CN106478655B

CN106478655B - 具有抗肿瘤活性的藤黄酸类化合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN106478655B
Application number: CN201510542836.9A
Authority: CN
Inventors: 陈莉; 冯俊俊; 李鹏飞
Original assignee: Nankai University
Current assignee: Nankai University
Priority date: 2015-08-31
Filing date: 2015-08-31
Publication date: 2019-07-09
Anticipated expiration: 2035-08-31
Also published as: CN106478655A

Abstract

本发明涉及具有抗肿瘤活性的藤黄酸类化合物及其制备方法和用途，属于药物化学领域。本发明在充分认识已有化合物活性的基础上，设计合成了多种藤黄酸类衍生物，并对其进行抗肿瘤生物活性研究，获得改善的抗肿瘤化合物。本发明具体提供通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐、其药物组合物、制备方法以及用于制备治疗或预防疾病的药物组合物的用途：

Description

具有抗肿瘤活性的藤黄酸类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种新型抗肿瘤活性的藤黄酸类衍生物及其制备方法和应用，属于药物化学领域。

背景技术

藤黄，为藤黄科植物藤黄所分泌的干燥树脂，中医传统将其用于消肿、化毒、止血。近年来研究表明，藤黄还具有抗肿瘤作用，在临床上用于治疗乳腺癌、淋巴肉瘤、皮肤癌均取得一定疗效，因此受到高度关注。

藤黄酸(gambogic acid，GA)为从中药藤黄中分离得到的具有抗肿瘤活性的化合物，其具有抗瘤谱较广、毒性较低的特点，能够选择性地杀死癌细胞，且对正常的造血***和白细胞影响较小。该化合物与作为高效低毒的抗肿瘤药物，可通过不同机制发挥抗肿瘤作用，包括诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡，抑制端粒酶和拓扑异构酶活性，抗肿瘤血管生成和肿瘤转移，逆转多药耐药等。然而，藤黄酸还存在水溶性较差、易降解、且生物利用度较低等亟待改善的不足。为此，科学家们对藤黄酸类衍生物的开发表现出浓厚的兴趣，对此类化合物的探索也不断深入。

本发明在充分认识已有化合物活性的基础上，设计合成了多种藤黄酸类衍生物，并对其进行抗肿瘤生物活性研究，获得改善的抗肿瘤化合物。

发明内容

本发明提供通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R¹为H或选自任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-₁₀环烷基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b；

R²选自O、S、OH、SH或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基氧基-、C_2-6烯基氧基-、C_3-10环烷基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基氧基-、C_6-14芳基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基氧基-、C_1-6烷基硫基-、C_2-6烯基硫基-、C_3-10环烷基硫基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基硫基-、C_6-14芳基硫基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基硫基-、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b，R²与C-12间的表示单键或双键，其中当R²为O或S时，其与C-12形成双键，当R²为以上定义中的其它基团时，其与C-12形成单键；

R³选自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-C₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b；

R⁴选自-CHO、-CH＝N-OR⁵、-CH＝N-OC(＝O)-R⁶、-CH＝N-OC(＝O)O-R⁷、-CH＝N-OC(＝O)-NH-R⁸、-C(＝O)O-N＝CH-R⁹；

R⁵选自H、OH或任选被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基氧基-；连接R⁵的C-4与C-3间的表示单键或双键，其中当R⁵为H时，C-4与C-3形成双键，当R⁵不为H时，C-4与C-3形成单键；

R^a独立地选自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、＝O、NR^cR^d、C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-C₁₀环烷基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、C_1-6烷基氧基-、C_2-6烯基氧基-、C₃-C₁₀环烷基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基氧基-、C_6-14芳基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基氧基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b；

R^b选自任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-；

R^c和R^d相互独立地选自H或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-₁₀环烷基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-。

根据本发明，R¹优选为H或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-₁₀环烷基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b；

R²优选选自O、S、OH、SH或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基氧基-、C_2-6烯基氧基-、C₃-C₁₀环烷基氧基-、C_1-6烷基硫基-、C_2-6烯基硫基-、C₃-C₁₀环烷基硫基-、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b，R²与C-12间的表示单键或双键，其中当R²为O或S时，其与C-12形成双键，当R²为其它基团时，其与C-12形成单键；

R³优选选自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b。

根据本发明，R¹更优选为H或任选被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b；

R²更优选选自O、S、OH、SH或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基氧基-、C_1-6烷基硫基-、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b，R²与C-12间的表示单键或双键，其中当R²为O或S时，其与C-12形成双键，当R²为其它基团时，其与C-12形成单键；

R³更优选选自F、Cl、Br、OH、SH或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C₃-₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b；

可选地，R¹选自H、C_1-6烷基-或者被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基-；

R²选自O、-OH或者C_1-6烷基-；

R³选自任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C₃-₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-或者-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b。

根据本发明，通式(I)化合物可以选自下式(I’)和(I”)所示的化合物：

其中，基团R¹至R⁵各自独立地选自通式(I)中的定义。

根据本发明，通式(I)化合物还可以示例性地选自下式(II’)～(VII’)及式(II”)～(VII”)所示的化合物：

其中，R¹～R²和R⁵分别独立地选自上述通式(I)中的定义，R³选自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN或任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C₃-C₁₀环烷基-、NR^cR^d、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b；

R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰彼此独立地选自H、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、任选被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C_3-10环烷基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-；

R^a、R^b、R^c、R^d分别独立地具有上述通式(I)中的定义。

优选地，本发明通式(I)、(I’)、(I”)、(II’)～(VII’)及(II”)～(VII”)所示的化合物包括其光学纯化合物、立体异构体混合物或其药学上可接受的盐。

术语定义和解释

术语“C_1-6烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的线性的或支化的饱和一价烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基或1,2-二甲基丁基或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2、3或4个碳原子(“C_1-4烷基”)，例如甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基，更特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C_1-3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。

术语“C_2-6烯基”应理解为优选表示线性的或支化的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5或6个碳原子，特别是2或3个碳原子(“C_2-3烯基”)，应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1,1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基。

术语“C_3-10环烷基”应理解为表示饱和的一价单环或双环烃环，其具有3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子。所述C_3-10环烷基可以是单环烃基，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃基如十氢化萘环。

术语“3-10元杂环烷基”意指饱和的一价单环或双环烃环，其包含1-3个选自N、O和S杂原子。所述杂环烷基可以通过所述碳原子中的任一个或氮原子(如果存在的话)与分子的其余部分连接。特别地，所述杂环烷基可以包括但不限于：4元环，如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基；5元环，如四氢呋喃基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基；或6元环，如四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、二噻烷基、硫吗啉基、哌嗪基或三噻烷基；或7元环，如二氮杂环庚烷基环。任选地，所述杂环烷基可以是苯并稠合的。所述杂环基可以是双环的，例如但不限于5,5元环，如六氢环戊并[c]吡咯-2(1H)-基环，或者5,6元双环，如六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基环。所述含氮原子环可以是部分不饱和的，即它可以包含一个或多个双键，例如但不限于2,5-二氢-1H-吡咯基、4H-[1,3,4]噻二嗪基、4,5-二氢噁唑基或4H-[1,4]噻嗪基环，或者，它可以是苯并稠合的，例如但不限于二氢异喹啉基环。

术语“C_6-14芳基”应理解为优选表示具有6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的一价芳香性或部分芳香性的单环、双环或三环烃环(“C_6-14芳基”)，特别是具有6个碳原子的环(“C₆芳基”)，例如苯基；或联苯基，或者是具有9个碳原子的环(“C₉芳基”)，例如茚满基或茚基，或者是具有10个碳原子的环(“C₁₀芳基”)，例如四氢化萘基、二氢萘基或萘基，或者是具有13个碳原子的环(“C₁₃芳基”)，例如芴基，或者是具有14个碳原子的环(“C₁₄芳基”)，例如蒽基。

术语“5-14元杂芳基”应理解为包括这样的一价单环、双环或三环芳族环系，其具有5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个环原子，特别是5或6或9或10个碳原子，且其包含至少一个可以相同或不同的杂原子(所述杂原子是例如氧、氮或硫)，并且，另外在每一种情况下可为苯并稠合的。特别地，杂芳基选自噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、***基、噻二唑基、噻-4H-吡唑基等以及它们的苯并衍生物，例如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并咪唑基、苯并***基、吲唑基、吲哚基、异吲哚基等；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，例如喹啉基、喹唑啉基、异喹啉基等；或吖辛因基、吲嗪基、嘌呤基等以及它们的苯并衍生物；或噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基等。

除非另有说明，所述杂芳基或亚杂芳基包括其所有可能的异构形式，例如其位置异构体。因此，对于一些说明性的非限制性实例，术语吡啶基或亚吡啶基包括吡啶-2-基、亚吡啶-2-基、吡啶-3-基、亚吡啶-3-基、吡啶-4-基和亚吡啶-4-基；或者，术语噻吩基或亚噻吩基包括噻吩-2-基、亚噻吩-2-基、噻吩-3-基和亚噻吩-3-基。

术语“取代的”意指所指定的原子上的一个或多个氢被所列出基团取代，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。

术语“任选被……取代”指可以无取代或被所列出的基团取代。

环系的取代基指与芳族或非芳族环系连接的取代基，例如所述取代基代替所述环系上可用的氢。

本发明各通式化合物的取代基定义中使用的术语“一次或多次”应理解为包括一次、两次、三次、四次或五次，特别是一次、两次、三次或四次，更特别是一次、两次或三次，例如一次或两次。

本发明还提供式(I)所示藤黄酸类衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括选自下列的一个或多个步骤的组合：

步骤1)：

可通过本领域已知的方法，例如经过酯化、还原、氧化反应，由化合物(a)制备化合物(b)。其中：

在酯化反应中，优选在催化剂如1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)的存在下，将化合物(a)与醇(例如C_1-12的醇)反应以制备化合物(a)的酯；

