CN106550763B - 一种蝉花孢子粉的人工培养方法 - Google Patents
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本发明涉及一种蝉花孢子粉的人工培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1，将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触；步骤2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养；步骤3，对孢子粉进行采收。该方法以吸湿材料为载体培养孢子粉，工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。
Description
技术领域
本发明涉及一种蝉花孢子粉的的人工培养方法，具体涉及一种以吸湿材料为载体的培养蝉花孢子粉的的培养方法。
背景技术
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界(FUNGI)的子囊菌门(Ascomycot)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、棒束孢属(Isaria)，是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。蝉花具有独特而广泛的功效，如改善肾功能，抗肿瘤，调节免疫***，滋补强壮，提高细胞能力、抗疲劳，降血压、血糖，解热、镇痛、改善睡眠，改善脂质代谢，促进造血，抗真菌，抗衰老等。
蝉花孢子是蝉花的繁殖器官，孢子在孕育期，集中了蝉花培养物的全部营养，由此而生的蝉花孢子粉是一种优质、特效的高营养品。蝉花孢子纯粉中，蛋白质含量高达41.6克，占其营养素值的近70％，是典型的高蛋白食物。孢子粉属无胆固醇食物，饱和脂肪酸含量仅达7.04克，且不饱和脂肪酸含量是其1.86倍。同时膳食纤维高达34.35克，是其营养素值的1.37倍。这对于对于防治便泌、利于减肥、预防结肠和直肠癌、促进钙吸收、降低血脂、预防冠心病有重要的作用。在孢子粉中维生素D的含量奇高，高达886微克，是其营养素NRV含量的177.2倍，维生素D又称钙化醇、抗佝偻病维生素，是类固醇衍生物，含环戊烷多氢菲结构。维生素D的功能是维持正常的钙、磷代谢，因而对骨骼的正常发育有极重要的作用，缺乏时不仅会出现软骨症，阻碍生长，还会严重影响繁殖机能。孢子粉中矿物质元素钙、钾、镁、锰、铁、锌、锰含量较高。孢子粉中氨基酸总量达23.8％，必须氨基酸占总氨基酸含量33.7％，在植物蛋白中是很高的，完全可以满足人们生活的需要。且在植物蛋白中常见的几种限制性氨基酸，如Lys(赖氨酸),Thr(苏氨酸),Val(缬氨酸),Met(蛋氨酸)含量较高。
实验研究表明，金蝉花孢子粉醇提物(金蝉花孢子粉)和野生金蝉花粗多糖(粗多糖)对体外培养的人胃癌HGC27、人白血病K562、PBL985/GPD、人横纹肌肉瘤RD、人***Siha、Hela、人胰腺癌SW1990、人胶质瘤LN229及人回盲肠癌ccl-244细胞等9株肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。
关于孢子粉的培养，现有技术是在蝉花固体培养中，通过增加光照、提高培养温度、降低培养湿度等方法来提高培养物上孢子粉的产量。培养基都是用孢梗束培养的培养基。培养方法难度大且收率低，耗时长。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蝉花孢子粉的人工培养方法，该方法以吸湿材料为载体培养孢子粉，工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种蝉花孢子粉的人工培养方法，该方法包括如下步骤：
步骤1，将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触；
步骤2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养；
步骤3，对孢子粉进行采收。
进一步，步骤1所述吸湿载体为对种子液具有吸附功能的材料，如纱布、棉布、无纺布、白坯布、土布等。
进一步，步骤1所述的接触方法可以是将吸湿载体直接浸润在种子液中，也可以是将种子液均匀涂布于载体上。
进一步，步骤1所述种子液中加入麦麸、黄豆粉、玉米粉、小麦粉等能够增加培养基粘性的成分；更进一步，其加入量为1～3％(w/v)。
进一步，步骤2培养过程中将吸湿载体置于密封环境中。
进一步，步骤2暗培养过程中将吸湿载体置于密封环境中，光培养过程中将吸湿载体置于开放的环境中。
进一步，步骤2培养过程中将吸湿载体置于培养架上，培养架层高15～18cm。
进一步，步骤2暗培养条件为温度20～24℃，相对湿度80～90％；光培养条件为温度23～27℃，相对湿度90～95％。
进一步，步骤3在对孢子粉进行采收前调整相对湿度为55～60％。
进一步，步骤3在孢子粉采收时将载体装入塑料袋中抖落孢子并收集，以防止孢子扩散继而污染环境。
