CN106769336A - 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法 - Google Patents

利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106769336A
CN106769336A CN201710105787.1A CN201710105787A CN106769336A CN 106769336 A CN106769336 A CN 106769336A CN 201710105787 A CN201710105787 A CN 201710105787A CN 106769336 A CN106769336 A CN 106769336A
Authority
CN
China
Prior art keywords
micro
microchannel
albumen
cage
hydrogel
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710105787.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106769336B (zh
Inventor
颜菁
杨洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SUZHOU BOFU BIOLOGICAL MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD.
Original Assignee
Suzhou Bofu Biological Medicine Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Bofu Biological Medicine Technology Co Ltd filed Critical Suzhou Bofu Biological Medicine Technology Co Ltd
Priority to CN201710105787.1A priority Critical patent/CN106769336B/zh
Publication of CN106769336A publication Critical patent/CN106769336A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106769336B publication Critical patent/CN106769336B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/40—Concentrating samples
    • G01N1/4044—Concentrating samples by chemical techniques; Digestion; Chemical decomposition

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其包括（1）使超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液在微流控芯片上混合得到混合液，然后使混合液、油相物质在微流控芯片上混合，获得微液滴，微液滴内，超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇发生巯基‑烯的点击化学反应形成水凝胶，得到微凝胶；（2）对微凝胶进行培养使其中的蛋白肽单体发生折叠聚集；（3）加入脱乳化剂以破坏微凝胶的油相外层并进行清洗。本发明可仅捕获错误折叠程度高的蛋白质寡聚物和纤维，从而进行针对性研究。同时，水凝胶的形成无需借助加热或紫外照射，在此过程中不会对蛋白质结构产生影响，使检测结果更准确。