在还原反应中，将化合物(a)的酯在还原剂的存在下反应，得到相应的还原产物，所受还原剂优选二异丁基氢化铝；

在氧化反应中，将还原产物在氧化剂的存在下反应，得到化合物(b)。

作为示例，可通过例如申请号201310682918.4、公开号CN103613602A的中国发明专利说明书第[0004]至[0019]段记载的方法进行，该申请全文记载的内容并入本申请发明内容。

根据本发明具体的实施方案，步骤1)包括以下步骤a)～c)：

a)：在催化剂的作用下，化合物(a)(如藤黄酸)与醇类(如甲醇)缩合得到化合物(a)的酯(如藤黄酸酯)；

反应温度可以为例如-30℃～30℃，反应优选在有机溶剂中和氮气保护下进行，有机溶剂优选二氯甲烷，催化剂优选1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和/或4-二甲氨基吡啶(DMAP)；

b)：在有机溶剂中化合物(a)的酯在还原剂的存在下反应，得到相应的还原产物；

反应温度可以为例如-78℃～-40℃，反应优选在有机溶剂中进行，有机溶剂优选为二氯甲烷，还原剂为二异丁基氢化铝；

c)：步骤b)的还原产物在氧化剂的存在下反应，得到化合物(b)；

反应温度可以为例如-30℃～30℃，反应优选在有机溶剂中进行，有机溶剂优选为二氯甲烷，氧化剂优选四甲基哌啶氧化物(TEMPO)和/或二乙酸碘苯(BAIB)。

如果需要，进行步骤2)：

其中，所述氧化通过本领域已知的任何合适反应进行。作为实例，所述氧化可以选自例如奥本奥尔氧化(Oppenauer Oxidation，氧化剂为Al(O-i-Pr)₃/丙酮)、戴斯-马丁氧化反应(Dess-Martin Oxidation，氧化剂为戴斯-马丁过碘烷或DMP)或斯文氧化反应(Swern Oxidation，氧化剂为DMSO)；

或

其中，所述醚化通过本领域已知的任何合适方法进行。作为实例，所述醚化可以通过脱水反应或威廉逊合成法(Williamson Synthesis)进行。例如将化合物(b)与醇或硫醇在酸存在下脱水，或将化合物(b)转化为醇钠或硫醇钠化合物后与卤代化合物(如卤代烷烃)反应。

步骤3)：

其中，所述反应优选在碱性条件下进行；更优选地，所述反应在碱的存在下进行；

步骤4)：

其中，各反应优选在碱性条件下进行；更优选地，所述反应在碱的存在下进行；

或

所述反应优选在催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和/或碱的存在下进行；

或者使用相同的方法，由下列化合物(e”)和(f”)制备相应的化合物(III”)～(VII”)：

以及，步骤5)：

任选地，将步骤1)～4)所得的化合物与适当的酸或碱反应制备其药学上可接受的盐；

其中，R¹～R³、R⁵至R¹⁰分别具有独立选自通式(I)中的定义；

R^2a选自OH或SH；

R^2b选自O或S；

R^2c选自任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基氧基-、C_2-6烯基氧基-、C₃-C₁₀环烷基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基氧基-、C_6-14芳基氧基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基氧基-、C_1-6烷基硫基-、C_2-6烯基硫基-、C₃-C₁₀环烷基硫基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基硫基-、C_6-14芳基硫基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基硫基-、-OC(＝O)R^b、-OS(＝O)₂R^b，其中R^a和R^b独立选自式(I)定义的基团；

X选自氯、溴或者碘；

Z选自氢、氯或者溴。

在本发明的制备方法中，如果需要，可以使用本领域的任何合适的方法将具有反应活性的基团保护后再进行反应。作为实例，可用作醇羟基保护基的可以为例如乙酰基、2-甲氧基乙氧甲基醚基、甲氧甲基醚基、对甲氧基苄基醚、特戊酰基、四氢吡喃等；可用作氨基保护基的可以为例如苄氧羰基、叔丁氧羰基、苄基、对甲氧苯基等；可用作羰基保护基的可以为例如缩醛与缩酮、偕二酸酯、二噻烷等；可用作羧基保护基的可以为甲基酯基、苄基酯基、叔丁基酯基、硅基酯基等。

例如，可将步骤1)化合物(a)的R^2b基团保护，再经过酯化、还原、脱保护反应，得到化合物(c)。

上述各步骤可以在合适的溶剂存在下进行。所述溶剂是在反应条件下呈惰性的任何有机溶剂，包括选自例如下列的一种或多种的混合物：酮，例如丙酮和甲基乙基酮；无环醚和环醚，例如***和四氢呋喃；酯，例如乙酸乙酯或者乙酸丁酯；碳氢化合物，例如苯、甲苯、二甲苯、己烷和环己烷；氯化烃，例如一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷和氯苯；醇，例如甲醇、乙醇、正-丙醇、异丙醇，正-丁醇或者叔-丁醇；或者其它的溶剂，例如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)、乙腈或者吡啶；

所述碱可以为有机碱、无机碱或其混合物，例如选自碱金属或者碱土金属碳酸盐或碳酸氢盐，例如碳酸锂、碳酸钠，碳酸钾、碳酸钙、碳酸铯、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸氢钙；碱金属醇盐，例如叔-丁醇钠或者叔丁醇钾；碱金属氢化物，例如氢化钠或者氢化钾；氨化物，例如双(三甲基甲硅烷基)氨基锂、双(三甲基甲硅烷基)氨基钾或者二异丙基氨基锂(LDA)；有机胺，例如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N,N-二异丙基乙胺、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]癸-7-烯(DBU)、吡啶或者4-N,N-二甲基氨基吡啶；或者磷腈碱三乙胺、吡啶、哌啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)；

所述碱具体可以选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸铯、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠中的一种或多种的混合物；

其中，所述酸可以为有机酸、无机酸或其混合物，例如选自下列的一种或多种：羧酸，如乙酸或者三氟乙酸；磺酸，例如甲磺酸、三氟甲磺或者对-甲苯磺酸；盐酸、硫酸、磷酸、膦酸或者磷酸。

上述各步骤可独立地在合适的温度，例如-30℃～30℃(如室温)下进行。

作为实例，本发明化合物可通过选自下列一个或多个步骤的组合制备：

其中，R¹～R³和R⁵各自独立选自通式(I)中的定义；

R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰彼此独立地选自H、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、任选被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基-、C_2-6烯基-、C_3-10环烷基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的3-10元杂环烷基-、C_6-14芳基-、包含1-3个选自N、O和S杂原子的5-14元杂芳基-。

作为实例，本发明化合物的制备方法包括选自下列的一个或多个步骤组合：

步骤a)：在有机溶剂中，氮气保护下，在氧化剂的作用下，化合物8氧化得到化合物2；有机溶剂优选二氯甲烷，氧化剂优选为(1,1,1-三乙酰氧基)-1,1-二氢-1,2-苯碘酰-3(1H)-酮(Dess-Martin氧化剂，DMP)；

步骤b)：在有机溶剂中，氮气保护下，在碱的作用下，化合物9与盐酸羟胺反应得到化合物10；有机溶剂优选为乙醇，碱优选为吡啶、三乙胺；

步骤c)：在有机溶剂中，在碱的作用下，化合物10与卤代烃反应，得到肟醚类化合物3；有机溶剂优选为四氢呋喃(THF)、二甲基甲酰胺(DMF)；碱优选为氢氧化钠(NaOH)、氢化钠(NaH)等；

步骤d)：在有机溶剂中，在碱和催化剂的作用下，化合物10与酰氯或者羧酸反应，得到相应的肟酯类化合物4；有机溶剂优选为二氯甲烷(DCM)；所述的碱可以是有机碱和无机碱，优选为吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氢氧化钠等，催化剂优选1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)；

步骤e)：在有机溶剂中，在碱的作用下，化合物10与氯甲酸酯反应，得到相应的碳酸肟酯类化合物5；有机溶剂优选为二氯甲烷(DCM)；所述的碱可以是有机碱和无机碱，优选为吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氢氧化钠等；

步骤f)：在有机溶剂中，在碱的作用下，化合物10与取代异氰酸酯反应，得到相应的碳酰胺肟酯类化合物6；有机溶剂优选为二氯甲烷(DCM)；所述的碱可以是有机碱和无机碱，优选为吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺等；

步骤g)：在-30℃～30℃(如室温)条件下，在有机溶剂中，在碱和催化剂的作用下，藤黄酸与各种肟反应，得到相应的藤黄酸肟酯类化合物7；有机溶剂优选为二氯甲烷(DCM)；所述的碱可以是有机碱和无机碱，优选为吡啶、4-二甲氨基吡啶(DMAP)、氢氧化钠等，催化剂优选1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)。

根据本发明，本领域技术人员还可将上述制备方法中各步骤1)～5)及各步骤a)～g)中任意的一个或多个步骤及其具体条件进行结合或组合，或与本领域技术人员公知的步骤及具体条件进行结合或组合，所得到的方法同样应当包含在本发明的范围内。

本发明还提供包含一种或多种本发明化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。可利用这些组合物通过向有此需要的患者给药来实现期望的药理学作用。就本发明的目的而言，患者是需要治疗具体病症或疾病的包括人在内的哺乳动物。因此，本发明包括这样的药物组合物，其包含药学上可接受的载体和药学有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐。

药学上可接受的载体优选是这样的载体，其在与活性成分的有效活性一致的浓度下对患者相对无毒且无害，以致于由所述载体引起的任何副作用不会破坏所述活性成分的有益作用。化合物或其药学上可接受的盐的药学有效量优选是对正在治疗的具体病况产生结果或者产生影响的量。可使用包括速释、缓释和定时释放制剂在内的任意有效的常规剂量单位形式，将本发明的化合物与本领域公知的药学上可接受的载体一起以如下方式给药：口服、肠胃外、局部、鼻腔、眼部、舌下、直肠、***给药等。

