CN106546755B

CN106546755B - 一种潜血速测用毛细管阵列制备方法及应用

Info

Publication number: CN106546755B
Application number: CN201611014224.3A
Authority: CN
Inventors: 王桦; 姜耀; 张立燕; 刘凤娟; 蔡园园
Original assignee: Qufu Normal University
Current assignee: Qufu Normal University
Priority date: 2016-11-18
Filing date: 2016-11-18
Publication date: 2018-06-29
Anticipated expiration: 2036-11-18
Also published as: CN106546755A

Abstract

本发明涉及一种潜血速测用毛细管阵列制备方法及应用,借助潜血中血红蛋白催化内壁上封装基质的显色反应，以及毛细现象自动吸取样品，实现对潜血快速、灵敏、高通量的可视化检测，首先在毛细管内壁修饰有多孔水凝胶封装的过氧化物酶催化反应基质，制备可视化比色的毛细管阵列，进而通过毛细管的毛细作用自动吸入样品，并利用潜血样品中的血红蛋白催化内壁上水凝胶封装的过氧化物酶基质底物的显色反应，导致毛细管显示出不同程度的蓝色，直接、快速定量或可视化判定样品中血红蛋白含量，具有快速、灵敏、高通量、样品用量少、成本低、可视化等特点。

Description

一种潜血速测用毛细管阵列制备方法及应用

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，涉及一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，并借助血红蛋白特异催化基质显色反应，以及毛细现象自动吸取样液的功能，建立了一种快速、灵敏、高通量的可视化检测潜血的毛细管阵列分析方法。

背景技术

潜血一般出现在人类唾液，尿液和粪便中，通常红血细胞通常被损坏，肉眼下或显微镜下无法观察到有红血球的存在。一般而言可以归因于下列三项原因，一是炎症，一是结石，再则是肿瘤。因此发展一个简单的，准确的潜血检测试验的分析方法对许多临床疾病的早期诊断是非常重要的。从历史上看，许多潜血试验的分析或筛选方法已被开发，主要包括放射性分析，物理分析，免疫分析和化学分析等方法。基于放射性分析测定潜血是非常具体的，定量的，但太复杂，不能常规使用。基于显微镜检测的红细胞计数法虽然实用且准确，但是仍不能快速检测。免疫试验检测潜血的选择性高、重现性好，但耗时长，需要专业化操作。近年来，越来越多地关注被吸引到高灵敏度、高选择性的化学方法检测潜血，通过对从潜血释放的血红蛋白分子中血红素部分的伪过氧化物酶活性的研究。然而，这些当前化学方法检测潜血试验仍然有费时，成本效率低下和复杂仪器的操作等一些缺点，仍不适合的常规监测和快速诊断的应用。到目前为止，已经发展了很多快速即时分析方法的检测平台，据我们所知，这些即时的检测平台几乎不适用于临床的潜血检测。

玻璃毛细管是内径等于或小于1.0 毫米的玻璃细管。毛细管的一些特殊性质及成本低等优点而被应用于各种研究分析中。例如，医院中常见的通过毛细管的作用力自动的取血检测。再则，毛细管电泳是一类以毛细管为分离通道、以高压高直流电场为驱动力的常见液相分离分析技术，包含电泳、色谱及其交叉内容。此外，基于毛细管的传感器也被应用于光化学检测和电化学分析，例如《Determination of pyruvic acid by using enzymicfluorescence capillary analysis》提出了一种基于酶催化反应的丙酮酸“荧光毛细分析法”。该方法采用一个专用支架和常规医用毛细管，用以替代传统荧光池, 实现了对微量样品中丙酮酸的分析，但需要外来动力以吸取样品，并需使用大型荧光仪才能完成测定操作。但是，目前这些分析方法中，毛细管仅是样品分离通道或活性物质（如酶）的固定化表面，样品的吸入尚需使用流动注射或泵等辅件，均未涉及毛细管的本身作用力，同时，不仅涉及前述的活性物质（如酶）的使用局限性，而且尚需依赖外来信号检测仪器（如荧光仪和电化学仪）才能完成定量分析，不能快速、直观地获取定量分析结果。

TMB作为一种低致癌毒性的过氧化酶催化反应底物，常用于设计酶免疫分析法和酶联免疫吸附检验法，广泛应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测等领域；例如，潜血和指纹检测；唾液中酒精的快速检测；尿联试纸的配制；肝炎病毒检测；妊娠检测试验；血液和尿液中葡萄糖、血红蛋白、白蛋白的快速测定；粪便隐血试验；血液中粒细胞值的测定、类固醇、性激素的检测；酶活性的测定；抗原、抗体及遗传物质的分析、检测；生物样品的染色；水质检测(余氯、亚硝酸盐等)。但是，由于TMB显色基质本身的不稳定性，和现配现用的局限性，使得这种化学检测方法有一定的缺陷，不能长时间保存和不能即时检测。