Description

利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法
技术领域
本发明涉及一种与神经退行性疾病产生有关的蛋白质例如β-淀粉样蛋白、tau蛋白、a-突触核蛋白等的捕获方法。该捕获方法可为准确分析和研究蛋白质的聚集情况从而为进一步开发这些疾病的治疗药物提供必要的条件。
背景技术
世界人口在不断的老龄化，据世界卫生组织统计，目前全球有3560万痴呆患者，到2030年这一数字将增加一倍，2050年这一数字将增加至三倍以上。痴呆类型包括阿尔茨海默病、帕金森氏病、亨廷顿舞蹈病等神经退行性疾病。普遍认为大量错误折叠的蛋白质，如β-淀粉样蛋白(amyloid beta)、tau蛋白、a-突触核蛋白(α-synuclein)在细胞内聚集是神经退行性疾病产生的物质基础。因此在开发针对这些疾病的治疗药物的过程中，需要有一种简单易用的方法捕获这些蛋白，并实时监控这些物质对于蛋白质聚集的影响。
水凝胶是由交联的聚合物链形成的三维聚合物空间网状结构。它不溶于水但亲水性使其能够容纳大量的水。此外，可以通过调节聚合物浓度和前体的分子量来改变孔径。其内部多孔结构可以将药物分子包裹在聚合物网络内。此外，这种结构也可以作为细胞封装的支架：其纳米级孔径可以允许后续向细胞供应营养物，但同时防止较大物质如抗体或酶的渗透。此外，水凝胶的生物相容性使其能更好地模拟蛋白质折叠的自然环境。
水凝胶通常分为物理凝胶和化学凝胶两种。其中物理凝胶包括热可逆凝胶，其在常温下呈稳定的凝胶态，但加热后可转变为溶液。但是，其中温度的改变可能影响蛋白质反应速度，破坏蛋白质结构。而化学凝胶使用较多的包括含有甲基丙烯酸酯或丙烯酸酯基团的超支化聚丙三醇(hPG)和聚乙二醇(PEG)。通过将这些大分子单体与光引发剂一同暴露于紫外线下进行快速交联，或利用加热手段引发自由基进行聚合。综上，无论是利用加热或紫外线辐照的方法，均会影响蛋白质反应，从而使得检测结果不准确。此外，现有常规的物理凝胶和化学凝胶捕获方法捕获的不仅有错误折叠程度高的蛋白质寡聚物和纤维，也会捕获错误折叠程度低的小分子蛋白质和部分小尺寸单体，无法对错误折叠程度高的蛋白质寡聚物和纤维进行针对性研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的蛋白质捕获方法，该方法对错误折叠程度高的蛋白质寡聚物和纤维可进行针对性捕获，同时，该方法无需依赖加热或紫外线辐照从而可以避免对蛋白质反应造成影响，从而可以获得更准确的分析结果。
为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：
一种利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其包括如下步骤：
(1)使超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液在微流控芯片上混合得到混合液，然后使所述混合液、油相物质在所述微流控芯片上混合，获得微液滴，所述微液滴内，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇发生巯基-烯的点击化学反应形成水凝胶，得到外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶；
(2)对所述微凝胶进行培养使其中的蛋白肽单体发生折叠聚集，得到外层为油相内层含有不同折叠程度的聚合蛋白的微凝胶；
(3)向经过步骤(2)的体系中加入脱乳化剂以破坏所述油相外层并进行清洗以除去所述微凝胶内小于所述微凝胶孔道的聚合蛋白或未聚合蛋白，即得捕获了蛋白的水凝胶微笼，所述捕获了蛋白的水凝胶微笼可用于后续的检测分析。
进一步地，步骤(1)中，所述微流控芯片包括芯片本体，形成于芯片本体上且在一端部相交汇构成第一聚焦区的第一微通道、第二微通道和第三微通道，形成于芯片本体上且在一端部相交汇构成第二聚焦区的第四微通道、第五微通道和第六微通道，以及形成于芯片本体上的第七微通道，其中所述第四微通道的另一端与所述第一聚焦区连通，所述第七微通道的一端与所述第二聚焦区连通，将超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽溶液分别注入所述第一微通道、第二微通道和第三微通道，三者在第一聚焦区混合得到所述混合液，分别向第五微通道和第六微通道内注入所述油相物质，混合液经第四微通道流到第二聚焦区，在二聚焦区与从第五微通道和第六微通道内注入的油相物质混合形成所述微液滴。
进一步地，在各所述微通道的进液端设置过滤器(过滤精度为例如约1微米)，以防止可能存在的颗粒物质造成通道堵塞。
进一步地，所述方法还包括以软刻蚀法制作微流控芯片的步骤，该步骤包括如下几步：
i)将设计好的第一微通道、第二微通道、第三微通道、第四微通道、第五微通道以及第六微通道印刷在醋酸膜上，并将醋酸膜放置于涂覆有光刻胶的硅晶片顶部，经过紫外光照射，得到芯片模板；
ii)将聚二甲基硅氧烷预聚物和其交联剂灌注在所述芯片模板上，进行固化，将固化的聚二甲基硅氧烷模具剥离芯片模板，并对各所述微通道的出入口进行压力穿孔，之后运用表面平整的基底对各微通道进行密封；
