CN106726868B - 一种具美白能力的月季花花青素的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具美白能力的月季花花青素的制备方法，以水蒸气蒸馏法蒸馏新鲜月季花，水与花的比例为4.5‑5.5:1，蒸馏之后的水蒸汽经冷却，得冷却液，当蒸馏出的冷却液重量为加入月季花瓣重量的3‑4倍时，即停止蒸馏；以水蒸气蒸馏后，蒸馏器底部月季花残留液与蒸馏器中月季花共同煮沸0.5‑1.5小时过滤，滤液通过DIAION HP‑20管柱去除高极性成分，搜集流出液后真空浓缩抽干，再经冷冻干燥即得月季花青素，置‑20℃冰存储藏。本发明产品可抑制黑色素细胞生成黑色素。

Description

一种具美白能力的月季花花青素的制备方法
技术领域
本发明涉及化妆品原料领域，具体地涉及一种具美白能力的月季花花青素制备方法。
背景技术
月季花(学名：Rosa chinensis Jacq.)：被称为花中皇后，又称“月月红”，是常绿、半常绿低矮灌木，四季开花﹐一般为红色﹐或粉色、偶有白色和黄色﹐可作为观赏植物，也可作为药用植物，亦称月季。有三个自然变种，现代月季花型多样，有单瓣和重瓣，还有高心卷边等优美花型；其色彩艳丽、丰富，不仅有红、粉黄、白等单色，还有混色、银边等品种；多数品种有芳香。月季的品种繁多，世界上已有近万种，中国也有千种以上。
自然花期8月到次年4月，花成大型，由内向外，呈发散型，有浓郁香气，可广泛用于园艺栽培和切花。月季的适应性强，耐寒、耐寒，不论地栽、盆栽均可，适用于美化庭院、装点园林、布置花坛、配植花篱、花架，月季栽培容易，可作切花，用于做花束和各种花篮，月季花朵可提取香精，并可入药。也有较好的抗真菌及协同抗耐药真菌活性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具美白能力的月季花花青素制备方法。
本发明提供的技术方案如下：
本发明的目的之一，在于提供一种具美白能力的月季花花青素制备方法，包括如下步骤：以水蒸气蒸馏法蒸馏新鲜月季花，水与花的比例为4.5-5.5:1，蒸馏之后的水蒸汽经冷却，得冷却液，当蒸馏出的冷却液重量为加入月季花瓣重量的3-4倍时，即停止蒸馏；以水蒸气蒸馏后，蒸馏器底部月季花残留液与蒸馏器中月季花共同煮沸0.5-1.5小时过滤，滤液通过DIAION HP-20管柱去除高极性成分，搜集流出液后真空浓缩抽干，再经冷冻干燥即得月季花青素，置-20℃冰存储藏。
作为优选，以水蒸气蒸馏法蒸馏新鲜月季花，水与花的比例为5:1，以水蒸汽蒸馏经冷却所得之冷却液，当蒸馏出的冷却液重量为加入月季花瓣重量的3-4倍时，即停止蒸馏；以水蒸气蒸馏后，蒸馏器底部月季花残留液与蒸馏器中月季花共同煮沸1小时过滤，滤液通过以配置完成的DIAION HP-20管柱去除高极性成分，搜集流出液后真空浓缩抽干，再经冷冻干燥24小时即得月季花青素，置-20℃冰存储藏。
本发明的又一目的，在于提供一种月季花花青素的用途，其用于抑制DPPH自由基。
本发明的又一目的，在于提供一种月季花花青素的用途，其用于抑制抑制酪胺酶活性。
本发明的又一目的，在于提供一种月季花花青素的用途，用于抑制黑色素细胞生成黑色素。
由上述描述可知，本发明提供了一种具美白能力的月季花花青素制备方法，本发明制备的月季花花青素，可用于抑制DPPH自由基、抑制抑制酪胺酶活性或抑制黑色素细胞生成黑色素。且对人体皮肤无红肿、浮肿、丘疹、水泡等刺激反应。
附图说明
图1为本发明实施例5的季花青素抑制DPPH自由基的实验结果图；其中横坐标为浓度(ppm)，纵坐标为抑制率(％)；
图2为本发明实施例8贴布实验结果；
具体实施方式
实施例1
月季花精露、月季花青素生产工艺：
1.以水蒸气蒸馏法蒸馏新鲜月季花(选择大红系月季花)，水与花的比例为5:1，以蒸馏后的水蒸汽经冷却，得冷却液，当蒸馏出的冷却液重量为加入月季花瓣重量的3倍时，即停止蒸馏，此即为月季精露，含有天然月季香气，可作为天然月季水之用。
2.以水蒸气蒸馏后，蒸馏器底部的月季花残留液与蒸馏器中月季花共同煮沸1小时过滤，滤液通过以配置完成的DIAION HP-20管柱去除高极性成分，搜集流出液后真空浓缩抽干，再经冷冻干燥24小时即得月季花青素，置-20℃冰存储藏。
实施例2月季花青素之总类黄酮含量测定
类黄酮化合物于碱性条件下可与氯化铝形成稳定的黄色错合物，并于波长415nm下有吸光，当颜色越深，其类黄酮含量越高。取一96孔盘加入样品或不同浓度标准品20mL再依序加入60mL乙醇(95％)、4mL 10％氯化铝(aluminum chloride)、4mL 1M醋酸钾(potassium acetate)及112mL去离子水，在室温下避光反应30分钟，由ELISA reader在波长415nm测其吸光值。依吸光值判定测试样品中类黄酮含量多寡，利用其吸光值代入先前制作的槲皮素(quercetin)标准曲线，做出相对于槲皮素的浓度表示。最后，换算出每克样品中含有多少毫克类黄酮含量。
