.0Hz,1H),7.56(d,J＝15.7Hz,1H),7.36(t,J＝7.9Hz,1H),7.26(t,J＝4.3Hz,1H),6.52–6.49(m,2H),6.37(t,J＝5.7Hz,1H),5.30(s,1H),5.24(s,1H),4.88(s,2H),3.38(q,J＝6.6Hz,2H),2.58–2.56(m,1H),2.38(t,J＝6.2Hz,2H),1.78–1.70(m,2H),1.60–1.55(m,2H),1.45–1.37(m,2H),0.84–0.79(m,2H),0.59–0.52(m,2H).
实施例2
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-6-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)己酰胺的制备：
制备方法类同实施例1。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):508.1[M+Na]+。
实施例3
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺的制备：
制备方法同实施例1。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):468.1[M+Na]+。
实施例4
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(3-(2-氨基-6-(乙炔氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺的制备：
制备方法同实施例1。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):478.2[M+Na]+。
实施例5
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
第一步：
将2-氨基-4,6-二氯嘧啶(2.1g,15.2mmol)和3-羟基苯硼酸(2.27g,13.8mmol)溶于1,4－二氧六环(20ml)和水(5ml)中，加入碳酸钠(2.92g,27.6mmol)和四三苯基膦钯(400mg,0.345mmol)，于90℃反应2小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(50ml)和水(40ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物5-1(1.5g，产率49％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.52–7.40(m,2H),7.28(t,J＝7.9Hz,1H),7.12(s,1H),7.03(s,2H),6.91(dd,J＝8.1,2.4Hz,1H).
第二步：
将化合物5-1(0.95g,4.29mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺，依次加入5-(叔丁氧羰基氨基)溴戊烷(1.7g,6.43mmol)和碳酸钾(1.78g,12.9mmol)，在90℃反应6小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(40ml)和水(30ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物5-2(1.6g，产率89％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.52–7.44(m,2H),7.34(t,J＝7.9Hz,1H),7.04–6.96(m,2H),5.55(s,2H),4.65(s,1H),4.00(t,J＝6.3Hz,2H),3.14(q,J＝6.5Hz,2H),1.86–1.74(m,2H),1.61–1.46(m,4H),1.44(s,9H).MS(ESI,m/z):431.1[M+Na]+。
第三步：
将化合物5-2(1.7g,4mmol)溶于正丁醇，加入环丙胺(2.77ml,40mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.57ml,20mmol)，在95℃反应24小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(40ml)和水(30ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物5-3(1.5g，产率78％)。
产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.55–7.44(m,2H),7.33(t,J＝7.9Hz,1H),6.96(dd,J＝8.2,2.5Hz,1H),6.50(s,1H),5.24(s,1H),4.84(s,2H),4.60(s,1H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.14(q,J＝6.5Hz,2H),2.65–2.52(m,1H),1.86–1.76(m,2H),1.62–1.47(m,4H),1.44(s,9H),0.88–0.78(m,2H),0.64–0.54(m,2H).MS(ESI,m/z):450.2[M+Na]+。
第四步：
将化合物5-3(2.5g,6mmol)溶于二氯甲烷(25ml)，加入三氟乙酸(5ml)，常温下反应2小时，减压蒸除溶剂，得到棕色油状物。将油状物用二氯甲烷(40ml)溶解，依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.14ml,12mmol)，反-3(3-吡啶基)烯丙酸(893mg,3mmol)、EDCI(2.3g,12mmol)、DMAP(145mg,0.12mmol)，在常温反应8小时，加入饱和氯化铵(50ml)，用二氯甲烷萃取(50mlx3)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物2((E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺)(1.7g，产率60％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.71(d,J＝2.2Hz,1H),8.54(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),7.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(d,J＝15.7Hz,1H),7.51(s,1H),7.46(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(t,J＝7.9Hz,1H),7.27(t,J＝4.3Hz,1H),6.94(dd,J＝8.2,2.6Hz,1H),6.55–6.40(m,2H),6.14(t,J＝5.7Hz,1H),5.33(s,1H),4.94(s,2H),4.02(t,J＝6.2Hz,2H),3.41(q,J＝6.6Hz,2H),2.62–2.51(m,1H),1.88–1.75(m,2H),1.70–1.59(m,2H),1.59–1.47(m,2H),0.86–0.76(m,2H),0.61–0.52(m,2H).MS(ESI,m/z):458.2[M+H]+。