发明内容

本发明针对现有技术存在的上述缺点，提出一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，利用明胶和对羟基苯丙酸形成多孔水凝胶，用以封装过氧化物酶催化反应基质于毛细管内壁，制得对潜血敏感的功能化毛细管阵列。

同时，本发明还提供了上述制得的毛细管阵列的应用，借助血红蛋白特异催化基质显色反应，以及毛细现象自动吸取样液的功能，建立了一种快速、灵敏、高通量的可视化检测潜血的毛细管阵列分析方法，实现对微量人体唾液、尿液和粪便中潜血的高通量可视化检测。

本发明技术方案如下：

一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，步骤包括：

（1）采用食人鱼洗液清洗毛细管的内外管壁，再用超纯水和乙醇清洗，40℃烘干，然后用4.0-8.0 wt%的十六烷基三甲基硅烷（APTES）的乙醇溶液浸泡6 h，取出后用无水乙醇清洗，干燥，备用；

（2）将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）按质量比3:1混合后，再加入0.2-1.2倍质量的对羟基苯丙酸（HPA ）混合均匀，然后将上述混合物加入到MES缓冲液中，浓度为6-11mg/ mL，室温下搅拌15min，得到含有EDC-NHS活化的HPA的混合液，然后向上述混合液中加入0.5 - 6 % (w/v）的明胶（Gel），在搅拌下加热到50℃，待明胶全部溶解后，冷却到室温，并且搅拌过夜，得到Gel-HPA水凝胶；

（3）将得到的Gel-HPA水凝胶采用透析膜在去离子水中透析6h，然后采用EDC-NHS活化，随后加入双氧水至浓度为0.1 -16 mM，得到双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶；

（4）向步骤（3）制得的双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶中按体积比1:2加入1 -80mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺－二甲基亚砜（TMB-DMSO），得到水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质；

（5）将步骤（1）处理过的毛细管浸入步骤（4）得到的水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质中，反应24h后，取出毛细管，采用去离子水冲洗两次，干燥，制得内壁修饰了装填双氧水的Gel-HPA-TMB复合材料的毛细管；

（6）上述毛细管处理方法应用于批量毛细管制备，得到潜血速测用毛细管阵列。

步骤（1）中，所述的毛细管优选医用毛细管。

步骤（1）中，所述的食人鱼洗液为体积比7:3的浓硫酸和双氧水混合溶液；

步骤（1）中，所述十六烷基三甲基硅烷的乙醇溶液浓度优选为6 wt%。

步骤（2）中，优选加入1.0倍质量的对羟基苯丙酸（HPA），优选加入4.0 %（w/v）的明胶。

步骤（2）中，MES缓冲液浓度优选50.0 mM。

步骤（3）中，所述双氧水浓度优选10 mM。

步骤（3）中，所述的透析膜规格为10 KDa。

步骤（3）中，所述的EDC-NHS为质量比3:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合物，Gel-HPA水凝胶与EDC-NHS质量比为1：0.2-1.2。

步骤（4）中，所述的3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）浓度优选20 mg/mL。

上述步骤中的溶液，溶剂均为二次蒸馏水。

本发明上述潜血速测用毛细管阵列的应用，适用于无色和浅色的潜血样品中潜血含量的速测，所述的无色和浅色的潜血样品为唾液、尿液和处理后的粪便。

所述潜血样品中潜血含量的速测，方法为采用制得的毛细管阵列***含有潜血的样品液中，通过毛细现象自动吸取样品，借助潜血中红蛋白催化毛细管内壁上基质的显色反应，确定样品中潜血的含量。

上述潜血样品中潜血含量的速测方法，具体步骤包括：

1）建立标准曲线

取血红蛋白标准品，加入到相同体积的PBS缓冲液中，制得浓度梯度的血红蛋白的标准样品溶液，将上述制备的潜血速测用毛细管阵列***配制的标准品溶液中，待毛细管中液面不再变化，取出毛细管，观察毛细管颜色变化并测定其吸光度值，得吸光度和血红蛋白浓度的标准曲线；

