CN106922951A - 饲料添加菌剂及其制备方法、菌株筛选方法 - Google Patents

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CN106922951A CN201511022254.4A CN201511022254A CN106922951A CN 106922951 A CN106922951 A CN 106922951A CN 201511022254 A CN201511022254 A CN 201511022254A CN 106922951 A CN106922951 A CN 106922951A
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Abstract

本发明提供了一种饲料添加菌剂及其制备方法，主要包含枯草杆菌(Bacillus subtilis)及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，其内含的总菌数约每公克至少1x109菌落形成单位(CFU/g)。

Description

饲料添加菌剂及其制备方法、菌株筛选方法
技术领域
本发明涉及一种饲料添加菌剂及其制备方法，尤指一种可利用解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)或其组合添加碳酸钙粉末后所制成的饲料添加菌剂及其制备方法。
背景技术
畜牧农业的发展已伴随着人类社会数百年的历史，近年来，用于禽畜类的饲料，为了其功能性而参入许多种类的饲料添加剂。
而一般常见的饲料添加剂功能包括增加动物摄食量、提高动物生产力、提高健康水平、改善饲料质量、调节动物生理过程、提高动物相关产品质量以及改善环境状况等。
其中，也有帮助动物吸收饲料营养的饲料添加剂，一般这类饲料添加剂属于微生物制剂的一种。以往微生物制剂大多以乳酸菌类为主，但若使用单一菌种或仅使用纯乳酸菌，往往可获得的效果十分有限。
近年来人们遂开始寻找其他较为合适的菌株作为研发目标，其中，安全性与有效性皆佳的产孢型非肠道菌类逐渐被人们发现其功效，除了前述的优点外，更可使饲料发挥的效果更加多元化。然而，该类菌株的运用方式中，尚未找到具有多重功效的优良复合制剂。
发明内容
为解决现有技术中所提及的问题，本发明提供了一种饲料添加菌剂，包含一菌粉以及一填充物。
其中该菌粉包含多个菌株，包含一枯草杆菌(Bacillus subtilis)、一短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)或其组合。
上述该多个菌株的总菌数为每公克至少1x109菌落形成单位(CFU/g)，且该多个菌株中每一菌株占该饲料添加菌剂的重量百分比相等，而该碳酸钙粉末与该菌粉均匀混合。
本饲料添加菌剂所述该枯草杆菌(Bacillus subtilis)的保藏号码为NITE BP-02169，而该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的保藏号码为NITE BP-02170。
此外，本发明更提供了一种饲料添加菌剂的制备方法，首先执行步骤(a)，挑选一菌株接入一第一种瓶中活化，该菌株为一枯草杆菌(Bacillus subtilis)、或一短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。
接着执行步骤(b)，再将该第一种瓶中该菌株的菌落接入一第二种瓶中放大，该第二种瓶的容量大于该第一种瓶，其后执行步骤(c)，通过一接种箱再将该菌株接入一发酵槽同时活化放大，直至该菌株进入对数生长期。
再执行步骤(d)，将该菌株打入一发酵罐直至该菌株孢子化，并制备为一菌粉，之后执行步骤(e)，重复步骤(a)～(d)直至该枯草杆菌(Bacillus subtilis)及该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)皆制备为该菌粉并均匀混和，且该枯草杆菌(Bacillus subtilis)及该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)占该菌粉的重量百分比相等，最后，执行步骤(f)，将该菌粉与一填充物均匀混合。