iii)将表面疏水剂注入各微孔通道并静置，使得微通道表面疏水即得所述微流控芯片。
进一步地，步骤(1)中，所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液可通过先采用有机荧光素对蛋白肽单体侧链的N-末端进行荧光标记，然后溶解于0.5％～2％的氨水中制备预备蛋白肽单体溶液，最后以pH 7-8的缓冲液稀释成设定浓度得到。
根据本发明，上述有机荧光色素包括但不限于Alexa Fluor405、Alexa-350、AMCA-X、Alexa-488、FITC、HiLyte Flour488、Alexa-430、Alexa-555、HiLyte Plus555、DyLight549、HiLyte Fluor555、Alexa Fluor 546、Alexa-546、Alexa-568、AlexaFlour594、HiLyte Fluor TR(622)、Alexa-633等。
进一步地，步骤(1)中，所述双巯基聚乙二醇水溶液通过将2-亚氨基硫烷盐酸盐与聚乙二醇双胺在pH为7-8的缓冲溶液中反应得到。
进一步地，步骤(1)中，所述蛋白肽单体为人β淀粉样蛋白1-40，人β淀粉样蛋白1-42，tau蛋白或a-突触核蛋白。
进一步地，步骤(1)中，所述油相物质优选为选自氟化液、矿物类油、植物油及脂肪酸中的一种或多种的组合。
优选地，步骤(1)中，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇水溶液的流速分别为10-400微升/小时、所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液的流速为10-400微升/小时，所述油相的流速为400-4000微升/小时，所述微液滴生产速度为0.2-10千赫兹。
进一步优选地，步骤(1)中，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇水溶液的流速分别为180-220微升/小时、所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液的流速为180-220微升/小时，所述油相的流速为1800-2200微升/小时。
根据本发明的一个具体且优选方面，所述脱乳化剂为全氟辛醇油，所述清洗采用pH 7-8的磷酸缓冲溶液，在离心旋杯柱中进行清洗。
根据本发明，聚乙二醇双胺、超支化聚丙三醇的分子量可根据需要的微笼孔径来设计。优选地，所述聚乙二醇双胺的分子量为1-5kDa，超支化聚丙三醇的分子量为10-30kDa。更优选地，所述聚乙二醇双胺的分子量为2-3kDa，超支化聚丙三醇的分子量为15-25kDa。
根据本发明，所述微凝胶的大小约为30-80微米，优选为40-60为微米，更优选为45-55微米。
由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明创新采用巯基-烯点击反应结合微流控技术的方法，开发出了单分散性的水凝胶蛋白质捕获微笼。由于在错误折叠和聚集过程中，蛋白从小尺寸单体生长到更大尺寸的纤维，根据本发明方法，可以洗去折叠程度低的小分子蛋白质，从而仅捕获错误折叠程度高的蛋白质寡聚物和纤维，从而进行针对性研究。同时，水凝胶的形成无需借助加热或紫外照射，在此过程中不会对蛋白质结构产生影响，使检测结果更准确。
附图说明
图1为本发明的工艺原理图；
图2为微流控芯片的结构示意图；
图3显示了利用微流控芯片制备外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶的示意图；
图4为实施例制备的微液滴和微笼的光学显微镜图；
图5为水凝胶微笼的荧光测定图；
图6为实施例制备的微液滴和微笼经光学显微镜图观察并绘制的粒径分布图；
图7为水凝胶微笼硫黄素T染色实验荧光强度的示意图。
具体实施方式
球形水凝胶，又称微凝胶已被用于模拟细胞外基质的微环境。通常情况下，微凝胶可以通过匀浆机制作。但是，这种方法得到的微凝胶粒径是多分散的，不同大小的微凝胶个体之间缺乏相互对比性。而粒径的单分散性可以提高微凝胶球体之间的可比性。
本发明的工艺原理图参见图1。在本发明中，我们运用了巯基-烯点击反应同时结合微流控技术的方法，开发出了单分散性的水凝胶蛋白质捕获微笼。具体的说，本发明利用微流控芯片生产具有单分散性的水凝胶微液滴，并将蛋白肽单体包裹在微液滴内(如图1A所示)。然后通过于37℃培养微液滴使蛋白肽折叠聚集，之后用用冰浴冷却微液滴的方法，种植蛋白聚集过程(如图1B所示)。随后，通过加入脱乳化剂(如弱表面活性剂)除去油和表面活性剂的液滴涂层。脱乳化剂的加入导致表面活性剂在油/水界面的不稳定，从而使油水两相的分离(如图1C所示)。如果使用氟油这样的弱表面活性剂(例如全氟辛醇或其他含有一个小亲水基团的氟化合物)，未聚集的蛋白肽或低聚物和高分子积聚体(小于微凝胶孔道大小)都会在缓冲溶液冲洗微凝胶的过程中被洗出(如图1D所示)。与此相反，大于微凝胶孔道大小的高分子聚集体和纤维状的蛋白质积聚体则被捕获在微凝胶网状结构内。同时，由于微凝胶网状结构的存在，微凝胶不仅能保留蛋白积聚体，还可以后续向微凝胶中加入生物反应所需小分子，从而进行其他生物反应。