月季花青素之总类黄酮含量测定结果
样品 总类黄酮含量(mg Quercetin eq./g)
月季花青素萃取物 26.6±2.0
实施例3月季花青素的总酚含量测定
总酚含量的测定以没食子酸(gallic acid)为标准品，制作不同浓度的没食子酸吸光值的检量线，利用ELISA测750nm之吸光值，以吸光值为纵轴，没食子酸标准溶液浓度为横轴绘制标准曲线，并计算定量线性回归公式。样品所测得的吸光值由没食子酸检量线加以换算后，即可得到待测样品的总多酚含量相当于多少的没食子酸的含量，没食子酸的量愈高，代表化合物的抗氧化活性愈高。
没食子酸标准曲线制作：
(1)分别配制浓度为12.5、25、50、100、200及400μg/mL的没食子酸水溶液。
(2)各取50μL上述浓度之标准水溶液，加入50μL福林酚试剂(Folin-Ciocalteu'sphenol reagent)，均匀混合后于室温静置20分钟。
(3)再加入100μL浓度为20％Na2CO3水溶液，混匀后置于室温反应10分钟，测定于750nm之吸光值(用水当空白对照)。
(4)利用吸光值为纵轴，没食子酸标准溶液浓度为横轴绘制标准曲线，并计算定量线性回归公式。
月季花青素之总酚含量测定
样品 总酚含量(mg Gallic acid eq./g)
月季花青素萃取物 102.2±1.4
实施例4月季花青素细胞毒性评估(Colorimetric MTT assay)
选用SCC25细胞(人类头颈部鳞状癌细胞株)与HaCaT(人类皮肤角质细胞)评估月季花青素72小时细胞毒性实验，结果显示月季花青素100mg/mL对SCC25细胞略有些许毒性，但细胞存活度仍超过70％以上；对HaCaT(人类皮肤角质细胞)显示花青素没有毒性。
实施例5月季花青素抑制DPPH自由基的评估
方法：取99μL DPPH乙醇溶液(100μL)混合1μL之萃取物后避光反应30分钟，最后于波长517nm下测定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。与对照组维他命C比较。
结果显示花青素在为100ppm浓度时，显示可达到94.2％的抑制能力，显示月季花青素有非常优异的抑制DPPH自由基的效能。
样品名称 抑制率(％)
Vit C(对照组) 97.7±0.9
花青素 94.2±0.2
实施例6月季花青素抑制抑制酪胺酶活性评估
于浓度100ppm下，月季花青素显示有超过50％的抑制酪胺酸酶效果。
样品名称 抑制率(％)
Vit C(对照组) 98.2±1.0
花青素 58.6±2.2
实施例7月季花青素抑制黑色素细胞(B16)生成黑色素之活性评估
将B16细胞，以1×105/mL之密度接种于96孔板中培养24小时后，将萃取物及对照组维生素C混合于含有100nMα-MSH之无酚红(phenol red free)培养液，反应72小时后，取上清液100μL于96孔板中，于405nm波长测定吸光值(BioTek,SynergyTM2,USA)。计算萃取物和维生素C本身之吸光值，换算萃取物及维生素C作用于细胞后抑制黑色素生成量能力。
结果显示月季花青素在72小时的作用时间下，100ppm浓度下即有抑制效果，在高浓度的剂量500ppm可发现有显著的抑制B16细胞生成黑色素的功效。
实施例8月季花青素皮肤刺激性测试(贴布测试)
评估结果：月季花青素皮肤刺激性测试结果显示在24、48、72小时观察均无皮肤刺激性反应。
实验方法：根据国际接触性皮炎研究组(ICDRG)的规定，是以视觉的方式来观察，将所获得样本配置成10％之水溶液，再以移液管取0.1ml置于1.0×1.0cm附上纱布的塑料盘，另取0.1ml过滤二次水作为空白对照组，贴在上臂内侧，用透气胶带固定，避免洗澡弄湿，每24小时更换新的纱布，并重新添加0.1ml受测物质及空白组，观察72小时。观察皮肤有无红肿、浮肿、丘疹、水泡等刺激反应。(实验人次为10人)。

Claims (3)

1.一种具美白能力的月季花花青素制备方法，其特征在于：以水蒸气蒸馏法蒸馏新鲜月季花，水与花的比例为4.5-5.5:1，蒸馏之后的水蒸汽经冷却，得冷却液，当蒸馏出的冷却液重量为加入月季花瓣重量的3-4倍时，即停止蒸馏；以水蒸气蒸馏后，蒸馏器底部月季花残留液与蒸馏器中月季花共同煮沸0.5-1.5小时过滤，滤液通过DIAIONHP-20管柱去除高极性成分，搜集流出液后真空浓缩抽干，再经冷冻干燥即得月季花青素，置-20℃冰存储藏。
2.一种具美白能力的月季花花青素制备方法，其特征在于：蒸馏出的冷却液为月季精露，含有天然月季香气，作为天然月季水使用。
3.月季花花青素的用途，用于制备抑制黑色素细胞生成黑色素的制剂，其中，所述的月季花花青素采用权利要求1的方法制备而得，月季花花青素的使用浓度为100-500ppm。
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