本饲料添加菌剂的制备方法所述该枯草杆菌(Bacillus subtilis)的保藏号码为NITE BP-02169，而该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的保藏号码为NITE BP-02170。
本发明更提供了一种一种菌株筛选方法，包含步骤(甲)，选取一土壤作为样本，接着执行步骤(乙)，取一重量之该样本加入无菌水中，依序于一第一条件及一第二条件中培养，再执行步骤(丙)，将该样本序列稀释为104～107倍，得到一样本稀释液。
接着执行步骤(丁)，将该样本稀释液涂抹于对应的筛选培养基，以一第三 条件培养，获得如请求项1所述之复数个菌株，最后依序执行步骤(戊)对该复数个菌株鉴定其16S rDNA序列及淀粉、纤维、脂质、蛋白质、钙磷、铁磷、铝磷分解能力是否符合标准，以及步骤(己)将符合标准的该复数个菌株保存。
附图说明
图1是本发明饲料添加菌剂的菌株筛选方法流程图。
图2是本发明饲料添加菌剂的制备方法流程图。
具体实施方式
为能了解本发明的技术特征及实用功效，并可依照说明书的内容来实施，兹进一步以如图式所示的较佳实施例，详细说明如后：
本实施例所述的饲料添加菌剂包含菌粉及填充物，其中该填充物可为碳酸钙粉末或麦芽糊精，且该填充物占该饲料添加菌剂的重量百分比为98％，且该饲料添加菌剂含水量的重量百分比为10％以下。
其中该菌粉包含多个菌株，包含一枯草杆菌(Bacillus subtilis)、一短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)或其组合。又，在其他实施例中，该复数个菌株更可包含一解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。而上述的菌株是通过如下方式筛出：
请参照图1，图1是本发明饲料添加菌剂的菌株筛选方法流程图。所述的多个菌株是通过土壤筛选而得，首先执行步骤(甲)，选取一土壤作为样本。该土壤的质地为砂壤土(Sand silt)，更精确地来说，是为中国台湾屏东县长治乡联发生物科技股份有限公司场内的土壤。
接着，执行步骤(乙)，取一重量的该样本加入无菌水中，依次在一第一条件及一第二条件中培养。在本实施例中，首先会取1公克的样本加入50毫升的无菌水中，接着以第一条件，也就是在室温28℃下培养24小时，接着再以第二条件28℃的条件下培养16小时。
再执行步骤(丙)，将该样本序列稀释为104～107倍，得到一样本稀释液。本实施例中所述的序列稀释是以序列稀释涂盘的方式进行，取1毫升的样本液体加9毫升的无菌水，依照技术人员的需求稀释为104～107倍。
接着执行步骤(丁)，将该样本稀释液涂抹于对应的筛选培养基，以一第三条件培养，获得如前述的多个菌株。本实施例是将前述的每1毫升的样本稀释液涂于相对应筛选培养基上，培养基可选自营养洋菜培养基(Nutrient Agar,NA)或马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar,PDA)，再以第三条件28℃培养24小时后，观察其菌相及菌数。
接着执行步骤(戊)，对该多个菌株鉴定其16S rDNA序列及淀粉、纤维、脂质、蛋白质、钙磷、铁磷、铝磷分解能力是否符合标准。本实施例中，该多个菌株对于淀粉、纤维、脂质、蛋白质、钙磷、铁磷、铝磷的分解能力是通过在培养基中参杂该些物质并观察其代谢反应或检测其产物而得；而16S rDNA的序列可以透过次世代定序(Next Generation Sequencing,NGS)等方式判断，本发明不以此为限。
最后，执行步骤(己)，将符合标准的该多个菌株保存。本实施例是将该多个菌种纯化后再以甘油(Glycerol)制作为冻管保存于-80℃的冷冻装置中。
本实施例所筛选出解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的品系编号为AGB-F002，该枯草杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)AGB-F002及短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)其16S rDNA基因序列的特征依序如序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2及SEQ ID NO.3所示。