2）待测样品中潜血含量的测定

取不同质量的血红蛋白标准品，添加到待测样品中，制得浓度梯度的血红蛋白的潜血样品溶液，将潜血速测用毛细管***待测样品溶液中，利用毛细现象自动吸取样品，待毛细管中液面不再变化后，取出毛细管，观察毛细管内颜色变化并测定其吸光度值，得吸光度和血红蛋白浓度的标准曲线，根据吸光度和血红蛋白浓度的标准曲线，确定样品中潜血的含量。

步骤1）中，标准品溶液浓度范围优选0.1 -120 µg/mL。

步骤2）中，待测样品溶液，优选浓度范围为0.1-120 µg/mL。

上述速测方法中，所述的PBS缓冲液为0.1 mol/L，pH 7.4。

本发明采用水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质的毛细管阵列, 实现对唾液、尿液、粪便中潜血快速、灵敏、高通量的可视化检测的速测原理：采用明胶和对羟基苯丙酸并借助双氧水氧化途径，制备高粘性多孔水凝胶，用以通过共价结合方式封装过氧化物酶催化反应基质TMB，以及包埋双氧水，于毛细管内壁上，制得一系列对潜血敏感的功能化毛细管阵列，进而借助毛细现象自动吸取样品，以及潜血中血红蛋白催化内壁上封装基质的显色反应，实现对唾液、尿液、粪便中潜血快速、灵敏、高通量的可视化检测。利用毛细现象自动吸取样液，特别是潜血中血红蛋白的高效过氧化物酶性能，特异性催化毛细管内壁上封装底物的显色反应，实现对唾液、尿液、粪便等体液与***物中潜血的快速、灵敏、高通量、高选择性定量检测和可视化分析。

本发明与现有技术相比其有益效果在于：

（1）本发明快速检测方法通过水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质于毛细管内壁，进而借助被测样品中血红蛋白与管壁上过氧化物酶催化反应基质引起颜色变化，不涉及复杂的光电换能器的使用；同时，利用毛细管的毛细作用实现样品的吸入，无需使用流动注射或泵等辅件；

（2）本发明中高粘性多孔凝胶基质的应用可以让过氧化物酶催化反应基质牢固地固定在毛细管内壁，同时显著提高了固定基质的稳定性，特别是为酶催化显色反应提供了高度敏感的检测微环境，并极大地加快对目标物的响应速度；

（3）本发明采用的医用毛细管具有廉价、便携、并呈现一体化设计特点，既是被测液容器和反应容器，又是功能识别分子的固定化载体；其定量方式直观、快捷，可通过目视颜色变化直接判定潜血程度；

（4）本发明利用潜血中血红蛋白的高效过氧化物酶性能，通过其特异催化毛细管内壁上封装底物的显色反应，达到对体液和***物中潜血的高选择性定量和可视化分析；

（5）本发明操作简单、检测时间短、灵敏度高（检测限在0.10 µg/mL）、试样用量少（20 µL），真正实现了微量样品的微量分析，并适于对唾液、尿液、粪便中血红蛋白含量的快速、灵敏、微量化、方便现场携带、以及即时速测。

附图说明

图1为本发明潜血速测用毛细管阵列快速检测潜血的方法的示意图；

图2为血红蛋白催化不同的显色底物显色反应比较的结果（其中a底物为TMB和H₂O₂，b底物为在柠檬酸缓冲液中的TMB和H₂O₂，c底物为水凝胶封装的TMB和H₂O₂，d底物为在柠檬酸缓冲液中的水凝胶封装的TMB和H₂O₂）；

图3为潜血速测用毛细管阵列制备中明胶，HPA，TMB，H₂O₂用量对显色结果的影响；

图4为潜血速测用毛细管阵列在潜血检测中不同离子强度，温度，时间，pH下对结果的影响；

图5为潜血速测用毛细管阵列在潜血检测中不同干扰物质对检测结果的影响；

图6为实施例4潜血速测用毛细管阵列在标准潜血样品中检测吸光度的标准曲线；

图7为实施例5潜血速测用毛细管阵列在唾液潜血中检测吸光度的标准曲线；

图8为实施例6潜血速测用毛细管阵列在尿液潜血中检测吸光度的标准曲线；

图9为实施例7潜血速测用毛细管阵列在粪便潜血中检测吸光度的标准曲线；

图10为功能化比色毛细管稳定性探究。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步描述本发明，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。

实施例1

一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，步骤包括：

（1）采用食人鱼洗液（体积比7:3的浓硫酸和双氧水混合溶液）清洗医用毛细管的内外管壁，再用超纯水和乙醇清洗，40℃烘干，然后用6.0 wt%的十六烷基三甲基硅烷（APTES）的乙醇溶液浸泡6 h，取出后用无水乙醇清洗，干燥，备用；