进一步，步骤1所述液体培养包括摇瓶培养、种子罐培养、发酵罐培养中的任一一种或几种方法；所述液体培养的培养基为蝉花培养过程中常用的液体培养基，如马铃薯-蔗糖-琼脂培养基(PSA)、马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(PDA)、马铃薯-葡萄糖-水培养基(PSB)、酵母浸出粉-复合氨基酸-白砂糖培养基(SAAY)、酵母浸出粉-白砂糖-大豆水解蛋白培养基等；优选酵母浸出粉-复合氨基酸-白砂糖培养基(SAAY)。
本发明中所述蝉花(Isaria cicadae Miquel)是广布种，广泛分布在我国秦岭-淮河以南的18个省、市、区。在我国长江以南的亚热带和热带地区，且多在低洼地带及滇藏高原的金沙江、怒江、澜沧江和雅鲁藏布江等河谷地带。只要在其生长季节，每年的6-8月，按照一般中药材的采集方法都可采到，是现有技术中已知菌种，并可以从商业途径购买获得。本发明实施例采用CN102851353A公开的蝉拟青霉菌株[Paecilomyces cicadae(Miq.)Samson]，已于2009年11月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453。
本发明的有益效果：
1、工艺简单，节能、节材。关于孢子粉的培养，现有技术采用孢梗束培养的固体培养基，通过增加光照和提高培养温度来提高孢梗束上孢子粉的产量，该方法需要制备固体培养基，且需要增加光照和培养温度，工艺复杂，成品高，难度大。本发明方法将吸湿载体直接与种子液接触，无需制备固体培养基，无需增加光照和温度，工艺简单，大大减少了能耗。
2、培养周期短。现有技术通过固体培养方法，在转为光培养后20天才能产生孢子，而本发明方法转为光培养后仅3～5天孢子就能布满吸湿载体，大大缩短了培养周期。
3、产孢量高，孢子粉质量好。在单位时间和空间内，本发明方法的产孢量明显高于现有固体培养方法，且本发明方法不影响孢子粉质量，其有效成分含量与固体培养的孢子粉相当。
实验例1 本发明方法与常规固体培养方法比较
取实施例1液体培养得到的种子液，分别按如下三种方法培养孢子粉，比较三种方法的产孢量、培养周期以及三种方法获得的孢子粉质量。
方法一：取实施例1液体培养得到的种子液，加入3％黄豆粉，按实施例8的方法进行培养；
方法二：取实施例1液体培养得到的种子液，加入3％麦麸煮汁，按实施例11的方法进行培养；
方法三：取实施例1液体培养得到的种子液，按对照实施例的方法进行培养。
结果见表1。
表1 两种培养方法比较结果
| 培养方法 | 方法一 | 方法二 | 方法三 |
| 产孢量(g/m<sup>3</sup>)/20d | 448 | 301 | 238 |
| 固体培养周期(天) | 5 | 5 | 20 |
| 蛋白质(g) | 45.33 | 43.20 | 41.6 |
| 膳食纤维(g) | 36.00 | 34.57 | 34.35 |
| 维生素D(μg) | 890 | 870 | 886 |
| 氨基酸总量(％) | 24.0 | 23.9 | 23.8 |
方法一、二为本发明采用纱布培养，方法三为采用固体培养基进行培养，通过比较可以看出，在菌种来源和培养条件均相同的情况下：
1、从培养周期看，方法一、二仅为5天，而方法三为20天，本发明方法相对于现有固体培养方法培养周期明显缩短；
2、从产孢量看，在单位时间(20天)和单位空间(m3)内，方法一、二分别为448g和301g，方法三为238g，本发明方法明显高于现有固体培养方法；
3、从孢子粉质量看，不同方法培养得到的孢子粉其蛋白质、膳食纤维、维生素D和氨基酸含量均无显著差异，说明本发明方法培养的孢子粉质量与现有固体培养方法相当。
综上所述，本发明工艺简单、周期短、产孢量高，且孢子粉质量高，相对于现有的固体培养具有明显的优势。
附图说明
图1吸湿载体
图2培养网
图3于培养架上密封环境下暗培养
图4于培养架上开放环境下光培养
具体实施方式
以下实例中，培养室地面喷洒25％新洁尔灭，臭氧消毒30min。实验材料全部灭菌，包括无菌服，纱布，燕尾夹，不锈钢桶，塑料袋，培养网等。
实施例1 液体培养
培养基配方：酵母粉浸出粉0.5％，复合氨基酸1％，白砂糖3.5％，余量补水至100％；
培养方法：摇瓶培养；培养条件为温度22℃、150转/分摇床中培养72h；待培养液呈***或出现小米粒状的小菌丝球时停止培养，得到种子液。
实施例2 液体培养
培养基配方与培养方法同实施例1，区别在于在培养得到的种子液中加入3％的麦麸煮汁。
实施例3 液体培养
培养基配方与培养方法同实施例1，区别在于在培养得到的种子液中加入3％黄豆粉。
实施例4 液体培养
培养基配方与培养方法同实施例1，区别在于在培养得到的种子液中加入2％的麦麸煮汁。
实施例5 液体培养
培养基配方与培养方法同实施例1，区别在于在培养得到的种子液中加入1％的麦麸煮汁，余量补水至100％；
培养方法：同实施例1。
实施例6 液体培养
培养基配方与培养方法同实施例1，区别在于在培养得到的种子液中加入1％的黄豆粉，余量补水至100％；
培养方法：同实施例1。
实施例7 液体培养
培养基配方：酵母浸出粉3％，白砂糖3％，大豆水解蛋白0.5％余量补水至100％；
培养方法：同实施例1，在培养得到的种子液中加入3％的小麦粉。
实施例8 孢子粉培养方法
步骤1，将实施例1～7任一的种子液倒入不锈钢桶，用三层纱布载体(如图1)充分浸润，稍作沥干，置于培养网上(见图2)；