实施例6
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-(4-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.69(d,J＝2.2Hz,1H),8.50(d,J＝4.8Hz,1H),8.03(d,J＝8.1Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.54(d,J＝15.8Hz,1H),7.46(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),7.03(d,J＝8.7Hz,2H),6.72(d,J＝15.8Hz,1H),6.33(s,1H),4.07(t,J＝6.3Hz,2H),3.35(t,J＝6.8Hz,2H),2.88–2.65(m,1H),1.91–1.79(m,2H),1.74–1.62(m,2H),1.62–1.52(m,2H),0.90–0.80(m,2H),0.63–0.54(m,2H).
实施例7
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-(2-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):481.2[M+Na]+。
实施例8
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2,4-二氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):495.3[M+H]+。
实施例9
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2-氯4-氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):510.0[M+Na]+。
实施例10
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(2-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)乙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(s,1H),8.53(d,J＝4.7Hz,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,1H),7.60(d,J＝15.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.46(d,J＝7.7Hz,1H),7.32(t,J＝7.9Hz,1H),7.29–7.21(m,1H),6.95(d,J＝8.0Hz,1H),6.74(t,J＝5.7Hz,1H),6.52(d,J＝15.7Hz,1H),6.46(s,1H),5.45(s,1H),5.14(s,2H),4.17(t,J＝5.0Hz,2H),3.81(q,J＝5.3Hz,2H),2.68–2.46(m,1H),0.87–0.73(m,2H),0.65–0.45(m,2H).
实施例11
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(3-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)丙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.72(s,1H),8.54(d,J＝4.7Hz,1H),7.75(d,J＝6.4Hz,1H),7.58(d,J＝15.7Hz,1H),7.54(s,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,1H),7.30–7.23(m,1H),6.97(d,J＝8.1Hz,1H),6.57–6.40(m,3H),5.38(s,1H),5.06(s,2H),4.15(t,J＝6.0Hz,2H),3.61(q,J＝6.2Hz,2H),2.67–2.52(m,1H),2.18–2.05(m,2H),0.90–0.72(m,2H),0.65–0.47(m,2H).MS(ESI,m/z):431.2[M+H]+。
实施例12
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(7-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)庚基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),8.55(d,J＝4.8Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(d,J＝15.7Hz,1H),7.51(s,1H),7.47(d,J＝7.7Hz,1H),7.33(t,J＝7.9Hz,1H),7.30–7.26(m,1H),6.96(dd,J＝8.1,2.5Hz,1H),6.49(s,1H),6.46(d,J＝15.8Hz,1H),5.88(t,J＝5.6Hz,1H),5.26(s,1H),4.85(s,2H),4.02(t,J＝6.5Hz,3H),3.38(q,J＝6.7Hz,2H),2.65–2.48(m,1H),1.87–1.71(m,2H),1.63–1.53(m,2H),1.53–1.43(m,2H),1.43–1.31(m,4H),0.87–0.75(m,2H),0.64–0.50(m,2H).
