CN106893679A - 一种富铁灵芝菌丝体的生产方法 - Google Patents

一种富铁灵芝菌丝体的生产方法 Download PDF

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刘铁平
孙勇
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

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Abstract

本发明公开了一种富铁灵芝菌丝体的生产方法。它包括以下步骤：A:芝深层发酵培养，灵芝菌种培养；摇床种；一级放大；二级放大；发酵培养：将培养基负压吸入发酵罐中，加入发酵培养基发酵，所述发酵培养基含有无机硫酸亚铁；B、制备灵芝酶解液；C、将上述灵芝酶解液降至40~45℃，并加入NaOH溶液，调节pH，加入复合蛋白酶，搅拌升温灭酶活；D、板框压滤；E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体，对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富铁灵芝菌丝体粉。其有益效果是：让灵芝在深层液体培养时能够富集铁元素，使无机态的铁转化为有机态铁形成灵芝菌丝体结构的成分，这样生产出来的富铁灵芝菌丝体既具有灵芝广泛的药理作用又同时具有铁元素的生物机能等药理作用。

Description

一种富铁灵芝菌丝体的生产方法
技术领域
本发明涉及一种灵芝的高效药用价值开发的方法，具体地说是一种富铁灵芝菌丝体的生产方法。
背景技术
铁元素是构成人体的必不可少的元素之一，缺铁会影响到人体的健康和发育，最大的影响即是缺铁性贫血，世界卫生组织的调查表明，大约有50％的女童、20％的成年女性、40％的孕妇会发生缺铁性贫血。补铁是通过食物或专用营养剂为人体额外补充必须的、适量的有机铁化合物，从而补充铁元素以达到强身健体、预防或辅助治疗疾病目的的过程。补铁是通过食物或药物方法为人体额外补充必须的、适量的有机铁化合物，从而补充铁元素以达到强身健体、预防或辅助治疗疾病目的的过程，铁的吸收几乎都是以有机螯合态的形式进行，生物体是几乎不能直接吸收无机态铁，而灵芝具有广泛的药理作用，如抗肿瘤作用、免疫调节作用、镇静安神作用、强心及抗心肌缺血作用、调节血脂作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧和抗衰老作用等，如何培养基配方、让灵芝在深层液体培养时能够富集铁元素，使无机态的铁转化为有机态铁形成灵芝菌丝体结构的成分，为灵芝的高效药用价值开发提供了一种途径。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种让灵芝在深层液体培养时能够富集铁元素，使无机态的铁转化为有机态铁形成灵芝菌丝体结构的成分的富铁灵芝菌丝体的生产方法。
为了解决上述技术问题，本发明的富铁灵芝菌丝体的生产方法，包括以下步骤：
A:芝深层发酵培养
a、灵芝菌种培养：培养温度为25～26℃，
取灵芝菌种在菌种培养基中培养20～30天，所述菌种培养基的配方组成为：马铃薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氢钾3～4g、七水硫酸镁1.5～2g、维生素B110～20mg、琼脂18～20g、水1000ml；
b、摇床种：保持温度在25～26℃，在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基，用水稀释，然后置于振荡器上，搅拌3～4天，控制搅拌速度为100～120转/min；
c、一级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中，培养2～3天；
d、二级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中，培养2～3天；
e、发酵培养：保持温度在25～26℃，将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中，并加入发酵培养基发酵，所述发酵培养基含有无机硫酸亚铁；
B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45～55℃，加入20000u/g的酸性纤维素酶，加入量为发酵罐实际装量的0.0001～0.0004％，搅拌酶解3～4小时，得到灵芝酶解液；
C、将上述灵芝酶解液降至40～45℃，并加入质量浓度为10％的NaOH溶液，调节pH至7.0～9.0，加入发酵罐实际装量的0.006～0.012％的复合蛋白酶，搅拌酶解3～5小时，升温至85～95℃，灭酶活10～30分钟；
D、板框压滤：将所述步骤C酶解灵芝混合液取出，用50～60kg的压力压滤，除去固体物，得到灵芝酶解原液；
E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体，然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富铁灵芝菌丝体粉。
按质量百分数计，所述发酵培养基的配方组成为：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、无机硫酸亚铁0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.01～0.02％、硫酸铵0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量为水；
所述得复合蛋白酶的质量组成为：
10万u/g的中性蛋白酶 35％
20万u/g的碱性蛋白酶 35％
10万u/g胰蛋白酶 10％
10万u/g的木瓜蛋白酶 15％
10万u/g的糖肽酶 5％
所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象，且菌丝变细，菌丝原生质凝集，菌丝有自溶现象发生时。
所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：菌丝湿重达到15～20％。
所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：发酵原液的pH值为3.0～3.5。
本发明的有益效果在于：
灵芝具有很强的铁离子生物富集作用，通过灵芝深层发酵技术在液体培养基中加入0.02％的无机硫酸亚铁灵芝富集铁的效果最佳，能最大效率的把无机铁转化为有机态铁，通过服用富铁灵芝达到机体补铁效果，灵芝对铁的生物富集作用，把无机态的铁离子富集形成生物有机铁，实行了一种行之有效的人体补铁途径，通过合理设计培养基配方、让灵芝在深层液体培养时能够富集铁元素，使无机态的铁转化为有机态铁形成灵芝菌丝体结构的成分，这样生产出来的富铁灵芝菌丝体既具有灵芝广泛的药理作用又同时具有铁元素的生物机能等药理作用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的富铁灵芝菌丝体的生产方法作进一步详细说明。
本发明的富铁灵芝菌丝体的生产方法，包括以下步骤：
A:芝深层发酵培养
a、灵芝菌种培养：培养温度为25～26℃，
取灵芝菌种在菌种培养基中培养20～30天，所述菌种培养基的配方组成为：马铃薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氢钾3～4g、七水硫酸镁1.5～2g、维生素B110～20mg、琼脂18～20g、水1000ml；
b、摇床种：保持温度在25～26℃，在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基，用水稀释，然后置于振荡器上，搅拌3～4天，控制搅拌速度为100～120转/min；
c、一级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中，培养2～3天；
d、二级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中，培养2～3天；
e、发酵培养：保持温度在25～26℃，将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中，并加入发酵培养基发酵，所述发酵培养基含有无机硫酸亚铁；
按质量百分数计，所述发酵培养基的配方组成为：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、无机硫酸亚铁0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.01～0.02％、硫酸铵0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量为水；
待达到以下标准时，发酵结束：
待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象，且菌丝变细，菌丝原生质凝集，菌丝有自溶现象发生时。
发酵结束：菌丝湿重达到15～20％。
发酵原液的pH值为3.0～3.5。
B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45～55℃，加入20000u/g的酸性纤维素酶，加入量为发酵罐实际装量的0.0001～0.0004％，搅拌酶解3～4小时，得到灵芝酶解液；
C、将上述灵芝酶解液降至40～45℃，并加入质量浓度为10％的NaOH溶液，调节pH至7.0～9.0，加入发酵罐实际装量的0.006～0.012％的复合蛋白酶，搅拌酶解3～5小时，升温至85～95℃，灭酶活10～30分钟；
所述步骤C中复合蛋白酶的质量组成为：
10万u/g的中性蛋白酶 35％
20万u/g的碱性蛋白酶 35％
10万u/g胰蛋白酶 10％
10万u/g的木瓜蛋白酶 15％
10万u/g的糖肽酶5％
D、板框压滤：将所述步骤C酶解灵芝混合液取出，用50～60kg的压力压滤，除去固体物，得到灵芝酶解原液；
E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体，然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富铁灵芝菌丝体粉。