对于口服给药，可将所述化合物或其药学上可接受的盐配制成固体或液体制剂，例如胶囊剂、丸剂、片剂、含锭剂(troche)、锭剂(lozenge)、熔胶剂(melt)、散剂、溶液剂、混悬剂或乳剂，并且可根据本领域已知的用于制备药物组合物的方法来制备。固体单位剂型可为胶囊剂，其可为普通的硬胶囊型或软胶囊型，包含例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂(例如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉)。

在另一实施方案中，可将本发明的化合物或其药学上可接受的盐和常规片剂基质(例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)一起并与如下物质组合压制成片剂：粘合剂(例如***胶、玉米淀粉或明胶)、用于辅助给药后片剂的分解和溶出的崩解剂(例如土豆淀粉、藻酸、玉米淀粉和瓜尔胶、黄蓍树胶、***胶)、用于提高片剂制粒的流动性并且防止片剂材料与片剂模具和冲头的表面粘附的润滑剂(例如滑石、硬脂酸或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌)、染料、着色剂，以及用于改善片剂的感官性质并使它们更容易被患者接受的调味剂(例如薄荷油、冬青油或樱桃香精)。用于口服液体剂型的适合的赋形剂包括磷酸二钙和稀释剂，例如水和醇(例如乙醇、苯甲醇和聚乙烯醇)，添加或不添加药学上可接受的表面活性剂、助悬剂或乳化剂。可以存在各种其它物质作为包衣或者用于改变剂量单位的物理形式。例如可用虫胶、糖或二者将片剂、丸剂或胶囊剂包衣。

还可将本发明的化合物以所述化合物的注射剂量进行肠胃外给药，即皮下、静脉内、眼内、滑膜内、肌内或腹膜内给药，所述注射剂量优选在含有药物载体的生理学可接受的稀释剂中，所述药物载体可为无菌液体或液体的混合物，所述液体例如水，盐水，葡萄糖水溶液和相关的糖溶液，醇例如乙醇、异丙醇或十六醇，二醇例如丙二醇或聚乙二醇，甘油缩酮例如2,2-二甲基-1,1-二氧戊环-4-甲醇，醚例如聚乙二醇400(PEG400)，油，脂肪酸，脂肪酸酯或脂肪酸甘油酯或乙酰化脂肪酸甘油酯，所述稀释剂添加或不添加有药学上可接受的表面活性剂，例如肥皂或洗涤剂，助悬剂例如果胶、卡波姆、甲基纤维素、羟丙甲纤维素或羧甲基纤维素，或乳化剂和其它药学辅剂。

用于肠胃外制剂的示例性表面活性剂是聚乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯类，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及环氧乙烷与疏水性基质的高分子量加合物，所述疏水性基质由环氧丙烷和丙二醇缩合形成。

还可将本发明的组合物以用于药物的直肠给药的栓剂的形式给药。可通过将药物与在常温下为固体但是在直肠温度下为液体并且因此可在直肠中溶化而释放所述药物的适合的无刺激性的赋形剂混合来制备这些组合物。此类物质是例如可可脂和聚乙二醇。

用于肠胃外给药的控释制剂包括本领域已知的脂质体微球、聚合物微球和聚合物凝胶制剂。

可能需要或必须通过机械递送装置将所述药物组合物递送至患者。用于递送药剂的机械递送装置的构造和用途是本领域公知的。例如将药物直接给药至脑的直接技术通常涉及将药物递送导管置入患者的脑室***以绕过血脑屏障。

可将本发明的化合物作为单一药剂给药或者与一种或多种其它药剂组合给药，其中所述组合不会引起不可接受的不良反应。本发明还涉及此类组合。例如，可将本发明的化合物与已知的化疗剂或抗癌剂(例如抗过度增殖性疾病或其它适应症的药剂等)以及与它们的混合物和组合进行组合。其它适应症药剂包括但不限于抗血管生成剂、有丝***抑制剂、烷化剂、抗代谢剂、DNA-嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物应答调节剂或抗激素。

一般而言，将细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与本发明的化合物或组合物组合使用会起到以下作用：

(1)与单独给药任一种药剂相比在减少肿瘤生长或者甚至消除肿瘤方中产生更好的功效，

(2)允许给药更少量的所给药的化疗药剂，

(3)提供化疗剂治疗，其被患者良好地耐受并且具有的有害药理学并发症比在单一药剂化疗和某些其它组合疗法中所观察到的少，

(4)允许治疗范围更广的哺乳动物(特别是人)的不同癌症类型，

(5)提供受治疗患者中更高的响应，

(6)与标准的化疗治疗相比提供受治疗患者中更长的存活时间，

(7)提供更长的肿瘤发展时间，和/或

(8)与其它癌症药剂组合产生拮抗效应的已知情况相比，得到至少与单独使用的药剂一样好的功效和耐受性。

本发明的另一方面提供如上文所述的化合物用于制备治疗或预防疾病的药物组合物的用途。

所述疾病是由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病，或者伴有不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病，特别地，所述疾病为例如血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移，如白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头部和颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其它妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和***瘤在内的泌尿***肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。更特别地，所述疾病为癌症如肺癌。

在本发明的语境中，特别是如本文所使用的在“不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答”的语境中，术语“不适当的”应理解为优选表示比正常应答更弱或更强并且与所述疾病的病理相关、引起或导致所述疾病的病理的应答。

优选地，所述用途是用于疾病的治疗或预防，其中所述疾病是血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移。

本发明还提供本发明的化合物及其组合物在制备治疗哺乳动物的过度增殖性病症的药物中的用途。可利用化合物来抑制、阻断、降低、减少等细胞增殖和/或细胞***和/或引起凋亡。过度增殖性病症包括但不限于银屑病、瘢痕疙瘩和其它影响皮肤的增生、良性***增生(BPH)、实体瘤例如乳腺癌、呼吸道癌、肺癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌以及它们的远端转移。所述病症还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。

这些病症已在人类中得到良好的表征，但是还以相似的病因学存在于其它哺乳动物中，并且可通过给药本发明的药物组合物进行治疗。

本文件通篇提及的术语“治疗”具有本领域技术人员公知的常规含义，例如为了抵抗、减轻、减少、缓解、改善诸如肉瘤的疾病或病症的情况等的目的来管理或护理个体。

本发明通式(I)所示化合物对人白血病、肝癌和肺癌肿瘤细胞株具有良好的抑制活性，其对A-549人肺癌细胞的IC₅₀值<0.05μg/mL。具体而言，本发明实施例化合物对A-549人肺癌细胞的IC₅₀值≤0.02μg/mL。作为优选，本发明实施例化合物12、13、14、18、20、25-30对A-549人肺癌细胞的IC₅₀值≤0.01μg/mL。

并且，本发明化合物对正常细胞还具有较低的细胞毒性。具体而言，本发明化合物，例如实施例化合物12-19、21、27、37、38、40、41、42对HELF-6的IC₅₀值<0.4μg/mL。

剂量和给药

基于已知用来评价用于治疗过度增殖性病症和血管生成病症的化合物的标准实验室技术，通过标准毒性试验以及通过用于确定对哺乳动物中上文所述病症的治疗的标准药理学试验，并且通过将这些结果与用于治疗这些病症的已知药物的结果进行比较，可容易地确定用于治疗每一种期望适应症的本发明的化合物的有效剂量。在这些病症之一的治疗中所给药的活性成分的量可根据如下考量而发生很大变化：所使用的具体化合物和剂量单位、给药方式、疗程、受治疗患者的年龄和性别以及被治疗病症的性质和程度。例如，待给药的活性成分的总量一般为约0.001mg/kg-约200mg/kg体重/天，并且优选约0.01mg/kg-约20mg/kg体重/天。临床上有用的给药方案会是每日一次至三次的给药至每四周一次的给药。本发明的化合物或其药学上可接受的盐或酯或组合物的期望的治疗方式和给药数量可由本领域技术人员利用常规的治疗试验来确定。

具体实施方式

以下通过示例性的具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。但不应将这些实施例解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，实施例中使用的原料和试剂均为市售物质。

实施例1 化合物2的制备

称取单甲醚8(2.08g,3.31mmol)溶于40mL的二氯甲烷，加入DMP(2.813g,6.62mmol)室温反应5小时，饱和的Na₂S₂O₃和饱和的NaHCO₃溶液淬灭反应。无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物2，1.83g，产率88.4％。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ9.54(s,1H),7.44(d,J＝6.8Hz,1H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),6.13(t,J＝8.0Hz,1H),5.57(d,J＝10.2Hz,1H),5.20(t,J＝5.9Hz,1H),5.08(t,J＝6.5Hz,1H),3.78(s,3H),3.55–3.45(m,1H),3.44–3.26(m,2H),3.13(dd,J＝14.9,9.8Hz,1H),2.88(dd,J＝14.8,6.5Hz,1H),2.55(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.4,4.3Hz,1H),2.12–1.97(m,2H),1.88–1.80(m,1H),1.78(s,3H),1.73(s,3H),1.66(s,6H),1.63–1.58(m,1H),1.56(s,3H),1.51(s,3H),1.48(s,3H),1.42–1.37(m,1H),1.31(s,3H).ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,189.4,174.1,159.3159.1,155.4,140.6,137.3,135.5,133.6,132.4,131.9,127.8,123.8,121.6,116.5,112.7,110.6,107.2,90.5,84.1,83.8,80.9,62.1,49.0,46.8,41.9,30.0,29.0,27.4,26.7,25.7,25.7,25.7,22.8,22.0,18.2,17.6,16.4.ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₃₉H₄₇O₇627.3322,found for[M+H]⁺627.3305.