上述该多个菌株的总菌数为每公克至少1x109菌落形成单位(CFU/g)，且每一该多个菌株占该饲料添加菌剂的重量百分比相等，而该碳酸钙粉末与该菌粉均匀混合。
在本实施例中，将举以实际用于农畜动物身上的实例以及实验数据，证明本发明族具有优异的功效及进步性。
实施例1
请参照表1-1～1-2，表1-1是以「鸡」做为喂养动物的实验条件；表1-2为本实施例所获得增肉率的相关结果。
实施条件：
(1)选用白肉鸡(Gallus gallus)的雏鸡12只，并分为两组，空白组仅喂养一般饲料；实验组的饲料添加有本实施例所述的饲料添加菌剂。
(2)进行三重复的试验。
(3)喂养间期：五周。
(4)早晚各供应一次50公克的鸡饲料。
表1-1：鸡只喂养试验条件表
接着请参照表1-2的实验结果，本实施例是以饲料增肉率(Feed Conversion Rate,FCR)作为计算标准，饲料增肉率是指每增重一个单位体重所需的饲料量，若FCR为3，则代表需要使用3单位的饲料来增加一单位喂养生物的重量。
表1-2：鸡只喂养试验结果表
组别 空白组 实验组
饲料增肉率 1.96 1.82
因此，本实施例显示加入饲料添加菌剂后，对于喂养鸡只而言，可提升饲料利用率、促进鸡只生长与吸收，进而使饲料增肉率(Feed Conversion Rate,FCR)下降。
接着，请参照表1-3，表1-3是针对利用本饲料添加菌剂于鸡只后，对鸡蛋 质量影响的结果。
在鸡蛋质量的实验中，所有条件均与表1-1极其实施条件相同，仅喂养间期拉长至3个月，而测定的方式采用诺德斯卡格和范斯沃夫法(Nordskog and Famsworth)检定，其中检定项目包含：
i.鸡只均日产蛋率：计算每日蛋数并除以当日活鸡数取百分比(％)，将试验期间的数值平均即得。
ii.鸡只均日产蛋重：计算每日蛋重并除以当日活鸡数，将试验期间的数值(公克)平均即得。
iii.蛋壳强度：使用电动式拉力机进行测定，测定时将鸡蛋正放(尖端朝上)，速度设定为50毫米/分钟，而其测定单位为公斤。
iv.蛋壳厚度：将鸡蛋上中下部分(尖端、中端、钝端)各取一片蛋壳，精测其厚度(毫米)后取平均值，此为蛋壳的厚度。
因此，本实验的结果如下表1-3所示。
表1-3：饲料添加菌对鸡蛋的质量影响结果表
检测项目 空白组 实验组
i.鸡只均日产蛋率(％) 25 50
ii.鸡只均日产蛋重(g) 69.8 73.66
iii.蛋壳强度(kg) 1.33 1.45
iv.蛋壳厚度(mm) 1.25 1.3
在实施例1中，该饲料添加菌剂随着饲料被鸡摄入其肠胃道中，除可以稳定鸡体内的肠道菌群外，更改善了鸡只对于饲料养分的吸收，因此本实施例的饲料添加菌剂可以在不用增加饲料消耗量的状况下，增加鸡只的增重率，使其消化较为完整，并降低有毒氮气的排放，进而改善鸡舍中的臭味问题；此外，微生物更能够改善鸡只对于蛋白质、钙质与微量元素的消化与吸收。
此外，在喂养鸡只的期间，实施例1更研究了选用本实施例的饲料添加菌 剂造成的环境相关影响。
首先，在实施的鸡舍里，其空气中硫化氢、氨气及其它臭味显著减少，而水源的部分，水中的有机质分解较完全，生化需氧量(Biochemical oxygen demand,BOD)下降，此外，该饲料添加菌剂中的微生物随着鸡只的***物排放至土壤中，重建土壤菌相，使有机质分解快速、完全，增加土壤肥力。
此外，根据粪便软硬程度，实际上可看出家禽的健康状况，对于鸡只而言，下痢是病变的原因之一，有碍生长及降低饲料效率，过份的硬便也是消化不良的现象，会造成对生长有不良影响；而粪便松软则表示其消化吸收良好。
因本实施例的饲料添加菌剂可使肠内菌族群改变，进而促进其分泌出丰富的消化酵素，分解饲料营养物质使饲料的消化吸收更快速更完全，***物在大肠停留时间较短，被吸收的水份也减少，所以粪便松软。
至于对鸡只内分泌的影响，本实施例中的枯草杆菌在小肠中进行酦酵时能产生促进脑下垂体分泌正常，而促使家禽发育良好，改善鸡群整齐度，使出产的家禽良率较高，此外，更可增强鸡只的抵抗力。