（2）将75.0 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和25.0 mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合，再加入100mg对羟基苯丙酸（HPA ）混合均匀，然后将上述混合物加入到20 mL MES缓冲液 (50.0 mM)中，室温下搅拌15min，得到含有EDC-NHS活化的HPA的混合液，然后向上述混合液中加入4% (w/v）的明胶（Gel），在搅拌下加热到50℃，待明胶全部溶解后，冷却到室温，并且搅拌过夜，得到Gel-HPA水凝胶；

（3）将得到的Gel-HPA水凝胶采用透析膜（10 KDa）在去离子水中透析6h，然后采用EDC-NHS（质量比3:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合物）活化，Gel-HPA水凝胶与EDC-NHS质量比为1：1.2，随后加入双氧水至浓度为10mM，得到双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶；

（4）向步骤（3）制得的双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶中按体积比1:2加入20mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺－二甲基亚砜（TMB-DMSO），得到水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质；

（6）上述毛细管处理方法应用于批量毛细管制备，得到潜血速测用毛细管阵列，冷藏待用。

实施例2

一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，步骤包括：

（2）将75.0 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和25.0 mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合，再加入20mg对羟基苯丙酸（HPA ）混合均匀，然后将上述混合物加入到20 mL MES缓冲液 (50.0 mM)中，室温下搅拌15min，得到含有EDC-NHS活化的HPA的混合液，然后向上述混合液中加入0.5% (w/v）的明胶（Gel），在搅拌下加热到50℃，待明胶全部溶解后，冷却到室温，并且搅拌过夜，得到Gel-HPA水凝胶；

（3）将得到的Gel-HPA水凝胶采用透析膜（10 KDa）在去离子水中透析6h，然后采用EDC-NHS（质量比3:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合物）活化，Gel-HPA水凝胶与EDC-NHS质量比为1：0.2，随后加入双氧水至浓度为0.1mM，得到双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶；

（4）向步骤（3）制得的双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶中按体积比1:2加入1mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺－二甲基亚砜（TMB-DMSO），得到水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质；

实施例3

一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，步骤包括：

（2）将75.0 mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和25.0 mg N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）混合，再加入120mg对羟基苯丙酸（HPA ）混合均匀，然后将上述混合物加入到20 mL MES缓冲液 (50.0 mM)中，室温下搅拌15min，得到含有EDC-NHS活化的HPA的混合液，然后向上述混合液中加入6% (w/v）的明胶（Gel），在搅拌下加热到50℃，待明胶全部溶解后，冷却到室温，并且搅拌过夜，得到Gel-HPA水凝胶；

（3）将得到的Gel-HPA水凝胶采用透析膜（10 KDa）在去离子水中透析6h，然后采用EDC-NHS（质量比3:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合物）活化，Gel-HPA水凝胶与EDC-NHS质量比为1：1.0，随后加入双氧水至浓度为16mM，得到双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶；

（4）向步骤（3）制得的双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶中按体积比1:2加入80mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺－二甲基亚砜（TMB-DMSO），得到水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质；

一、本发明基于毛细管的毛细作用与水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质的酶催化反应快速检测潜血的方法可行性验证：

根据图2显示，对不同的显色底物显色反应比较的结果，包括a底物为TMB和H₂O₂，b底物为在柠檬酸缓冲液中的TMB和H₂O₂，c底物为水凝胶封装的TMB和H₂O₂，d底物为在柠檬酸缓冲液中的水凝胶封装的TMB和H₂O₂，可以证明所制备的掺杂H₂O₂的Gel-HPA-TMB 复合材料与商业上购买的TMB-H₂O₂显色基质在功能上基本一致，并且显色效果更明显。

二、本发明基于毛细管的毛细作用与水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质的酶催化反应快速检测潜血的方法选择性测试：

将内壁修饰了有多孔水凝胶封装的过氧化物酶催化反应基质的实施例1制备的潜血速测用毛细管阵列分别***相同浓度（120 µg/mL ）的17中干扰物质的溶液中，其中包括Fe²⁺、Fe³⁺、Cl^-、Na⁺、K⁺、Ca²⁺、氨、葡萄糖、蛋白质、尿素、尿酸、维生素C、酪氨酸、组氨酸、丝氨酸、赖氨酸，利用毛细现象自动吸取样品，待毛细管中液面不再变化，观察毛细管中颜色变化并测其吸光度，结果如图5所示，由此可知，制备的比色毛细管对血红蛋白有特殊的相应信号，可实现对血红蛋白进行特异性检测。