步骤2：暗培养：将培养网放置于塑料袋中，用燕尾夹封口，然后置于层高为15cm左右的培养架上(每1m的高度可置放6层)，于暗室中进行暗培养(见图3)，培养温度22℃，湿度85％；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养(3-4天)；
光培养：将培养网从塑料袋中移出，直接置于培养架上(即载体上下两面均与空气接触)，转为光培养(见图4)，培养温度25℃，湿度95％；待孢子布满培养物时结束培养(3-5天)。
步骤3，采收：在采收前一天将光培养湿度95％调至60％，以让其自然干燥；在百级层流罩下用小刷子收获孢子粉。
实施例9 孢子粉培养方法
步骤1、3同实施例8，区别仅在于步骤2：
步骤2：暗培养：将培养网放置于塑料袋中，用燕尾夹封口，置于暗室中进行暗培养，培养温度22℃，湿度85％；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养(3-4天)；
光培养：将培养网从塑料袋中移出置于培养盘中(即仅载体上表面与空气接触)，转为光培养，培养温度25℃，湿度95％；待孢子布满培养物时结束培养(3-5天)。
实施例10 孢子粉培养方法
步骤1、3同实施例8，区别仅在于步骤2：
步骤2，暗培养：将培养网放置于塑料袋中，用燕尾夹封口，置于暗室中进行暗培养，培养温度22℃，湿度85％；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养(3-4天)；
光培养：转为光培养，培养温度25℃，湿度95％；待孢子布满培养物时结束培养(3-5天)。
实施例11 孢子粉培养方法
步骤1、3同实施例8，区别仅在于步骤2：
步骤2，暗培养：将培养网置于暗室中进行暗培养，培养温度22℃，湿度85％；待菌丝布满纱布载体时结束暗培养(3-4天)；
光培养：转为光培养，培养温度25℃，湿度95％；待孢子布满培养物时结束培养(3-5天)。
实施例12 孢子粉培养方法
步骤1～3同实施例8，区别仅在于将纱布替换为棉布。
实施例13 孢子粉培养方法
步骤1～3同实施例8，区别仅在于将纱布替换为无纺布。
实施例14 孢子粉培养方法
步骤1～3同实施例8，区别仅在于步骤1将种子液涂布于纱布上。
对照实施例 孢子粉培养方法
液体培养基及培养方法均同实施例1。固体培养基为小麦，按照不同规格容器进行分装(乐扣盒装0.33公斤，方盒装0.5公斤)，加水量为1：1.2，121℃灭菌30分钟，自然冷却。冷却后接种(接入实施例1的种子液)，接种量为10％，在25℃，湿度95％左右的条件下光培养20天。待孢子成熟后干燥收获。
不同培养方法的产孢量
| 液体培养方法 | 孢子粉培养方法 | 产孢量g/m<sup>3</sup> |
| 实施例1 | 对照实施例 | 238 |
| 实施例2 | 对照实施例 | 217 |
| 实施例1 | 实施例11 | 245 |
| 实施例2 | 实施例11 | 301 |
| 实施例3 | 实施例11 | 302 |
| 实施例3 | 实施例10 | 326 |
| 实施例3 | 实施例9 | 374 |
| 实施例3 | 实施例8 | 448 |
| 实施例3 | 实施例12 | 439 |
| 实施例3 | 实施例13 | 447 |
| 实施例3 | 实施例14 | 464 |
| 实施例7 | 实施例14 | 425 |
Claims (4)
1.一种蝉花孢子粉的人工培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
步骤1，将吸湿载体与液体培养得到的菌种种子液充分接触；
步骤2，将接触种子液的吸湿载体先进行暗培养，待布满菌丝体后转为光培养；和
步骤3，对孢子粉进行采收；
其中，步骤1所述种子液中加入能够增加培养基粘性的成分；所述能够增加培养基粘性的成分的加入量为1～3％；
步骤2暗培养过程中将吸湿载体置于密封环境中，光培养过程中将吸湿载体置于开放的环境中；
步骤2暗培养条件为温度20～24℃，相对湿度80～90％；光培养条件为温度23～27℃，相对湿度90～95％；
步骤3在对孢子粉进行采收前调整相对湿度为55～60％。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述吸湿载体为纱布、棉布、无纺布、白坯布、土布中的任意一种。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1所述的接触方法为将吸湿载体直接浸润在种子液中，或将种子液均匀涂布于载体上。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述能够增加培养基粘性的成分为麦麸、黄豆粉、玉米粉、小麦粉中的任意一种或几种。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN104286032A (zh) * | 2014-09-04 | 2015-01-21 | 青岛农业大学 | 一种黄色篮状菌孢子粉的制备方法、黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法 |
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