此外，表1-3中更证明了，本饲料添加菌剂对于鸡蛋质量也有相当正面的影响，添加本实施例饲料添加菌剂之后，鸡只其均日产蛋率较空白组高25％，且该组的蛋重、蛋壳强度与厚度均较空白组高。可见添加本实施例饲料添加菌剂对于鸡只所产的鸡蛋质量有显著提升。
综上所述，在实施例1中，将本实施例所述的饲料添加菌剂用于鸡只的饲养时，所产出的鸡肉弹性较佳，质量提高，此外也提高了整体鸡群的良率；除此之外更具有节省成本的额外优点，缩短饲养时间、提高饲料效率，而鸡只发育良好，在抵抗力较佳的情况下，鸡只不易发生疾病，间接省去综合维他命及抗生素的使用。
实施例2
请参照表2-1～2-2，表2-1系是以「猪」做为喂养动物的实验条件；表2-2为本实施例所获得平均成长率即饲料转换率的相关结果。
实施条件：
(1)选用体重80公斤左右的大猪(Sus scrofa domestica)18只，并分为两组，空白组仅喂养一般饲料；实验组的饲料添加有本实施例所述的饲料添加菌剂。
(2)喂养间期：49天。
表2-1：猪只喂养试验条件表
接着请参照表2-2，表2-2是本实施例喂养试验的结果。
表2-2：猪只喂养试验结果表
项目 实验组 空白组
平均总增重 41.28公斤 23.28公斤
平均日增重 0.842公斤 0.475公斤
总喂食饲料量 1350公斤 1320公斤
总实验天数 49天 49天
平均成长率 50.1％ 27.5％
饲料转换率 3.27 5.7
以添加有该饲料添加菌剂的饲料喂食猪只后，可增加其肠道环境中的有益菌含量，提升猪只对于饲料和养分的吸收，因此，使用本实施例饲料添加菌剂可以在不增加饲料的用量下，增加猪只的平均成长率。此外，肠道中的益生菌被***出体外后，亦能在粪便中存活，让粪便更容易分解，减少处理所需时间。
其功效除了如前述实施例1中所述具有提升猪肉质量及增加猪只免疫力的功效相当之外，利用本实施例的饲料添加菌剂喂养的猪群更具有额外的优点，例如猪只的粪便松软，易于清洁冲洗，除了可节省水力及人力的费用之外，饲料添加菌剂中的微生物随***物排出在体外后，尚能继续繁殖，可进一步的分解***物中的有机质，在未来制成肥料时，可间接改善土壤菌相，提高***物的再利用价值。
由于本实施例所述的饲料添加菌剂主要的作用位置是主要位于蓄养动物的消化道，因此其实际上在动物体消化道中的状态也显得相当重要。接着，将针对本实施例所述的饲料添加菌剂进行肠胃道模拟耐受性测试。本肠胃道仿真耐受性测试之测试项目主要有两大项，包含：
a.酸碱值与温度
b.盐度
当混有本实施例饲料添加菌剂的饲料由动物体的口腔经由食道进入胃后，酸碱值(pH)会骤降至1.5～2.5左右，但进入十二指肠后，酸碱值会陡升为9，接着在肠道维持中性偏碱的酸碱值。因此，本实施例的菌株必须具备可以克服剧烈酸碱值变化的特性才得以生存。
此外，由于饲料的保存或加工，有时会在高温下进行造粒，故如本实施例中饲料添加菌剂等微生物制剂的耐热性也是一大重点。
通常以酵素或乳酸菌等生物制剂的热稳定性较差，但本实施例饲料添加菌剂的热稳定性相当优异，主要是因本实施例饲料添加菌剂于制备完成时，其内的菌株皆已形成内孢子的型态。
因此，在a.酸碱值与温度的测试项目中，下表3-1的实验结果证明，本实施例饲料添加菌剂所采用的菌株具备顺利抵达动物体肠道的特性。
表3-1：菌株型态与可承受的酸碱度、温度一览表：
其中，内孢子态时可存活的温度范围虽为-20℃～65℃，但实际上本实施例的饲料添加菌剂在特殊情况下最高可耐受维持100℃十分钟或90℃二十分钟的环境，因此可接受饲料在造粒时产生的瞬间高温。
而下表3-2则是本实施例饲料添加菌剂对于b.盐度的耐受程度试验结果，由于被畜养的动物不一定会使用市售的饲料，故须考虑盐度是否会影响本实施例饲料添加菌剂中菌株的活性。
在试验b.中，将饲料添加菌剂中的菌株分别培养在盐度0％、1％、3％、5％及10％的培养液中，于48小时后涂在培养皿上，结果显示所有种类的菌株皆可于盐度10％的环境下存活，表示在正常且常用的畜牧饲料中，本实施例的饲料添加菌剂不会因不同配方产生的不同盐度，进而引响到其功效。
表3-2：饲料添加菌剂对于盐度的耐受程度表
活菌态 内孢子态
盐度耐受度(％) 0～10％ 0～10％