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明并不限于以下实施例。实施例中未注明的条件为常规实验条件。
实施例1微流控芯片的设计和制作
微流控芯片设计为如图2所示，其包括芯片本体1，形成于芯片本体1上且在一端部相交汇构成第一聚焦区A的第一微通道2、第二微通道3和第三微通道4，形成于芯片本体1上且在一端部相交汇构成第二聚焦区B的第四微通道5、第五微通道6和第六微通道7，以及形成于芯片本体1上的第七微通道9，其中第四微通道5的另一端与第一聚焦区A连通，第七微通道9的一端与第二聚焦区B连通。在第一至第六微通道7的进口端分别设置有过滤器8。本例中，过滤器8的过滤精度为1微米。
以软刻蚀法制作微流控芯片，具体步骤如下：
i)将设计好的各微通道印刷在醋酸膜上，并将醋酸膜放置于涂覆有光刻胶的硅晶片顶部，经过紫外光照射，即得芯片模板；
ii)将聚二甲基硅氧烷预聚物和其交联剂灌注在芯片模板上，进行固化；将固化的聚二甲基硅氧烷模具剥离芯片模板，并对各所述微通道的出入口进行压力穿孔，之后运用表面平整的基底(例如显微镜用载玻片)对各微通道进行密封；
iii)将表面疏水剂(如玻璃镀膜剂Aquapel)注入微孔道并静置5分钟，使得通道表面疏水，最后加装过滤器即得微流控芯片。
实施例2捕获人β淀粉样蛋白1-42蛋白
(1)制备外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶
将2-亚氨基硫烷盐酸盐、聚乙二醇双胺(2kDa)以及超支化聚丙三醇(20kDa)分别溶解在pH 7.4的Napi缓冲溶液中，获得浓度分别为21g/L、300g/L和1000g/L的2-亚氨基硫烷盐酸盐、聚乙二醇双胺以及超支化聚丙三醇的水溶液。
将2-亚氨基硫烷盐酸盐水溶液与聚乙二醇双胺水溶液以体积比0.75:1混合，室温下搅拌30分钟，使二者反应转化成双巯基聚乙二醇，得到双巯基聚乙二醇水溶液，反应方程式如下：
将超支化聚丙三醇水溶液及双巯基聚乙二醇水溶液分别注入200微升固定针气密注射器中。
用HiLyte FluorTM488对人β淀粉样蛋白1-42肽单体侧链的N-末端进行荧光标记，并溶解于1wt％的氨水中做为预备蛋白肽单体溶液。将预备蛋白肽单体溶液以pH 7.4的磷酸缓冲溶液稀释成所需浓度(如5微米)，得到HiLyte FluorTM488修饰的人β淀粉样蛋白1-42的水溶液(以下简称蛋白肽溶液)，注入注射器，并置于冰浴中。
参见图3所示，取超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、蛋白肽溶液分别以流速200微升/小时注入微流控芯片的第一微通道、第二微通道和第三微通道，三者在芯片的第一聚焦区混合得到混合液。混合液自第四微通道流入第二聚焦区，并在第二聚焦区被以流速2000微升/小时注入的氟化液HFE-7500包裹形成单分散微液滴(微液滴的光学显微镜图参见图4A，粒径分布图参见图6A，微液滴大小为约48微米，且呈现非常好的单分散性)，微液滴从第七微通道流出收集。微液滴在芯片上的生成过程通过安装在IX71倒置显微镜的单色幻影V7.2相机进行成像。然后利用LabVIEW 8.2计算液滴的生成频率，约为1.2千赫兹。在这过程中，超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇在微液滴中发生巯基-烯的点击化学反应，并快速形成水凝胶。
(2)培养
将步骤(1)制备得到的外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶置于37℃下培养一定时间，使蛋白肽折叠聚集。当培养结束，冰浴冷却60秒淬灭反应。
(3)破坏微凝胶的油相外层并进行清洗
向经过步骤(2)的体系中加入全氟辛醇油，打开微液滴的油相外层，并用pH7.4的磷酸缓冲溶液于离心旋杯柱(0.45μm孔径)中清洗3次，并保存在pH7.4的磷酸缓冲溶液中，得到内含高程度聚合蛋白的水凝胶微笼(水凝胶微笼的光学显微镜图参见图4B，应的粒径分布图参见图6B，微笼大小为约47微米，且呈现非常好的单分散性)，以备荧光测定，相应荧光测定图参见图5。从该图可见，水凝胶微笼内蛋白质主要以折叠程度高的聚合蛋白(蛋白积聚体)形式存在。
此外，为了进一步证明水凝胶微笼内蛋白质以蛋白积聚体存在，进行了以下实验：取实施例所得水凝胶微笼，加入硫磺素T(Thioflavin T)进行染色，于470nm激发荧光检测，如图7所示，微笼内荧光强度值明显大于洗出液的荧光强度值，表明水凝胶微笼内蛋白的积聚程度较高(由于硫磺素T结合b淀粉样蛋白后，染料本身结构改变，荧光值升高(淀粉样蛋白的积聚程度越高，则与硫磺素T结合的量就越大，因此荧光值也越高)。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)使超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液在微流控芯片上混合得到混合液，然后使所述混合液、油相物质在所述微流控芯片上混合，获得微液滴，所述微液滴内，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇发生巯基-烯的点击化学反应形成水凝胶，得到外层为油相内层为含有蛋白肽溶液的微凝胶；
