CN106680505A - 一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法:以多株可以相互两两配对的单克隆抗体修饰胶乳微球,进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原,即可高灵敏、高特异地获得样本中抗原含量信息。该方法与传统的多克隆抗体标记胶乳增强免疫比浊方法的优点在于,单克隆抗体特异性较高,而且利用相互两两配对的单克隆抗体,针对抗原的结合位点更多,抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争,因而也可以提高检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测和生物技术领域,尤其涉及基于一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法。本发明可应用于超灵敏抗原检测,为抗原检测手段提供一种可供选择的方法。
背景技术
胶乳增强免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是当抗原与抗体在特殊稀释***中反应而且比例合适时,形成的可溶性免疫复合物在稀释***中的促凝剂的作用下,自液相析出,形成微粒使反应液出现浊度,从而计算出待检样品中抗原的含量。这种方法可用仪器检测,自动化程度高,提高了检测的速度、灵敏度和易操作性,适合大量样本的临床检测。传统的胶乳增强免疫比浊方法是用胶乳微球标记多克隆抗体,但是多克隆抗体能与多种抗原表位结合,因此多克隆抗体的特异性较差。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位,因此单克隆抗体的特异性较高,但是这种超高的特异性会使敏感性降低,所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法,这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点,又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点,而且利用两两相互配对的单克隆抗体,针对抗原的结合位点更多,抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争,因而更加的提高了检测的灵敏度。
发明内容
本发明设计了多株单克隆抗体同时包被微球的方法。该方法与传统的多克隆抗体标记胶乳增强免疫比浊方法的优点在于,单克隆抗体的特异性较高。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位,这种超高的特异性会使敏感性降低,所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法,这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点,又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点。
筛选了两两相互配对的多株单克隆抗体。针对抗原的结合位点更多,抗体与抗体之间不会形成结合位置的竞争,因而可以提高检测灵敏度。
所述多株单克隆抗体,主要特征为:包括但不限于三株或者三株以上的单克隆抗体。
所述确定两两配对的实验可以是但不限于ELISA和涉及到双抗体夹心实验筛选出的成对单克隆抗体等。
与现有技术相比,本发明具有以下特点:
传统的胶乳增强免疫比浊方法是用胶乳微球标记多克隆抗体,但是多克隆抗体能与多种抗原表位结合,因此多克隆抗体的特异性较差。单一的单克隆抗体只识别某一特定抗原表位,因此单克隆抗体的特异性较高,但是这种超高的特异性会使敏感性降低,所以我们设计了利用多株单克隆抗体进行检测的方法,这种方法即克服了多克隆抗体特异性低的缺点,又克服了单一的单克隆抗体敏感性低的缺点,而且我们利用可以相互两两配对的单克隆抗体更加增加了检测的敏感性。
附图说明
以下结合附图及实施例对本发明作进一步描述。
图1为一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法流程示意图。
图2为胶乳微球包被三株单克隆抗体、胶乳微球包被多克隆抗体和ELISA三种方法检测血清中GP73含量的ROC曲线。
具体实施方式
以下结合实例对本发明作进一步描述:
本发明公布了一种基于多株相互两两配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法,以多株可以相互两两配对的单克隆抗体修饰胶乳微球,进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原,即可获得样本中抗原含量信息。在本发明的一个较佳的实例中,以羧基化的胶乳微球包被三株两两配对的单克隆抗体,在全自动生化分析仪上进行信号的检测。
实施例:以肝癌肿瘤标志物GP73蛋白为对象进行检测。
1.在胶乳微球上包被单克隆抗体。将107nm的胶乳微球(100μL with 5%wt/vol)分散于50mM的HEPES溶液(pH 7.0)中,加入三株单克隆抗体(0.5mg/mL)在摇床上孵育30min。加入0.5mg/mL的NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)和EDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl carbodiimide hydrochloride)孵育30min后用1%的封闭液BSA(Bovine Serum Albumin)封闭30min。胶乳微球包被的抗体分散在含有1%BSA的Tris-HCl(1.0Mm,pH 6.8)中,超声至溶液透光。试剂保存在4℃待用。
2.样本检测。样本检测在自动生化分析仪中进行,10μL的样本和240μL的试剂1(10mM Tris-HCl(pH 7.0),150mM NaCl,0.01%Tween-20and PEG-6000)加入到反应盘中,孵育5min后,加入试剂2(胶乳微球包被的单克隆抗体)启动免疫比浊反应。反应5min后记录570nm波长处第5min和第10min处吸光度的变化。
3.免疫比浊检测结果如图2所示。胶乳微球包被三株单克隆抗体的反应体系检测肝癌血清样本中GP73的敏感性和特异性(96.7%和93.3%)均高于胶乳微球包被多克隆抗体(94.6%和72.4%)和ELISA(70.0%和83.3%)。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何形式上的限制,任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,依据本发明的技术实质,对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等,均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法,其特征在于:以单克隆抗体修饰胶乳微球,进行胶乳增强免疫比浊方法检测对应抗原,从而获得样本中抗原含量信息;其中所采用的单克隆抗体为多株单克隆抗体,且所述多株单克隆抗体相互两两配对。
2.根据权利要求1所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法,其特征在于:所述多株单克隆抗体包括三株或者三株以上的单克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法,其特征在于:所述两两配对的单克隆抗体是通过筛选出的成对单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的基于多株相互配对单克隆抗体的胶乳增强免疫比浊检测方法,其特征在于:所述两两配对的单克隆抗体是通过利用双抗体夹心实验筛选出的成对单克隆抗体。
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