实施例13
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝2.2Hz,1H),8.53(dd,J＝4.9,1.6Hz,1H),7.73(dt,J＝8.0,2.0Hz,1H),7.58(d,J＝15.7Hz,1H),7.46(s,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.33–7.21(m,2H),6.92(dd,J＝8.2,2.6Hz,1H),6.48(d,J＝15.7Hz,1H),6.21(t,J＝5.6Hz,1H),6.15(s,1H),5.15(s,1H),5.12(s,2H),3.99(t,J＝6.3Hz,2H),3.37(q,J＝6.7Hz,2H),2.92(d,J＝5.0Hz,3H),1.83–1.71(m,2H),1.64–1.53(m,2H),1.53–1.44(m,2H),1.44–1.35(m,2H).MS(ESI,m/z):470.1[M+Na]+。
实施例14
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(环丁氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.66(s,1H),8.49(d,J＝4.9Hz,1H),8.02(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(d,J＝15.9Hz,1H),7.48–7.35(m,2H),7.26(s,2H),7.10(d,J＝8.3Hz,1H),6.75(d,J＝15.8Hz,1H),6.26(s,1H),4.57(s,1H),4.05(t,J＝6.3Hz,2H),3.34(t,J＝7.0Hz,2H),2.49–2.27(m,2H),2.13–1.98(m,2H),1.87–1.70(m,4H),1.68–1.57(m,2H),1.57–1.49(m,2H),1.49–1.39(m,2H).MS(ESI,m/z):510.0[M+Na]+。
实施例15
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(丙烯氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):473.3[M+H]+。
实施例16
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((3-乙炔苯基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):533.1[M+H]+。
实施例17
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):489.6[M+H]+。
实施例18
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)巯基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例5。产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):489.6[M+H]+。
实施例19
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2,3-二氯苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
第一步：
将2-氨基-4,6-二氯嘧啶(1g,6.1mmol)和2,3-二氯苯硼酸(1.39g,6.7mmol)溶于1,4－二氧六环(24ml)和水(6ml)中，加入碳酸钠(1.3g,12.2mmol)和四三苯基膦钯(176mg,0.15mmol)，于90℃反应2小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(30ml)和水(30ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物19-1(0.78g，产率46％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.64(dd,J＝7.7and 1.9Hz,1H),7.47–7.37(m,3H),6.85(s,1H).
第二步：
将化合物19-1(117mg,0.43mmol)溶于正丁醇，加入N-(6-氨基己基)氨基甲酸叔丁酯(184mg,0.85mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.15ml,0.85mmol)，在95℃反应24小时，减压蒸除溶剂，加入乙酸乙酯(20ml)和水(20ml)，萃取后有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到化合物19-2(160mg，产率82％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.33(dd,J＝7.7,1.6Hz,1H),7.21(t,J＝7.8Hz,1H),5.90(s,1H),5.18(s,1H),5.09(s,2H),4.68(s,1H),3.21(d,J＝8.6Hz,2H),3.06(d,J＝6.8Hz,2H),1.56–1.50(m,2H),1.41(s,11H),1.37–1.26(m,4H).MS(ESI,m/z):477.1[M+Na]+。
第三步：
将化合物19-2(300mg,0.66mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入三氟乙酸(1ml)，常温下反应2小时，减压蒸除溶剂，得到棕色油状物。将油状物用二氯甲烷(5ml)溶解，依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.6ml,3.3mmol)，反-3(3-吡啶基)烯丙酸(98mg,0.66mmol)、EDCI(253mg,1.32mmol)、DMAP(16mg,0.132mmol)，在常温反应8小时，加入饱和氯化铵(50ml)，用二氯甲烷萃取(20mlx3)，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂后柱层析得到(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2,3-二氯苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺(245mg，产率76％)。产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.70(d,J＝2.2Hz,1H),8.51(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.04(d,J＝8.2Hz,1H),7.63(t,J＝4.8Hz,1H),7.55(d,J＝15.9Hz,1H),7.47(dd,J＝8.0,4.9Hz,1H),7.39(s,1H),7.38(s,1H),6.73(d,J＝15.8Hz,1H),5.97(s,1H),3.41(s,2H),3.36–3.31(m,2H),1.72–1.53(m,4H),1.51–1.38(m,4H).MS(ESI,m/z):485.1[M+H]+。