实施例2 化合物12的制备

将羟胺的盐酸盐(50.2mg,0.723mmol)溶于5mL无水乙醇，滴入吡啶(0.194mL,2.41mmol)待无固体时即羟胺的盐酸盐被释放完全时，加入醛11(370mg,0.602mmol)的乙醇溶液，室温反应过夜，水淬灭反应，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物12，0.321g，产率84.7％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),7.90(s,1H),7.64(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.56(t,J＝7.7Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.13–5.02(m,2H),3.41–3.29(m,2H),3.30–3.20(m,1H),3.08(dd,J＝5.3,2.2Hz,1H),2.96–2.86(m,1H),2.58(dd,J＝14.8,5.8Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.1Hz,1H),2.28–2.21(m,1H),2.18(d,J＝10.1Hz,1H),2.09–2.01(m,2H),1.81(s,3H),1.79–1.76(m,1H),1.75(s,3H),1.74(s,3H),1.65(s,6H),1.61–1.57(m,1H),1.56(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.25(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,161.2,158.1,157.6,148.0,142.1,131.8,131.7,131.6,131.0,129.1,124.5,123.8,122.5,116.0,107.5,102.5,100.2,92.5,84.4,84.2,81.2,70.6,49.1,42.1,36.9,32.2,30.2,28.5,27.8,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,19.2,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/zcalcd for C₃₈H₄₆NO₇628.3275,found for[M-H]⁺628.3285.

实施例3 化合物13的制备

同实施例2，不同在于用化合物8代替化合物11反应，得到化合物13，产率93.1％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.88(s,1H),7.52(d,J＝7.1Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.60(t,J＝7.4Hz,1H),5.53(d,J＝10.1Hz,1H),5.11(s,1H),5.06(t,J＝6.9Hz,1H),3.84(s,3H),3.45(dd,J＝14.6,7.6Hz,1H),3.39–3.31(m,1H),3.23(s,1H),2.87(br,1H),2.58(dd,J＝14.7,7.1Hz,1H),2.35–2.26(m,2H),2.24–2.12(m,3H),2.08–1.99(m,2H),1.83–1.72(m,10H),1.70–1.59(m,7H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.43(s,3H),1.37–1.29(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ175.7,160.1,158.8,155.3,147.9,140.6,133.5,132.0,131.9,131.3,129.2,127.3,123.8,122.1,116.7,112.6,109.9,107.4,92.5,84.5,84.0,80.5,70.8,62.2,49.0,42.0,36.7,32.2,30.2,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.7,22.4,19.3,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₃₉H₅₀NO₇644.3578,found for[M+H]⁺644.3578.

实施例4 化合物14的制备

同实施例2，不同在于用化合物2代替化合物11反应，得到化合物14，产率72.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.64(s,1H),7.58(s,1H),7.38(d,J＝6.9Hz,1H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),5.51(d,J＝10.2Hz,1H),5.28(t,J＝6.7Hz,1H),5.24–5.15(m,1H),5.06(t,J＝7.1Hz,1H),3.79(s,3H),3.50–3.43(m,1H),3.42–3.33(m,2H),2.75(dd,J＝14.9,9.7Hz,1H),2.63(dd,J＝15.1,5.3Hz,1H),2.49(d,J＝9.3Hz,1H),2.31(dd,J＝13.4,4.5Hz,1H),2.09–1.98(m,2H),1.83–1.74(m,4H),1.71(s,3H),1.68(s,3H),1.65(s,3H),1.62–1.59(m,1H),1.57(s,3H),1.55(s,3H),1.42(s,3H),1.38–1.35(m,1H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.8,174.3,159.5,159.0,155.4,147.2,135.7,133.0,132.3,131.9,130.5,129.2,127.2,123.8,122.0,116.7,112.7,110.2,107.2,90.4,84.2,83.5,80.6,62.1,49.1,46.8,42.1,30.0,29.1,27.7,27.7,25.8,25.7,25.7,22.7,22.1,19.0,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₃₉H₄₈NO₇642.3431,found for[M+H]⁺642.3430.

实施例5 化合物15的制备

将NaH(25.36mg,1.06mmol)溶于10mL DMF，在冰水浴条件下将溶有底物12(133mg,0.211mmol)的DMF溶液滴加到前者混合物中，冰水浴反应30min后移至室温，滴加入异丙基溴(0.1mL,1.06mmol)，再移至50℃的油浴反应11小时。水淬灭反应，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物15，0.62mg，产率81.9％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.01(s,1H),7.82(s,1H),7.63(d,J＝7.2Hz,1H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.53(t,J＝7.6Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–5.02(m,2H),4.28(dq,J＝12.5,6.4Hz,1H),3.38–3.26(m,2H),3.21(s,1H),3.01(s,1H),2.93–2.87(m,1H),2.56(dd,J＝14.3,5.9Hz,1H),2.33(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.17(dd,J＝12.3,9.2Hz,2H),2.10–2.01(m,2H),1.84–1.71(m,10H),1.65(s,3H),1.65(s,3H),1.60(dd,J＝6.9,2.5Hz,1H),1.56(s,3H),1.53(s,3H),1.44(s,3H),1.32–1.24(m,1H),1.21(d,J＝1.8Hz,3H),1.19(d,J＝1.8Hz,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.9,161.2,158.2,157.6,145.9,142.2,132.1,131.8,131.6,131.0,127.8,124.5,123.8,122.6,116.0,107.5,102.6,100.0,92.6,84.4,84.1,81.1,75.4,70.7,49.0,42.0,36.9,32.2,30.3,28.5,27.7,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,21.6,21.6,19.4,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/zcalcd for C₄₁H₅₄NO₈672.3900,found for[M+H]⁺672.3897.

实施例6 化合物16的制备

分别称取底物12(615mg,0.98mmol)，NaOH(78.2mg,1.95mmol)和四丁基溴化铵(TBAB,50.4mg，0.156mmol)，然后加入20mL THF和4mL水，再加入苄溴(0.174mL,1.47mmol)在室温反应8小时，水淬灭反应，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物16，0.447g，产率61.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),7.90(s,1H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.34–7.27(m,5H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.56(t,J＝7.6Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.10–5.05(m,2H),5.04(s,2H),3.34(dd,J＝14.6,7.7Hz,1H),3.27(dd,J＝14.8,5.6Hz,1H),3.22–3.17(m,1H),3.00(d,J＝5.4Hz,1H),2.92–2.86(m,1H),2.55(dd,J＝14.8,5.8Hz,1H),2.32(dd,J＝14.1,4.0Hz,1H),2.20–2.12(m,2H),2.04(dd,J＝15.8,7.8Hz,2H),1.78(s,3H),1.77(s,3H),1.77–1.73(m,1H),1.73(s,3H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.60–1.57(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.30–1.24(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.9,161.2,158.1,157.7,147.0,142.2,137.4,131.8,131.7,131.6,131.0,128.8,128.4,128.4,127.9,124.5,123.9,122.5,116.1,107.5,102.6,100.3,92.5,84.4,84.1,81.1,76.2,70.7,49.1,42.0,36.9,32.3,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,25.0,22.7,21.9,19.3,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₅₃NO₇Na 742.3720,found for[M+Na]⁺742.3720.

实施例7 化合物17的制备

同实施例6，不同在于用化合物14代替化合物12反应，得到化合物17，产率21.2％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.64(s,1H),7.38(d,J＝6.9Hz,1H),7.33–7.25(m,5H),6.67(d,J＝10.2Hz,1H),5.53(d,J＝10.2Hz,1H),5.30–5.20(m,2H),5.05(t,J＝7.1Hz,1H),4.97–4.87(m,2H),3.77(s,3H),3.45(dd,J＝6.7,4.5Hz,1H),3.39–3.32(m,2H),2.70(dd,J＝15.0,9.1Hz,1H),2.59(dd,J＝15.2,6.4Hz,1H),2.49(d,J＝9.3Hz,1H),2.30(dd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.08–1.98(m,2H),1.78–1.73(m,4H),1.71(s,3H),1.69–1.63(m,7H),1.60(s,3H),1.54(s,3H),1.40(s,3H),1.37–1.32(m,1H),1.28(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.7,174.3,159.5,158.9,155.3,146.2,137.7,135.7,133.1,132.2,131.9,130.8,128.8,128.2,128.1,127.6,127.4,123.8,122.0,116.8,112.8,110.2,107.3,90.5,84.2,83.5,80.5,75.9,62.1,49.1,46.8,41.9,30.0,29.0,27.6,27.5,25.7,25.7,25.7,22.6,22.1,19.1,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₆H₅₄NO₇732.3900,found for[M+H]⁺732.3902.

实施例8 化合物18的制备

将底物12(108mg,0.172mmol)溶于5mL CH₂Cl₂，加入(13.8μL,0.172mmol)吡啶，后加入(12.1μL,0.172mmol)乙酰氯，室温反应4小时，水淬灭反应，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物18，71mg，产率61.6％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.99(s,1H),8.12(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.85(t,J＝7.9Hz,1H),5.44(d,J＝10.1Hz,1H),5.06(m,2H),3.35(dd,J＝14.6,7.5Hz,1H),3.28(d,J＝5.5Hz,1H),3.23(s,1H),2.96–2.90(m,1H),2.59(dd,J＝14.7,6.6Hz,1H),2.34(dd,J＝14.0,4.1Hz,1H),2.22–2.14(m,3H),2.15(s,3H),2.04(dd,J＝16.0,7.7Hz,2H),1.87(s,3H),1.83–1.72(m,7H),1.65(s,6H),1.62–1.58(m,1H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.44(s,3H),1.31–1.23(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,168.8,161.3,157.9,157.6,153.1,142.4,134.2,131.9,131.7,130.9,130.8,124.7,123.8,122.4,115.8,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,70.9,49.1,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.6,24.9,22.7,21.9,19.7,19.0,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₀H₅₀NO₈672.3536,found for[M+H]⁺672.3528.

实施例9 化合物19的制备

同实施例8，不同在于用异丁酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物19，产率78.0％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ12.99(s,1H),8.16(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),6.67(d,J＝10.1Hz,1H),5.87(t,J＝7.8Hz,1H),5.44(d,J＝10.1Hz,1H),5.06(t,J＝6.9Hz,2H),3.36(dd,J＝14.6,7.6Hz,1H),3.26(dd,J＝15.1,5.6Hz,1H),3.21(d,J＝5.4Hz,1H),2.98(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.69–2.59(m,2H),2.34(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.23–2.17(m,1H),2.14(dd,J＝14.8,8.2Hz,1H),2.09–2.00(m,2H),1.90(s,3H),1.81–1.72(m,7H),1.68–1.61(m,7H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.34–1.26(m,1H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H),1.23(d,J＝6.8Hz,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,174.3,161.2,158.0,157.6,153.5,142.5,134.0,131.8,131.6,131.0,130.8,124.6,123.8,122.4,115.8,107.4,102.6,100.2,92.5,84.2,84.2,81.3,71.0,49.1,42.0,36.9,32.8,32.5,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.9,22.7,21.9,21.9,19.0,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₂H₅₄NO₈700.3849,found for[M+H]⁺700.3837.

实施例10 化合物20的制备

同实施例8，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物20，产率64.0％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),8.13(s,1H),7.67(t,J＝9.4Hz,1H),7.34–7.26(m,5H),6.67(d,J＝9.8Hz,1H),5.86(s,1H),5.42(t,J＝10.7Hz,1H),5.06(s,2H),3.72(s,2H),3.36(dd,J＝14.6,7.6Hz,,1H),3.27(dd,J＝15.1,5.6Hz,1H),3.20(d,J＝5.2Hz,1H),2.99(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.60(dd,J＝14.3,7.2Hz,1H),2.33(d,J＝13.8Hz,1H),2.21–2.11(m,2H),2.09–1.99(m,2H),1.87(s,3H),1.82–1.72(m,7H),1.68–1.60(m,7H),1.56(s,3H),1.51(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.24(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,169.0,161.3,158.0,157.7,153.6,142.6,134.4,133.3,131.8,131.7,130.9,130.8,129.3,128.6,127.2,124.7,123.8,122.4,115.8,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,71.0,49.1,42.0,39.9,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,19.0,18.3,17.7ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₆H₅₄NO₈748.3849,found for[M+H]⁺748.3843.

实施例11 化合物21的制备

在室温条件下，氮气保护，将底物12(200mg,0.32mmol)溶于10mL二氯甲烷中，分别加入EDCI(73.12mg,0.38mmol)，DMAP(3.88mg,0.032mmol)，最后加入对溴苯甲酸(89.44mg,0.44mmol)，室温反应5h，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析得到化合物21，210mg，产率86.1％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),8.30(s,1H),7.94(d,J＝8.6Hz,1H),7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.61(d,J＝8.6Hz,1H),6.61(d,J＝10.2Hz,1H),5.94(t,J＝7.9Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.23–4.95(m,1H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.30–3.21(m,2H),3.00(d,J＝5.5Hz,1H),2.97–2.91(m,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.2Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.2Hz,1H),2.25–2.16(m,2H),2.06–1.97(m,2H),1.95(s,3H),1.81(s,3H),1.76–1.73(m,1H),1.71(s,3H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.58–1.56(m,1H),1.54(s,6H),1.36(s,3H),1.33–1.26(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,163.1,161.3,157.9,157.6,154.3,142.6,134.8,131.8,131.8,131.7,131.2,130.8,128.4,127.6,124.6,123.8,122.3,115.7,107.3,102.7,100.2,92.6,84.3,84.2,81.3,71.2,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.7,24.8,22.7,21.9,19.1,18.2,17.6.ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₅₁BrNO₈812.2798,found for[M+H]⁺812.2783.

实施例12 化合物22的制备

同实施例11，不同在于用对氟苯甲酸代替对溴苯甲酸反应，得到化合物22，产率72.0％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),8.30(s,1H),8.14–8.05(m,2H),7.68(d,J＝7.1Hz,1H),7.13(t,J＝8.5Hz,2H),6.61(d,J＝10.1Hz,1H),5.92(t,J＝7.7Hz,1H),5.38(d,J＝10.1Hz,1H),5.12–4.99(m,2H),3.42–3.33(m,1H),3.33–3.21(m,2H),3.01(br,1H),2.94(br,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.4Hz,1H),2.34(d,J＝13.5Hz,1H),2.22–2.16(m,2H),2.08–1.98(m,2H),1.95(s,3H),1.81(s,3H),1.76–1.73(m,1H),1.72(s,3H),1.64(s,4H),1.62(s,3H),1.54(s,6H),1.36(s,3H),1.33–1.28(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,166.0,162.9,161.4,157.9,157.6,154.1,142.6,134.6,132.4,131.9,131.7,130.9,130.8,125.0,124.6,123.7,122.3,115.8,115.7,107.4,102.7,100.2,92.6,84.3,84.2,81.4,71.2,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.8,22.7,21.9,19.1,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₅₁FNO₈752.3598,found for[M+H]⁺752.3589.

实施例13 化合物23的制备

同实施例11，不同在于用对硝基苯甲酸代替对溴苯甲酸反应，得到化合物23，产率83.8％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.01(s,1H),8.34–8.30(m,3H),8.26(d,J＝9.0Hz,2H),7.70(d,J＝7.2Hz,1H),6.59(d,J＝10.2Hz,1H),6.00(t,J＝8.0Hz,1H),5.38(d,J＝10.2Hz,1H),5.09–5.00(m,2H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.30–3.20(m,2H),3.00(d,J＝5.6Hz,1H),2.97–2.91(m,1H),2.64(dd,J＝14.6,7.9Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.27–2.18(m,2H),2.05–1.97(m,2H),1.96(s,3H),1.82(s,3H),1.78–1.69(m,4H),1.64(s,3H),1.63(s,3H),1.60–1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.54(s,3H),1.37(s,3H),1.34–1.29(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,162.0,161.4,157.9,157.6,154.8,150.7,142.7,135.7,134.3,131.9,131.8,130.9,130.8,130.5,124.7,123.7,123.6,122.3,115.7,107.3,102.7,100.2,92.6,84.4,84.2,81.4,71.4,49.1,42.0,36.9,32.7,30.1,28.5,27.8,25.7,25.6,24.8,22.7,21.9,19.0,18.2,17.6.ppm；HRMS(EI)m/z calcd forC₄₅H₅₁N₂O₁₀779.3543,found for[M+H]⁺779.3526.

实施例14 化合物24的制备

同实施例11，不同在于用间三氟甲基苯甲酸代替对溴苯甲酸反应，得到化合物24，产率82.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ13.00(s,1H),8.35(s,2H),8.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.85(d,J＝7.7Hz,1H),7.69(d,J＝7.1Hz,1H),7.62(t,J＝7.7Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),5.96(t,J＝7.8Hz,1H),5.37(d,J＝10.1Hz,1H),5.10–4.99(m,2H),3.37(dd,J＝14.7,7.8Hz,1H),3.26(d,J＝10.7Hz,2H),3.02(br,1H),2.94(br,1H),2.66(dd,J＝15.0,7.7Hz,1H),2.35(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.28–2.18(m,2H),2.06–1.96(m,2H),1.95(s,3H),1.82(s,3H),1.77–1.70(m,1H),1.68(s,3H),1.64(s,3H),1.62–1.50(m,10H),1.35(s,3H),1.31–1.26(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.8,162.6,161.3,157.9,157.6,154.6,142.6,135.0,133.0,131.9,131.8,130.8,130.7,129.8,129.8,129.7,129.2,126.6,126.6,124.7,123.7,122.3,115.7,107.4,102.7,100.2,92.6,84.4,84.2,81.4,71.3,49.1,42.0,36.9,32.6,30.1,28.5,27.7,25.7,25.6,24.8,22.7,21.8,19.1,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₆H₅₁F₃NO₈802.3567,found for[M+H]⁺802.3556.

实施例14 化合物25的制备

同实施例8，不同在于用化合物13代替化合物12反应，得到化合物25，产率84.0％。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ8.10(s,1H),7.54(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.2Hz,1H),5.87(t,J＝7.9Hz,1H),5.55(d,J＝10.2Hz,1H),5.09(t,J＝6.4Hz,1H),5.05(t,J＝7.1Hz,1H),3.85(s,3H),3.44(dd,J＝14.5,7.8Hz,1H),3.33(dd,J＝14.5,5.3Hz,1H),3.20(s,1H),2.90–2.85(m,1H),2.59(dd,J＝14.6,7.3Hz,1H),2.34–2.26(m,2H),2.22–2.16(m,2H),2.15(s,3H),2.09–1.99(m,2H),1.87(s,3H),1.79(m,3H),1.78–1.71(m,4H),1.65(s,6H),1.61–1.57(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.44(s,3H),1.36–1.27(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ175.6,168.7,160.0,158.9,155.3,153.3,140.8,134.6,133.3,132.0,131.9,130.7,127.5,123.7,122.0,116.5,112.6,110.1,107.5,92.5,84.2,84.2,80.6,71.1,62.3,49.0,41.9,36.7,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,22.4,19.6,19.0,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₁H₅₂NO₈686.3693,found for[M+H]⁺686.3688.

实施例15 化合物26的制备

同实施例14，不同在于用异丁酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物26，产率86.7％。R_f＝0.3(PE:AE＝2:1)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.15(s,1H),7.54(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.88(t,J＝7.7Hz,1H),5.54(d,J＝10.2Hz,1H),5.10(t,J＝6.4Hz,1H),5.05(t,J＝6.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.45(dd,J＝14.3,7.9Hz,1H),3.38–3.30(m,1H),3.20(s,1H),2.93–2.82(m,1H),2.68–2.60(m,1H),2.36–2.26(m,2H),2.24–2.16(m,2H),2.12(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),2.08–1.99(m,2H),1.90(s,3H),1.87–1.72(m,7H),1.65(s,6H),1.62–1.58(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.44(s,3H),1.37–1.31(m,1H),1.23(d,J＝6.8Hz,6H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ175.6,174.3,160.0,158.8,155.2,153.6,140.8,134.3,133.3,131.9,131.8,130.9,127.4,123.7,122.0,116.5,112.5,110.0,107.5,92.5,84.2,84.1,80.6,71.1,62.2,49.0,41.9,36.7,32.8,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,22.4,19.0,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd forC₄₃H₅₆NO₈714.4006,found for[M+H]⁺714.4007.

实施例16 化合物27的制备

同实施例14，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物27，产率58.2％。R_f＝0.20(PE:AE＝2:1)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.12(s,1H),7.55(d,J＝7.0Hz,1H),7.37–7.22(m,5H),6.64(d,J＝10.2Hz,1H),5.88(t,J＝7.6Hz,1H),5.53(d,J＝10.1Hz,1H),5.15–5.03(m,2H),3.83(s,3H),3.71(s,3H),3.45(dd,J＝14.3,7.7Hz,1H),3.34(d,J＝13.5Hz,1H),3.20(s,1H),2.87(br,1H),2.59(dd,J＝14.5,7.4Hz,1H),2.32(d,J＝11.9Hz,1H),2.19(d,J＝9.6Hz,1H),2.12(dd,J＝15.0,8.1Hz,1H),2.09–1.98(m,2H),1.87(s,3H),1.83–1.72(m,7H),1.70–1.60(m,7H),1.55(s,3H),1.51(s,3H),1.43(s,3H),1.37–1.26(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ175.6,169.0,160.0,158.9,155.2,153.7,140.9,134.7,133.3,133.2,132.0,131.9,130.7,129.3,128.6,127.5,127.2,123.7,122.0,116.5,112.6,110.1,107.5,92.5,84.2,84.1,80.6,71.1,62.3,49.0,42.0,39.9,36.7,32.5,30.1,28.5,27.6,25.7,25.7,25.1,22.6,22.4,19.0,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcdfor C₄₇H₅₆NO₈762.4006,found for[M+H]⁺762.4003.

实施例17 化合物28的制备

同实施例8，不同在于用化合物14代替化合物12反应，得到化合物28，产率49.2％。¹HNMR(300MHz,CDCl₃)δ7.87(s,1H),7.41(d,J＝6.9Hz,1H),6.63(d,J＝10.1Hz,1H),5.60–5.47(m,2H),5.28(t,J＝6.2Hz,1H),5.03(t,J＝6.2Hz,1H),3.82(s,3H),3.51–3.43(m,1H),3.38(d,J＝6.6Hz,2H),2.75(dd,J＝14.7,9.7Hz,1H),2.64(dd,J＝15.3,7.2Hz,1H),2.51(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.2,4.3Hz,1H),2.14–1.97(m,5H),1.86–1.60(m,17H),1.53(s,3H),1.47(s,3H),1.44–1.37(m,1H),1.30(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,174.1,168.6,159.2,158.9,155.3,152.3,135.5,134.4,133.3,132.4,132.0,130.1,127.8,123.6,121.9,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,84.0,83.6,80.7,62.2,49.0,46.8,41.7,30.0,29.1,27.9,27.2,25.8,25.7,25.6,22.5,22.1,19.7,18.8,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₁H₅₀NO₈684.3536,found for[M+H]⁺684.3531.

实施例18 化合物29的制备

同实施例17，不同在于用异丁酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物29，产率77.8％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92(s,1H),7.41(d,J＝6.8Hz,1H),6.63(d,J＝10.1Hz,1H),5.64–5.51(m,2H),5.22(t,J＝6.6Hz,1H),5.04(t,J＝6.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.52–3.43(m,1H),3.43–3.32(m,2H),2.76–2.55(m,3H),2.51(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.2,4.1Hz,1H),2.09–1.96(m,2H),1.80–1.60(m,17H),1.54(s,3H),1.47(s,3H),1.42–1.37(m,1H),1.29(s,3H),1.21–1.15(m,6H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.5,174.2,159.3,159.0,155.3,152.7,135.5,134.0,133.5,132.3,131.9,130.1,127.7,123.7,121.8,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,83.9,83.6,80.6,62.2,49.0,46.8,41.8,32.6,30.0,29.0,27.7,27.2,25.7,25.7,25.6,25.2,22.6,22.1,19.0,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₃H₅₄NO₈712.3849,found for[M+H]⁺712.3844.

实施例19 化合物30的制备

同实施例17，不同在于用苯乙酰氯代替乙酰氯反应，得到化合物30，产率61.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.89(s,1H),7.41(d,J＝6.8Hz,1H),7.35–7.24(m,5H),6.61(d,J＝10.2Hz,1H),5.62–5.50(m,2H),5.25(t,J＝6.5Hz,1H),5.03(t,J＝6.5Hz,1H),3.81(s,3H),3.66(s,2H),3.46(dd,J＝11.1,5.8Hz,1H),3.42–3.33(m,2H),2.71(dd,J＝14.9,9.2Hz,1H),2.62(dd,J＝14.9,7.2Hz,1H),2.52(d,J＝9.2Hz,1H),2.32(dd,J＝13.3,4.1Hz,1H),2.09–1.99(m,2H),1.80(s,3H),1.78–1.75(m,1H),1.72(s,6H),1.68(s,3H),1.64(s,3H),1.62–1.58(m,1H),1.54(s,3H),1.47(s,3H),1.42–1.32(m,1H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.5,174.2,168.9,159.3,159.0,155.3,152.6,135.4,134.5,133.6,133.3,132.3,131.9,129.9,129.3,128.6,127.8,127.2,123.7,121.8,116.6,112.9,110.5,107.4,90.5,83.9,83.6,80.7,62.2,49.0,46.7,41.7,39.7,30.0,29.0,27.8,27.3,25.7,25.7,25.7,22.5,22.1,18.8,18.3,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcdfor C₄₇H₅₄NO₈760.3849,found for[M+H]⁺760.3840.

实施例20 化合物31的制备

同实施例8，不同在于用氯甲酸-4-甲氧基苯酯代替乙酰氯反应，得到化合物31，产率85.6％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.99(s,1H),8.22(s,1H),7.67(d,J＝7.2Hz,1H),7.12(d,J＝9.0Hz,3H),6.89(d,J＝9.1Hz,2H),6.68(d,J＝10.1Hz,1H),5.87(t,J＝7.8Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.09(d,J＝6.4Hz,1H),5.06(d,J＝6.4Hz,1H),3.80(s,3H),3.38(dd,J＝14.7,7.6Hz,1H),3.31(dd,J＝14.8,5.0Hz,1H),3.24(d,J＝5.3Hz,1H),3.01(d,J＝5.5Hz,1H),2.93(br,1H),2.63(dd,J＝14.5,6.9Hz,1H),2.34(dd,J＝14.2,4.0Hz,1H),2.21(dd,J＝12.4,7.9Hz,2H),2.04(dd,J＝14.5,8.8Hz,2H),1.89(s,3H),1.81(s,3H),1.78(s,3H),1.75–1.72(m,1H),1.66(s,3H),1.65(s,3H),1.64–1.61(m,1H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.43(s,3H),1.35–1.25(m,1H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.7,161.3,157.9,157.6,157.4,153.9,152.4,144.5,142.5,134.8,131.9,131.8,130.9,130.5,124.6,123.8,122.4,121.7,115.9,114.5,107.4,102.7,100.2,92.5,84.3,84.2,81.3,70.8,55.6,49.1,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₆H₅₃NO₁₀780.3733,found for[M+H]⁺780.3726.

实施例21 化合物32的制备

同实施例8，不同在于用氯甲酸氯甲酯代替化乙酰氯反应，得到化合物32，产率69.0％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.97(s,1H),8.16(s,1H),7.66(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.88(t,J＝7.4Hz,1H),5.80(s,2H),5.43(d,J＝10.2Hz,1H),5.10–5.02(m,2H),3.33(dd,J＝14.8,6.8Hz,1H),3.30–3.20m,2H),2.99(d,J＝5.6Hz,1H),2.93(br,1H),2.60(dd,J＝14.9,7.0Hz,1H),2.33(dd,J＝13.8,3.8Hz,1H),2.23–2.16(m,2H),2.04(dd,J＝15.1,8.3Hz,2H),1.87(s,3H),1.84–1.80(m,1H),1.79(s,3H),1.76(s,3H),1.64(s,6H),1.63–1.60(m,1H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.33–1.26(m,1H)ppm；¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ179.7,161.2,157.9,157.6,154.4,151.9,142.4,135.3,132.0,131.8,130.8,130.3,124.7,123.8,122.3,115.8,107.4,102.7,100.1,92.4,84.4,84.2,81.3,72.3,70.8,49.0,42.0,36.9,32.5,30.1,28.5,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.8,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₀H₄₉ClNO₉722.3083,found for[M+H]⁺322.3103.

实施例22 化合物33的制备

同实施例8，不同在于用氯甲酸异丁酯代替化酰氯反应，得到化合物33，产率92.2％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.98(s,1H),8.14(s,1H),7.65(d,J＝7.1Hz,1H),6.66(d,J＝10.1Hz,1H),5.82(t,J＝7.7Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–5.02(m,2H),4.00(d,J＝5.7Hz,2H),3.35(dd,J＝14.8,7.6Hz,1H),3.27(dd,J＝14.5,5.6Hz,1H),3.21(d,J＝5.1Hz,1H),2.99(d,J＝5.5Hz,1H),2.95–2.88(m,1H),2.60(dd,J＝14.8,6.9Hz,1H),2.33(dd,J＝14.2,3.9Hz,1H),2.18(d,J＝10.3Hz,2H),2.07–2.02(m,2H),1.98(dd,J＝13.5,6.9Hz,1H),1.87(s,3H),1.79(s,3H),1.77–1.72(m,4H),1.66–1.61(m,7H),1.55(s,3H),1.52(s,3H),1.42(s,3H),1.33–1.22(m,1H),0.96(d,J＝6.4Hz,6H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.7,161.2,157.9,157.6,153.8,153.1,142.4,134.2,131.8,131.8,130.9,130.7,124.6,123.8,122.4,115.9,107.4,102.6,100.2,92.5,84.3,84.2,81.2,74.5,70.8,49.0,42.0,36.9,32.5,30.2,28.5,27.8,27.7,25.7,25.7,24.9,22.7,21.9,18.9,18.9,18.2,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₃H₅₆NO₉730.3940,found for[M+H]⁺730.3954.

实施例23 化合物34的制备

将底物12(100mg,0.159mmol)溶于5mL CH₂Cl₂，加入(44.6μL,0.318mmol)三乙胺，后加入(50μL,0.794mmol)乙基异氰酸酯，室温反应4小时，水淬灭反应，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物34，110.0mg，产率98.8％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.99(s,1H),8.10(s,1H),7.65(d,J＝7.2Hz,1H),6.65(d,J＝10.1Hz,1H),6.07(t,J＝5.5Hz,1H),5.77(t,J＝7.8Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.11–4.99(m,2H),3.36(dd,J＝15.5,8.2Hz,2H),3.32–3.27(m,2H),3.25(s,1H),3.02(d,J＝5.6Hz,1H),2.95–2.89(m,1H),2.58(dd,J＝14.7,6.5Hz,1H),2.33(dd,J＝14.1,4.0Hz,1H),2.25(dd,J＝14.6,9.2Hz,1H),2.17(d,J＝10.0Hz,1H),2.07–1.98(m,2H),1.79(s,3H),1.78(s,3H),1.77(s,3H),1.76–1.70(m,1H),1.64(s,6H),1.58(dd,J＝7.1,3.0Hz,1H),1.54(s,3H),1.52(s,3H),1.43(s,3H),1.33–1.25(m,1H),1.18(t,J＝7.2Hz,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ179.7,161.3,157.9,157.6,155.0,150.3,142.2,134.1,132.0,131.8,130.9,130.5,124.7,123.8,122.2,115.8,107.5,102.6,100.1,92.4,84.3,84.3,81.2,70.5,49.0,42.0,36.9,36.0,32.4,30.2,28.5,27.6,25.7,25.7,24.9,22.6,21.9,19.0,18.3,17.6,15.1ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₁H₅₃N₂O₈701.3802,foundfor[M+H]⁺701.3799.

实施例24 化合物35的制备

在室温条件下，氮气保护，将底物GA(300mg,0.48mmol)溶于10mL二氯甲烷中，分别加入EDCI(109.91mg,0.57mmol)，DMAP(5.83mg,0.048mmol)，最后加入对溴苯甲醛肟(133.06mg,0.67mmol)，室温反应5h，无水***萃取，合并有机相，饱和食盐水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到化合物35，312mg，产率80.7％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.82(s,1H),8.07(s,1H),7.60–7.49(m,5H),6.58(d,J＝10.1Hz,1H),6.17(t,J＝6.7Hz,1H),5.34(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.47(s,1H),3.31(dd,J＝14.3,8.1Hz,1H),3.17(d,J＝12.8Hz,1H),3.05–2.89(m,2H),2.52(d,J＝9.2Hz,1H),2.31(d,J＝13.1Hz,1H),2.06–1.95(m,2H),1.81(s,3H),1.77–1.67(m,7H),1.63(s,3H),1.63–1.56(m,4H),1.54(s,3H),1.39(d,J＝12.5Hz,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,157.7,155.1,138.2,135.5,133.3,132.0,131.8,131.6,129.8,129.3,126.0,126.0,124.6,123.7,122.2,116.0,107.7,102.5,100.4,90.9,83.8,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.6,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₄₉BrNO₈810.2641,found for[M+H]⁺810.2606.

实施例25 化合物36的制备

同实施例24，不同在于用间溴苯甲醛肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物36，产率77.3％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),8.07(s,1H),7.89(s,1H),7.64–7.52(m,3H),7.30(t,J＝7.8Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(t,J＝6.7Hz,1H),5.35(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.48(t,J＝4.8Hz,1H),3.32(dd,J＝14.4,8.0Hz,1H),3.18(d,J＝12.4Hz,1H),3.04(dd,J＝16.4,7.2Hz,1H),2.94(dd,J＝16.6,6.6Hz,1H),2.53(d,J＝9.2Hz,1H),2.37–2.28(m,1H),2.06–1.95(m,2H),1.82(s,3H),1.77–1.67(m,7H),1.67–1.59(m,7H),1.54(s,3H),1.44–1.33(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,154.7,138.2,135.4,134.3,133.3,132.4,131.8,131.6,130.8,130.3,127.3,126.0,124.6,123.7,122.9,122.2,116.0,107.8,102.6,100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₄₉BrNO₈810.2641,found for[M+H]⁺810.2616.

实施例26 化合物37的制备

同实施例24，不同在于用对氟苯甲肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物37，产率76.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),8.09(s,1H),7.71(dd,J＝8.6,5.4Hz,2H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.10(t,J＝8.6Hz,2H),6.59(d,J＝10.1Hz,1H),6.17(t,J＝6.6Hz,1H),5.35(d,J＝10.4Hz,1H),,5.08–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.5,4.7Hz,1H),3.31(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),3.22–3.14(m,1H),2.98(qd,J＝16.6,6.5Hz,2H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.82(s,3H),1.77–1.72(m,1H),1.71(s,6H),1.64(s,3H),1.62(s,3H),1.59–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.35(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,178.9,164.7,164.2,161.4,157.5,155.0,138.0,135.4,133.3,131.8,131.6,130.6,126.7,126.6,126.1,124.6,123.7,122.2,116.1,116.0,107.8,102.6,100.4,91.0,83.8,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.6,28.8,27.6,25.7,25.6,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/zcalcd for C₄₅H₄₉FNO₈750.3442,found for[M+H]⁺750.3432.

实施例27 化合物38的制备

同实施例24，不同在于用间氟苯甲肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物38，产率73.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),8.10(s,1H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.49–7.43(m,2H),7.38(td,J＝8.1,5.8Hz,1H),7.19–7.12(m,1H),6.59(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝7.2,6.0Hz,1H),5.34(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.6,4.7Hz,1H),3.31(dd,J＝14.6,8.1Hz,1H),3.18(dd,J＝14.5,4.9Hz,1H),3.03(dd,J＝16.2,6.7Hz,1H),2.94(dd,J＝17.3,6.5Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.6Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.82(d,J＝0.9Hz,3H),1.77–1.72(m,1H),1.70(s,6H),1.63(s,3H),1.63(s,3H),1.59–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.34(m,1H),1.32(s,3H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,178.9,162.8,161.5,157.6,157.5,155.1,155.0,138.2,135.4,133.4,132.6,131.8,131.6,130.4,126.0,124.6,124.6,123.7,122.2,118.5,116.0,114.7,107.8,102.6,100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.6,25.2,22.6,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/zcalcd for C₄₅H₄₉FNO₈750.3442,found for[M+H]⁺750.3422.

实施例28 化合物39的制备

同实施例24，不同在于用间氯苯甲肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物39，产率45.1％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),8.08(s,1H),7.74(s,1H),7.57(d,J＝13.2,1H),7.55(d,J＝12.4,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(t,J＝7.8Hz,1H),6.60(d,J＝10.1Hz,1H),6.15(dd,J＝7.2,6.0Hz,1H),5.35(d,J＝10.1Hz,1H),5.08–4.99(m,2H),3.48(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.6,8.0Hz,1H),3.18(dd,J＝14.4,4.9Hz,1H),3.04(dd,J＝16.6,6.3Hz,1H),2.94(dd,J＝16.7,6.0Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.96(m,2H),1.82(d,J＝0.8Hz,3H),1.78–1.72(m,1H),1.71(s,3H),1.71(s,3H),1.64(s,6H),1.59–1.55(m,1H),1.54(s,3H),1.39(dd,J＝13.4,9.5Hz,1H),1.32(s,3H),1.30(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,178.9,164.0,161.4,157.5,157.5,154.8,138.2,135.4,134.9,133.4,132.2,131.8,131.6,131.4,130.0,128.0,126.8,126.0,124.6,123.7,122.2,116.0,107.8,102.6100.4,90.9,83.8,83.4,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.5,25.7,25.7,25.2,22.7,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₄₉ClNO₈766.3146,found for[M+H]⁺766.3131.

实施例29 化合物40的制备

同实施例24，不同在于用邻氯苯甲醛肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物40，产率45.7％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.81(s,1H),8.62(s,1H),8.08(d,J＝7.4Hz,1H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),7.42–7.35(m,2H),7.33–7.27(m,1H),6.57(d,J＝10.1Hz,1H),6.16(t,J＝6.7Hz,1H),5.31(d,J＝10.1Hz,1H),5.09–4.98(m,2H),3.51–3.45(m,1H),3.33(dd,J＝14.7,8.1Hz,1H),3.22–3.12(m,1H),3.10–2.95(m,2H),2.52(d,J＝9.3Hz,1H),2.32(dd,J＝13.4,4.7Hz,1H),1.99(dd,J＝15.7,7.9Hz,2H),1.83(s,3H),1.76–1.69(m,7H),1.64(s,6H),1.58–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.38(dd,J＝13.4,9.6Hz,1H),1.33(s,3H),1.30(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.5,178.9,163.9,161.4,157.7,157.4,152.8,138.8,135.2,134.9,133.4,132.4,131.8,131.5,129.8,128.6,128.4,127.1,125.9,124.4,123.8,122.3,116.0,107.6,102.6,100.4,90.9,83.8,83.5,81.1,49.0,46.9,42.0,29.9,29.5,28.8,27.6,25.7,25.7,25.2,22.6,21.7,20.5,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcdfor C₄₅H₄₉ClNO₈766.3146,found for[M+H]⁺766.3133.

