CN106680481A - 一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡 - Google Patents

一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与20‑30μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素‑蛋白偶联物的浓度为0.05‑0.4mg/mL；控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.5‑2mg/mL。本发明具有检测速度快、检测灵敏度高、安全性较高、检测成本低、对操作员要求不高等特点，可用于实验室和现场的残留检测，提高食品安全检验工作的效率与准确率。

Description

一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，具体是一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡。
背景技术
黄曲霉毒素 (Aflatoxin，AF）属于黄曲霉毒素类的一种，均为二氢呋喃香豆素的衍生物，是食品中广泛存在的一种高致癌性真菌毒素，是黄曲霉(Asperillusflavus)和寄生曲霉(Asperillus parasiticus)的二次代谢产物。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。国内外检测AF的方法有微柱法、薄层色谱法（TLC）、液相色谱法（LC）、ELISA等。但这些检测方法对操作人员的专业技术要求高、前处理方法复杂、检测时间长、需昂贵仪器的辅助以及单个样品检测成本高等特点不能广泛的应用于大量样品的快速筛查。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测速度快、检测灵敏度高、安全性较高、检测成本低的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与20-30μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.05-0.4mg/mL；控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.5-2mg/mL。
作为本发明进一步的方案：黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为2-5μg/mL。
作为本发明进一步的方案：硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的包被量为0.8-1.5μL/cm。
作为本发明进一步的方案：控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的包被量为0.8-1.5μL/cm。
作为本发明进一步的方案：所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.08-0.2mg/mL。
作为本发明进一步的方案：控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.8-1.5mg/mL。
作为本发明进一步的方案：所述检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取1-5g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡3-20min，1500-5000r/min离心3-10min，取上清0.3-1mL与0.3-1mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米90μL-150μL，5-10min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明具有检测速度快、检测灵敏度高、安全性较高、检测成本低、对操作人员专业要求不高等特点，可应用于实验室和现场的残留检测，有利于提高食品安全检验工作的效率与准确率。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本发明实施例中，一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与20μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为2μg/mL。所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.05mg/mL；包被量为0.8μL/cm。控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.5mg/mL，包被量为0.8μL/cm。
上述检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取1g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡3min，1500r/min离心3min，取上清0.3mL与0.3mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米90μL，5min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
实施例2
本发明实施例中，一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与30μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为5μg/mL。所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.4mg/mL；包被量为1.5μL/cm。控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为2mg/mL，包被量为1.5μL/cm。
上述检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取5g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡20min，5000r/min离心10min，取上清1mL与1mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米150μL，10min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
实施例3
本发明实施例中，一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与22μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为3μg/mL。所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.08mg/mL；包被量为1μL/cm。控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.8mg/mL，包被量为1μL/cm。
上述检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取2g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡10min，2000r/min离心5min，取上清0.5mL与0.5mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米100μL，6min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
实施例4
本发明实施例中，一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与25μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为4μg/mL。所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.2mg/mL；包被量为1.2μL/cm。控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为1.5mg/mL，包被量为1.2μL/cm。
上述检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取4g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡15min，4000r/min离心8min，取上清0.8mL与0.8mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米120μL，8min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
取黄曲霉毒素污染的玉米，分别按实施例1-4分别进行样品处理。将每个浓度（0μg/kg、0.1μg/kg、0.3μg/kg、0.5μg/kg、0.8μg/kg、1μg/kg）的污染样品随机分为四组，每组10个样品（平行样不分开），分别使用实施例1-4的黄曲霉毒素检测卡进行检测，以95%出现阳性结果的最低浓度作为试剂盒的检测灵敏度。
四组检测卡对阴性玉米样本的阳性检出率均为0%；黄曲霉毒素添加浓度为0.1μg/kg 玉米样本的阳性检出率为3.5%；黄曲霉毒素添加浓度为0.3μg/kg玉米样本的阳性检出率为98%；黄曲霉毒素添加浓度为0.5μg/kg玉米样本的阳性检出率为98%；黄曲霉毒素添加浓度为0.8μg/kg玉米样本的阳性检出率为98%；黄曲霉毒素添加浓度为1μg/kg时，玉米样本的阳性检出率均为100%。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (7)

1.一种检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，包括：样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸，所述样品垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜NC膜及吸水纸设置在PVC胶板上；其特征在于，金标抗体结合垫上设置的胶体金颗粒标记的黄曲霉毒素单克隆抗体是黄曲霉毒素单克隆抗体与20-30μm的胶体金颗粒通过物理方法结合在一起的产物；所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.05-0.4mg/mL；控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.5-2mg/mL。
2.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，黄曲霉毒素单克隆抗体标记量为2-5μg/mL。
3.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的包被量为0.8-1.5μL/cm。
4.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的包被量为0.8-1.5μL/cm。
5.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，所述硝酸纤维素膜NC膜的检测线上包被的黄曲霉毒素-蛋白偶联物的浓度为0.08-0.2mg/mL。
6.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，控制线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为0.8-1.5mg/mL。
7.根据权利要求1所述的检测玉米中黄曲霉毒素的检测卡，其特征在于，所述检测卡的检测方法，包括以下步骤：
将玉米粉碎至20目，取1-5g玉米放入样品管中，加入抽提液5mL，震荡3-20min，1500-5000r/min离心3-10min，取上清0.3-1mL与0.3-1mL超纯水混匀备用；加样孔中加入处理好的玉米90μL-150μL，5-10min后读取观察窗显示的结果，在质控线显色的情况下，如果包被黄曲霉毒素包被抗原的条带显色，即判定该玉米为黄曲霉毒素的阳性样品。
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