实施例4：建立标准样品（PBS缓冲液）中吸光度和血红蛋白浓度的标准曲线：

将用实施例1制备的潜血速测用毛细管阵列的毛细管分别***含有浓度依次为0.10, 0.50, 1.0, 6.0, 24, 40, 62, 80, 100, 120 µg/mL血红蛋白的PBS缓冲液中，利用毛细现象自动吸取样品，待毛细管中液面不再变化，观察毛细管颜色变化并测定毛细管吸光度值，得到血红蛋白浓度-吸光度值的标准曲线（如图6所示）。

实施例5：唾液潜血样品中潜血含量的速测：

采用实施例1制备的潜血速测用毛细管阵列，测定唾液潜血样品中潜血含量：

1）建立标准曲线

将不同浓度的血红蛋白添加到唾液样品中，制得已知血红蛋白含量的具有浓度梯度的唾液样品溶液。标准曲线建立方法同实施例4，得到血红蛋白浓度-吸光度值的标准曲线及其定量方程式y =0.09808 + 0.00642x（如图7所示）。

2）唾液潜血样品的速测

唾液潜血样品，测定其吸光度值为0.3201，通过计算得实际潜血含量为34.58 µg/mL。

实施例6：尿液潜血样品中潜血含量的速测

采用实施例1制备的潜血速测用毛细管阵列，测定尿液潜血样品中潜血含量：

1）建立标准曲线

将不同浓度的血红蛋白添加到尿液样品中，制得已知血红蛋白含量的具有浓度梯度的尿液样品溶液。标准曲线建立方法同实施例4，得到血红蛋白浓度-吸光度值的标准曲线及其定量方程式y =0.10543 + 0.00588x（如图8所示）。

2）尿液潜血样品的速测

尿液潜血样品，测定其吸光度值为0.1532，通过计算得实际潜血含量为8.12 µg/mL。

实施例7：粪便潜血样品中潜血含量的速测

采用实施例1制备的潜血速测用毛细管阵列，测定粪便潜血样品中潜血含量：

1）建立标准曲线

取1.0 g粪便样品的等分试样加入到离心管中，依次加入10.0 mL PBS缓冲液，然后分别添加不同浓度的血红蛋白到处理的粪便样品中，制得已知血红蛋白含量的具有浓度梯度的粪便样品溶液。标准曲线建立方法同实施例4，得到血红蛋白浓度-吸光度值的标准曲线及其定量方程式y =0.06137+0.00754x（如图9所示）；

2）粪便潜血样品的速测

粪便潜血样品，测定其吸光度值为0.4121，通过计算得实际潜血含量为46.52 µg/mL。

Claims

1.一种潜血速测用毛细管阵列制备方法，其特征在于，步骤包括：

（1）采用食人鱼洗液清洗毛细管的内外管壁，再用超纯水和乙醇清洗，40℃烘干，然后用4.0-8.0 wt% 的十六烷基三甲基硅烷的乙醇溶液浸泡6 h，取出后用无水乙醇清洗，干燥，备用；

（2）将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺按质量比3:1混合后，再加入0.2-1.2倍质量的对羟基苯丙酸混合均匀，然后将上述混合物加入到MES缓冲液中，浓度为6-11mg/ mL，室温下搅拌15min，得到含有EDC-NHS活化的HPA的混合液，然后向上述混合液中加入0.5 - 6 % (w/v）的明胶，在搅拌下加热到50℃，待明胶全部溶解后，冷却到室温，并且搅拌过夜，得到Gel-HPA水凝胶；

（4）向步骤（3）制得的双氧水掺杂的活化Gel-HPA水凝胶中按体积比1:2加入1 -80 mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺－二甲基亚砜，得到水凝胶封装过氧化物酶催化反应基质；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的毛细管为医用毛细管；所述的食人鱼洗液为体积比7:3的浓硫酸和双氧水混合溶液；所述十六烷基三甲基硅烷的乙醇溶液浓度为6 wt%。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，加入1.0倍质量的对羟基苯丙酸，加入4.0 %（w/v）的明胶；MES缓冲液浓度为50.0 mM。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，所述双氧水浓度为10 mM；

所述的透析膜规格为10 KDa；所述的EDC-NHS为质量比3:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合物，Gel-HPA水凝胶与EDC-NHS质量比为1：0.2-1.2。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，所述的3,3',5,5'-四甲基联苯胺浓度为20 mg/mL。

6.一种根据权利要求1所述制备方法制备的非诊断目的的潜血速测用毛细管阵列的应用，其特征在于：适用于无色和浅色的潜血样品中潜血含量的速测，所述的无色和浅色的潜血样品为唾液、尿液和处理后的粪便。