实施例20
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(5-((2-氨基-6-苯基嘧啶-4-基)氨基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):425.1[M+Na]+。
实施例21
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-氨基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):432.1[M+Na]+。
实施例22
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):453.2[M+Na]+。
实施例23
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(4-氰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):464.4[M+Na]+。
实施例24
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-(吡咯-1-基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):486.3[M+H]+。
实施例25
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-三氟甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):485.2[M+H]+。
实施例26
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-乙炔基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
制备方法同实施例19，产物鉴定结果：MS(ESI,m/z):441.1[M+H]+。
实施例27
本发明所述嘧啶类化合物之一(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((5-((E)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺的制备：
采用化合物5-2，制备方法同实施例19，产物鉴定结果：1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.67(s,2H),8.49(d,J＝4.8Hz,2H),8.00(dd,J＝8.0,2.3Hz,2H),7.52(dd,J＝15.8,2.4Hz,2H),7.44(dd,J＝8.0,4.9Hz,2H),7.38–7.22(m,3H),7.05–6.95(m,1H),6.72(d,J＝15.9Hz,2H),6.23(s,1H),4.02(t,J＝6.4Hz,2H),3.38(t,J＝7.0Hz,2H),1.85–1.71(m,2H),1.70–1.36(m,13H).MS(ESI,m/z):649.2[M+H]+。
实施例28
抑制8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(human mutT homologue MTH1；8-oxoguaninenucleoside triphosphatase)的筛选实验：
化合物生化活性测定是用MTH1酶来测试。主要是根据化合物抑制MTH1酶的作用程度来确定其活性的。其测试原理为：用荧光标记的MTH1酶和化合物作用之后。荧光标记底物被胰蛋白酶裂解后，释放出荧光物质，该荧光物质在630nm光的激发下产生发射光。根据激发光的强度来计算酶的活性变化。
具体步骤：
1.化合物在96孔板(最好是尖底板)上用DMSO稀释，起始浓度为10mM，3倍梯度稀释，11个浓度梯度(最后一个浓度为0mM，作为max对照)；
2.取1ul的化合物或者DMSO加到96孔检测板中；
3.每个孔中加入50ul酶混合溶液或者1×Buffer(min对照)，离心混匀；
4.然后加入50ul的底物混合溶液，离心混匀，室温反应1h；
5.最后加入25ul的孔雀绿检测溶液，离心混匀，反应15min，酶标仪630nm吸光值读数；
6.化合物的终浓度为100uM起始，第1列的酶溶液用1×Buffer代替作为negativecontrol(min孔对照)，第2-11列为化合物的浓度梯度，第12列不加抑制剂，作为positivecontrol(max孔对照)；
7.用Prim数据分析计算机软件对数据进行分析。化合物的活性测试结果如表1所示：
表1：MTH1酶活性测试结果
由上述活性实验可知，本发明的嘧啶类化合物对8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶(humanmutT homologue MTH1；8-oxoguanine nucleoside triphosphatase)具有很好的抑制活性，其中，实施实例1、2、5、8、10、11、14、16、17、18、19、21、22、23、24、25、26、和实施实例27的IC50值比阳性对照TH588更高，尤其是实施实例21的化合物对8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶的IC50值最高，达到0.95nM。因此，本发明化合物可用于8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常而导致的一系列疾病，如肿瘤。
实施例29
体外抑制肿瘤细胞的实验：