实施例30 化合物41的制备

同实施例24，不同在于用对硝基苯甲肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物41，产率40.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),8.28(d,J＝8.8Hz,2H),8.19(s,1H),7.90(d,J＝8.8Hz,2H),7.55(d,J＝6.9Hz,1H),6.57(d,J＝10.1Hz,1H),6.23(dd,J＝7.2,5.9Hz,1H),5.35(d,J＝10.0Hz,1H),5.08–4.98(m,2H),3.49(dd,J＝6.7,4.6Hz,1H),3.31(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),3.21–3.14(m,1H),3.05–2.91(m,2H),2.54(d,J＝9.3Hz,1H),2.33(dd,J＝13.5,4.7Hz,1H),2.05–1.95(m,2H),1.83(d,J＝1.0Hz,3H),1.75(dd,J＝12.1,4.6Hz,1H),1.71(s,6H),1.63(s,6H),1.57–1.54(m,1H),1.53(s,3H),1.40–1.35(dd,J＝13.4,9.6Hz,1H),1.32(s,3H),1.30(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.4,179.0,163.8,161.5,157.6,153.9,149.4,138.8,136.4,135.5,133.3,131.9,131.7,129.2,125.7,124.7,124.0,123.6,122.1,115.9,107.8,102.6,100.4,91.0,83.9,83.3,81.2,49.0,46.9,41.9,29.9,29.7,28.8,27.6,25.7,25.6,25.2,22.6,21.7,20.6,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₅H₄₉N₂O₁₀777.3387,found for[M+H]⁺777.3360.

实施例31 化合物42的制备

同实施例24，不同在于用丙酮肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物42，产率38.4％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.82(s,1H),7.53(d,J＝6.9Hz,1H),6.64(d,J＝10.1Hz,1H),6.16(t,J＝6.3Hz,1H),5.42(d,J＝10.1Hz,1H),5.09-5.01(m,2H),3.46(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.7,8.0Hz,1H),3.21(dd,J＝14.6,5.1Hz,1H),3.04(dd,J＝16.6,7.1Hz,1H),2.88(ddd,J＝17.0,6.1,1.4Hz,1H),2.52(d,J＝9.3Hz,1H),2.31(dd,J＝13.4,4.6Hz,1H),2.07–1.98(m,5H),1.83(s,3H),1.81(d,J＝0.9Hz,3H),1.79–1.75(m,1H),1.73(s,3H),1.70(s,3H),1.65(s,3H),1.63(s,3H),1.61-1.56(m,1H),1.55(s,3H),1.44(s,3H),1.38(dd,J＝13.3,9.5Hz,1H),1.29(s,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.6,178.9,164.2,163.6,161.5,157.6,157.5,137.8,135.3,133.3,131.8,131.5,126.6,124.5,123.8,122.3,116.0,107.7,102.6,100.4,90.9,83.7,83.2,81.2,49.0,47.0,42.0,30.0,29.7,28.8,27.8,25.7,25.7,25.3,22.7,22.1,21.7,20.5,18.1,17.6,17.1；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₁H₅₀NO₈684.3536,found for[M+H]⁺684.3527.

实施例32 化合物43的制备

同实施例24，不同在于用异丁醛肟代替对溴苯甲醛肟反应，得到化合物43，产率36.5％。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ12.83(s,1H),7.54(d,J＝6.9Hz,1H),7.34(d,J＝6.9Hz,1H),6.65(d,J＝10.1Hz,1H),6.24(t,J＝6.4Hz,1H),5.43(d,J＝10.1Hz,1H),5.09-5.00(m,2H),3.46(dd,J＝6.6,4.6Hz,1H),3.32(dd,J＝14.5,8.1Hz,1H),3.17(dd,J＝14.5,4.7Hz,1H),2.99–2.82(m,2H),2.65(dq,J＝13.7,6.9Hz,1H),2.53(d,J＝9.3Hz,1H),2.30(dd,J＝13.5,4.6Hz,1H),2.04(dd,J＝15.9,7.7Hz,2H),1.84–1.76(m,4H),1.73(s,3H),1.71(s,3H),1.65(s,3H),1.63(s,3H),1.60(dd,J＝7.0,3.0Hz,1H),1.55(s,3H),1.44(s,3H),1.38(dd,J＝13.3,9.6Hz,1H),1.29(s,3H),1.13(d,J＝6.8Hz,3H),1.12(d,J＝6.8Hz,3H)ppm；¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ203.5,178.9,164.7,164.1,161.4,157.6,157.5,137.3,135.5,133.3,131.9,131.6,126.0,124.5,123.8,122.2,116.0,107.6,102.5,100.4,91.1,83.8,83.2,81.2,49.0,46.9,42.0,29.4,29.6,29.5,28.8,27.9,25.7,25.7,25.2,22.8,21.7,20.6,19.7,19.7,18.1,17.6ppm；HRMS(EI)m/z calcd for C₄₂H₅₂NO₈698.3693,foundfor[M+H]⁺698.3685.

生物活性实施例藤黄酸类似物抗肿瘤生物活性体外筛选试验

1.材料

1.1.样品及试剂：

试验样品用二甲基亚砜(DMSO，终浓度0.8％)溶解，用含15％小牛血清RPMI1640培养基配成2mg/ml备用，用时稀释至所需浓度。

注射用顺铂(CDDP CISPLATIN FOR INJECTION)，10mg/瓶，齐鲁制药有限公司生产。

RPMI1640培养基：美国GIBGO公司生产。

二甲基亚砜(DMSO)：天津富宇精细化工有限公司，批号：2013年10月23B。

MTT：Sigma公司生产。

1.2.细胞：A549(人肺腺癌)，购于中国科学院细胞库。HELF-6(人胚肺细胞)细胞，山东省医学科学院基础所赠送。均使用含15％小牛血清的RPMI1640培养基、置37℃、5％CO₂培养箱内培养。

1.3.仪器：

Forma3111水套式二氧化碳培养箱，美国Forma公司生产。

Victor1420多功能标记分析仪，美国。

96孔板，美国制造。

2.方法

2.1 细胞培养及药物作用：分别取A549(人肺腺癌)和HELF-6(人胚肺细胞)指数生长期的细胞经洗涤后，用0.25％胰酶消化后计数，调整细胞浓度为1×10⁵/ml，分别接种于96孔板内，每孔0.1ml，置37℃、5％CO₂培养箱内培养。培养24小时后加样品。作用于A549(人肺腺癌)和HELF-6(人胚肺细胞)细胞12个样品最高剂量组药物浓度均为100μg/ml，按5倍依次稀释至0.01μg/ml，共5个剂量组。每个浓度设3个复孔，并设溶媒对照孔(DMSO，0.8％)，培养48小时后，用MTT方法测定OD值，计算细胞抑制率。本实验重复两次。

2.2 细胞抑制率的计算：细胞终止培养后，每孔加入10μl 0.5％MTT置CO₂培养箱内，4小时后取出倾去孔内液体加入DMSO(0.2ml/孔)，充分振荡，使蓝紫色甲臜溶解，于多功能标记分析仪570nm波长处检测OD值，采用不同浓度受试药物3复孔OD值的均值计算细胞的抑制率及IC₅₀。

2.3.结果判断：

根据新药临床前研究指导原则(中华人民共和国***药政局1993.7：139)

植物提取物IC₅₀≤30μg/ml认为有一定抑制作用；

合成药IC₅₀≤10μg/ml认为有一定抑制作用。

表1：对肿瘤细胞生长的抑制率％

Claims

1.选自下列式(III’)～(VII’)及式(III”)～(VII”)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中，R¹为H或C_1-6烷基-；

R²选自O、S或OH，R²与C-12间的表示单键或双键，其中当R²为O或S时，其与C-12形成双键，当R²为以上定义中的其它基团时，其与C-12形成单键；

R³选自C_1-6烷基-；

R⁵选自H，连接R⁵的C-4与C-3形成双键；

R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰彼此独立地选自H、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b、任选被一个或多个R^a取代的C_1-6烷基-、C_6-14芳基-；

R^a独立地选自F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、＝O、NR^cR^d、C_1-6烷基-、C_6-14芳基-C_1-6烷基氧基-、C_6-14芳基氧基-、-C(＝O)R^b、-S(＝O)₂R^b；

R^b选自任选被一个或多个R^a取代的下列基团：C_1-6烷基-、NR^cR^d、C_6-14芳基-；

R^c和R^d相互独立地选自H或C_1-6烷基-。

2.选自下式所示的化合物或其药学上可接受的盐：

3.如权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，包括选自下列的一个或多个步骤的组合：

步骤1)：

如果需要，进行步骤2)：

步骤3)：

步骤4)：

所述反应在催化剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)和/或碱的存在下进行；或

使用相同的方法，由下列化合物(e”)和(f”)制备权利要求1中的化合物(III”)～(VII”)：

以及，步骤5)：

其中，R¹～R³、R⁵至R¹⁰分别具有如权利要求1所述的定义；

R^2a选自OH或SH；

R^2b选自O或S；

X选自氯、溴或者碘；

Z选自氢、氯或者溴。

4.如权利要求3所述的方法，包括选自下列的一个或多个步骤的组合：

其中，R¹～R³和R⁵～R¹⁰各自独立地选自权利要求3中的定义。

5.药物组合物，包含如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐。

6.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐用于制备治疗或预防疾病的药物组合物的用途，其中所述疾病选自血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述疾病选自白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头部和颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其它妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和***瘤在内的泌尿***肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。

8.如权利要求6所述的用途，其中所述疾病为癌症。

9.如权利要求6所述的用途，其中所述疾病为肺癌。