(2)对所述微凝胶进行培养使其中的蛋白肽单体发生折叠聚集，得到外层为油相内层含有不同折叠程度的聚合蛋白的微凝胶；
(3)向经过步骤(2)的体系中加入脱乳化剂以破坏所述油相外层并进行清洗以除去所述微凝胶内小于所述微凝胶孔道的聚合蛋白或未聚合蛋白，即得捕获了蛋白的水凝胶微笼，所述捕获了蛋白的水凝胶微笼可用于后续的检测分析。
2.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述微流控芯片包括芯片本体，形成于所述芯片本体上且在一端部相交汇构成第一聚焦区的第一微通道、第二微通道和第三微通道，形成于所述芯片本体上且在一端部相交汇构成第二聚焦区的第四微通道、第五微通道和第六微通道，以及形成于芯片本体上的第七微通道，其中所述第四微通道的另一端与所述第一聚焦区连通，所述第七微通道的一端与所述第二聚焦区连通，将超支化聚丙三醇水溶液、双巯基聚乙二醇水溶液、带有标记的待捕获蛋白肽溶液分别注入所述第一微通道、第二微通道和第三微通道，三者在所述第一聚焦区混合得到所述混合液，分别向所述第五微通道和第六微通道内注入所述油相物质，混合液经第四微通道流到第二聚焦区，在二聚焦区与从第五微通道和第六微通道内注入的油相物质混合形成所述微液滴。
3.根据权利要求2所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：所述方法还包括以软刻蚀法制作所述微流控芯片的步骤，该步骤包括如下几步：
i)将设计好的第一微通道、第二微通道、第三微通道、第四微通道、第五微通道以及第六微通道印刷在醋酸膜上，并将醋酸膜放置于涂覆有光刻胶的硅晶片顶部，经过紫外光照射，得到芯片模板；
ii)将聚二甲基硅氧烷预聚物和其交联剂灌注在所述芯片模板上，进行固化，将固化的聚二甲基硅氧烷模具剥离芯片模板，并对各所述微通道的出入口进行压力穿孔，之后运用表面平整的基底对各微通道进行密封；
iii)将表面疏水剂注入各微孔通道并静置，使得微通道表面疏水即得所述微流控芯片。
4.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液通过先采用有机荧光素对蛋白肽单体侧链的N-末端进行荧光标记，然后溶解于0.5％～2％的氨水中制备预备蛋白肽单体溶液，最后以pH 7-8的缓冲液稀释成设定浓度得到。
5.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述双巯基聚乙二醇水溶液通过将2-亚氨基硫烷盐酸盐与聚乙二醇双胺在pH为7-8的缓冲溶液中反应得到。
6.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述蛋白肽单体为人β淀粉样蛋白1-40，人β淀粉样蛋白1-42，tau蛋白或a-突触核蛋白。
7.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述油相物质为选自氟化液、矿物类油、植物油及脂肪酸中的一种或多种的组合。
8.根据权利要求2或7所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇水溶液的流速分别为10-400微升/小时、所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液的流速为10-400微升/小时，所述油相的流速为400-4000微升/小时，所述微液滴生产速度为0.2-10千赫兹。
9.根据权利要求8所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述超支化聚丙三醇和双巯基聚乙二醇水溶液的流速分别为180-220微升/小时、所述带有标记的待捕获蛋白肽单体溶液的流速为180-220微升/小时，所述油相的流速为1800-2200微升/小时。
10.根据权利要求1所述的利用水凝胶微笼捕获蛋白的方法，其特征在于：所述脱乳化剂为全氟辛醇油，所述清洗采用pH 7-8的磷酸缓冲溶液，在离心旋杯柱中进行清洗。
CN201710105787.1A 2017-02-24 2017-02-24 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法 Active CN106769336B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710105787.1A CN106769336B (zh) 2017-02-24 2017-02-24 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710105787.1A CN106769336B (zh) 2017-02-24 2017-02-24 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106769336A true CN106769336A (zh) 2017-05-31
CN106769336B CN106769336B (zh) 2019-09-03