化合物癌细胞抑制活性数据用MTT方法来检测，MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT(黄色的噻唑兰)可透过细胞膜进入细胞内，活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT还原为难溶于水的蓝紫色的针状Formazan结晶并沉积在细胞中，结晶能被二甲基亚砜(DMSO)溶解，用酶联免疫检测仪在490nm/570nm波长处检测其光吸收值，可间接反映活细胞数量。所使用的癌细胞系MCF-7(人乳腺癌细胞)、K562(人慢性粒细胞白血病细胞)、MOLT-4(人急性T淋巴母细胞白血病细胞)、Hela(子***细胞)。具体实验步骤如下：
(1)收集对数生长期细胞，调整细胞悬液浓度，在96孔板中每孔加入100ul细胞悬液；每孔细胞数量约为7000个，在5％CO2，37℃孵育过夜至细胞完全贴壁；
(2)设置药物浓度梯度，每个浓度梯度设置3个复孔，将药物稀释到对应培养基中至所需终浓度，吸出96孔板中原有培养基，加入配好的含所需终浓度药物的培养基100ul，在5％CO2，37℃孵育；并同时设置空白组(只含100ul培养基，不含细胞，后续处理与其他各孔相同)与对照组(含有细胞与培养基)；
(3)药物处理至44小时时每孔加入10ulMTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h(药物处理细胞共48小时)；
(4)吸干净孔内培养液(如细胞出现悬浮，则先2500rpm离心5min再吸出培养基)。每孔加入150ul二甲基亚砜，振荡至结晶物充分溶解。在酶标仪上检测OD490nm处各孔的吸光值；
(5)计算抑制率：抑制率＝1-(加药组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)＝(对照组OD值-加药组OD值)/(对照组OD值-空白组的OD值)；
(6)按上述实验步骤重复三次，得出三次抑制率的平均值，利用IC50计算器算出药物的IC50值。
按照MTT法对K562、MCF-7、MOLT-4、Hela癌细胞系的半数致死量测试结果如表2所示：
表2：抗肿瘤活性测试结果
由表2可以看出，大部分化合物对K562(人慢性粒细胞白血病细胞)、MCF-7(人乳腺癌细胞)、MOLT-4(人急性T淋巴母细胞白血病细胞)、Hela(子***细胞)都具有优秀的抗肿瘤活性，且大都高出阳性对照TH588三个数量级，这些化合物有望被开发成为新的抗肿瘤药物。
上列详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本案的专利保护范围中。

Claims (12)

1.一种嘧啶类化合物，其特征在于，结构如式(I)所示:
式中，
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基、取代芳基或基团P中的一种，P基团为
R3选自氢或基团Q，基团Q为其中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；
基团P和基团Q至少出现一个；
m为1-7；n为1-7。
2.根据权利要求1所述的嘧啶类化合物，其特征在于，结构如式(Ia)所示:
式中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基或Cl-6全氟烷基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7。
3.根据权利要求1所述的嘧啶类化合物，其特征在于，结构如式(Ib)所示:
式中，R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；m为1-7。
4.根据权利要求1所述的嘧啶类化合物，其特征在于，结构如式(Ic)所示:
式中，X选自O、S、NH或-NHCO-中的一种；m为1-7；n为1-7。
5.根据权利要求1所述的嘧啶类化合物，其特征在于，为以下任一化合物：
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-6-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)己酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(3-(2-氨基-6-(乙炔氨基)嘧啶-4-基)苯基)-5-(3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(4-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(2-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2,4-二氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)-2-氯4-氟苯酚基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(2-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)乙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(3-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)丙基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(7-(3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)庚基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(甲氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(环丁氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-(丙烯氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((3-乙炔苯基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((3-(2-氨基-6-(环丙氨基)嘧啶-4-基)苯基)巯基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2,3-二氯苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(5-((2-氨基-6-苯基嘧啶-4-基)氨基)戊基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-氨基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(4-氰基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-(吡咯-1-基)苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(2-三氟甲基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-((2-氨基-6-(3-乙炔基苯基)嘧啶-4-基)氨基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺；
(E)-N-(6-(3-(2-氨基-6-((5-((E)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺基)戊基)氨基)嘧啶-4-基)苯酚基)己基)-3-(吡啶-3-基)丙烯酰胺。
6.一种权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物的制备方法，由以下步骤组成：
其中，X选自O、S或NH；
R1选自氢、卤素、硝基、氰基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基或Cl-6全氟烷基中的一种；
R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7；
LG选自F、Cl、Br、I、OMs、OTs或OTf中的一种；
PG选自Boc、Fmoc或Cbz。
7.一种权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物的制备方法，由以下组成：
其中，R1选自氢、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、二甲氨基、Cl-6烷基、Cl-6全氟烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-12杂脂环基或Cl-6烷氧基中的一种；m为1-7；PG选自Boc、Fmoc或Cbz。
8.一种权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物的制备方法，由以下步骤组成：
其中，X选自O、S或NH；m为1-7；n为1-7；
LG选自F、Cl、Br、I、OMs、OTs或OTf中的一种；
PG选自Boc、Fmoc或Cbz。
9.一种权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物的制备方法，由以下步骤组成：
其中，R2选自氢、Cl-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6环烷氧基、C3-12杂脂环基、芳基或取代芳基中的一种；n为1-7；PG选自Boc、Fmoc或Cbz。
10.权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物在制备治疗因8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常所引起的疾病药物中的应用。
11.根据权利要求10所述的嘧啶类化合物的应用，其特征在于，所述疾病为肿瘤，包括实体瘤和液体瘤。
12.一种用于治疗因8-羟基鸟嘌呤核苷酸酶活性异常所引起的疾病的药物，其特征在于，所述药物包含权利要求1－5任一项所述嘧啶类化合物中一种或几种或其在药学上可接受的盐、溶剂合物、前药。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114805357A (zh) * 2021-01-21 2022-07-29 四川大学 一种靶向setdb1-ttd的小分子抑制剂及其制药用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002046171A2 (en) * 2000-12-06 2002-06-13 Signal Pharmaceuticals, Inc. Anilinopyrimidine derivatives as ikk inhibitors and compositions and methods related thereto
CN1452620A (zh) * 2000-09-05 2003-10-29 阿斯特拉曾尼卡有限公司 作为细胞增生抑制剂的咪唑－5－基－2－苯胺基－嘧啶
CN101503402A (zh) * 2009-03-10 2009-08-12 沈阳药科大学 2-苯胺嘧啶衍生物及其制备和用途
CN104860891A (zh) * 2014-02-25 2015-08-26 上海海雁医药科技有限公司 芳氨基嘧啶类化合物及其应用以及由其制备的药物组合物和药用组合物
CN105143206A (zh) * 2012-11-27 2015-12-09 托马斯·黑勒戴药物研究基金会 用于治疗癌症的嘧啶-2,4-二胺衍生物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1452620A (zh) * 2000-09-05 2003-10-29 阿斯特拉曾尼卡有限公司 作为细胞增生抑制剂的咪唑－5－基－2－苯胺基－嘧啶
WO2002046171A2 (en) * 2000-12-06 2002-06-13 Signal Pharmaceuticals, Inc. Anilinopyrimidine derivatives as ikk inhibitors and compositions and methods related thereto
CN101503402A (zh) * 2009-03-10 2009-08-12 沈阳药科大学 2-苯胺嘧啶衍生物及其制备和用途
CN105143206A (zh) * 2012-11-27 2015-12-09 托马斯·黑勒戴药物研究基金会 用于治疗癌症的嘧啶-2,4-二胺衍生物
CN104860891A (zh) * 2014-02-25 2015-08-26 上海海雁医药科技有限公司 芳氨基嘧啶类化合物及其应用以及由其制备的药物组合物和药用组合物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114805357A (zh) * 2021-01-21 2022-07-29 四川大学 一种靶向setdb1-ttd的小分子抑制剂及其制药用途
CN114805357B (zh) * 2021-01-21 2023-12-19 四川大学 一种靶向setdb1-ttd的小分子抑制剂及其制药用途

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