因此，根据上述所有实验结果，本实施例饲料添加菌剂可同时发挥多种功效，包括抑制害菌生存、提高饲料利用率并促进中营养物质的消化与吸收以及增加动物的免疫能力，此外，更具有使用便利以及利于各种加工方式的优点，足见其进步性。
此外，本发明更提供了一种饲料添加菌剂的制备方法，首先请参照图2，图2系本发明饲料添加菌剂的制备方法流程图。
如图2所示，首先执行步骤(a)，挑选一菌株接入一第一种瓶中活化，该菌株为枯草杆菌(Bacillus subtilis)、及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。当然，更可包含前述之解淀粉芽孢杆菌(Bacilus amyloliquefaciens)。其中，如前所述，本实施例采用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)AGB-F002的品系，此外，该菌株会被接入100 毫升的第一种瓶活化24小时，待活化完毕之后执行步骤(b)。
接着执行步骤(b)，再将该第一种瓶中该菌株的菌落接入一第二种瓶中放大，该第二种瓶的容量大于该第一种瓶，其后执行步骤(c)，通过一接种箱再将该菌株接入一发酵槽同时活化放大，直至该菌株进入对数生长期。
在步骤(b)中，所述菌株会被接入2公升的种瓶进行第一次的菌种放大，其放大时间约18～24小时，其后便进入步骤(c)，将步骤(b)中已放大的该菌株，利用接种箱接入500公升的发酵槽中，同时活化以及再次放大，直到测量该菌株的数量进入对数生长期(Exponential phase)。
步骤(c)中所采用的活化放大条件是以通气量0.3vvm、转速80r.p.m.以及温度35℃的条件进行活化放大，本实施例另该菌株生长至对数生长期所需的时间约莫为12小时。
待基础菌株的数量足够后，执行步骤(d)，将该菌株打入一发酵罐直至该菌株孢子化，并制备为一菌粉。步骤(d)中所述的发酵罐是选用5吨(T)的发酵罐，待该菌株孢子化后收集该些内孢子，形成菌粉。
本实施例制作菌粉的方式主要包三步骤，首先执行步骤I，
将该菌株的发酵液经转速14000rpm处理，并取得一菌泥，接着执行步骤II，将该菌泥添加一保护剂后冷冻干燥，冷冻干燥的条件为：温度摄氏-50℃～60℃、压力0毫米汞柱(mmHg)，并维持48小时的时间，完成后可取得干燥菌块；最后，执行步骤III，将该干燥菌块粉碎后制得该菌粉。
其中，上述步骤II中的保护剂可为甘油(Glycerol)等抗冻剂，本发明不以此为限。
之后执行步骤(e)，重复步骤(a)～(d)直至该枯草杆菌(Bacillus subtilis)、该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)皆制备为该菌粉并均匀混和，且该枯草杆菌(Bacillus subtilis)、该解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)或该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)占该菌粉的重量百分比相等。
由于本实施例是以最佳实施例作为范例，因此需以三种菌株的菌粉制备后均匀混合而得之，而本实施例中所述干燥菌块及该菌粉之目数(Mesh)为80～100单位。
最后，执行步骤(f)，将该菌粉与一填充物均匀混合。其中，所述填充物可为碳酸钙粉末或麦芽糊精，且该填充物所占制备完成后饲料添加菌剂的重量百分比为98％。
待该饲料添加菌剂制备完成后，尚须检验该饲料添加菌剂是否符合规格。首先，针对质量检验请参照下表4，表4是针对饲料添加菌剂的检验项目及其标准表。
表4：饲料添加菌剂的检验项目及其标准表
首先，本实施例对于总菌数的检测法是利用平板计数法(Plate Count Method)测得，本实施例所采的平板计数法是属于一种密度测定法。先将本实施例所制备的饲料添加菌剂经过适当的10倍连续稀释后，在无菌操作下，吸取1毫升稀释水样至无菌培养皿(petri dish)(二重复)，待稀释水干燥后，倒置在30℃的培养箱内24～48小时。而本实施例培养皿中的培养基系选用营养洋菜培养基(Nutrient Agar,NA)。
直至菌落生成后，选择菌落生成数目在30至300之间者计数，并反推算原 饲料添加菌剂的含菌密度。利用所述的平板计数法可以测出总好氧、兼氧异营性细菌密度。