Claims (4)

1.一种富铁灵芝菌丝体的生产方法，包括以下步骤：
A:芝深层发酵培养
a、灵芝菌种培养：培养温度为25～26℃，
取灵芝菌种在菌种培养基中培养20～30天，所述菌种培养基的配方组成为：马铃薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氢钾3～4g、七水硫酸镁1.5～2g、维生素B110～20mg、琼脂18～20g、水1000ml；
b、摇床种：保持温度在25～26℃，在30L搅拌罐中装入所述步骤1)中培养有灵芝菌种的菌种培养基，用水稀释，然后置于振荡器上，搅拌3～4天，控制搅拌速度为100～120转/min；
c、一级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤b中稀释搅拌后的培养基负压吸入300L种子罐中，培养2～3天；
d、二级放大：保持温度在25～26℃，将所述步骤c中搅拌后的培养基负压吸入1.5吨的种子罐中，培养2～3天；
e、发酵培养：保持温度在25～26℃，将所述步骤d中培养后的培养基负压吸入7吨的发酵罐中，并加入发酵培养基发酵，所述发酵培养基含有无机硫酸亚铁；
B、将7吨发酵罐中的灵芝发酵原液升温至45~55℃，加入20000u/g的酸性纤维素酶，加入量为发酵罐实际装量的0.0001~0.0004%，搅拌酶解3~4小时，得到灵芝酶解液；
C、将上述灵芝酶解液降至40~45℃，并加入质量浓度为10%的NaOH溶液，调节pH至7.0~9.0，加入发酵罐实际装量的0.006~0.012%的复合蛋白酶，搅拌酶解3~5小时，升温至85~95℃，灭酶活10~30分钟；
D、板框压滤：将所述步骤C酶解灵芝混合液取出，用50～60kg的压力压滤，除去固体物，得到灵芝酶解原液；
E、经过板框压滤后形成灵芝菌丝体，然后对灵芝菌丝体真空干澡并粉碎得到富铁灵芝菌丝体粉。
2.按照权利要求1所述的富铁灵芝菌丝体的生产方法，其特征在于：按质量百分数计，所述发酵培养基的配方组成为：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、无机硫酸亚铁0.01～0.02％，磷酸二氢钾0.01～0.02％、硫酸铵0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量为水；
按照权利要求1所述的富铁灵芝菌丝体的生产方法，其特征在于：所述步骤C中复合蛋白酶的质量组成为：
10万u/g的中性蛋白酶35%
20万u/g的碱性蛋白酶35%
10万u/g胰蛋白酶 10%
10万u/g的木瓜蛋白酶15%
10万u/g的糖肽酶 5%
按照权利要求1所述的富铁灵芝菌丝体的生产方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：待灵芝菌丝上无明显芽头和锁状联合现象，且菌丝变细，菌丝原生质凝集，菌丝有自溶现象发生时。
3.按照权利要求1所述的富铁灵芝菌丝体的生产方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：菌丝湿重达到15～20％。
4.按照权利要求1所述的富铁灵芝菌丝体的生产方法，其特征在于：所述步骤A中e工序中，待达到以下标准时，发酵结束：发酵原液的pH值为3.0～3.5。
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