Family

ID=58960669

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710105787.1A Active CN106769336B (zh) 2017-02-24 2017-02-24 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106769336B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108707577A (zh) * 2018-05-25 2018-10-26 苏州博福生物医药科技有限公司 一种细胞或生物分子的洗脱方法及捕获方法
CN109655447A (zh) * 2019-01-28 2019-04-19 广东海天创新技术有限公司 用于微生物计数的检测***和方法
CN111175503A (zh) * 2020-03-05 2020-05-19 上海邦先医疗科技有限公司 捕获筛及其制备方法
CN113272449A (zh) * 2018-10-26 2021-08-17 Illumina公司 调整聚合物小珠以进行dna处理

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101598717A (zh) * 2008-05-16 2009-12-09 中国科学院大连化学物理研究所 以水凝胶平面微图案化为基础的液塑法制备聚二甲基硅氧烷芯片的方法
CN105641743A (zh) * 2016-03-16 2016-06-08 王华楠 一种微流控装置及利用该装置制备微凝胶的方法
CN106140340A (zh) * 2016-08-19 2016-11-23 北京工业大学 基于流动聚焦型微通道合成微乳液滴的微流控芯片

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101598717A (zh) * 2008-05-16 2009-12-09 中国科学院大连化学物理研究所 以水凝胶平面微图案化为基础的液塑法制备聚二甲基硅氧烷芯片的方法
CN105641743A (zh) * 2016-03-16 2016-06-08 王华楠 一种微流控装置及利用该装置制备微凝胶的方法
CN106140340A (zh) * 2016-08-19 2016-11-23 北京工业大学 基于流动聚焦型微通道合成微乳液滴的微流控芯片