本实施例中，酸碱值(pH)值的计算可先将饲料添加菌剂以去离子水(Deionized water)稀释至1％之后，再利用酸碱计(pH meter)或其他可测得酸碱值的方法达成；而针对含水量的计算，本实施例以红外线水分分析仪测定。将红外线水分分析仪归零后放入2.1公克的饲料添加菌剂到测定盘上，开始测定，直至屏幕显示水分含量后即完成。
最后，外观的部分仅以肉眼进行光学观察即可得到，本发明不以此为限。
本实施例中所述的该枯草杆菌(Bacillus subtilis)是以保藏号码NITE BP-02169所活藏的菌种据以实施，而短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)则以保藏号码NITE BP-02170所活藏的菌种据以实施。
以下为相关的保藏信息：
枯草杆菌 (Bacillus subtilis)：
保藏国家：日本国
保藏机构：国家技术评估学会 专利微生物保藏中心(独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター,NITE Patent Microorganisms Depositary(NPMD))
保藏地址：〒292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室(〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8122号室；#122,2-5-8 Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba 292-0818,Japan)
保藏日期：公元2015年12月3日
保藏号码：NITE BP-02169
分类命名：Bacillus subtills AGB-F003
短小芽孢杆菌 (Bacillus pumilus) ：
保藏国家：日本国
保藏机构：国家技术评估学会 专利微生物保藏中心(独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター,NITE Patent Microorganisms Depositary(NPMD))
保藏地址：〒292-0818千叶县木更津市上总镰足2-5-8122号室(〒292-0818千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8122号室；#122,2-5-8 Kazusakamatari,Kisarazu-shi,Chiba 292-0818,Japan)
保藏日期：公元2015年12月3日
保藏号码：NITE BP-02170
分类命名：Bacillus pumilus AGB-F001
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，不能以此限定本发明实施的范围，凡依本发明申请专利范围及说明内容所作的简单等效变化与修饰，皆仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (18)

1.一种饲料添加菌剂，其特征在于其包含：
一菌粉，包含多个菌株，其中该多个菌株包含一枯草杆菌、一短小芽孢杆菌或其组合，该多个菌株的总菌数为每公克至少1x109菌落形成单位，且该多个菌株中每一菌株占该饲料添加菌剂的重量百分比相等；以及
一填充物，与该菌粉均匀混合。
2.如权利要求1所述的饲料添加菌剂，其特征在于该填充物为碳酸钙粉末或麦芽糊精，该填充物占该饲料添加菌剂的重量百分比为98％。
3.如权利要求1所述的饲料添加菌剂，其特征在于该饲料添加菌剂含水量的重量百分比为10％以下。
4.如权利要求1所述的饲料添加菌剂，其特征在于该多个菌株的16S r DNA序列为：枯草杆菌为SEQ ID NO.1的序列；短小芽孢杆菌为SEQ ID NO.3的序列；且该枯草杆菌的保藏号码为NITE BP-02169；
该短小芽孢杆菌的保藏号码为NITE BP-02170。
5.一种饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于其包含步骤：
(a)挑选一菌株接入一第一种瓶中活化，该菌株为一枯草杆菌或一短小芽孢杆菌；
(b)再将该第一种瓶中该菌株的菌落接入一第二种瓶中放大，该第二种瓶的容量大于该第一种瓶；
(c)通过一接种箱再将该菌株接入一发酵槽同时活化放大，直至该菌株进入对数生长期；
(d)将该菌株打入一发酵罐直至该菌株孢子化，并制备为一菌粉；
(e)重复步骤(a)～(d)直至该枯草杆菌及该短小芽孢杆菌皆制备为该菌粉并均匀混和，且该枯草杆菌及该短小芽孢杆菌占该菌粉的重量百分比相等；以及
(f)将该菌粉与一填充物均匀混合；
其中，该枯草杆菌的保藏号码为NITE BP-02169；
该短小芽孢杆菌的保藏号码为NITE BP-02170。
6.如权利要求5所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(b)中该第一种瓶的容量为100毫升，该第二种瓶的容量为2公升。
7.如权利要求5所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(c)中该发酵槽的容量为500公升。
8.如权利要求5所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(c)中的活化放大条件为通气量0.03vvm、转速80r.p.m.及温度35℃。
9.如权利要求5所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(d)中该发酵罐为5吨发酵罐。
10.如权利要求5所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(d)中制备该菌粉的方法包含：
I.将该菌株的发酵液经转速14000rpm处理，并取得一菌泥；
II.将该菌泥添加一保护剂后冷冻干燥，冷冻干燥的条件为：温度摄氏-50℃～60℃、压力0毫米汞柱以及时间48小时，并取得一干燥菌块；以及
III.将该干燥菌块粉碎后制得该菌粉。
11.如权利要求10所述的饲料添加菌剂的制备方法，其特征在于，步骤II.中的该保护剂为甘油。
12.一种菌株筛选方法，其特征在于其包含步骤：
(甲)选取一土壤作为样本；
(乙)取一重量的该样本加入无菌水中，依次在一第一条件及一第二条件中培养；
(丙)将该样本序列稀释为104～107倍，得到一样本稀释液；
(丁)将该样本稀释液涂抹于对应的筛选培养基，以一第三条件培养，获得如权利要求1所述的多个菌株；
(戊)对该多个菌株鉴定其16S rDNA序列及淀粉、纤维、脂质、蛋白质、钙磷、铁磷、铝磷分解能力是否符合标准；以及
(己)将符合标准的该多个菌株保存。
13.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(甲)中的该土壤为砂壤土。
14.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(乙)中的该重量为1公克。
15.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(乙)中的该第一条件为28℃培养24小时；该第二条件为28℃培养至少16小时。
16.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(丁)中的该第三条件为28℃培养24小时。
17.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(戊)中该多个菌株为一枯草杆菌及一短小芽孢杆菌，该枯草杆菌及该短小芽孢杆菌的16S rDNA序列为：该枯草杆菌为SEQ ID NO.1的序列；
该短小芽孢杆菌为SEQ ID NO.3的序列；
该枯草杆菌及该短小芽孢杆菌的保藏号码依序为：该枯草杆菌的保藏号码为NITE BP-02169；以及
该短小芽孢杆菌的保藏号码为NITE BP-02170。
18.如权利要求12所述的菌株筛选方法，其特征在于，步骤(己)中的保存方法是先将该多个菌株个别纯化后，以甘油保存于-80℃的冷冻装置中。
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