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TORSTEN ROSSOW ET AL: "Controlled Synthesis of Cell-Laden Microgels by Radical-Free Gelation in Droplet Microfluidics", 《JACS》 *
王晓威等: "基于多肽和蛋白质的水凝胶研究进展", 《高分子通报》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108707577A (zh) * 2018-05-25 2018-10-26 苏州博福生物医药科技有限公司 一种细胞或生物分子的洗脱方法及捕获方法
CN108707577B (zh) * 2018-05-25 2023-11-10 江苏汇先医药技术有限公司 一种细胞或生物分子的洗脱方法及捕获方法
CN113272449A (zh) * 2018-10-26 2021-08-17 Illumina公司 调整聚合物小珠以进行dna处理
CN113272449B (zh) * 2018-10-26 2024-03-12 Illumina公司 调整聚合物小珠以进行dna处理
US11999945B2 (en) 2018-10-26 2024-06-04 Illumina, Inc. Modulating polymer beads for DNA processing
CN109655447A (zh) * 2019-01-28 2019-04-19 广东海天创新技术有限公司 用于微生物计数的检测***和方法
CN111175503A (zh) * 2020-03-05 2020-05-19 上海邦先医疗科技有限公司 捕获筛及其制备方法
CN111175503B (zh) * 2020-03-05 2023-07-25 上海邦先医疗科技有限公司 捕获筛及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106769336B (zh) 2019-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN206474192U (zh) 用于蛋白质捕获的微流控芯片
Yu et al. Design of capillary microfluidics for spinning cell-laden microfibers
CN106769336B (zh) 利用水凝胶微笼捕获蛋白质的方法
CN106309407B (zh) 一种具有核壳结构的复合药物微载体
Lim et al. Multi stimuli-responsive hydrogel microfibers containing magnetite nanoparticles prepared using microcapillary devices
Shim et al. Elaborate design strategies toward novel microcarriers for controlled encapsulation and release
Shum et al. Dewetting-induced membrane formation by adhesion of amphiphile-laden interfaces
CN109414671A (zh) 用于批量生产单分散的可生物降解聚合物基微球的设备和可结合在所述设备中的多通道形成装置
Xie et al. Composable microfluidic spinning platforms for facile production of biomimetic perfusable hydrogel microtubes
CN108721684A (zh) 一种核壳型预装化疗药物栓塞微球及其制备方法
do Nascimento et al. Microfluidic fabrication of pluronic vesicles with controlled permeability
CN107298767A (zh) 一种基于微流控芯片装置的明胶纳米微粒的连续制备方法
CN102124096A (zh) 具有微通道的器官模仿装置及其使用和制造方法
CN104302349A (zh) 制造聚合物微针的新方法
Kim et al. Smart Microcapsules with Molecular Polarity‐and Temperature‐Dependent Permeability
Sadek et al. Blood particulate analogue fluids: A review
Kim et al. Enhancing the biocompatibility of microfluidics-assisted fabrication of cell-laden microgels with channel geometry
US20190282510A1 (en) Method of encapsulating cells using a microfluidic encapsulation device
Vargas-Nadal et al. Fluorescent multifunctional organic nanoparticles for drug delivery and bioimaging: a tutorial review
Rose et al. Shape anisotropy enhances nanoparticle dynamics in nearly homogeneous hydrogels
Rosellini et al. Microfluidic Fabrication of Natural Polymer-Based Scaffolds for Tissue Engineering Applications: A Review
Xu et al. Preparation and characterization of ion-sensitive brimonidine tartrate in situ gel for ocular delivery
Vaezi et al. Investigation of the programmed cell death by encapsulated cytoskeleton drug liposomes using a microfluidic platform
WO2021224328A1 (de) Mikrofluidische vorrichtung
De Clerck et al. Photodisruption of the inner limiting membrane: exploring ICG loaded nanoparticles as photosensitizers

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190211

Address after: 215300 Pilot Building 101, No. 168 Yuanfeng Road, Yushan Town, Kunshan City, Suzhou City, Jiangsu Province

Applicant after: Kunshan Huixian Medical Technology Co., Ltd.

Address before: 215634 2nd Floor, Building A, Kechuang Park, 36 Huada Road, Zhangjiagang Bonded Zone, Suzhou City, Jiangsu Province

Applicant before: SUZHOU BOFU BIOLOGICAL MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD.

TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190409

Address after: 215634 2nd Floor, Building A, Kechuang Park, 36 Huada Road, Zhangjiagang Bonded Zone, Suzhou City, Jiangsu Province

Applicant after: SUZHOU BOFU BIOLOGICAL MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD.

Address before: 215300 Pilot Building 101, No. 168 Yuanfeng Road, Yushan Town, Kunshan City, Suzhou City, Jiangsu Province

Applicant before: Kunshan Huixian Medical Technology Co., Ltd.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant